تصف هذه الورقة بالتفصيل إجراءات العملية والاحتياطات الواجب اتخاذها أثناء الكى في علاج التهاب الفقار اللاصق في فئران التجارب.
يتطلب اشتراك JoVE لعرض هذا المحتوى. تسجيل الدخول أو ابدأ نسخة تجريبية مجانية
مقالة منهجية
تصف هذه الورقة بالتفصيل إجراءات العملية والاحتياطات الواجب اتخاذها أثناء الكى في علاج التهاب الفقار اللاصق في فئران التجارب.
التهاب الفقار اللاصق (AS) هو شكل من أشكال التهاب المفاصل يزداد سوءا وتعطيلا يؤثر بشكل أساسي على الهيكل العظمي المحوري. هذا المرض يشمل أساسا العمود الفقري والمفصل العجزي الحرقفي. قد يحدث اندماج العمود الفقري والمفصل العجزي الحرقفي في المرحلة المتأخرة من المرض ، مما يؤدي إلى تصلب العمود الفقري وحداب ، وكذلك صعوبة في المشي ، مما يؤثر بشكل خطير على جودة العمل وأنشطة الحياة اليومية ويفرض عبئا ثقيلا على المريض والأسرة والمجتمع. تم إيلاء اهتمام متزايد للعلاج غير الدوائي كعلاج بديل ل AS. الكى هو تقنية علاجية قديمة تستخدم في الطب الصيني التقليدي (TCM). علاج الكى Du ، وهو علاج خارجي فريد ومبتكر تم تطويره على أساس الكى العادي ، له تأثير علاجي واضح على AS. يجمع Du-mokibustion بمهارة بين التقنيات المتوافقة للطب الصيني التقليدي لدمج خطوط الطول ونقاط الوخز والأدوية العشبية الصينية والكي. يصف هذا البحث إجراءات التشغيل والاحتياطات الواجب اتخاذها أثناء الكى المثاني في فئران التجارب بالتفصيل لتوفير أساس تجريبي لدراسة آلية الكى المثاني في علاج AS.
التهاب الفقار اللاصق (AS) هو شكل من أشكال التهاب المفاصل يزداد سوءا وتعطيلا يؤثر بشكل أساسي على الهيكل العظمي المحوري. وفقا لأحدث مسح وبائي ، ~ 0.01٪ -1.8٪ من الناس في العالم يعانون من هذه الحالة1 ، معظمهم من الشباب الذكور (نسبة الذكور إلى الإناث هي ~ 2-3: 1) 2. معدل حدوث AS في السكان الصينيين هو 0.2 ٪ -0.4 ٪. هذا المرض يشمل أساسا العمود الفقري والمفصل العجزي الحرقفي. قد يحدث اندماج العمود الفقري والمفصل العجزي الحرقفي في المراحل المتأخرة من المرض ، مما يؤدي إلى تصلب العمود الفقري وحداب ، وكذلك صعوبة في المشي ، مما يؤثر بشكل خطير على جودة العمل وأنشطة الحياة اليومية ويفرض عبئا ثقيلا على المريض والأسرة والمجتمع1. حاليا ، لا يوجد حل نهائي ل AS ، وتركز العلاجات المقدمة ، الدوائية وغير الدوائية ، في المقام الأول على تخفيف الألم ، وإبطاء تطور المرض ، وتحسين نوعية الحياة. في السنوات الأخيرة ، نظرا لأن خيارات العلاج الدوائي كانت محدودة للغاية3 ، فقد تم إيلاء اهتمام متزايد للعلاج غير الدوائي ، والذي أصبح علاجا بديلا ل AS. في الصين ، غالبا ما يفضل المرضى العلاج الخارجي الذي يتكون من الطب الصيني التقليدي (TCM) ، والذي له آثار جانبية طفيفة وراحة كبيرة أثناء العلاج.
الكى هو تقنية علاجية قديمة تستخدم في الطب الصيني التقليدي. الكى المدو هو تقنية علاج خارجية تتكون من "الكى الطبي بالرغوة" على الجزء الفقري من خط الطول Du. يستخدم بشكل رئيسي في علاج AS وقد أظهر السلامة والفعالية. بالمقارنة مع الكى العادي ، يتميز Du-moxibustion بخصائص منطقة الكى الواسعة ، ومخروط moxa الكبير ، وقوة النيران القوية ، ودرجة الحرارةالعالية 4. تشير المراجعة المنهجية والتحليل التلوي إلى أن الكى هو علاج تكميلي فعال ل AS5. أكدت دراسة حديثة أن الأعراض السريرية وبعض العوامل الالتهابية لمرضى AS قد تحسنت بسبب الكى6. كشفت الدراسات أن الكى Du يمكن أن يزيد من محتوى الدماغ من β-endorphin ويمارس تأثيرا مسكنا مركزيا7 ، ويقلل من تنظيم التعبير عن جين HLA-B27 8 ، ويؤخر معدل تكرار AS. كما أن الكى المتساوي له تأثير محسن على تطور AS عن طريق تقليل مؤشر الالتهاب ESR (ESR) ومستويات البروتين التفاعلي C (CRP) ، والببتيد C-terminal من الكولاجين من النوع الأول (CTX-I) ، وبروتين Dickkopf1 (DKK1) 9,10.
أظهرت دراسة سريرية أخرى أن الكى Du يمكن أن يزيد من ضبط المجموعات الفرعية للخلايا التائية المضطربة ، Ig ، ويكمل C3 لتحقيق التوازن بين آلية المناعة11. من حيث استقلاب العظام ، يمكن أن يمنع الكى صعود الفوسفاتيز القلوي في الدم (ALP) وفوسفور المصل (S-P) ، ويزيد من الكالسيوم في الدم (S-Ca) ، وكثافة المعادن في العظام (BMD) ، وقوة العظام12. علاوة على ذلك ، يمكن ل Du-mokibustion إصلاح وظيفة العمود الفقري في نقاط متعددة لتخفيف أعراض التعب لدى مرضى AS13. كشفت بعض الدراسات التي أجريت على عن الآلية المحتملة للكي في علاج AS. أشارت دراسة إلى أن الكى حسن بشكل كبير الحالة الصحية العامة ، وقلل من مستويات سمك المخلب ، وقلل من مستويات IL-1β و PGE2 و IL-6 و TNF-α في عينات أنسجة الأربطة في العمود الفقري. ربط تحليل المسار الأيضي المستقلبات المحددة بدورة TCA ، وكذلك الدهون والأحماض الأمينية والنباتات المعوية واستقلاب البيورين14. أظهرت دراسة أخرى أن الكى قمع التعبير عن السيتوكينات المؤيدة للالتهابات ، IL-1β ، TNF-α ، IL-17 ، و IL-6. خفض مستويات mRNA من RANKL و RANK و ALP و OCN ؛ وتحسين السمات النسيجية المرضية في الفئرانAS 15.
في حين أن هذه الدراسات تشير إلى أن الكى قد يكون فعالا في علاج AS، هناك حاجة إلى مزيد من البحوث لتأكيد هذه النتائج وتحديد بروتوكول العلاج الأمثل للكي في المرضى الذين يعانون من AS. قام فريقنا بإنشاء وتعديل علاج الكى بناء على النظرية الأساسية والتشغيل العملي للكي الصيني التقليدي ، والذي تم تنفيذه وتطبيقه على نطاق واسع في الممارسة السريرية الصينية لأكثر من 35 عاما. على الرغم من وجود عدد قليل من الدراسات عالية الجودة حول علاج AS بواسطة Du-moxibustion ، إلا أن دلالته في علاج AS مدعومة بالأدلة. ومع ذلك ، فإن آلية علاج AS مع Du-mokibustion تستحق مزيدا من الدراسة. تعد الدراسة على طريقة مهمة لاستكشاف آلية الكى في علاج AS. العملية السريرية ل Du-mokibustion ناضجة نسبيا ولكنها نادرا ما تستخدم في دراسة الآلية في التجارب على. تصف هذه الورقة بالتفصيل العملية والاحتياطات الواجب اتخاذها أثناء الكى Du في علاج فئران التجارب AS.
الوصول مقيد. يرجى تسجيل الدخول أو بدء فترة تجريبية لعرض هذا المحتوى.
تمت الموافقة على جميع التجارب على من قبل لجنة مراجعة أخلاقيات رعاية التجريبي بجامعة شاندونغ للطب الصيني التقليدي (No. SDUTCM20230831301).
1. إعداد
2. إنشاء نموذج الماوس AS
ملاحظة: تم تحفيز نموذج AS باستخدام بروتيوغليكان الغضروف (PG) ، وهي طريقة نمذجة كلاسيكية16،17،18،19،20،21. تم تحصين الفئران من سلالة BALB / c بشكل متكرر باستخدام PG للحث على التهاب الأوتار والتهاب الفقار. انظر جدول المواد للحصول على التفاصيل المتعلقة بالمواد والكواشف والأدوات المستخدمة في هذا البروتوكول.
3. دو الكى
ملاحظة: قم بإعداد أهم ثلاث مواد خام ل Du-mokibustion مسبقا (الشكل 1).
4. تقييم مؤشر التهاب المفاصل (الذكاء الاصطناعي)
5. اختبار الروتارود
ملاحظة: يستخدم اختبار الروتارود لتقييم التنسيق الحركي والتوازن عن طريق تسجيل الوقت الذي تقضيه الفئران على الأسطوانة الدوارة. تألفت هذه التجربة من ثلاث تجارب تفصل بينها فواصل زمنية مدتها 20 دقيقة. تم تسجيل بيانات الاختبار الرسمية من التجربة الثالثة ، حيث كان أول اختبارين بمثابة تمارين تدريبية.
6. اختبار المجال المفتوح (OFT)
ملاحظة: يستخدم OFT لتقييم حالة الحركة اللاإرادية ، بهدف تحديد السلوك المرضي. تم وضع أربع ساحات مربعة مفتوحة المجال (50 سم × 50 سم × 40 سم) معا لتشكيل الجهاز. تم تقسيم الجزء السفلي من الصندوق إلى تسعة مربعات متساوية.
7. القتل الرحيم وجمع العينات
8. التحليل النسيجي
9. مقايسة الممتز المناعي المرتبط بالإنزيم (ELISA)
10. التحليل الإحصائي
الوصول مقيد. يرجى تسجيل الدخول أو بدء فترة تجريبية لعرض هذا المحتوى.
طورت الفئران النموذجية التي يسببها PG أعراض التهاب المفاصل المحيطي ، والتي تتميز باحمرار وتورم الأطراف وأصابع القدم ، وطورت تدريجيا التهاب المفاصل المحوري في وقت مبكر من الأسبوع 14 ، وهو مشابه جدا لمظهر AS. لذلك ، اعتبر نموذج الماوس AS ناجحا إذا كان مؤشر التهاب المفاصل (الذكاء الاصطناعي) أكثر من 3 نقاط في 14 أسبوعا بعد الحقنالأخير 22. عندما بدت أقدام الفئران منتفخة ، تم إجراء علاج الكى Du مرة واحدة في الأسبوع لما مجموعه 3x. بعد العلاج ، تم القتل الرحيم للفئران عن طريق خلع عنق الرحم تحت التخدير الع...
الوصول مقيد. يرجى تسجيل الدخول أو بدء فترة تجريبية لعرض هذا المحتوى.
يتجلى AS سريريا كألم تورم في الظهر وأسفل الظهر والمفاصل ، وقد يحدث تشوه في العمود الفقري وصلابة المفاصل في الحالات الشديدة26. يمكن أن يؤدي التشخيص والعلاج المبكر إلى تحسين نوعية الحياة وتقليل معدلات الإعاقة وتحسين توقعات المرضى الذين يعانون من AS. وفقا للطب الصيني التقليدي (TCM) ، يعتقد أن AS ناتج عن نقص يانغ في الكلى وخط الطول دو ، بالإضافة إلى تراكم الشر البارد داخليا. يرى الطب الصيني التقليدي أن الكى ، بناء على مفهوم خطوط الطول ، يمكن أن يولد Qi الذي يسخن سطح الجسم. ثم ينتقل Qi هذا لأسفل على طو...
الوصول مقيد. يرجى تسجيل الدخول أو بدء فترة تجريبية لعرض هذا المحتوى.
ليس لدى المؤلفين أي تضارب في المصالح للإعلان عنه.
تم دعم هذا العمل من قبل البرنامج العام للمؤسسة الوطنية للعلوم الطبيعية في الصين (رقم 82174491) ومشروع الميراث الأكاديمي لمدرسة تشيلو للطب الصيني التقليدي (No. لو ويهان [2020]132). شكرا لمركز المختبر بجامعة شاندونغ للطب الصيني التقليدي لتزويدنا بالظروف التجريبية.
الوصول مقيد. يرجى تسجيل الدخول أو بدء فترة تجريبية لعرض هذا المحتوى.
| الاسم | الشركة | رقم فهرسي | التعليقات |
|---|---|---|---|
| 10 ٪ EDTA | شنغهاي ماكلين الكيمياء الحيوية المحدودة ، شنغهاي ، الصين | ||
| منصات الكحول | HYNAUT ، تشينغداو هاينو للهندسة البيولوجية المحدودة ، تشينغداو ، الصين | ||
| آلة التخدير | المستلزمات الطبية & الخدمات INT. المحدودة ، Keighley ، أنابيب الطرد المركزي في المملكة المتحدة | ||
| Axygen ، Corning ، NewYork ، UAS | |||
| كاملة مساعد Frech (CFA) | علاء الدين ، شنغهاي ، الصين | F393378 | |
| كرة القطن | Henan RUIKE Medical Equipment Co.، Ltd. ، Xinxiang ، الصين | ||
| شاش القطن | Henan RUIKE MEDICAL Equipment Co.، Ltd. ، Xinxiang ، الصين | ||
| لوح التقطيع | التحضير | ||
| decorin من الغضروف المفصلي البقري | Sigma-Aldrich ، MO ، الولايات المتحدة الأمريكية | D8428 | |
| Veet ، Reckitt Benckiser (الصين) Investment Co. LTD ، شنغهاي ، الصين | |||
| مقياس إلكتروني | شنغهاي Yajin Electronic Technology Co.، Ltd. ، شنغهاي ، الصين | ||
| أنبوب | EppendorfAxygen ، Corning ، نيويورك ، زيوت | ||
| Beijing Shuangji Pharmaceutical Co.، LTD. ، بكين ، الصين | |||
| الزنجبيل | ذاتي التحضير | ||
| GraphPad Prism 7 برنامج | GraphPad Software ، بوسطن ، الولايات المتحدة الأمريكية | ||
| ماكينة قص الشعر | Super Human Group CO LTD ، Jinhua ، الصين | ||
| وسادات | التدفئةشنتشن Leshuo التكنولوجيا المحدودة ، شنتشن ، الصين | ||
| فرويند غير المكتمل s مساعد (IFA) | علاء الدين ، شنغهاي ، الصين | حقن F393371 | |
| ؛ حقنة | شاندونغ شينخوا أندي للمستلزمات الطبية المحدودة ، زيبو ، الصين | ||
| isoflurane | شنتشن Rayward Life Technology Co.، LTD ، Shenzhen ، الصين | R510-22-10 | |
| جوس عصا | Shijiazhuang Lidu Fragrant Industry Co.، LTD. ، Shijiazhuang ، الصين | ||
| عصارة | براون (شنغهاي) المحدودة ، شنغهاي ، الصين | ||
| سكين | ولاعة ذاتية التحضير | ||
| تشجيانغ ولاعة النمر المحدودة | |||
| ملاط | Luoyang Yinai Ceramic Technology Co.، LTD.، Luoyang، الصين | ||
| Mouse IL-17 ELISA Kit | absin، شنغهاي، الصين | abs520009-96T | |
| ماوس TNF- & ألفا; إليسا كيت | ووهان Sanying ، Wuhan ، الصين | KE10002 | |
| ورق التوت | Yishui County Mulinsang paper Co.، LTD ، Linyi ، China | ||
| OFT | Xinruan ، Shanghai ، China | XR-XZ301 | |
| التحضير | الذاتي للأكواب الورقية | ||
| OXFORD BIO INSTRUMENTS INC. ، أكسفورد ، المملكة المتحدة | |||
| المكررة MOXA المخملية | الإعداد | الذاتي | |
| rotarod | Xinruan ، شنغهاي ، الصين | XR-6C | |
| scientz-48L طاحونة الأنسجة المبردة عالية الإنتاجية | نينغبو Xinzhi التكنولوجيا الحيوية المحدودة | ||
| مقص | شاندونغ جيaren للمستلزمات الطبية المحدودة ، زيبو ، الصين | ||
| آلة تقطيع البارافين شبه الأوتوماتيكية | Leica Camera AG ، Watznach ، ألمانيا | ||
| SPSS 25.0 برنامج | International Business Machines Corporation ، نيويورك ، UAS | ||
| التحضير | الذاتي لمسحوق الطب الصيني | ||
| التقليدي Biosharp ، Labgic ، بكين ، الصين | |||
| فرشاة الكتابة | Yishui County Mulinsang paper Co.، LTD ، Linyi ، الصين |
الوصول مقيد. يرجى تسجيل الدخول أو بدء فترة تجريبية لعرض هذا المحتوى.