يتطلب اشتراك JoVE لعرض هذا المحتوى. تسجيل الدخول أو ابدأ نسخة تجريبية مجانية

مقالة منهجية

نظام استزراع آلي للحفاظ على الخلايا الجذعية متعددة القدرات التي يسببها الإنسان وتمييزها

2.5K مشاهدة

⸱

DOI:

10.3791/65672

⸱

يناير 26, 2024

 ,  , 
1Innovative Regenerative Medicine, Kansai Medical University Graduate School of Medicine

في هذه المقالة

ملخص

هنا ، نقدم بروتوكولا لنظام زراعة الخلايا الآلي. يقلل نظام الاستزراع الآلي هذا من العمالة ويفيد المستخدمين ، بما في ذلك الباحثين غير المعتادين على التعامل مع الخلايا الجذعية المستحثة متعددة القدرات (iPS) ، من صيانة الخلايا الجذعية المستحثة متعددة القدرات إلى التمايز إلى أنواع مختلفة من الخلايا.

الملخص

من المتوقع أن يكون للخلايا الجذعية متعددة القدرات التي يسببها الإنسان (hiPSCs) ذات القدرة اللانهائية على التكاثر الذاتي تطبيقات في العديد من المجالات ، بما في ذلك توضيح أمراض الأمراض النادرة ، وتطوير أدوية جديدة ، والطب التجديدي الذي يهدف إلى استعادة الأعضاء التالفة. على الرغم من ذلك ، لا يزال التنفيذ الاجتماعي ل hiPSCs محدودا. ويرجع ذلك جزئيا إلى صعوبة إعادة إنتاج التمايز في الثقافة ، حتى مع المعرفة المتقدمة والمهارات التقنية المتطورة ، بسبب الحساسية العالية ل iPSCs للتغيرات البيئية الدقيقة. يمكن أن يؤدي تطبيق نظام الثقافة الآلي إلى حل هذه المشكلة. يمكن توقع تجارب ذات قابلية استنساخ عالية مستقلة عن مهارة الباحث وفقا لإجراء مشترك عبر مختلف المعاهد. على الرغم من أن العديد من أنظمة الاستزراع الآلي التي يمكنها الحفاظ على ثقافات iPSC وتحفيز التمايز قد تم تطويرها سابقا ، إلا أن هذه الأنظمة ثقيلة وكبيرة ومكلفة لأنها تستخدم أذرعا روبوتية إنسانية متعددة المفاصل. لتحسين المشكلات المذكورة أعلاه ، قمنا بتطوير نظام جديد باستخدام نظام سكة منزلق بسيط للمحور x-y-z ، مما يسمح له بأن يكون أكثر إحكاما وأخف وزنا وأرخص. علاوة على ذلك ، يمكن للمستخدم بسهولة تعديل المعلمات في النظام الجديد لتطوير مهام معالجة جديدة. بمجرد إنشاء المهمة ، كل ما يحتاجه المستخدم هو إعداد iPSC ، وتوفير الكواشف والمواد الاستهلاكية اللازمة للمهمة المطلوبة مسبقا ، وتحديد رقم المهمة ، وتحديد الوقت. أكدنا أن النظام يمكنه الحفاظ على iPSCs في حالة غير متمايزة من خلال عدة ممرات بدون خلايا مغذية والتمايز إلى أنواع مختلفة من الخلايا ، بما في ذلك خلايا عضلة القلب وخلايا الكبد والأسلاف العصبية والخلايا الكيراتينية. سيمكن النظام من إجراء تجارب قابلة للتكرار بدرجة كبيرة عبر المؤسسات دون الحاجة إلى باحثين مهرة وسيسهل التنفيذ الاجتماعي ل hiPSCs في مجموعة واسعة من مجالات البحث من خلال تقليل العقبات التي تحول دون الدخول الجديد.

المقدمة

تهدف هذه المقالة إلى توفير إجراءات معالجة فعلية ومفصلة لنظام زراعة آلي للخلايا الجذعية متعددة القدرات التي يسببها الإنسان (iPSC) ، والتي أنتجناها بالتعاون مع شركة ، وإظهار نتائج تمثيلية.

منذ نشر المقال في عام 2007 ، جذبت iPSC الانتباه في جميع أنحاء العالم1. نظرا لأعظم ميزة لها تتمثل في القدرة على التمايز إلى أي نوع من الخلايا الجسدية ، فمن المتوقع أن يتم تطبيقها في مجالات مختلفة مثل الطب التجديدي ، وتوضيح أسباب الأمراض المستعصية ، وتطوير أدوية علاجية جديدة 2,3. بالإضافة إلى ذلك ، فإن استخدام الخلايا الجسدية البشرية المشتقة من iPSC يمكن أن يقلل من التجارب على ، والتي تخضع لقيود أخلاقية كبيرة. على الرغم من أن العديد من iPSCs المتجانسة مطلوبة باستمرار للبحث عن طرق جديدة مع iPSCs ، إلا أن إدارتها شاقة للغاية. علاوة على ذلك ، فإن التعامل مع iPSC أمر صعب بسبب حساسيته العالية ، حتى للتغيرات الثقافية والبيئية الدقيقة.

لحل هذه المشكلة ، من المتوقع أن تؤدي أنظمة الثقافة الآلية المهام بدلا من البشر. طورت بعض المجموعات عددا قليلا من أنظمة زراعة الخلايا الجذعية البشرية الآلية متعددة القدرات لصيانة الخلايا والتمايز ونشرت إنجازاتها4،5،6. تجهز هذه الأنظمة ذراعا (أذرع) روبوتية متعددة المفاصل. لا تتمتع الأذرع الروبوتية بميزة من حيث أنها تحاكي حركات الذراع البشرية فحسب ، بل إنها أيضا تعيب من حيث أنها تتطلب تكلفة (تكاليف) أعلى للذراع (الذراعات) ، وتغليف نظام أكبر وأثقل ، وجهود تعليمية تستغرق وقتا طويلا من قبل المهندسين للحصول على الحركات المستهدفة 7,8. من أجل تسهيل إدخال الجهاز إلى المزيد من المرافق البحثية في نقاط الاستهلاك الاقتصادي والمساحي والموارد البشرية ، قمنا بتطوير نظام ثقافة آلي جديد لصيانة وتمييز iPSC إلى أنواع مختلفة من الخلايا9.

كان الأساس المنطقي للنظام الجديد هو اعتماد نظام سكة حديد المحور X-Y-Z بدلا من الأذرع الروبوتية متعددة المفاصل9. لاستبدال الوظائف المعقدة الشبيهة باليد للأذرع الروبوتية ، قمنا بتطبيق فكرة جديدة على هذا النظام ، والتي يمكنها تلقائيا تغيير ثلاثة أنواع من أطراف الذراع الوظيفية المحددة. هنا ، نشير أيضا إلى كيف يمكن للمستخدمين بسهولة عمل جداول المهام بأوامر بسيطة على البرامج بسبب عدم وجود متطلبات لمساهمات المهندسين طوال العملية.

أظهر أحد أنظمة الاستزراع الروبوتي صنع أجسام جنينية باستخدام 96 لوحة بئر كمجاميع خلايا ثلاثية الأبعاد للتمايز4. لا يمكن للنظام المذكور هنا التعامل مع 96 لوحة بئر. حقق أحدهما درجة ممارسات التصنيع الجيدة الحالية (cGMP) باستخدام خط الخلية ، على الرغم من أنها لم تكن خلية جذعية بشرية متعددة القدرات5. تم الآن تطوير نظام الاستزراع الآلي المفصل هنا بهدف محدد هو مساعدة التجارب المعملية (الشكل 1). ومع ذلك ، فإنه يحتوي على أنظمة كافية للحفاظ على مستويات نظيفة تعادل خزانة أمان من المستوى الرابع.

الوصول مقيد. يرجى تسجيل الدخول أو بدء فترة تجريبية لعرض هذا المحتوى.

البروتوكول

وافقت لجنة الأخلاقيات بجامعة كانساي الطبية على توليد واستخدام iPSCs الصحية المشتقة من المتطوعين المسماة KMUR001 (الموافقة رقم 2020197). قدم المتبرع ، الذي تم تجنيده علنا ، موافقة رسمية مستنيرة ووافق على الاستخدام العلمي للخلايا.

ملاحظة: الواجهة الحالية (البرنامج الخاص المسمى "ccssHMI" الذي يعمل تحت نظام التشغيل Windows XP) هي شاشة التشغيل الأساسية. تحت الواجهة المذكورة أعلاه ، يتم ترتيب سلسلة من علامات التبويب ، مما يسمح للمستخدمين ببدء عمليات مختلفة.

1. عمليات التحميل

  1. انقر على تحميل زر على الشاشة العلوية للبرنامج. انقر فوق الزر بدء إعداد التحميل .
  2. ضع الطبق (الأطباق) أو اللوحة (الأطباق) المراد إدخالها في الجهاز في موضعها في الجهاز.
    ملاحظة: يجب كتابة المعلومات اللازمة لتحديد الطبق على كل غطاء.
  3. أغلق النافذة المنزلقة الأمامية يدويا واضغط على زر تأكيد السلامة الميكانيكية.
  4. حدد نوع وكمية الطبق (الأطباق) أو اللوحة (الأطباق) في البرنامج.
  5. انقر فوق الزر اكتمل إعداد التحميل . انقر فوق الزر بدء التحميل .
  6. بعد تحميل طبق في النظام، حدد المعلومات الموجودة على الطبق، مثل خلايا iPS أو بدون خلايا iPS، على البرنامج. تسجيل ملاحظات حول كل طبق في البرنامج.
  7. انقر فوق الزر "تسجيل " في النهاية لإكمال عملية التحميل.

2. عملية التفريغ

  1. انقر على تفريغ زر على الشاشة العلوية للبرنامج. حدد الطبق (الأطباق) المراد إزالته في البرنامج.
  2. بعد تحديد الطبق (الأطباق) ، انقر فوق الزر "بدء التحضير" للتفريغ . انقر فوق الزر "بدء تفريغ ".
  3. بعد نقل الطبق (الأطباق) من الحاضنة إلى طاولة العمل في النظام ، اضغط على زر إزالة الطبق .
  4. افتح النافذة المنزلقة الأمامية يدويا وأخرج الطبق (الأطباق). أغلق النافذة المنزلقة الأمامية يدويا واضغط على زر تأكيد السلامة الميكانيكية.

3. ملحق المواد الاستهلاكية: الماصات والأنابيب والمتوسطة

  1. لتجديد المواد الاستهلاكية مثل الماصات والأنابيب والوسيط، انقر على زر المواد الاستهلاكية على الشاشة العلوية للبرنامج، ثم حدد العنصر المراد تجديده.
    1. الماصات
      1. انقر فوق زر الماصة . حدد الزر تجديد .
      2. حدد رفا يريد المستخدم تجديده على البرنامج. انقر فوق الزر تجديد البدء .
      3. بعد التأكد من فتح غطاء منطقة تخزين الماصة على طاولة العمل ، افتح النافذة المنزلقة الأمامية يدويا وقم بتجديد الماصات حسب الحاجة.
      4. أغلق النافذة المنزلقة الأمامية يدويا واضغط على زر تأكيد السلامة الميكانيكية. انقر فوق الزر تجديد مكتمل .
      5. انقر فوق الزر إعداد التجديد وأدخل معلومات التجديد ، ثم انقر فوق الزر تسجيل .
      6. انقر فوق الزر تجديد مكتمل .
    2. انابيب
      1. انقر فوق الزر Tube . حدد الزر تجديد .
      2. حدد رفا يريد المستخدم تجديده على البرنامج. انقر فوق الزر تجديد البدء .
      3. بعد التأكد من انتقال الحامل إلى الأعلى ، انقر فوق الزر Replenish Tube .
      4. افتح النافذة المنزلقة الأمامية يدويا وقم بتجديد الأنابيب حسب الحاجة.
      5. أغلق النافذة المنزلقة الأمامية يدويا واضغط على زر تأكيد السلامة الميكانيكية.
      6. انقر فوق الزر تجديد مكتمل .
      7. انقر فوق الزر إعداد التجديد وأدخل معلومات التجديد ، ثم انقر فوق الزر تسجيل . انقر فوق الزر إغلاق .
    3. متوسط
      1. انقر فوق الزر متوسط . حدد ملف تجديد زر في البرنامج.
      2. حدد رفا واحدا من ثلاثة يريد المستخدمون تجديده. انقر فوق الزر تجديد البدء .
      3. بعد التأكد من فتح غطاء منطقة التخزين المتوسطة ، افتح النافذة المنزلقة الأمامية يدويا وقم بتجديد الوسيط.
      4. أغلق النافذة المنزلقة الأمامية يدويا واضغط على زر تأكيد السلامة الميكانيكية.
      5. انقر فوق الزر تجديد مكتمل .
      6. انقر فوق الزر "تجديد " وأدخل المعلومات الخاصة بالوسيط، بما في ذلك اسم الوسيط ومقداره. أدخل تعليقات إضافية إذا لزم الأمر.
      7. انقر فوق الزر تسجيل .
      8. انقر فوق الزر إغلاق .

4. اختيار المهمة

  1. انقر على مهمة زر على الشاشة العلوية للبرنامج.
  2. حدد زر إعداد المهمة . حدد المهمة المطلوبة من قائمة المهام وانقر فوق الزر الخطوة التالية .
  3. حدد التاريخ والوقت لتنفيذ المهمة، ثم انقر فوق الزر تسجيل . حدد طبقا أو طبقا لتنفيذ المهمة، ثم انقر فوق الزر تسجيل .
  4. بعد إعادة تأكيد المهمة المحددة ، انقر فوق الزر تسجيل . تأكد من تسجيل المهمة على الشاشة التالية.
  5. إذا لزم الأمر ، قم بتعيين المهمة التالية بنفس الطريقة.
  6. انقر فوق الزر "ابدأ" في النهاية. بعد ذلك ، ستبدأ المهمة تلقائيا في التاريخ والوقت المحددين.
    ملاحظة: مباشرة بعد الانتهاء من كل مهمة ، يتم تشغيل مصابيح الأشعة فوق البنفسجية (الموجودة على جانبي غطاء المحرك) تلقائيا ، وبعد 5-30 دقيقة ، وفقا للإعداد الإضافي ، يتم إيقاف تشغيلها للحفاظ على غطاء المحرك في حالة معقمة. للتوقف، يمكن للمستخدمين النقر فوق الزر ابدأ .
  7. إذا أراد المستخدمون إلغاء مهمة مجدولة مسبقا، فانقر فوق الزر إيقاف .
  8. بعد تحديد المهمة المراد إحباطها، انقر فوق الزر تحرير المهمة .
  9. انقر فوق الزر إلغاء المهمة . تأكد من حذف المهمة على الشاشة التالية.

5. تحقق من صور الخلية

  1. تتضمن كل مهمة ملاحظات مجهرية (التقاط صور) قبل وبعد عمل المهمة. راقب تقدم زراعة الخلايا فوتوغرافيا من خلال دمج مهمة التصوير المجهري قبل أو بعد كل مهمة.
  2. حدد برامج المهام المحددة مسبقا ، بما في ذلك تحديد مواقع محددة متعددة للطبق أو لوحة البئر مسبقا لمراقبة نقطة ثابتة لمراقبة نفس الموقع بمرور الوقت.

6. المرور والتمايز

  1. اتبع الخطوات الواردة في الأقسام 1-5 واضبط نظام زراعة الخلايا الآلي لأداء التمرير والتمايز. يتم عرض إعدادات الأداة للتمرير ، وتمايز الخلايا العضلية القلبية ، وتمايز خلايا الكبد ، وتمايز الخلايا العصبية السلائف ، وتمايز الخلايا الكيراتينية في الجدول 1 والجدول 2 والجدول 3 والجدول 4 والجدول 5 على التوالي.

الوصول مقيد. يرجى تسجيل الدخول أو بدء فترة تجريبية لعرض هذا المحتوى.

النتائج

صيانة الخلايا الجذعية متعددة القدرات التي يسببها الإنسان
استخدمنا ثلاثة خطوط hPSC (RIKEN-2F و 253G1 و KMUR001). لقد قمنا بتحسين بروتوكول الصيانة من خلال التجارب اليومية التي يتم إجراؤها يدويا وقمنا بتحسين البرامج التفصيلية من خلال التجارب الأولية السبع التي يقوم بها النظام. على سبيل المثال ، تختلف إجهادات القص الناتجة عن سرعات السائل لتدفق البصاق من الماصات المختلفة التي يتعامل معها البشر والنظام تماما. لذلك ، قمنا بتحسين المدة الزمنية لعملية الهضم الأنزيمي وعدد الماصات لتشتت الخلايا بواسطة النظام.

الوصول مقيد. يرجى تسجيل الدخول أو بدء فترة تجريبية لعرض هذا المحتوى.

المناقشة

تتمثل إحدى الخطوات المهمة في البروتوكول في أنه إذا وجد المستخدم أي أخطاء ، فانقر فوق الزر "إلغاء" أو "إيقاف" أو "إعادة تعيين" في أي وقت وابدأ من جديد من الخطوة الأولى. يمكن للبرنامج تجنب الأخطاء البشرية ، بما في ذلك الحجز المزدوج ، وفتح الأبواب أثناء تنشيط مهام النظام ، ونقص التجديد. نقطة أخرى حاسمة للتمايز الناجح والفعال للخلية الجسدية المرغوبة هي الاختيار الصحيح لخطوط الخلايا الجذعية متعددة القدرات لأن كل خلية جذعية متعددة القدرات لها تحيز لا يمكن السيطرة عليه في خصائص التمايز14,15

الوصول مقيد. يرجى تسجيل الدخول أو بدء فترة تجريبية لعرض هذا المحتوى.

الإفصاحات

ليس لدى المؤلف ما يكشف عنه.

شكر وتقدير

تم دعم هذه الدراسة بمنحة من مركز ترويج الأعمال الجديدة ، شركة باناسونيك لهندسة الإنتاج المحدودة ، أوساكا ، اليابان.

الوصول مقيد. يرجى تسجيل الدخول أو بدء فترة تجريبية لعرض هذا المحتوى.

المواد

قائمة المواد المستخدمة في هذه المقالة
الاسمالشركةرقم فهرسيالتعليقات
0.15٪ مصل ألبومين بقري الكسر Vفوجي فيلم واكو كيميكال إنك ، ميازاكي ، اليابان9048-46-8
1٪ GlutaMAXThermo Fisher Scientific35050061
ألواح بلاستيكية مقاس 10 سم   ؛Corning Inc., NY, United States430167
253G1RKEN Bioresource ResearchCenter HPS0002
2-mercaptoethanolThermo Fisher Scientific21985023
Actinin  mouseAbcamab9465
Activin A Nacali Tesque18585-81
AdenineThermo Fisher ScientificA14906.30
Albumin  أرنبDakoA0001
حمض الريتينويك المتحولةبالكامل Fuji Film Wako Chemical Inc. 186-01114
نظام الاستزراع الآليمكمل باناسونيك
B-2717504044ثيرمو فيشر العلمي
bFGFفوجي فيلم واكو كيميكال إنك   ؛062-06661
BMP4 ثيرمو فيشر العلميPHC9531
ألبومين مصل الأبقارميرك810037
CHIR-99021   ؛MCE ، نيوجيرسي ، الولايات المتحدة #HY-10182252917-06-9
تعريف الخلايا الكيراتينية SFMالحرارية فيشر العلمية10744019الخلايا الكيراتينية البشرية المتوسطة
ديكساميثازونميرك266785
ديهكساس & nbsp ؛TRC ، أونتاريو ، كندا13071-60-8rac-1،2-Dihexadecylglycerol
مقياس الدم القابل للتصرفCountessTM شرائح غرفة عد الخلايا ، Thermo Fisher ScientificC10228
DorsomorphinThermo Fisher Scientific1219168-18-9
Dulbecco ' s تعديل النسر المتوسط / F12   ؛شركة فوجي فيلم واكو للكيماويات12634010
EGFفوجي فيلم واكو كيميكال إنك. 053-07751
أساسي 8 ثيرمو فيشر A1517001 العلميالجذعية البشرية متعددة القدرات وسط
مصل الأبقار الجنينية Biowest, FL, الولايات المتحدةS140T
FGF-basic شركة Nacalai Tesque19155-07
فورسكولينثيرمو فيشر العلميJ63292. MF
الجلوتامينالحراري فيشر 25030081 العلممكمل الجلوتامين
الماعز IgG (H + L) AlexaFluo546Thermo ScientificA11056
HNF-4A   الماعزسانتاكروز6556
هيدروكورتيزونثيرمو فيشر العلميA16292.06
هيدروكورتيزون 21-هيميسوكسيناتميركH2882
iMatrix511 الحرير Nippi Inc., طوكيو, اليابان892 021مصفوفة زراعة الخلية
الأنسولين-ترانسفيرين-السيلينيومثيرمو فيشر 41400045
الكيراتين 1  فأرسانتاكروز376224
الكيراتين 10  أرنبBioLegend19054
KMUR001جامعة كانساي الطبية iPSCs المشتقة من المريض 
مصل بالضربة القاضيةThermo Fisher Scientific10828010
حمض الأسكوربيك L-2-phosphate   ؛A8960 ، ميركA8960
ليبوفيتز s L-15 متوسطة شركة فوجي فيلم واكو للكيماويات128-06075
شركة ماتريجلكورنينج354277
ماوس IgG (H + L) AlexaFluo488Thermo ScientificA21202
N-2 مكملThermo Fisher Scientific17502048
Nestin mouseSantacruz23927
Neurobasal mediumThermo Fisher Scientific21103049
Neurofilament   أرنبChemiconAB1987
NeutristemSartrius AG ، G & ouml ؛ ttingen ، ألمانيا05-100-1Aوسط زراعة الخلايا   ؛
Oct 3/4  ماوسBD611202
PBS(-)Nacalai Tesque Inc., Kyoto, Japan14249-24
Rabbit IgG(H+L) AlexaFluo488Thermo ScientificA21206
Rabbit IgG(H+L) AlexaFluo546Thermo ScientificA10040
الألبومين البشري المؤتلف A0237 ، ميرك ، دارمشتات ، ألمانياA9731
مثبط كيناز رو ، Y-27632   ؛شركة Sellec Inc. ، طوكيو ، اليابان129830-38-2
RIKEN 2FRKEN Bioresource Research CenterHPS0014hiPSCs غير المتمايزة   ؛
RPMI 1640 ثيرمو فيشر Scientific # 1187512633020
SB431542Thermo Fisher Scientific301836-41-9
الصوديوم L-ascorbateMerckA4034-100G
SSEA-4   ؛ الماوسMilliporeMAB4304
StemFit AK02N  Ajinomoto ، طوكيو ، اليابانAK02وسط زراعة الخلايا 
TnT أرنبأبكامab92546
TRA 1-81 فأرميليبورMAB4381
ثلاثي يودوثيرونينثيرمو فيشر العلميH34068.06
TripLETM إنزيم صريح   ؛Thermo Fisher Scientific, Waltham, MA, الولايات المتحدة12604013
Trypan blue solution Nacalai Tesque ، كيوتو ، اليابان20577-34
مرق فوسفات التربتوزMerckT8782-500G
Wnt-C59   ؛Bio-techne, NB, المملكة المتحدة5148
β   figure-materials-1 Tublin  الماوسPromegaG712A
الخلايا استبدال

المراجع

  1. Okita, K., et al. A more efficient method to generate integration-free human iPS cells. Nature Methods. 8 (5), 409-412 (2011).
  2. Tanaka, T., et al. In vitro pharmacologic testing using human induced pluripotent stem cell-derived cardiomyocytes. Biochemical and Biophysical Research Communications. 385 (4), 497-502 (2009).
  3. Egashira, T., et al. Disease characterization using LQTS-specific induced pluripotent stem cells. Cardiovascular Research. 95 (4), 419-429 (2012).
  4. Sasamata, M., et al. Establishment of a robust platform for induced pluripotent stem cell research using Maholo LabDroid. SLAS technology. 26 (5), 441-453 (2021).
  5. Tristan, C. A., et al. Robotic high-throughput biomanufacturing and functional differentiation of human pluripotent stem cells. Stem Cell Reports. 16 (12), 3076-3092 (2021).
  6. Konagaya, S., Ando, T., Yamauchi, T., Suemori, H., Iwata, H. Long-term maintenance of human induced pluripotent stem cells by automated cell culture system. Scientific Reports. 5, 16647(2015).
  7. McClymont, D. W., Freemont, P. S. With all due respect to Maholo, lab automation isn't anthropomorphic. Nature Biotechnology. 35 (4), 312-314 (2017).
  8. Gonzalez, F., Zalewski, J. Teaching joint-level robot programming with a new robotics software tool. Robotics. 6 (4), 41(2017).
  9. Bando, K., Yamashita, H., Tsumori, M., Minoura, H., Okumura, K., Hattori, F. Compact automated culture system for human induced pluripotent stem cell maintenance and differentiation. Frontiers in Bioengineering and Biotechnology. 10, 1074990(2022).
  10. Tohyama, S., et al. Glutamine oxidation is indispensable for survival of human pluripotent stem cells. Cell Metabolism. 23 (4), 663-674 (2016).
  11. Yamashita, H., Fukuda, K., Hattori, F. Hepatocyte-like cells derived from human pluripotent stem cells can be enriched by a combination of mitochondrial content and activated leukocyte cell adhesion molecule. JMA journal. 2 (2), 174-183 (2019).
  12. Shimojo, D., et al. Rapid, efficient and simple motor neuron differentiation from human pluripotent stem cells. Molecular Brain. 8 (1), 79(2015).
  13. Nishimoto, R., Kodama, C., Yamashita, H., Hattori, F. Human induced pluripotent stem cell-derived keratinocyte-like cells for research on Protease-Activated Receptor 2 in nonhistaminergic cascades of atopic dermatitis. The Journal of Pharmacology and Experimental Therapeutics. 384 (2), 248-253 (2023).
  14. International Stem Cell Initiative. Screening ethnically diverse human embryonic stem cells identifies a chromosome 20 minimal amplicon conferring growth advantage. Nature Biotechnology. 29 (12), 1132-1144 (2011).
  15. Keller, A., et al. Genetic and epigenetic factors which modulate differentiation propensity in human pluripotent stem cells. Human Reproduction Update. 24 (2), 162-175 (2018).

الوصول مقيد. يرجى تسجيل الدخول أو بدء فترة تجريبية لعرض هذا المحتوى.

إعادة الطباعة والأذونات

استكشف المزيد من المقالات

الاستزراع الخلوي المؤتمتتمايز الخلايا الجذعيةصيانة الخلاياتمرير الخلاياتحليل القياس المناعي الخلويتقييم الصور القائم على الذكاء الاصطناعيتكاثر الخلاياالتعاون البحثي العالمي
نظام استزراع آلي للحفاظ على الخلايا الجذعية متعددة القدرات التي يسببها الإنسان وتمييزها
تواصل معنا
أوصِ به للمكتبة

الخصوصية

شروط الاستخدام

السياسات

حقوق الطبع والنشر © 2026 MyJoVE Corporation. جميع الحقوق محفوظة.