تم إجراء سلسلتين من تقييمات الوسم لمعالجة فعالية وضع علامات على الشاد للأحداث - تجارب أولية في عام 2020 ودراسة احتجاز طويلة الأجل في عام 2021. تم إجراء تقييمات معملية أولية في PNNL في نوفمبر 2020 لتحديد الطريقة المفضلة لزرع الشاد الأمريكي بناقل صوتي دقيق جديد. تم إقران تصميمات أجهزة الإرسال النموذجية (n = 4 ، P1-P4) بمواقع وسم مختلفة (المعدة والصدر والحوض والظهر) لما مجموعه 4 معالجات فريدة لموقع وضع علامات على جهاز الإرسال الصوتي (ن = 40 سمكة لكل معاملة ، الجدول 1). تم تعيين جميع أسماك الاختبار بشكل عشوائي إلى خزان العلاج والاحتجاز. تم إجراء اختبار الأسماك في حوضين مع أعداد متساوية من الأسماك من كل معاملة (أي 20 سمكة لكل معاملة) لكل حوض لمدة 14 يوما. في أول يومين من التقييم ، تم الاحتفاظ بالشاد في المياه المالحة قليلة الملوحة (7.5 جزء في الألف) وسمح له بالتعافي من وضع العلامات والمناولة. ثم تم تحويل الخزانات إلى مياه عذبة متدفقة للفترة المتبقية من فترة التقييم.
بالنسبة للتقييم الأولي ، تراوح حجم الأسماك الموسومة والزعانف في الطول من 50-80 مم في طول الشوكة. كان بقاء صغار الشاد والاحتفاظ بالعلامات أعلى بالنسبة للأسماك المزروعة عن طريق شق صدري مقارنة بتقنيات وضع العلامات الأخرى (الشكل 3). كما أظهرت تقييمات تجريبية إضافية أن تقنيات المناولة مثل عمليات النقل من الماء إلى الماء والاحتفاظ بالأسماك في المياه المالحة قليلة الملوحة قبل وبعد الأحداث المجهدة ، مثل وضع العلامات ، كانت حاسمة لزيادة معدلات البقاء على قيد الحياة.
باستخدام بروتوكولات وضع العلامات والمناولة الناجحة من التقييم الأولي ، أجريت دراسة مخبرية في PNNL في عام 2021 لتقييم البقاء على قيد الحياة على المدى الطويل 60 يوما والاحتفاظ بالعلامات للشاد الأمريكي اليافع المزروع بجهاز إرسال صوتي باستخدام طريقة وضع علامات على الشق الصدري. استخدم التقييم طويل الأجل جهاز الإرسال الوهمي P5 (الشكل 4) ، وهو تصميم نموذج أولي محسن مشابه في الشكل والحجم لتصميم P1 المستخدم في التقييم الأولي. كان متوسط أبعاد ووزن علامة P5 الوهمية بطول 7.6 مم × قطر 2.3 مم ووزن في الهواء 0.058 جم (انحراف معياري 0.002 جم) ، مما أدى إلى عبء علامة بنسبة <1٪. يبلغ طول جهاز الإرسال الصوتي النموذجي ذو المكونات الوظيفية (الشكل 4) أبعادا يبلغ طولها 7.6 مم × قطرها 2.0 مم ووزنها في الهواء 0.050 جم.
تم احتجاز الشاد الأمريكي اليافع المستخدم في التقييم طويل الأجل في الأسر لمدة 4 أشهر في وقت الاختبار. في حين تم تصميم التجربة للحصول على أعداد متساوية من أسماك المعالجة والسيطرة المحتفظ بها في حوضين لمدة 60 يوما ، كانت أعداد الشادة المتبقية في وقت وضع العلامات منخفضة. لذلك ، تم تعيين المزيد من الشاد بشكل عشوائي لمجموعة العلاج الموسومة أكثر من المجموعة الضابطة للحصول على فهم أفضل لفعالية تقنية وضع العلامات على الشاد على المدى الطويل. كان كل من الخزانين يحتوي على 27 سمكة معالجة و 9 أو 10 أسماك مراقبة. ومع ذلك ، نظرا لأن البقاء على قيد الحياة من الدبابة A (13.8٪) كان أسوأ بكثير من الخزان B (78.4٪ ؛ اختبار فيشر الدقيق ، p < 0.001) ولم يكن هناك فرق في البقاء على قيد الحياة بين المجموعات الموسومة والمجموعة الضابطة داخل كل خزان ، فقط نتائج الخزان B مدرجة هنا.
تم تمييز الشاد (طول الشوكة 69-105 مم ؛ الوزن 3.9-11.7 جم) إما بمرسل P5 باستخدام الشق الصدري (ن = 27) أو تم تخصيصه لمجموعة التحكم (ن = 10). تم التعامل مع أسماك التحكم باستخدام نفس الإجراءات ، بما في ذلك وضعها على الوسادة الجراحية لمدة ~ 20 ثانية ، لكنها لم تتلق مشبك زعنفة أو شق ولم يتم زرعها بجهاز إرسال. بعد وضع العلامات ، تم الاحتفاظ بكلتا مجموعتي المعالجة في المياه المالحة المالحة (7.5 جزء في الألف) لمدة 1 يوم ثم تحولت إلى مياه النهر المتدفقة لبقية الدراسة. كان البقاء على قيد الحياة في 60 يوما 81.5٪ للمجموعة الموسومة و 70٪ لعناصر التحكم غير الموسومة (الشكل 5). تم تعريف بقاء الأسماك الموسومة في هذا التقييم على أنه البقاء على قيد الحياة والاحتفاظ بالعلامات لأنه لا يمكن التمييز بين طرد العلامات وحدث النفوق في دراسة القياس عن بعد. لم يكن هناك فرق كبير في البقاء على قيد الحياة بين المجموعتين (اختبار فيشر الدقيق ، P = 0.884) ؛ ومع ذلك ، كانت القدرة على اكتشاف الفرق 38.4٪ بسبب أحجام العينات الصغيرة. على الرغم من أن القدرة على اكتشاف الفرق بين العلاجات كانت منخفضة ، إلا أن نتائج التقييم طويل المدى تظهر أنه يمكن استخدام بروتوكول المعالجة ووضع العلامات هذا بنجاح معتدل لزرع الشاد الأمريكي بأجهزة إرسال صوتية.

الشكل 1: خزان استعادة بعد وضع العلامات مملوء بالمياه المالحة قليلة الملوحة. يوفر نظام الجسر الجوي الأكسجين للخزان الثابت. يرجى النقر هنا لعرض نسخة أكبر من هذا الرقم.

الشكل 2: زرع جهاز إرسال صوتي لشاد أمريكي يافع. شاد أمريكي للأحداث (A) مع شق صدري و (B) مع إدخال جهاز إرسال P5 الوهمي في الشق. لاحظ أن فم الشاد مغمور جزئيا في الماء المتدفق من الأنبوب الأزرق. يرجى النقر هنا لعرض نسخة أكبر من هذا الرقم.

الشكل 3: النسبة المئوية للبقاء على قيد الحياة على تقييم أولي 14 د مع مجموعة واحدة من الضوابط غير الموسومة وأربع مجموعات موسومة من الشاد الأمريكي اليافع. تألفت العلاجات الموسومة من أربعة مواقع لوضع العلامات (المعدة والصدر والحوض والظهرية) كل منها مقترن بنموذج أولي فريد لجهاز الإرسال (P1-P4). تم تعريف بقاء الأسماك الموسومة على أنه البقاء على قيد الحياة والاحتفاظ بالعلامات. يرجى النقر هنا لعرض نسخة أكبر من هذا الرقم.

الشكل 4: أجهزة إرسال صوتية ووهمية لوضع علامات على الشاد الأمريكي اليافع. (أ) الناقل الصوتي الدقيق الوظيفي و (ب) جهاز الإرسال الأولي P5 الوهمي ، الذي تم استخدامه في دراسة البقاء على قيد الحياة المختبرية 60 d. لاحظ أن الأرقام 4-7 على المسطرة تمثل سنتيمترات. يرجى النقر هنا لعرض نسخة أكبر من هذا الرقم.

الشكل 5: النسبة المئوية للبقاء على قيد الحياة من شاد الأمريكية على مدى دراسة عقد 60 د على المدى الطويل. كانت الشاد اليافعة إما غير موسومة (عناصر تحكم غير موسومة ؛ خط متصل) أو موسومة (موسومة [صدري P5] ؛ خط متقطع) بجهاز إرسال وهمي. تم تعريف بقاء المجموعة الموسومة على أنها البقاء والاحتفاظ بالعلامة. يرجى النقر هنا لعرض نسخة أكبر من هذا الرقم.
| نوع العلامة | موقع الوسم | N | طول الشوكة (مم) | متوسط وزن العلامة (SD؛ ز) | عبء العلامة (٪) | البقاء على قيد الحياة (٪) | متوسط الوقت لوضع علامة / مقطع (قصات) |
| نطاق | المتوسط (SD) |
| ص 1 | المعده | 40 | 50 - 76 | 60 (6.0) | 0.058 (0.003) | 1.5 - 5.2 | 45 | 12 |
| ص2 | الصدريه | 40 | 50 - 78 | 60 (7.3) | 0.039 (0.001) | 1.0 - 3.2 | 80 | 23 |
| ص3 | الحوض | 40 | 50 - 70 | 58 (5.3) | 0.039 (0.001) | 1.0 - 4.1 | 55 | 26 |
| ص 4 | الظهريه | 40 | 50 - 80 | 61 (6.8) | 0.088 (0.004) | 0 | 60 | 57 |
| تحكم | NA (مقطع) | 40 | 50 - 80 | 59 (5.7) | غير متوفر | 0 | 92.5 | 14 |
الجدول 1: معلومات وضع العلامات والبقاء على قيد الحياة للشاد الأمريكي المزروع بأجهزة إرسال نموذجية (P1-P4) أو تم تمييزه بمشابك الزعنفة الذيلية العلوية والسفلية (التحكم) كجزء من التقييم الأولي. موقع العلامة للمجموعة الضابطة غير قابل للتطبيق (NA) لأن هذه الأسماك تلقت فقط مقاطع الزعانف (مقطع). لاحظ أن نوع العلامة P4 كان تصميما مزدهرا بشكل محايد. يتم سرد الانحراف المعياري (SD) للمتوسط بين قوسين.