مقالة منهجية

استخراج الحمض النووي الخالي من الخلايا لعينات الفكاهة الزجاجية والمائية لتشخيص ومراقبة سرطان الغدد الليمفاوية في الشبكية والجسم الزجاجي

DOI:

10.3791/65708

⸱

يناير 12, 2024

 ,  , 
1Department of Pathology, University of Michigan, Ann Arbor, 2Department of Ophthalmology and Visual Sciences, Kellogg Eye Center, University of Michigan, Ann Arbor, 3Department of Human Genetics, University of Michigan, Ann Arbor, 4Rogel Cancer Center, University of Michigan, Ann Arbor, 5Center of Computational Medicine and Bioinformatics, University of Michigan, Ann Arbor, 6Center for RNA Biomedicine, University of Michigan, Ann Arbor, 7A. Alfred Taubman Medical Research Institute, University of Michigan, Ann Arbor, 8Section of Ophthalmology, Surgery Service, Veterans Administration Ann Arbor Healthcare System

في هذه المقالة

ملخص

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,

تم إنشاء إجراء لاستخراج الحمض النووي الخالي من الخلايا من الفكاهة الزجاجية والمائية لإجراء دراسات جزيئية لتشخيص سرطان الغدد الليمفاوية في الشبكية والجسم الزجاجي. توفر الطريقة القدرة على استخراج الحمض النووي بشكل متزامن من المكون الخلوي للعينة أو حجزه للاختبار الإضافي.

الملخص

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,

يمثل سرطان الغدد الليمفاوية الشبكية والجسم الزجاجي (VRL) سرطان الغدد الليمفاوية العدواني ، وغالبا ما يصنف على أنه سرطان الغدد الليمفاوية للخلايا البائية الكبيرة المنتشرة في الجهاز العصبي المركزي الأساسي. لتشخيص VRL ، يتم جمع عينات مثل الفكاهة الزجاجية ، ومؤخرا ، الفكاهة المائية. يشمل الاختبار التشخيصي ل VRL على هذه العينات علم الخلايا وقياس التدفق الخلوي والاختبار الجزيئي. ومع ذلك ، فإن كل من علم الأمراض الخلوي وقياس التدفق الخلوي ، إلى جانب الاختبار الجزيئي باستخدام الحمض النووي الخلوي ، يستلزم خلايا كاملة سليمة. يكمن التحدي في حقيقة أن الفكاهة الزجاجية والمائية عادة ما يكون لها خلوية منخفضة ، ويتم تدمير العديد من الخلايا أثناء الجمع والتخزين والمعالجة. علاوة على ذلك ، تشكل هذه العينات صعوبات إضافية للاختبار الجزيئي بسبب اللزوجة العالية للفكاهة الزجاجية وانخفاض حجم كل من الفكاهة الزجاجية والمائية. تقترح هذه الدراسة طريقة لاستخراج الحمض النووي الخالي من الخلايا من العينات الزجاجية والمائية. يكمل هذا النهج استخراج الحمض النووي الخلوي أو يسمح باستخدام المكون الخلوي لهذه العينات في طرق التشخيص الأخرى ، بما في ذلك علم الخلايا وقياس التدفق الخلوي.

المقدمة

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,

سرطان الغدد الليمفاوية الشبكية والجسم الزجاجي (VRL) هو سرطان الغدد الليمفاوية العدواني المرتبط بسرطان الغدد الليمفاوية للخلايا البائية الكبيرة المنتشرة في الجهاز العصبي المركزيالأولي 1،2،3. عادة ما يكون VRL قاتلا بسبب تورطه في الجهاز العصبي المركزي 1,2. على الرغم من ندرته1,4 ، إلا أن VRL غالبا ما يظهر بأعراض مشابهة لالتهاب القزحية الخلفي وأمراض الشبكية والجسم الزجاجي الأخرى 4,5. وبالتالي ، فإن المرضى الذين تظهر عليهم أعراض التهاب القزحية يحتاجون إلى تشخيص إما لتأكيد أو استبعاد VRL.

في الآونة الأخيرة ، تم نشر معايير الإجماع لتشخيص VRL ، والتي تنطوي على مزيج من الفحص السريري والنتائج المختبرية6. تشمل العينات المستخدمة عادة لتشخيص VRL الفكاهة الزجاجية ، ومؤخرا ، الفكاهة المائية7. يتم الحصول على الفكاهة الزجاجية من خلال إجراء جراحي يسمى pars plana vitrectomy ، والذي يسمح بالوصول إلى الجزء الخلفي من العين8.

في البروتوكول المقدم ، تم جمع كل من عينات الفكاهة المائية والخلط الزجاجي لاستخراج الخلايا و cfDNA. بعد تخدير المرضى ووضع المبازل على بعد حوالي 4 مم من ليمبوس القرنية ، تم الحصول على عينة من الخلط المائي من حوالي 100-200 ميكرولتر باستخدام حقنة 1 مل من السل في ليمبوس القرنية. بالنسبة للمرضى الكاذبين ، تم الحصول على الجسم الزجاجي غير المخفف عن طريق إدخال الهواء المعقم في التسريب ، مما يتيح جمع كمية أكبر من الجسم الزجاجي غير المخفف (حتى 3.5 مل). في المرضى الذين يعانون من phakic ، تمت إزالة ما يقرب من 500 إلى 1000 ميكرولتر من الجسم الزجاجي غير المخفف قبل تشغيل ضخ محلول الملح المتوازن. في بعض الحالات ، تم جمع الجسم الزجاجي المخفف بشكل ثانوي (500 إلى 2000 ميكرولتر) عن طريق تحويل التسريب إلى سائل ووضع الزجاجي داخل التنورة الزجاجية للحصول على هذه العينة. تم جمع الجزء الزجاجي الأكثر تخفيفا عن طريق الحفاظ على كيس الكاسيت (الشكل التكميلي 1) في نهاية الجراحة. بمجرد وصول هذه الحقيبة إلى قسم علم الأمراض ، تم الحصول على الجسم الزجاجي المخفف من تصريف السوائل من هذا الكيس إلى أنابيب مخروطية لاستخراج الحمض النووي لاحقا.

غالبا ما يعتبر علم الأمراض الخلوي للسائل الزجاجي المعيار الذهبي9. ومع ذلك ، فقد أظهرت العديد من الدراسات حساسية محدودة بسبب المعالجة والحد الأدنى من الخلوية10،11،12. يمكن أن يساعد قياس التدفق الخلوي في تحديد الخلايا البائية النسيلية ولكن يمكن أيضا أن يكون محدودا بسبب انخفاض الخلوية وهشاشة خلايا سرطان الغدد الليمفاوية الكبيرة13،14،15. يتطلب كل من علم الأمراض الخلوي وقياس التدفق الخلوي خلايا كاملة سليمة. يتم تدمير العديد من هذه الخلايا أثناء الجمع والتخزين والمعالجة. عندما يتم إجراء الاختبار الجزيئي باستخدام الحمض النووي المستخرج من الخلايا السليمة (الحمض النووي الخلوي) ، فإنه يعاني من نفس القيد. بالإضافة إلى ذلك ، فإن تقسيم العينة الزجاجية المحدودة لجميع هذه الاختبارات يقلل من كمية المواد المتاحة لكل اختبار.

يمثل الحمض النووي الخالي من الخلايا (cfDNA) مصدرا آخر للحمض النووي لا يتطلب خلايا سليمة. تم استخدام cfDNA من العينات الزجاجية للكشف عن VRL 16,17 وكذلك سرطان الجلد العنبي18. في هذا البروتوكول ، يتم استخراج الحمض النووي الخلوي والخالي من الخلايا من السائل الزجاجي والمائي للكشف عن VRL.

البروتوكول

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,

يتبع البروتوكول الحالي إرشادات الرعاية البشرية وبموافقة مجلس المراجعة المؤسسية (IRB) بجامعة ميشيغان. تم الحصول على تنازل عن الموافقة المستنيرة لهذا من IRB. لا توجد معايير إدراج أو استبعاد ذات صلة للمرضى المعنيين.

1. فصل المكونات الخلوية والخالية من الخلايا

ملاحظة: يمكن استلام ثلاثة أنواع من العينات للاختبار التشخيصي VRL: الجسم الزجاجي (غير مخفف ؛ سائل من استئصال الزجاجية تم جمعه قبل بدء التسريب) ، الجسم الزجاجي المخفف داخل كيس كاسيت (الشكل 1) ، والخلط المائي (سائل من الغرفة الأمامية للعين).

  1. بالنسبة للسائل الزجاجي غير المخفف ، وهو لزج جدا ، قم بتخفيفه باستخدام 3-5 مل من برنامج تلفزيوني لتسهيل عملية سحب الماصة.
  2. بالنسبة للزجاج المخفف داخل كيس الكاسيت (الشكل التكميلي 1) ، قم بتصريف السائل في أنابيب مخروطية سعة 50 مل (واحد لكل 45 مل من السوائل).
  3. الفكاهة المائية منخفضة جدا في الحجم (<200 ميكرولتر). لضمان أقصى قدر من استعادة الخلايا ، انقل العينة إلى أنبوب سعة 1.5 مل ، واشطف أنبوب الطرد المركزي الأصلي سعة 500 ميكرولتر الذي تم جمع العينة فيه بحجم متساو من PBS ، وأضفه إلى أنبوب 1.5 مل.
  4. سائل زجاجي أو مائي بالطرد المركزي عند 3000 × جم لمدة 15 دقيقة في درجة حرارة الغرفة.
  5. قم بإزالة المادة الطافية بعناية باستخدام ماصة ، مع الحرص على عدم إزعاج الخلايا المحببة.

2. استخراج الحمض النووي من المكون الخلوي

  1. أضف كمية مناسبة من محلول تحلل الخلايا (300 ميكرولتر للحبيبات الصغيرة ، 1 مل أو أكثر للحبيبات الكبيرة) (انظر جدول المواد). تخلط عن طريق سحب السحب لأعلى ولأسفل.
  2. عند التحليل الكامل ، أضف 1/3 الحجم الإجمالي لمحلول راسب البروتين (100 ميكرولتر لكل 300 ميكرولتر محلل) (انظر جدول المواد).
  3. دوامة بقوة لمدة 20-30 ثانية. تدور لمدة 3 دقائق عند 3000 × غرام في درجة حرارة الغرفة.
  4. ماصة 300 ميكرولتر من الأيزوبروبانول في أنبوب طرد مركزي نظيف. ماصة بعناية طاف من الخطوة السابقة إلى أنبوب الأيزوبروبانول.
  5. أضف 1.5 ميكرولتر من 20 مجم / مل من الجليكوجين (لتحلل 300 ميكرولتر) (انظر جدول المواد).
  6. تخلط جيدا عن طريق الانقلاب ، ثم ضع العينة في الفريزر -20 درجة مئوية لمدة 1 ساعة إلى ليلة وضحاها للمساعدة في ترسيب الحمض النووي.
  7. جهاز طرد مركزي أنبوب 1.5 مل لمدة 5 دقائق عند 3000 × جم في درجة حرارة الغرفة. ماصة قبالة الأيزوبروبانول.
  8. أضف 0.5 مل من الإيثانول بنسبة 70٪ واقلب الأنبوب لغسل الحبيبات.
  9. تدور لمدة 1 دقيقة في 3000 × غرام في درجة حرارة الغرفة وصب الإيثانول. كرر غسل الإيثانول مرة واحدة.
  10. اقلب الأنبوب على شاش نظيف لتصريف المحلول وتجفيف الحبيبات أو الصب. قم بتدوير الحمض النووي بسرعة في جهاز طرد مركزي دقيق وماصة القطرة المتبقية من الإيثانول بطرف ماصة يمكن التخلص منه (بمجرد عدم ترك أي إيثانول متبقي في الأنبوب ، يجب أن يكون الحمض النووي جافا وجاهزا للترطيب في 5-10 دقائق).
  11. أضف 45 ميكرولتر من محلول ترطيب الحمض النووي (انظر جدول المواد) إلى حبيبات الحمض النووي المجففة.
  12. ضع الأنبوب في كتلة تسخين عند 50 درجة مئوية واتركه يذوب لمدة 1-2 ساعة. ماصة الحمض النووي لأعلى ولأسفل لتسريع عملية الترطيب.
    ملاحظة: أضف المزيد من محلول ترطيب الحمض النووي إذا بدت العينة شديدة اللزوجة.

3. استخراج الحمض النووي الخالي من الخلايا

  1. كمية الطافية من الخطوة 1.5 متغيرة. أضف 70 ميكرولتر من المخزن المؤقت للتكييف (انظر جدول المواد) لكل ملليلتر من المادة الطافية.
  2. امزج حبات المقاصة جيدا عن طريق الدوامة. أضف 10 ميكرولتر من خرز التطهير إذا تمت معالجة <14 مل من المادة الطافية الخالية من الخلايا ، و 20 ميكرولتر في حالة معالجة 14-40 مل.
  3. امزج العينة / خليط الخرزة جيدا عن طريق الدوامة. جهاز طرد مركزي عند 3000 × جم لمدة 15 دقيقة في درجة حرارة الغرفة.
  4. دون إزعاج الحبيبات ، ماصة خارج المادة الطافية تاركة وراءها 100 ميكرولتر إذا تم استخدام 10 ميكرولتر من خرز المقاصة ، و 200 ميكرولتر إذا تم استخدام 20 ميكرولتر من خرز الإزالة.
  5. أضف حجما متساويا من محلول هضم حبيبات البول (انظر جدول المواد) إلى الحبيبات وأعد تعليق الحبيبات جيدا عن طريق الدوامة أو الماصة.
  6. أضف Proteinase K (5٪ (v / v)) إلى الحبيبات المعاد تعليقها (على سبيل المثال ، أضف 10 ميكرولتر من Proteinase K إلى خليط 200 ميكرولتر) واخلطها جيدا عن طريق الدوامة اللطيفة.
  7. احتضان خليط الحبيبات على حرارة 55 درجة مئوية لمدة 30 دقيقة.
  8. أضف حجما واحدا من محلول التحلل الجينومي (انظر جدول المواد) إلى خليط الهضم (على سبيل المثال ، 210 ميكرولتر من محلول التحلل الجينومي إلى 210 ميكرولتر من خليط الهضم) واخلطه بالدوامة.
  9. انقل عمود الدوران المتاح تجاريا (انظر جدول المواد) إلى أنبوب تجميع جديد.
  10. أضف 200 ميكرولتر من المخزن المؤقت لتحضير الحمض النووي للبول إلى عمود الدوران ، وأجهزة الطرد المركزي عند ≥16000 × جم لمدة 1 دقيقة في درجة حرارة الغرفة ، وتجاهل التدفق.
  11. أضف 700 ميكرولتر من محلول غسيل الحمض النووي للبول إلى العمود ، وأجهزة الطرد المركزي عند ≥16000 × جم لمدة 1 دقيقة في درجة حرارة الغرفة وتجاهل التدفق.
  12. كرر الخطوة مع 200 ميكرولتر من محلول غسيل الحمض النووي للبول.
  13. انقل عمود الدوران إلى أنبوب طرد مركزي خال من DNase / RNase.
  14. أضف الحجم المناسب من المخزن المؤقت لشطف الحمض النووي (بناء على الاختبارات الجزيئية المراد إجراؤها) مباشرة إلى مصفوفة العمود واتركه يقف لمدة 3-5 دقائق في درجة حرارة الغرفة.
    ملاحظة: تم استخدام 30 ميكرولتر من المخزن المؤقت للشطف في الحالات النموذجية. يتم استخدام المزيد من المخزن المؤقت للشطف إذا كانت هناك حاجة إلى اختبار إضافي.
  15. أجهزة الطرد المركزي عند ≥16000 × جم في درجة حرارة الغرفة لمدة 1 دقيقة للحصول على الحمض النووي الخالي من الخلايا.

النتائج

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,

تم إجراء طرق الاستخراج هذه على عدد محدود من الحالات لضمان العائد الكافي وقابلية التضخيم للحمض النووي الخالي من الخلايا مقارنة بالحمض النووي الخلوي من العينات الزجاجية (أربعة) والمائية (أربعة). من هذه العينات ، تتشابه إنتاجية الحمض النووي من المكون الخالي من الخلايا لهذه السوائل مع تلك الموجودة في المكون الخلوي (الجدول 1). كما تم تقييم الخلايا و cfDNA من هذه العينات باستخدام الاختبارات الجزيئية ، مثل الطفرة المرتبطة ب VRL MYD88 L265P. يوضح تفاعل البوليميراز المتسلسل في الوقت الفعلي الخاص بالأليل ل MYD88 L265P (الشكل 1) اكتشاف هذه الطفرة المرتبطة ب VRL في كل من الحمض النووي الخلوي و cfDNA. في هذا المثال ، يبدو أن عبء المرض أعلى في المكون الخالي من الخلايا ، كما هو موضح بانخفاض (عتبة الدورة (Ct). توضح هذه البيانات أن cfDNA المستخرج من الفكاهة الزجاجية والمائية باستخدام هذه الطريقة ينتج عنه مصدر للحمض النووي يمكن تطبيقه أيضا على الاختبارات الجزيئية التشخيصية.

figure-results-1
الشكل 1: تفاعل البوليميراز المتسلسل في الوقت الحقيقي الخاص بالأليل MYD88 L265P. مخطط تضخيم تمثيلي يظهر تفاعل البوليميراز المتسلسل في الوقت الفعلي الخاص بالأليل MYD88 L265P للحمض النووي الخلوي والخالي من الخلايا (يتم إجراء كل تفاعل تفاعل تفاعل البوليميراز المتسلسل في نسختين). يشار إلى عتبة عتبة الدورة (Ct) بالخط الأخضر. يتم تصنيف النقاط التي يصل فيها تضخيم cfDNA (الآثار الزرقاء والبنية) والحمض النووي الخلوي (الآثار الحمراء والخضراء) - كل منها يتم إجراؤه في نسختين - إلى العتبة. مضان الخلفية موجود بالقرب من 1.00e-003. يوجد عبء طفرة أعلى في المكون الخالي من الخلايا ، كما يتضح من انخفاض التصوير المقطعي المحوسب. الرجاء النقر هنا لعرض نسخة أكبر من هذا الرقم.

الخلويهخالي من الخلايا
زجاجي 1130.567.5
زجاجي 2337.5105
زجاجي 3150168
زجاجي 41816654
مائي 158.540.5
مائي 2153225
مائي 3117454.5
مائي 4ليرة تركية27

الجدول 1: نواتج استخلاص الحمض النووي الخلوي والخالي من الخلايا. ينتج الحمض النووي (بالنانوغرام) لأربعة سوائل زجاجية غير مخففة وأربعة سوائل فكاهة مائية (الغرفة الأمامية) من أربعة أفراد مختلفين بناء على كمية الحمض النووي الفلورومتري. TL = منخفض جدا بحيث لا يمكن تحديده كميا.

الشكل التكميلي 1: كيس كاسيت زجاجي. مثال على كيس كاسيت زجاجي يحتوي على سائل زجاجي مخفف. الرجاء الضغط هنا لتنزيل هذا الملف.

المناقشة

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,

سرطان الغدد الليمفاوية الشبكية والجسم الزجاجي (VRL) هو سرطان الغدد الليمفاوية للخلايا البائية الكبيرةالعدوانية 1،2،3 التي يمكن أن تحاكي أعراضها أمراض الشبكية والجسم الزجاجي الأخرى 4,5. أصبح الاختبار الجزيئي للفكاهة الزجاجية ، ومؤخرا ، المائية طريقة حاسمة لإجراء تشخيص VRL أو استبعاده. ومع ذلك ، فإن هذه السوائل منخفضة الحجم وغالبا ما يكون لها خلوية منخفضة. يمكن أيضا أن تتلف العديد من الخلايا الموجودة داخل هذه السوائل أثناء الجمع والتخزين والمعالجة13،14،15. نتيجة لذلك ، غالبا ما تكون غلة الحمض النووي من هذه العينات منخفضة. بالإضافة إلى ذلك ، يجب مشاركة الخلايا من هذه السوائل مع طرق التشخيص الأخرى ، بما في ذلك علم الأمراض الخلوي وقياس التدفق الخلوي. يوفر الحمض النووي الخالي من الخلايا (cfDNA) داخل هذه السوائل مصدرا آخر للحمض النووي لا يتطلب خلايا سليمة.

يفصل هذا البروتوكول المكونات الخلوية والخالية من الخلايا للسائل الزجاجي أو المائي. يتم تخفيف السائل الزجاجي باستخدام PBS لتمكين السحب بسبب لزوجته. يتم التعامل مع السائل المائي لضمان أقصى قدر من الاسترداد لهذا السائل منخفض الحجم.

توضح مقارنة مخرجات الحمض النووي لهذين المكونين أنه يمكن اشتقاق حمض نووي إضافي كبير من المكون الخالي من الخلايا. يوضح الاختبار الجزيئي ل cfDNA ، مثل تفاعل البوليميراز المتسلسل في الوقت الفعلي الخاص بالأليل MYD88 L265P ، أنه يمكن اكتشاف VRL في المكون الخالي من الخلايا من الخلط الزجاجي والمائي وكذلك المكون الخلوي. في كثير من الحالات ، تكون الكمية النسبية من VRL أعلى في المكون الخالي من الخلايا منها في الخلية (الشكل 1).

يتيح استخراج المكون الخالي من الخلايا للسائل الزجاجي والمائي التقييم الجزيئي لمكون من هذه السوائل التي يمكن التخلص منها بخلاف ذلك. نظرا لأن VRL يتم تمثيله في المكونات الخلوية والخالية من الخلايا ، يمكن الجمع بين الحمض النووي الخلوي و cfDNA لتعظيم الحمض النووي المتاح من هذه العينات المحدودة. بدلا من ذلك ، يمكن استخدام المكون الخالي من الخلايا لهذه السوائل للاختبار الجزيئي ، ويمكن استخدام المكون الخلوي للاختبار الذي يتطلب خلايا سليمة ، أي علم الأمراض الخلوي وقياس التدفق الخلوي. ومن شأن هذا النهج أن يتجنب تخصيص حصص منفصلة من هذه السوائل لكل اختبار مما قد يضر بحساسية كل اختبار للكشف عن VRL. نظرا لنجاح هذه الطريقة في العينات الزجاجية والمائية ، قد تكون هذه الطريقة مفيدة أيضا في السوائل المحدودة الأخرى لزيادة كمية الحمض النووي المتاحة للاختبار الجزيئي.

الإفصاحات

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,

ليس لدى المؤلفين ما يكشفون عنه.

شكر وتقدير

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,

كان لتيموثي دانيلز ، MLS (ASCP) ، MB ، QLS ، وهيلموت ويجلين ، MLS (ASCP) دور فعال في إنشاء طريقة الاستخراج هذه داخل مختبرنا.

المواد

قائمة المواد المستخدمة في هذه المقالة
الاسمالشركةرقم فهرسيالتعليقات
2-بروبانول (إيزوبروبانول)فيشرA415-500
الحمض النووي نظيف & المكثف -10Zymo ResearchD4011
الحمض النووي نظيف & المكثف -5Zymo ResearchD4003
Gentra Puregene Cell SolutionQiagen158906
Gentra Puregene DNA HydrationSolution Qiagen158916
Gentra Puregene محلول ترسيب البروتينQiagen158912
ملحي مخزن بالفوسفات (PBS)SigmaP-4417
Quick-DNA طقم البولZymo ResearchD3061Conditioning Buffer ؛ يشمل أيضا إزالة الخرز ، Proteinase K وأعمدة الدوران
Ultrapure Glycogen ، 20 & micro ؛ ز /& مايكرو ؛ لتر (20 مجم / مل)ثيرمو فيشر / إنفيتروجين10814010
محلول

المراجع

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,
  1. Primary vitreoretinal lymphoma: a report from an International Primary Central Nervous System Lymphoma Collaborative Group symposium. Oncologist. 16 (11), 1589-1599 (2011).">Chan, C. C., et al. Primary vitreoretinal lymphoma: a report from an International Primary Central Nervous System Lymphoma Collaborative Group symposium. Oncologist. 16 (11), 1589-1599 (2011).
  2. Primary intraocular lymphomas. Clinical & Experimental Ophthalmology. 59 (5), 503-516 (2014).">Sagoo, M. S., et al. Primary intraocular lymphomas. Clinical & Experimental Ophthalmology. 59 (5), 503-516 (2014).
  3. Understanding intraocular lymphomas. Clinical & Experimental Ophthalmology. 36 (6), 564-578 (2008).">Coupland, S. E., Damato, B. Understanding intraocular lymphomas. Clinical & Experimental Ophthalmology. 36 (6), 564-578 (2008).
  4. Ocular and central nervous system lymphoma: clinical features and diagnosis. Ocular Immunology and Inflammation. 8 (4), 243-250 (2000).">Cassoux, N., et al. Ocular and central nervous system lymphoma: clinical features and diagnosis. Ocular Immunology and Inflammation. 8 (4), 243-250 (2000).
  5. Neoplastic masquerade syndrome. Survey Ophthalmology. 47, 81-124 (2002).">Read, R. W., Zamir, E., Rao, N. A. Neoplastic masquerade syndrome. Survey Ophthalmology. 47, 81-124 (2002).
  6. Consensus recommendations for the diagnosis of vitreoretinal lymphoma. Ocular Immunology and Inflammation. 23 (3), 507-520 (2021).">Carbonell, D., et al. Consensus recommendations for the diagnosis of vitreoretinal lymphoma. Ocular Immunology and Inflammation. 23 (3), 507-520 (2021).
  7. Aqueous humor-derived MYD88 L265P mutation analysis in vitreoretinal lymphoma: a potential less invasive method for diagnosis and treatment response assessment. Ophthalmology Retina. 7 (2), 189-195 (2023).">Demirci, H., et al. Aqueous humor-derived MYD88 L265P mutation analysis in vitreoretinal lymphoma: a potential less invasive method for diagnosis and treatment response assessment. Ophthalmology Retina. 7 (2), 189-195 (2023).
  8. Vitrectomy: a pars plana approach. Transactions - American Academy of Ophthalmology and Otolaryngology. 75 (4), 813-820 (1971).">Machemer, R., Buettner, H., Norton, E. W., Parel, J. M. Vitrectomy: a pars plana approach. Transactions - American Academy of Ophthalmology and Otolaryngology. 75 (4), 813-820 (1971).
  9. Reticulum cell sarcoma of the retina and uvea. Report of sex cases and review of the literature. American Journal of Ophthalmology. 66 (2), 205-215 (1968).">Vogel, M. H., Font, R. L., Zimmerman, L. E., Levine, R. A. Reticulum cell sarcoma of the retina and uvea. Report of sex cases and review of the literature. American Journal of Ophthalmology. 66 (2), 205-215 (1968).
  10. Japanese intraocular lymphoma study group. clinical features and diagnostic significance of the intraocular fluid of 217 patients with intraocular lymphoma. Japanese Journal of Ophthalmology. 56 (4), 383-389 (2012).">Kimura, K., Usui, Y., Goto, H. Japanese intraocular lymphoma study group. clinical features and diagnostic significance of the intraocular fluid of 217 patients with intraocular lymphoma. Japanese Journal of Ophthalmology. 56 (4), 383-389 (2012).
  11. Diagnostic testing of vitrectomy specimens. American Journal of Ophthalmology. 140 (5), 822-829 (2005).">Davis, J. L., Miller, D. M., Ruiz, P. Diagnostic testing of vitrectomy specimens. American Journal of Ophthalmology. 140 (5), 822-829 (2005).
  12. Primary intraocular lymphoma (ocular reticulum cell sarcoma) diagnosis and management. Ophthalmology. 95 (5), 625-630 (1988).">Char, D. H., Ljung, B. M., Miller, T., Phillips, T. Primary intraocular lymphoma (ocular reticulum cell sarcoma) diagnosis and management. Ophthalmology. 95 (5), 625-630 (1988).
  13. More accurate diagnosis of vitreoretinal lymphoma using a combination of diagnostic test results: a prospective observational study. Ocular Immunology and Inflammation. 30 (6), 1354-1360 (2022).">Tanaka, R., et al. More accurate diagnosis of vitreoretinal lymphoma using a combination of diagnostic test results: a prospective observational study. Ocular Immunology and Inflammation. 30 (6), 1354-1360 (2022).
  14. Multicolor flow cytometric immunophenotyping is a valuable tool for detection of intraocular lymphoma. Ophthalmology. 120 (5), 991-996 (2013).">Missotten, T., et al. Multicolor flow cytometric immunophenotyping is a valuable tool for detection of intraocular lymphoma. Ophthalmology. 120 (5), 991-996 (2013).
  15. Immunophenotyping large B-cell lymphomas. Flow cytometric pitfalls and pathologic correlation. American Journal of Clinical Pathology. 116 (2), 191-203 (2001).">Bertram, H. C., Check, I. J., Milano, M. A. Immunophenotyping large B-cell lymphomas. Flow cytometric pitfalls and pathologic correlation. American Journal of Clinical Pathology. 116 (2), 191-203 (2001).
  16. The molecular hallmarks of primary and secondary vitreoretinal lymphoma. Blood Advances. 6 (5), 1598-1607 (2022).">Bonzheim, I., et al. The molecular hallmarks of primary and secondary vitreoretinal lymphoma. Blood Advances. 6 (5), 1598-1607 (2022).
  17. Clinical relevance of the high prevalence of MYD88 L265P mutated vitreoretinal lymphoma identified by droplet digital polymerase chain reaction. Ocular Immunology and Inflammation. 29 (3), 448-455 (2021).">Shi, H., et al. Clinical relevance of the high prevalence of MYD88 L265P mutated vitreoretinal lymphoma identified by droplet digital polymerase chain reaction. Ocular Immunology and Inflammation. 29 (3), 448-455 (2021).
  18. Circulating tumor DNA tracking through driver mutations as a liquid biopsy-based marker for uveal melanoma. Journal of Experimental and Clinical Cancer Research. 40 (1), 196(2021).">Bustamante, P., et al. Circulating tumor DNA tracking through driver mutations as a liquid biopsy-based marker for uveal melanoma. Journal of Experimental and Clinical Cancer Research. 40 (1), 196(2021).

إعادة الطباعة والأذونات

طلب إذن لإعادة استخدام النص أو الأشكال في مقالة JoVE هذه

طلب إذن

الوسوم

مقالات ذات صلة