نقدم هنا بروتوكولا للحصول على الفطريات المسببة للأمراض الحشرية من حفار خشب الغابات وطريقة بديلة لتقييم أنشطتها المسببة للأمراض الحشرية باستخدام حشرة نموذج غمدية الأجنحة. هذه الطريقة فعالة ومريحة لاستكشاف الموارد الفطرية المسببة للأمراض الحشرية من الآفات الحشرية المملة للخشب في الغابات الطبيعية.
يتطلب اشتراك JoVE لعرض هذا المحتوى. تسجيل الدخول أو ابدأ نسخة تجريبية مجانية
مقالة منهجية
العزلة والتحديد السلوكي وتقييم الإمراضية للفطريات المسببة للأمراض الحشرية من حفار خشب الغابة
* These authors contributed equally
في هذه المقالة
ملخص
الملخص
يتسبب حفار خشب الغابات (FWB) في أضرار جسيمة للأشجار وخسائر اقتصادية في جميع أنحاء العالم. يعتبر إطلاق الفطريات المسببة للأمراض الحشرية (EPF) خلال فترة ظهور FWB بديلا مقبولا للمكافحة الكيميائية. ومع ذلك ، فقد تم استكشاف موارد EPF بشكل أقل بكثير بالنسبة ل FWBs ، على عكس الآفات الحشرية الزراعية. تقدم هذه الورقة بروتوكولا لاستكشاف موارد EPF من FWBs باستخدام مجموعات Monochamus alternatus البرية كمثال. في هذا البروتوكول ، فإن تعيين الفخاخ الطعم مع M. تضمن جاذبات Alternatus لمختلف السكان جمع عينات كافية مع أعراض العدوى الطبيعية ، خلال فترات ظهور الخنفساء. بعد تشريح التكامل بدقة ووضعها على وسط انتقائي ، تم عزل الأنواع الفطرية من كل جزء من أجسام الخنافس وتحديدها بناء على كل من السمات الجزيئية والمورفولوجية.
تم اعتماد العديد من الأنواع الفطرية على أنها EPFs طفيلية عن طريق إعادة إصابة M. alternatus السليم بمعلقات البوغ. لوحظت أنماطهم الظاهرية السلوكية على M. alternatus باستخدام المجهر الإلكتروني الماسح ومقارنتها كذلك مع تلك الموجودة في حشرة نموذج غمدية الأجنحة Tribolium castaneum. بالنسبة ل EPFs التي تقدم أنماطا ظاهرية متسقة للتطفل على كلا النوعين من الخنافس ، قم بتقييم أنشطتها على T. قدم Castaneum معلومات قيمة عن الفتك للدراسة المستقبلية على M. alternatus. ساعد هذا البروتوكول في اكتشاف EPF المبلغ عنه حديثا عن مجموعات M. alternatus في الصين ، والتي يمكن تطبيقها كنهج فعال لاستكشاف المزيد من موارد EPF من FWBs الأخرى.
المقدمة
وقد أدى الدمار الذي تسببه الآفات الحشرية إلى خسائر إيكولوجية واقتصادية كبيرة في كل من النظم الإيكولوجية للغابات والزراعة. تعرض معظم الآفات الزراعية نفسها للأعداء الطبيعيين أو عوامل المكافحة الاصطناعية بينما تلحق الضرر بالنباتات المضيفة. بدلا من ذلك ، يكمل حفار خشب الغابات (FWB) تقريبا دوراتهم التنموية الكاملة داخل جذوع الأشجار المضيفة1 ، مما يثير تحديات كبيرة لاستكشاف كائنات المكافحة الحيوية الفعالة من FWB في الحقل البري. والأسوأ من ذلك هو أن FWBs تحمل عددا كبيرا من مسببات الأمراضالنباتية 2 أو لها علاقة حميمة مع مسببات الأمراض هذه كناقلات محتملةلها 3,4<....
الوصول مقيد. يرجى تسجيل الدخول أو بدء فترة تجريبية لعرض هذا المحتوى.
البروتوكول
1. عزل الفطريات من M. alternatus (الشكل 1)
- اجمع عينة الخنفساء
- جمع الصنوبر مناشير الخنافس M. البديل باستخدام الفخاخ التجارية (انظر جدول المواد) الطعم مع الجاذبات قبل فترات الظهور المتوقعة لمجموعات الخنافس في غابات الصنوبر المصابة بشكل طبيعي.
ملاحظة: في هذه الدراسة ، تم جمع الخنافس من خمس مناطق جغرافية في جنوب الصين (هوتشو / تشجيانغ ، ليانغشان / سيتشوان ، شيامن / فوجيان ، شاوقوان / قوانغدونغ ، يولين / قوانغشي). إعداد المصيدة من أعلى إلى أسفل هو كما يلي: قمة مستديرة (قطرها 50 سم) ، لوحة متقاطعة الشكل (عرضها 35 ....
- جمع الصنوبر مناشير الخنافس M. البديل باستخدام الفخاخ التجارية (انظر جدول المواد) الطعم مع الجاذبات قبل فترات الظهور المتوقعة لمجموعات الخنافس في غابات الصنوبر المصابة بشكل طبيعي.
الوصول مقيد. يرجى تسجيل الدخول أو بدء فترة تجريبية لعرض هذا المحتوى.
النتائج
عزل وتحديد العزلات الفطرية من M. البديل
بمساعدة الفخاخ الجاذبة ، هناك عدد كبير (حوالي 500 خنفساء في المجموع) من M. تم جمع البديل من خمس مناطق جغرافية. تم اختيار جثث الخنفساء ذات الأعراض النموذجية للعدوى بالفطريات المسببة للأمراض الحشرية. بعد ذلك ، تم تشريح تكامل الجسم لكل خنفساء إلى عدة أوضاع كما هو موضح في البروتوكول الخطوة 1.3. نتيجة لذلك ، تم عزل أكثر من 600 عزلة فطرية من أوضاع مختلفة للجسم. هذا يسمح للمرشحين الفطريين الأكثر ثراء لفحص مسببات الأمراض ضد خنافس منش.......
الوصول مقيد. يرجى تسجيل الدخول أو بدء فترة تجريبية لعرض هذا المحتوى.
المناقشة
قد تطور المجموعات الجغرافية المختلفة من FWB تفاعلات متنوعة مع الفطريات الطبيعية المسببة للأمراض الحشرية ، بسبب التكيف البيئي طويل الأجل لأنواع EPF مع عوامل المناخ المحلية والسكان الوراثيين المحددين للحشرة المضيفة44,45. يساعد توسيع مواقع أخذ العينات إلى مناطق تواجد الحشرات المتعددة على زيادة إمكانية الحصول على سلالات أو أنواع متنوعة من EPF من مضيفاتها الطبيعية ، كما هو موضح في الدراسات السابقة حول الآفات الحشرية الزراعية
الوصول مقيد. يرجى تسجيل الدخول أو بدء فترة تجريبية لعرض هذا المحتوى.
الإفصاحات
يعلن أصحاب البلاغ عدم وجود تضارب في المصالح.
شكر وتقدير
تم دعم هذا البحث من قبل البرنامج الوطني للبحث والتطوير الرئيسي في الصين (2021YFC2600100) ومؤسسة العلوم الطبيعية بمقاطعة تشجيانغ (LY21C040001).
....الوصول مقيد. يرجى تسجيل الدخول أو بدء فترة تجريبية لعرض هذا المحتوى.
المواد
| الاسم | الشركة | رقم فهرسي | التعليقات |
|---|---|---|---|
| 1.5 مل ، 2 مل أنابيب الطرد المركزي Biosharp | BS-15-M | ||
| 10 & micro ؛ L نصائح الماصة | Sangon Biotech | F601216 | |
| 10 & micro ؛ L ، 20 وميكرو ؛ لتر ، 100 وميكرو ؛ لتر ، 200 وميكرو ؛ لتر ، 1,000 وميكرو ؛ L ماصات | Rainin | ||
| 1,000 & micro; L نصائح ماصة | سانجون للتكنولوجيا الحيوية | F630102 | |
| 2 مل قوارير مبردة | كورنينج | 430659 | |
| 20x PBS عازلة | سانغون للتكنولوجيا الحيوية | B548117-0500 | |
| 200 & L نصائح الماصة | سانجون للتكنولوجيا الحيوية | F601227 | |
| صانع 2,000 نقطة أساس | TaKaRar | SD0531 | |
| 50 مل أنابيب | عش | 602052 | |
| محلول جلوتارالديهايد 50٪ | سانجون للتكنولوجيا الحيوية | G916054 | |
| 50x TAE عازلة | سانجون للتكنولوجيا الحيوية B548101 | ||
| 6x عازلة تحميل | TaKaRar | SD0503 | |
| Agarose | Sangon Biotech | A610013 | |
| الإيثانول اللامائي | Jkchemical | LB10V37 | |
| خزانة زراعة الكيمياء الحيوية | Shanghaiyiheng | LRH-250F | |
| Chloroform | Juhua | 61553 | |
| مصائد الخنافس التجارية | FEIMENGDI | BF-8 | www.yinyouji.com |
| جل تصوير | Bio-Rad | GelDoc XR + | |
| الجلسرين | سانجون التكنولوجيا الحيوية | A600232 | |
| جهاز طرد مركزي مبرد عالي السرعة | سيجما | D-37520 | |
| وعاء التعقيم بالبخار عالي الضغط | Mettler Toledo | JA5003 | |
| كحول الأيزوبروبيل | كاشف عام | G75885B | |
| الحمض | سانجون للتكنولوجيا الحيوية | A616696 | |
| مجهر بصري ، OM | Leica | DM2000 | |
| Parafilm | Parafilm | PM996 | |
| PCR meter | Heal Force | Trident960 | |
| Penicillin G | Marklin | GB15743 | |
| البطاطس سكر العنب أجار ، المساعد الشخصي الرقمي | Oxoid | CM0139 | |
| مرق سكر العنب البطاطا ، بادئات PDB | Solarbio | P9240 | |
| Sangon Biotech | / | ||
| Primers Taq | TaKaRar | RR902A | |
| طقم عزل الحمض النووي الجينومي السريع للفطريات | Sangon | B518229 | |
| المجهر الإلكتروني الماسح ، SEM | هيتاشي | S-3400N | |
| Streptomycin | Marklin | S6153 | |
| Tetracycline | Marklin | T829835 | |
| Tween-80 | Marklin | T6336 | |
| مجفف تجميد فراغ | ياماتو | DC801 | |
| دوامة شاكر | HLD | WH-861 | |
| & بيتا ؛ -Mercaptoethanol | Marklin | M6230 |
المراجع
- Hajek, A. E., Bauer, L. S. Microbial control of wood-boring insects attacking forest and shade trees. Field Manual of Techniques in Invertebrate Pathology. 10, 505-525 (2007).
- Linnakoski, R., Forbes, K. M. Pathogens-t....
الوصول مقيد. يرجى تسجيل الدخول أو بدء فترة تجريبية لعرض هذا المحتوى.
إعادة الطباعة والأذونات
