يمكن للمنصة التجريبية للكي إصلاح الفئران دون قيود ، ويمكن أن تخضع الفئران للكي متعدد الوخز في حالة اليقظة ، مما يضمن رفاهية الفئران ، وحماية سلامة المشغلين ، وضمان الفعالية العلاجية ، وتحسين كفاءة التجربة.
يتطلب اشتراك JoVE لعرض هذا المحتوى. تسجيل الدخول أو ابدأ نسخة تجريبية مجانية
مقالة منهجية
استخدام الكى المنفصل عن الكعك العشبي لعلاج الفئران المصابة بالفشل الكلوي المزمن
* These authors contributed equally
في هذه المقالة
ملخص
الملخص
في عملية الكى في الممارسة السريرية ، يجب أن يكون الأشخاص في مزاج مستقر ووضعية مريحة لتجنب مشاكل مثل سقوط رماد moxa ، وحرق الجلد ، وضعف التأثير العلاجي. توجد مثل هذه المشاكل أيضا في تجربة الكى الفئران. لمحاكاة الممارسة السريرية ، من الضروري إدخال أداة تجريبية في التجارب على ، أي جهاز الكى مع الفئران الثابتة وتزامن علاج الكى ، والذي يمكن أن يجعل الفئران التجريبية تتلقى علاج الكى بهدوء وراحة تحت عدم التخدير.
صممت مجموعتنا البحثية منصة تجريبية للكي الفئران. تم تأطير الجهاز بلوح خشبي مع لوحة قاعدة داعمة ومكونات ثابتة متعددة ومكونات مقسمة. يمكن للجهاز تحقيق وضع تشغيل الكى في الفئران دون ربط ، وتجنب التخدير والحروق وتعريض نقاط الوخز المتعددة في وقت واحد على الظهر. يمكن أن تتجنب هذه العملية الإصابة الجسدية والعقلية للفئران والمشغلين ، مما يحسن كفاءة البحث ويعزز تطوير وبحث تجارب الكى.
يحتوي الجهاز على هيكل بسيط ، سهل التشغيل والترويج ، مصمم بشكل شامل ومبتكر ، قابل لإعادة الاستخدام ، ومناسب لتجارب الفئران التي تعتمد بشكل أساسي على الكي. تقدم هذه المقالة بشكل أساسي هيكل جهاز المنصة التجريبية للكي من الفئران ، وهو الإجراء الأساسي للكي المنفصل عن كعكة الأعشاب في الفئران التجريبية باستخدام الجهاز ويصف إنشاء نموذج الفئران للفشل الكلوي المزمن (CRF) والنتائج التجريبية التمثيلية.
المقدمة
ظهر الكى مع تطبيق النار. وجد الأطباء القدماء بطريق الخطأ أن بعض أجزاء الجسم المشتعل بالنار يمكن أن تخفف من أعراض الانزعاج. بعد ممارسة طويلة الأجل ، تم اختيار "Artemisiae Argyi Folium" تدريجيا كمادة الكى الرئيسية1. الكى هو أحد المكونات المهمة للطب الصيني التقليدي ، وعندما يتم وضعه جنبا إلى جنب مع مغلي الطب الصيني التقليدي والوخز بالإبر ، تستخدم هذه العلاجات الثلاثة الرئيسية للطب الصيني التقليدي على نطاق واسع في العديد من الأمراض.
غالبا ما استخدم الأطباء الصينيون الكى لعلاج الأمراض في وقت مبكر من فترة Huangdi Neijing (الكلاسيكية الداخلية للإمبراطور الأصفر). Artemisiae Argyi Folium هو نوع من الأدوية العشبية الصينية مع وظيفة خطوط الطول الدافئة لوقف النزيف وتبديد نزلات البرد وتخفيف الألم. يستخدم عادة في العلاج الخارجي للطب الصيني التقليدي ويمكن استخدامه أيضا في علاج مغلي الطب الصيني التقليدي. الكى هو نوع من العلاج الخارجي2 حيث يتم وضع moxa أو أدوية أخرى على نقاط الوخز على سطح الجسم لحرق واستخدام الحرارة المعتدلة لحريق الكى وتأثير الأدوية لعلاج الأمراض3.
كواحدة من الطرق الشائعة للعلاج ، تم استخدام الكى على نطاق واسع في الممارسة السريرية. مع التوسع المستمر في علاج الكى ، قام عدد متزايد من الدراسات بالتحقيق في آلية الكى وأجرى العديد من التجارب على 4,5.
يمكن تصنيف طريقة الكى على أنها الكى المباشر والكي غير المباشر. تسمى طريقة وضع الكى على جلد الجسم بالكي المباشر. يفصل الكى غير المباشر سطح مخروط moxa ونقاط الوخز بالأدوية أو المواد الأخرى. يمكن أن يعالج الكى أمراضا مختلفة ، مثل متلازمة القولون العصبي6 ، ومتلازمة التعب المزمن7 ، وهشاشة العظام في الركبة8.
يناقش هذا البحث بشكل أساسي آلية الكى المنفصل عن الكعك العشبي. ينتمي الكى المنفصل عن كعكة الأعشاب إلى طريقة الكى غير المباشرة ، حيث يتم وضع مخروط moxa على الكعكة الطبية لتطبيق الكى. أظهرت الدراسات الحالية أن تأثيرات الأشعة تحت الحمراء والاحترار الناتجة عن حرق مخروط moxa ، والتركيب الكيميائي لقطران أوراق moxa ، وتحفيز نقطة الوخز بالإبر يمكن أن تحقق الوقاية من الأمراض وعلاجها9 عن طريق زيادة تغلغل الأدوية في نقاط الإبر. لذلك ، ينتج الكى المنفصل عن كعكة الأعشاب بشكل أساسي "تأثيرا شاملا" من خلال الكى والأدوية ونقاط الوخز10.
تظهر الدراسات السابقة أن الكى هو طريقة فعالة لعلاج CRF11،12،13،14،15 ، لكن الآلية الأساسية لا تزال غير محددة. لقد عملنا على البحوث السريرية والحيوانية على نموذج الإبلاغ الموحد. في الوقت الحاضر ، نجري دراسة تجريبية عن الكى على فئران CRF بناء على مسار إشارات كيناز الشبكة الإندوبلازمية الشبيهة بالحمض النووي الريبي (PERK) لإجهاد الشبكة الإندوبلازمية المنفصلة عن الكيك العشبي (PERK). من خلال هذه التجربة على ، نهدف إلى شرح أولي للآلية المحتملة للكي في علاج أمراض الكلى المزمنة. في هذه التجربة ، يعد علاج الكى المنفصل عن الكعك العشبي للفئران عملية رئيسية.
في التجربة السابقة16 ، تم استخدام غطاء قفص التربية لربط وإصلاح الفئران. لحماية المشغل ، يجب تخدير الفئران قبل الربط. ومع ذلك ، من السهل الخوف من فئران Sprague-Dawley (SD) ومذهولتها. يمكن أن تسبب عملية الربط بسهولة الأرق في الفئران. غالبا ما حدثت مشاكل مثل ضعف تثبيت وضعية الفئران ، وانحراف موضع نقطة الوخز ، وزيادة وقت التجربة ، وإصابة المشغل.
بالإضافة إلى ذلك ، إذا كان الارتباط ضيقا جدا ، فقد يتسبب بسهولة في صعوبات في التنفس لدى الفئران ، وهو ما لا يفضي إلى رعاية. إذا كان الارتباط فضفاضا جدا ، فإن الفئران تكون عرضة للنضال وتحريك أجسامها ، مما يتسبب في سقوط مخاريط الكى وحرق جلدها ، مما يؤثر على النتائج التجريبية. استنادا إلى الأدبيات ، لا تزال التجارب على تنطوي على ربط16،17،18 ، ولا يمكن إصلاح معظم الأجهزة التجريبية إلا ، مما يعيق تنفيذ تقنيات أخرى مثل الكى19. لذلك ، أصبح تحقيق تكامل التثبيت والكي في جهاز التجربة مع ضمان رعاية والمواصفات التجريبية وكفاءتها أحد مجالات التركيز للباحثين.
الوصول مقيد. يرجى تسجيل الدخول أو بدء فترة تجريبية لعرض هذا المحتوى.
البروتوكول
تتبع الخطة إرشادات رعاية لجامعة يونان للطب الصيني وقد تمت الموافقة عليها من قبل لجنة أخلاقيات بجامعة يونان للطب الصيني. رقم مراجعة رعاية وأخلاقيات التجريبي هو R-062021G098.
1. جهاز منصة تجريبية الكى (الشكل 1)
ملاحظة: قمنا بتصميم وبناء جهاز المنصة التجريبية للكي الفئران بناء على المسافة بين الأطراف الخلفية والأمامية للفئران وخصائصها السلوكية والفسيولوجية.
- حجم جهاز الكى
- تصنيع الجهاز باستخدام مادة لوح مضاد للضرب ولوح خشبي ؛ الحجم الكلي 52 سم طول × 23.5 سم عرض × 64 سم ارتفاع ، والمساحة السفلية للجهاز 1222 سم2.
ملاحظة: تتم عملية الكى على المنصة عند هذا الارتفاع ، ويمكن الحفاظ على هدوء الفئران.
- تصنيع الجهاز باستخدام مادة لوح مضاد للضرب ولوح خشبي ؛ الحجم الكلي 52 سم طول × 23.5 سم عرض × 64 سم ارتفاع ، والمساحة السفلية للجهاز 1222 سم2.
- الإطار الرئيسي لجهاز الكى
- اصنع قاعدة الجهاز بالكامل بمادة لوح مضادة للضرب: لوحة القاعدة 52 سم طول × 23.5 سم عرض مع سطح أبيض. تأكد من أن الجزء السفلي يمثل نسبة كبيرة من وزن الجهاز لتثبيت الجهاز بالكامل.
- اصنع المنصة المرتفعة للجهاز بالخشب الصلب بارتفاع 60 سم.
ملاحظة: هذا هو الإطار الرئيسي للأداة بأكملها ، والذي يعمل على استقرار الجهاز بأكمله ويدعم وضع الفئران في وضع الوقوف. - ضع خمس فتحات وضع فوق المنصة المرتفعة ، بحجم 10 سم طول × 6 سم عرض × 10 سم ارتفاع. استخدم لوحات الفاصل الزمني (10 سم طول × 1.3 سم عرض × 10 سم ارتفاع) لفصل فتحات التنسيب ، المقابلة للمسافة بين الأطراف الأمامية والخلفية للفأر في وضع الوقوف.
- مكونات جهاز الكى
- ثبت شريطين من الفولاذ المقاوم للصدأ أعلى فتحات التنسيب. كل شريط ثابت عبارة عن قضيب فولاذي متساوي الحافة بزاوية قائمة 40 سم طول × 1.4 سم عرض (كلا الجانبين لهما نفس العرض) ، مع 15 فتحة. تتوافق ثلاثة ثقوب في الشريط الثابت مع كل فتحة ، تستخدم لإصلاح برغي مقبض البرقوق والخرطوم المتحرك. المسافة بين الثقوب المجاورة 7 سم.
- ضع برغي مقبض زهر البرقوق القابل للتعديل على طرفي شبكة العزل الحراري المصنوعة من الفولاذ المقاوم للصدأ 304 وقم بتوصيله بشبكة العزل الحراري الثابتة والشريط الثابت.
- قم بتوصيل الطرف العلوي لكل فتحة وضع بشبكة عزل حراري قابلة للرفع محاطة بإطار لوحة مجلفنة. قم بتوصيل هذا الإطار ببرغي مقبض زهر البرقوق في كلا الطرفين. ضع مادة شبكية دائرية من الفولاذ المقاوم للصدأ 304 في منتصف شبكة العزل الحراري لمنع الرماد من السقوط وحرق الفئران ولإصلاح الفئران لتسهيل الكى.
- قم بتثبيت الطرف السفلي للخرطوم المتحرك المصنوع من الفولاذ المقاوم للصدأ (بطول 34 سم) بشريط ثابت من الفولاذ المقاوم للصدأ والطرف العلوي بلوحة توصيل مشبك الأنبوب.
ملاحظة: الخرطوم المتحرك مناسب لضبط موضع عصا moxa أثناء عملية الكى المعلقة. - استخدم مشبك الأنبوب المصنوع من سبائك الألومنيوم لتوصيل الخرطوم المتحرك من الفولاذ المقاوم للصدأ ومشبك moxa.
- قم بتوصيل مشبك moxa المصنوع من الفولاذ المقاوم للصدأ بلوحة توصيل مشبك الأنبوب ، وقم بإصلاح 8-10 شرائط moxa في وقت واحد من أجل الكي.
ملاحظة: يمكن استخدام الخرطوم المتحرك ولوحة توصيل مشبك الأنبوب ومشبك moxa لعملية الكى المعلق في الفئران.
2. إنشاء نموذج الفئران من الفشل الكلوي المزمن
- تأقلم 24 من ذكور الفئران SD الخالية من مسببات الأمراض (SPF) (الذين تتراوح أعمارهم بين 3-4 أسابيع ، ويزن 180-200 جم) لمدة أسبوع واحد. الحفاظ على درجة حرارة التغذية عند 18-24 درجة مئوية ؛ الرطوبة النسبية في 40-70 ٪. ودورة مظلمة 12 ساعة و 12 ساعة مظلمة. إيواء ستة في كل قفص وتوفير حرية الوصول إلى المياه والأعلاف المشتركة.
- إنشاء نموذج الفئران من CRF. وفقا لجدول الأرقام العشوائية واتباع هذا البروتوكول ، حدد ستة فئران كمجموعة تحكم والباقي 18 كمجموعة نموذجية. عالج المجموعة الضابطة (ن = 6) بالماء المقطر (10 مل ∙ كجم -1∙ يوم -1) والتغذية العادية ومجموعة النموذج (ن = 18) مع تعليق الأدينين (150 مجم كجم -1∙day-1) وتغذية عالية البروتين لمدة 21 يوما.
- مراقبة وتسجيل وزن الجسم والحالة العقلية والنظام الغذائي يوميا. بعد نهاية 21 يوما ، تأكد من صيام جميع لمدة 12 ساعة قبل أخذ عينات الدم المدارية.
- جمع عينات الدم المدارية.
- تخدير الفئران لفترة وجيزة مع إيزوفلوران. أمسك ظهر الجرذ باليد غير المهيمنة ، وأمسك رأس الجرذ ووجهه بشكل متماثل بين الإبهام والسبابة ، وفضح جانبا واحدا تماما من كانثوس الفئران ، وشغل هذا الوضع.
- باليد المهيمنة ، امسك الشعيرات الدموية ذات نقطة الانصهار بطول 3 سم بين الإبهام والسبابة وقم بلف الشعيرات الدموية ببطء ، وأدخل الضفيرة الوريدية الداخلية للفأر عند 45 درجة حتى يتدفق الدم ببطء من الأنبوب.
- اجمع 150-200 ميكرولتر من عينات الدم في أنابيب مضادة للتخثر لجمع الدم سعة 0.5 مل ، واسحب الشعيرات الدموية برفق ، واضغط على المدار بالقطن.
- هز الأنبوب المضاد للتخثر بسرعة ودقة. قياس كرياتينين مصل البلازما (Scr) ونيتروجين اليوريا في الدم (BUN) باستخدام محلل كيميائي حيوي أوتوماتيكي.
ملاحظة: تشير الزيادة في SCR و BUN إلى نجاح إنشاء نموذج نموذج نموذج الإبلاغ الموحد. - قسم الفئران إلى أربع مجموعات: ج: ستة فئران تحكم ، بدون علاج. 18 فأرا نموذجيا مقسمة إلى مجموعات B: (المجموعة النموذجية: لا دواء أو كي) ، C: (مجموعة البوتاسيوم اللوسارتان: تدار 2.33 مجم ∙ كجم -1∙ يوم -1 بواسطة إبرة التزويج 12 جم) ، و د: (مجموعة الكى المنفصلة عن الكعك العشبية: الكى المنفصل عن كعكة الأعشاب المطبق على شينشو الثنائي [B23] و Pishu الثنائي [B20]).
3. مرحلة العلاج
ملاحظة: لا يتم إعطاء المجموعتين A و B أي علاج ، بينما سيتم علاج المجموعتين C و D مرة واحدة يوميا لمدة 24 يوما ، مع يومين عطلة بعد 12 يوما من العلاج.
- الاستعدادات قبل العلاج
- تحضير 300 غرام من الجذر المجفف astragali ، 300 غرام من Radix Codonopsis المجففة ، 200 غرام من Radix Rehmanniae Praeparata المجففة ، 100 غرام من عشب Epimedium المحمص قصير القرون و 100 غرام من Cornus officinalis. خلط هذه المساحيق.
- ضع 500 غرام من Artemisiae Argyi Folium في كسارة الطب الصيني التقليدي (سرعة 34000 دورة / دقيقة) لمدة 5 دقائق ، وانقل المسحوق المطحون إلى طبق ، ثم قم بغربلة 600 شبكة. بعد جولتي غربلة ، تخلص من moxa الخشنة وانقل moxa الناعم إلى كيس للاستخدام (الشكل 2).
- تحضير مخروط moxa عن طريق ملء moxa الناعم في القالب لعمل مخروط moxa صغير بقطر 0.5 سم وارتفاع 0.5 سم. بدلا من ذلك ، malaxate moxa بين الإبهام والسبابة من كلتا اليدين لتشكيل مخاريط moxa (الشكل 3A).
- تحضير قالب كعكة الأعشاب عن طريق قطع حقنة 5 مل إلى أربع حلقات بلاستيكية دائرية بسمك 0.5 سم ولصق الحلقات الأربع على نفس المستوى الأفقي (على زوايا مستوى مربع بطول جانبي 26 مم ، الشكل 3 د).
- اصنع كعكات الدواء عن طريق خلط المسحوق والماء بنسبة 1: 1 وملء الخليط في قالب كعكة الأعشاب (الشكل 3E). اترك كعكة الدواء في القالب وقم بتخزينها في مكان جاف.
- بمناسبة نقاط الوخز
- حدد نقاط الوخز على النحو التالي: Shenshu (B23) ، كلا جانبي الفقرة القطنية الثانية ، نقطة وخز واحدة على كل جانب ؛ Pishu (B20) ، الوربي للفقرة الصدرية 11 على كلا الجانبين ، نقطة وخز واحدة على كل جانب (الشكل 4).
ملاحظة: لمعرفة موقع نقاط الوخز بالإبر ، راجع دليل الوخز بالإبر لحيوانات التجارب20. - ارتد قفازا مطاطيا سميكا على اليد غير المهيمنة لتغطية رأس الجرذ برفق ، وحدد نقاط الوخز على ظهر الجرذ باليد المهيمنة ، ثم ضع علامة على نقاط الوخز بعلامة ملونة.
- حدد نقاط الوخز على النحو التالي: Shenshu (B23) ، كلا جانبي الفقرة القطنية الثانية ، نقطة وخز واحدة على كل جانب ؛ Pishu (B20) ، الوربي للفقرة الصدرية 11 على كلا الجانبين ، نقطة وخز واحدة على كل جانب (الشكل 4).
- وضع الفئران
- ارتداء قفازات مطاطية سميكة. استخدم الإبهام والأصابع الأربعة الأخرى لليد المهيمنة لقرص الجلد قليلا على ظهر وعنق الفئران. استخدم الإبهام والسبابة لليد غير المهيمنة لقرص ذيل الجرذ برفق.
- ارفع الجرذ ، وقم بمحاذاة رأس الجرذ في فتحة وضع منصة الكى الخاصة ، وحرك الجرذ ببطء للأمام. تأكد من أن المخلب الأمامي للفأر قريب من حافة فتحة التنسيب وأن الجرذ يصعد إلى الفتحة.
ملاحظة: قم بتطهير منصة الكى بالكامل قبل البدء. قبل اصطياد الجرذ ، المس ظهر الجرذ برفق أو تحدث إليه لتهدئته. اضبط ارتفاع شبكة العزل من موضع منخفض (عندما لا تكون قيد الاستخدام) إلى الأعلى ، وهو مناسب لدخول الفئران.
- تثبيت الفئران
- ضع إصبعي الإبهام والسبابة بكلتا اليدين على برغي برغي زهر البرقوق على طرفي شبكة العزل الحراري. قم بفك برغي زهر البرقوق لخفض شبكة العزل الحراري إلى الموضع المناسب ، بالقرب من الجزء الخلفي من الفئران ، ولكن لا تسبب ضغطا ، ثم شد البراغي.
- وضع مخروط moxa والكعكة الطبية.
- ضع القالب المحضر الذي يحتوي على كعكة الدواء على شبكة العزل الحراري المقابلة لنقاط الوخز لكل من Pishu (B20) و Shenshu (B23) وفقا لعلامات نقاط الوخز على الفئران. هناك أربع نقاط وخز ، كل منها يتوافق مع كعكة الدواء.
- ضع مخروط moxa على الكعكة الطبية بسلاسة وثبات.
- الكى
- أشعل مخروط moxa بولاعة وابدأ الكى حتى يحترق مخروط moxa وتتبدد الحرارة المتبقية بشكل طبيعي (تجف الكعكة الطبية الرطبة).
- استبدل مخروط moxa المحترق بمخروط moxa جديد وكعكة علاجية على نفس نقطة الوخز واستمر في الكى حتى يحترق مخروط moxa وتجف الكعكة الطبية. كرر هذا لما مجموعه 5x في كل نقطة وخز.
ملاحظة: قم بتنظيف وتطهير شبكة العزل الحراري القابلة للرفع قبل استبدالها بمخروط موكسا جديد وكعكة طبية. - أطفئ مخاريط moxa والكعك الطبي في خزان نفايات يحتوي على الماء بعد حرق خمسة مخاريط moxa في كل نقطة وخز.
ملاحظة: تتلقى كل نقطة وخز بالإبر خمسة مخاريط من الكى. يمكن استبدال كل مخروط Moxa بعد الاحتراق.
- إعادة الفئران إلى القفص
- ضع قفص التربية الفارغ أمام الجرذ ، بالقرب من الطرف السفلي من فتحة وضع منصة الكى ، وابق ثابتا. ربت برفق على أرداف الفئران حتى يتمكن الجرذ من الانتقال من فتحة التنسيب إلى قفص التغذية. بعد دخول الفئران ، اخماد القفص. استخدم اليد المهيمنة للإمساك بالفراء على ظهر الجرذ ، وأمسك الجرذ بقوة ، وضعه على الأرض لمزيد من المراقبة.
- لاحظ ما إذا كانت الفئران تعاني من ضيق في التنفس ، وما إذا كان المزاج مستقرا ، وما إذا كان سطح الجلد محروقا. إذا لم يكن هناك خلل ، فأعده إلى القفص. إذا تم تحطيمه ، ضع مرهم السمط على الفور على سطح الجلد وضعه في قفص واحد.
4. مرحلة أخذ العينات
- بعد 24 يوما من العلاج ، قم بإعداد الفئران لمدة 12 ساعة من الصيام قبل أخذ العينات.
- صب isoflurane في آلة تخدير الغاز وتخدير الفئران مع 2-3 ٪ isoflurane. بعد 2-3 دقائق ، تأكد من غياب ردود الفعل (قرصة الذيل بملاقط جراحية للتحقق من عدم وجود أي منعكس) واستمرار وجود ضربات القلب والتحول إلى تخدير الصيانة مع 1-1.5 ٪ إيزوفلوران.
- اجمع 5 مل من الدم من الشريان الأورطي البطني عن طريق إدخال الإبرة في الشريان الأورطي شبه البطني. دع الدم يقف لمدة 2 ساعة ، وأجهزة الطرد المركزي عند 2490 × جم لمدة 10 دقائق عند 4 درجات مئوية ، وانقل طاف المصل إلى أنبوب طرد مركزي دقيق سعة 1.5 مل لمزيد من التحليل.
- تخدير الفئران بعمق لفترة طويلة من الزمن وأخذ الدم من الشريان الأورطي البطني تحت تخدير الصيانة. علاوة على ذلك ، القتل الرحيم للفئران عن طريق خلع عنق الرحم.
- حصاد الأنسجة من كلتا الكليتين عن طريق تجريد اللفافة الكلوية الثنائية والدهون بالمقص الجراحي والملاقط والشطف بمحلول ملحي طبيعي بنسبة 0.9٪. وزن الكلى اليمنى واليسرى وتسجيل الوزن والتشكل.
- الحفاظ على الأنسجة الكلوية عن طريق قطع الكلية اليسرى إلى ستة أجزاء ووضعها في أنبوب طرد مركزي سعة 50 مل يحتوي على 4٪ بارافورمالدهيد للنقع والتثبيت والحفظ. قطع الكلية اليمنى إلى ست قطع باستخدام سكين في الاتجاه الطولي واثنين من السكاكين في الاتجاه العرضي. ضع هذه القطع في ستة أنابيب تبريد سعة 2 مل وضعها على الفور في النيتروجين السائل ؛ انقلها إلى فريزر -80 درجة مئوية للتخزين.
5. مرحلة الكشف
- استخدم أنسجة الكلى اليمنى ذات الحجم المناسب لاستخراج البروتين ، والرحلان الكهربائي للهلام ، ونقل الغشاء ، والحجب ، وحضانة الأجسام المضادة الأولية ، والأجسام المضادة الثانوية ، والتلألؤ الكيميائي ، والتطوير ، والتثبيت ، ومسح الفيلم.
- استخدم نظام تحليل بيانات صورة الهلام (على سبيل المثال ، Image-Pro Plus 6.0) لتحليل القيمة الرمادية للنطاق وحساب محتوى كل بروتين.
- إخضاع أنسجة الكلى اليسرى للجفاف ، والتطهير ، والتضمين في البارافين ، والتقسيم (سمك 4 ميكرومتر) ، وتلطيخ الهيماتوكسيلين يوزين وصبغة ماسون ثلاثية الألوان ، ومراقبة التغيرات المرضية21 في الأنسجة الكلوية تحت المجهر الضوئي عند تكبير 200x.
الوصول مقيد. يرجى تسجيل الدخول أو بدء فترة تجريبية لعرض هذا المحتوى.
النتائج
مورفولوجيا الكلى
كما يتضح من الشكل 5، بالمقارنة مع المجموعات الأخرى، كان حجم الكلى ولونها وملمسها في المجموعة (د ) (مجموعة الكى المنفصلة عن الكعك العشبي) أقرب إلى المجموعة الطبيعية. أظهر مورفولوجيا الكلى للنموذج ومجموعات البوتاسيوم اللوسارتان درجات مختلفة من التليف الأبيض.
وزن الكلى
يوضح الشكل 6 أن وزن الكلى اليسرى للمجموعة A يختلف اختلافا كبيرا عن وزن المجموعة B ، مما يشير إلى ...
الوصول مقيد. يرجى تسجيل الدخول أو بدء فترة تجريبية لعرض هذا المحتوى.
المناقشة
سريريا ، يتطلب علاج الوخز بالإبر والكي من المرضى الهدوء والاسترخاء ، وتجنب الغضب المفرط والجوع والتأكيد على "السلام". ومع ذلك ، فإن الممارسة الحالية لتجارب الوخز بالإبر والكي لا تزال تستند إلى فرضية ربط ، والتي لا تتعارض فقط مع النية الأصلية للتجربة ولكنها أيضا لا تتوافق مع الممارسة السريرية. الملزمة ، مما يجعل خائفة وغاضبة ، ستزيد بسرعة من الأدرينالين والهرمونات الأخرى في التجارب ، مما يؤثر على النتائج التجريبية22. أثناء التشغيل التجريبي لحيوانات الوخز بالإبر والكي ، يجب حل هذه المشكلات بشكل عاجل...
الوصول مقيد. يرجى تسجيل الدخول أو بدء فترة تجريبية لعرض هذا المحتوى.
الإفصاحات
يعلن المؤلفون أنه لا يوجد تضارب في المصالح. رقم براءة اختراع جهاز المنصة التجريبية للكي الفئران هو ZL202320880924.X.
شكر وتقدير
نشكر الأستاذ المشارك هوانغ والآنسة تسوي على توجيهاتهما ودعمهما الصارمين لهذه الورقة. تم دعم الدراسة من قبل: 1. المؤسسة الوطنية للعلوم الطبيعية في الصين (NSFC) ، 82160938 ، "استكشاف أبحاث الآلية حول التليف الخلالي الكلوي مع الكى المنفصل عن الكعكة من التأثير التفاعلي لمسارات إشارة ERK و Smad بوساطة TGF-β1" ؛ 2. لجنة الصحة في مقاطعة يوننان "2020 مواهب احتياطي الطب الصيني التقليدي رفيعة المستوى"مشروع الحضانة (Yunwei TCM Development [2021] No.1) ؛ 3. الصناديق الخاصة المشتركة المشتركة للطب الصيني التابعة لإدارة العلوم والتكنولوجيا في مقاطعة يونان - البحوث الأساسية التطبيقية (رقم 2019FF002-022 ، رقم 202101AZ70001-286 ، رقم 202301AZ070001-030) ؛ 4. فريق الابتكار في مقاطعة يونان لمنع وعلاج الاعتلال الدماغي بالوخز بالإبر وتوينا (2023).
الوصول مقيد. يرجى تسجيل الدخول أو بدء فترة تجريبية لعرض هذا المحتوى.
المواد
| الاسم | الشركة | رقم فهرسي | التعليقات |
|---|---|---|---|
| 0.5 مل أنبوب الهيبارين الليثيوم الكيميائي الحيوي | شيجياتشوانغ كانغويشي للمعدات الطبية المحدودة | 220518 | جمع الدم |
| 0.9 ٪ محلول ملحي | طبيعي كونمينغ نانجيانغ الصيدلانية المحدودة | / | شطف |
| 1.5 مل أنبوب إيبندورف | بكين لانجيكي التكنولوجيا الحيوية المحدودة | 12100024 | الحزمة الفرعية |
| 2 مل أنبوب الحفظ بالتبريد | الباروك التكنولوجيا الحيوية المحدودة | 88-0151 | الكلى المعبأة |
| 4 درجات; ثلاجة C | Haier Group Co. Ltd | BCD-236WDGL | Store |
| 5 مل حقنة | Sichuan New Century Medical polymer products Co., LTD | 20211115 | Gavage |
| 50 مل أنبوب الطرد المركزي | Beijing Langeke Biotechnology Co.، LTD | CT-002-50A | الكلى المعبأة ؛ |
| 12 G إبرة التزقيم | بكين Zhongke Hengtian التكنولوجيا المحدودة | 12 # 55 مم | تزقيم ؛ |
| 96 بئر لوحات | بكين لانجيكي التكنولوجيا الحيوية المحدودة | 11510 | تحديد تركيز البروتين |
| -80° C الفريزر | الحرارية فيشر العلمية | 991 | متجر |
| الأدينين | بكين Boaotuo التكنولوجيا المحدودة | A0607 | المخدرات |
| BCA مطور | Biyuntian Biological Engineering Co.، LTD | P0010 | تحديد تركيز البروتين |
| BCL-2 كاشف الأجسام المضادة للبروتين | Abcam Shanghai Trading Co.، LTD | ab196495 | Western Blot |
| Caspase-3 protein كاشف الأجسام المضادة | Abcam Shanghai Trading Co.، LTD | ab184787 | Western Blot |
| نظام التصوير الكيميائي | Shanghai Qinxiang Scientific Instrument Co.، LTD | 100240073 | تصوير نطاقات البروتين |
| مسحوق الطب | الصيني المستشفى التابع الثاني لجامعة يوننان للطب الصيني | / | علاج |
| علامة ملونة | ذات تحميل مباشربكين Kangrunchengye التكنولوجيا الحيوية المحدودة (GenStar) | M221 | Western Blot |
| إبرة جمع الدم المتاح | Liuyang Sanli Medical Science and Technology Development Co.، LTD | YZB / Country 0411-2010 | أخذ عينات الدم |
| حاوية جمع عينات الدم الوريدية البشرية القابل للتصرف | Liuyang Sanli Medical Science and Technology Development Co.، LTD | 20210901 | أخذ عينات الدم |
| DK-30 صانع الثلج الأوتوماتيكي | Henan Brothers instrument equipment Co.، LTD | SHDX0023 | ECL لصنع الثلج |
| Beijing Lanjieke Biotechnology Co.، LTD | BL520B | تحويل الصور الكامنة في الفيلم المكشوف إلى صور مرئية | |
| موازين إلكترونية | شنغهاي ران هاو للإلكترونيات المحدودة | JCS-31002C | تم قياس |
| وزن الجسم ووزن الكلى للفئرانتجميد microtome | Thermo Fisher Scientific | HM525 NX | Microtome |
| محلل كيميائي حيوي أوتوماتيكي بالكامل | تيانجين مايكرو نانو كور تكنولوجي وشركة ، LTD | PV2112001Z02410305 | اختبار وظائف الكلى |
| التخدير الغازي | Zhongshi Technology Co.، Ltd | ZS-MV-1 | Anesthesia |
| Glycine | Beijing Soleibao Technology Co.، Ltd. | Cat # G8200 | تشغيل المخزن المؤقت ، كاشف تلطيخ النقل الغربي |
| HE | Beijing Soleibao Technology Co.، Ltd. | G1120 | تلطيخ |
| الأعلاف عالية البروتين | Jiangsu Synergetics Biological Engineering Co.، LTD | XT19008 | تغذية |
| مختبر ذكي فائق النقاء آلة المياه | Chongqing huachuag Water Treatment Engineering Co.، LTD | 15L | |
| الترشيح المرجع الداخلي & beta ؛ الأكتين | Jiangsu Qinke Biological Research Co.، LTD | AF7018 | Western Blot |
| Isoflurane | Jiangsu Zhongmu Beikang Pharmaceutical Co.، Ltd | 20220701 | التخدير |
| النيتروجين السائل | Kunming Botai مبيعات الثلج الجاف المحدودة | / | تجميد الأنسجة الكلوية |
| أقراص البوتاسيوم Losartan | Merck Sharp & Dohme (الصين) الاستثمار المحدودة | J20180054 | علاج |
| درجة حرارة منخفضة طاحونة الأنسجة عالية السرعة | ووهان Servicebio technology CO.، LTD | SKZ3F20200191 | طحن الأنسجة |
| Maason تلطيخ | كيت بكين Soleibao التكنولوجيا المحدودة | G1340 | تلطيخ |
| الميثانول | قوانغدونغ قوانغهوا العلوم والتكنولوجيا المحدودة | 20220519 | المخزن المؤقت الغربي |
| Mini-PROTEAN Tetra | Bole Life Medical Products (شنغهاي) المحدودة | 552BR 233193 | الرحلان الكهربائي |
| Moxa | المستشفى الثاني التابع لجامعة يونان للطب | الصيني / | علاج |
| Multiskan الطيف الطيف الضوئي | TECAN | Spark | تم الكشف عن امتصاص وتركيز بروتين الأنسجة مقص |
| التشغيل | Zhangjiagang مصنع قطع سكين الغزلان Jinfeng | 201118 | قطع الجلد |
| Paraformaldehyde | Beijing Lanjieke Biotechnology Co.، LTD | BL539A | كاشف |
| الأجسام المضادة للبروتين PERK | الأنسجة الثابتة Shanghai Pumai Biotechnology Co.، LTD (وكيل CST الصين) | 3192 | اللطخة الغربية |
| المجهر الفلوري الإيجابي | كارل زايس سوتشو المحدودة | 5446000456 | التقاط صورة |
| الغراء الجاهزة | Derun Cheng (بكين) البيولوجية المحدودة (وكيل ACE الصين) | B230418 | Western |
| Blot Protein Find Goat Anti-Rabbit LgG (H + L) ، HRP Conrupgate | Shanghai Dinran Electronic Technology Co.، LTD (TRAN) | HS101 | Western Blot |
| الطاحن | Hefei Rongzhida الأجهزة المنزلية الصغيرة المحدودة | RS-FS1401 | الصينية المطحونة غشاء |
| الطب PVDF | شركة MerckMillipore | IPVH00010 | اللطخة الغربية |
| أجهزة الطرد المركزي المبردة | Hettich Precision Technology (Zhuhai) Co.، LTD | MIKRO 220R | أجهزة الطرد المركزي |
| RIPA lysate | Beijing Solaibao Technology Co.، LTD (Solarbio) | R0010 | عينات من الأنسجة اللايتية |
| الشعيرات الدموية | Jiangsu Kangjianhua Medical Supplies Co.، LTD | 20160157 | الدم من مرهم حروق الكانثوس |
| الداخلي (مرهم Zilian) | مستشفى مقاطعة يونان للطب الصيني التقليدي | / | يستخدم لعلاج الحروق من مسحوق الحليب الخالي من الدسم بالكي |
| قوانغتشو سايقو التكنولوجيا الحيوية المحدودة (BIOFROXX) | 1172GR500 | العازلة الغربية | |
| شنغهاي للمعدات الطبية المحدودة | JOBO10 | أنسجة الكلى | |
| مقبض سكين | جراحي شنغهاي للمعدات الطبية المحدودة | J11010 | شفرة التركيب |
| TS-200 شاكر المداري | Haimen Qilin Bell Manufacturing Co.، Ltd. | TS-8S | جل تثبيت |
| Tween 80 | MedChemExpress | HY-Y1819 | TBST |
| ملاقط | شنغهاي المعدات الطبية المحدودة | JD1050 | التقط moxa |
| الأدوية البيطرية * قرص اختبار وظيفة الكلى | تيانجين مايكرو نواة نانو التكنولوجيا المحدودة | 47031-35.5-0145-0227-62-220750 | اختبار وظائف الكلى |
المراجع
- Run-Ming, Y. The origin and development of Chinese acupuncture and moxibustion. Ancient Science of Life. 4 (4), 224-228 (1985).
- Zhang, Q. W. Moxibustion Theories of Different Schools. , China Press of Traditional Chinese Medicine. Beijing. (2016).
- Ren, H. W., Cai, D. J. Brief discuss on treating febrile diseases with moxibustion. China's Naturopathy. 29 (02), 1-2 (2021).
- Ouyang, X. L., et al. Moxibustion may delay the aging process of Wistar rats by regulating intestinal microbiota. Biomedicine & Pharmacotherapy = Biomedecine & Pharmacotherapie. 146, 112147(2022).
- Qi, Q., et al. Gut microbiome alterations in colitis rats after moxibustion at bilateral Tianshu acupoints. BMC Gastroenterology. 22 (1), 62(2022).
- Wang, G. Y., Meng, Z., Xu, Q. Y., Dou, L., Cui, X. F. Scar moxibustion Zusanli treatment of diarrhea-predominant irritable bowel syndrome 20 cases. Modern Chinese Medicine. 33 (03), 79-80 (2013).
- Xue, K. Y., Fu, J., Lan, L., Tang, J. X., Cui, J. Meta-analysis of the efficacy and safety of barrier moxibustion in the treatment of chronic fatigue syndrome. Journal of Guizhou University of Traditional Chinese Medicine. 44 (03), 53-59 (2022).
- Liu, J. W., Tian, Y., Peng, Y. Y., Ye, Y. Y. Observation on moxibustion sensitivity and curative effect of thermal sensitive moxibustion and knee osteoarthritis. Chinese Acupuncture & Moxibustion. 41 (10), 1063-1068 (2021).
- Liu, W. A., Chang, X. R., Liu, M., Zhang, G. S. Effects of herbal-cake-separated-moxibustion sized cones at different dosages on blood fat and hemorheology in patients with hyperlipemia. Liaoning Journal of Traditional Chinese Medicine. 40 (9), 1787-1790 (2013).
- Zuo, Z., Chen, X. M., Jiang, Y. W., Yang, Y. M., Wang, B. Y. Effect of medicinal cake partition moxibustion on serum TGF-β1 and renal function in chronic renal failure rabbits. Yunnan Journal of Traditional Chinese Medicine and Materia Medica. 38 (04), 82-84 (2017).
- Huang, P. D., et al. Effect of herbal cake-partitioned moxibustion on renal function and expression of renal connective tissue growth factor, integrin-linked kinase and bone morphogenetic protein-7 in chronic renal failure rabbits. Zhen Ci Yan Jiu = Acupuncture Research. 44 (8), 577-582 (2019).
- Li, L. R., Huang, X. X., Wei, T. T., Zhang, P. Research progress of TCM external treatment for chronic renal failure. Journal of Guangxi University of Chinese Medicine. 23 (04), 51-54 (2020).
- Zuo, Z., Jiang, Y. W., Guan, Z. X., Chen, X. M. Observations on the therapeutic effect of herbal cake moxibustion on chronic renal failure. Shanghai Journal of Acupuncture and Moxibustion. 34 (03), 218-220 (2015).
- Wang, H., Zhang, H. M., Xu, J. M., Fan, R. Y., Lu, J. Effect of moxibustion on renal hemodynamics in patients with chronic kidney disease. Zhen Ci Yan Jiu = Acupuncture Research. 43 (11), 722-724 (2018).
- Zhang, X. Q., Zhang, X. Y. External treatment of chronic kidney failure. Clinical Journal of Chinese Medicine. 9 (26), 141-143 (2017).
- He, C., Zhang, C. X., Zhou, S. Q., Fan, Y. S. Using old meshy cage cover to make a rat fixating device for acupuncture study. Zhen Ci Yan Jiu = Acupuncture Research. 46 (4), 348-350 (2021).
- Zhang, H. X., et al. Introduction of a new type of mouse forelimb fixator and two types of batch mice moxibustion device. Zhen Ci Yan Jiu = Acupuncture Research. 46 (7), 616-619 (2021).
- Chen, W., et al. A batch moxibustion device in the mouse abdominal waist. Journal of Chengdu University of Traditional Chinese Medicine. 45 (04), 110-112 (2022).
- Gao, S. Y., Wu, R. N., Wang, M. M., Zhang, S. J. A device for animal experiment. Clinical Journal of Chinese Medicine. 10 (23), 139-140 (2018).
- Hu, Y. L. Manual of acupuncture for experimental animals (second edition). , China Agriculture Press. Beijing. (2014).
- Liang, Y. L., et al. Reflections on animal experiments with moxibustion. China Journal of Traditional Chinese Medicine and Pharmacy. 31 (11), 4379-4381 (2016).
- Madalina, V. N., Jinyang, Z. -B., Malgorzata, W., Liliana, S. Targeting renal fibrosis: Mechanisms and drug delivery systems. Advanced Drug Delivery Reviews. 129, 295-307 (2018).
- Wu, R. N., et al. Design of convenient animal experimental moxibustion therapy device. Shanghai Journal of Acupuncture and Moxibustion. 38 (02), 243-244 (2019).
- Yan, L. G., Zhou, T., Jia, Z. K., Li, J., Wang, C. X. Influence of Panax pseudo-ginseng-partition moxibustion on cartilage damage in rats with traumatic osteoarthritis by regulating AMPK/SIRT1/NF-?B signaling pathway. Hebei Medical Journal. 45 (10), 1450-1454 (2019).
- Xu, Q., et al. Effect of mild moxibustion of 45 °C at "Zusanli" (ST36) of different durations on the inflammatory factors in the abdominal aorta of hyperlipidemia rats. Zhen Ci Yan Jiu = Acupuncture Research. 48 (9), 923-932 (2023).
الوصول مقيد. يرجى تسجيل الدخول أو بدء فترة تجريبية لعرض هذا المحتوى.
إعادة الطباعة والأذونات
الوسوم
