مقالة منهجية

أداة لإنشاء فجوات خالية من الخلايا مستقرة وقابلة للتكرار تلقائيا لتحسين موثوقية فحص التئام الجروح بالخلايا

DOI:

10.3791/65794

⸱

أكتوبر 4, 2024

 ,  ,  , 
1Faculty of Art and Communication, Kunming University of Science and Technology, 2The School of Integrated Chinese and Western Clinical Medicine, Anhui University of Chinese Medicine, 3School of Industrial Design, Hubei University of Technology

* These authors contributed equally

في هذه المقالة

ملخص

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,

من خلال دمج تصميم تجربة التفاعل وتحليل متطلبات المستخدم ، نقدم مكشطة خلايا مبتكرة تعزز فحوصات التئام الجروح الخلوية من حيث قابلية التكاثر والاعتمادية والتطبيق العملي والسلامة الخلوية وتجربة المستخدم.

الملخص

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,

غالبا ما يتم تقويض موثوقية قياس الهجرة الخلوية في مقايسات التئام الجروح بسبب عدم الاستقرار المنهجي السائد ، أي الطريقة القائمة على الأطراف. نقدم أداة مبتكرة مصممة لمعالجة هذه القيود. تتفوق مكشطة الخلايا الجديدة الخاصة بنا على النهج الحالي ، مما يولد فجوة خالية من الخلايا أكثر اتساقا واستقرارا. تكشف التجارب البيولوجية المتكررة أن الفجوة الخالية من الخلايا التي تنتجها مكشطة الخلية تظهر حوافا أكثر استقامة وحجما وشكلا موحدين مقارنة بالتقنية القائمة على الطرف (p < 0.05). من حيث تصميم المنتج ، تتميز مكشطة الخلايا بنظام ألوان مكرر مناسب للبيئات المختبرية ، مما يعزز مراقبة النتائج التجريبية ، ويسمح بالتعقيم من خلال التعقيم لإعادة الاستخدام. والجدير بالذكر أنه بعد العلاج ، تظهر مكشطة الخلايا تأثيرا ضئيلا على صلاحية الخلية وتكاثرها (97.31٪ و 24.41٪ على التوالي). على العكس من ذلك ، فإن الطريقة القائمة على الطرف تؤدي إلى انخفاض صلاحية الخلية (91.37٪) والانتشار (18.79٪). يقدم هذا التحقيق مكشطة الخلايا كجهاز جديد قابل لإعادة الاستخدام قادر على توليد فجوات خالية من الخلايا قابلة للتكرار مع الحفاظ على الجدوى الخلوية ، وبالتالي زيادة موثوقية فحوصات التئام الجروح مقارنة بالتقنيات الحالية.

المقدمة

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,

تتميز الأورام بسمات مميزة مثل مزايا النمو الانتقائي ، وإعادة الأسلاك الأيضية ، والتعديل المناعي ، وكلها تساهم بشكل مثير للاهتمام في تعزيز هجرة الخلايا ، وهو سلوك خبيث حرج للخلايا السرطانية. تؤثر هذه الميزة بشكل مباشر على ورم خبيث بعيد للورم الرئيسي ، مما يعرض للخطر بقاء المرضى على المدى الطويل1،2،3. تمكن مزايا النمو الانتقائي الخلايا السرطانية من التفوق على الخلايا الطبيعية ، بينما تدعم إعادة الأسلاك الأيضية هذا الانتشار السريع عن طريق تغيير مسارات الطاقة. في الوقت نفسه ، يسمح التعديل المناعي للأورام بالتهرب من دفاعات الجسم. تؤكد الدراسات على شدة هذه المشكلة ، حيث تظهر أن ورم خبيث في الرئة ، غالبا ما يكون نتيجة لهجرة الخلايا المعززة ، هو حدث نهائي يؤدي إلى وفاة مرضى يعانون من سرطانات مختلفة4. على سبيل المثال ، تمثل سرطانات الثدي5 وسرطان عنق الرحم4 وساركوما العظم6 20٪ و 9٪ و 30٪ من هذه الحالات على التوالي. لذلك ، أصبح تقييم هجرة الخلايا السرطانية جزءا لا يتجزأ من أبحاث الأورام الحالية ، مما يسلط الضوء بشكل أكبر على الطبيعة متعددة الأوجه لتطور الورم.

مقايسة التئام الجروح الخلوية هي طريقة سهلة الاستخدام لقياس الهجرة الخلوية في المختبر ، وغالبا ما تستخدم في دراسات الأورام7. يستخدم معظم المجربين أطراف الماصة لإنشاء جروح الخلايا يدويا8. على الرغم من أن مثل هذه الطريقة يمكن أن تشكل جروح الخلايا بسرعة وسهولة ، إلا أنها لا تزال تحتوي على العديد من القيود التي تؤثر على قابلية التكاثر والدقة لتقييم هجرة الخلايا. أولا ، يتأثر استخدام أطراف الماصة لإنشاء خدوش يدويا بشكل كبير بزاوية تشغيل المشغل وقوته وسرعته ، مما يؤثر على قابلية تكرار الطريقة8. ثانيا ، عادة ما يكون لعيوب الخلايا الناتجة عن الطرف حواف خشنة بدلا من حواف مستقيمة لأن أطراف الماصة هي منتجات بلاستيكية ذات مرونة معينة9. تولد بعض الدراسات الجروح عن طريق وضع إدخالات مستنبتة مسبقة الصنع مباشرة في لوحة زراعة الخلايا لتقييد نطاق تكاثر الخلايا10. يتحايل هذا النهج على قيود الطريقة القائمة على النصائح ، مثل الحواف الخشنة وقابلية التكاثر. ومع ذلك ، حتى مع المواد المتوافقة حيويا ، فإن التعايش طويل الأمد للتضمين مع الخلايا لا يزال يؤثر على نمو الخلايا11. علاوة على ذلك ، قد يتسبب التضمين أيضا في حدوث تغيرات جينية خلوية في المنطقة الهامشية بسبب تقييد الاتصال12. كما أن إدراج التلامس المنتج من مواد متوافقة حيويا باهظ الثمن ويصعب إعادة استخدامه ، مما يحد من جدواها13. لذلك ، هناك حاجة إلى أداة جديدة وقابلة للتكرار وعملية لتحديد الهجرة الخلوية في المختبر بسهولة.

الهدف الأساسي من هذه الطريقة هو تقديم أداة مبتكرة لتحديد الهجرة الخلوية في المختبر في دراسات الأورام ، ومعالجة قيود التقنيات الحالية وتعزيز قابلية التكاثر والدقة في تقييم الهجرة الخلوية.

يكمن الأساس المنطقي وراء تطوير هذه التقنية في الأهمية الحاسمة لتقييم هجرة الخلايا السرطانية في علم الأورام. تظهر الأورام سمات مميزة ، بما في ذلك مزايا النمو الانتقائي ، وإعادة الأسلاك الأيضية ، والتعديل المناعي ، وكلها تساهم في تعزيز هجرة الخلايا ، وهو جانب أساسي من الأورام الخبيثة السرطانية. تهدف هذه الطريقة إلى توفير وسيلة أكثر موثوقية لدراسة الهجرة الخلوية ، مما يساهم في فهم أعمق لسلوك الورم.

تقدم هذه الطريقة مزايا كبيرة على التقنيات الحالية. يمكن أن تعاني فحوصات الخدش اليدوية من التداخل المعتمد على المشغل ، بينما قد تؤثر إدخالات الثقافة على نمو الخلايا والتعبير الجيني. في المقابل ، توفر هذه الطريقة قابلية محسنة للتكرار والدقة والتطبيق العملي ، مما يوفر حلا فعالا من حيث التكلفة لقياس الهجرة الخلوية في المختبر في أبحاث الأورام. إنه يلبي حاجة ماسة إلى أداة موثوقة ويمكن الوصول إليها لدراسة هجرة الخلايا في أنواع مختلفة من السرطان ، مما يجعلها إضافة قيمة إلى هذا المجال.

البروتوكول

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,

وقدم جميع المشاركين موافقة خطية مستنيرة كاملة. لم تكن الموافقة الأخلاقية قابلة للتطبيق لأنه لم يتم تضمين عينات من أو الأنسجة البشرية في هذه الدراسة.

1. التحقيق في متطلبات مجتمع المستخدمين

  1. تسليم الاستبيانات إلى علماء الأحياء / المجرب الذي يعمل على مقايسات التئام الجروح الخلوية. جمع الاستبيانات المكتملة واستخدامها للدراسة. لهذه الدراسة ، من 12 أكتوبر 2021 إلى 3 فبراير 2022 ، تم تسليم 100 استبيان إلى 100 عالم أحياء. كانت نسبة الاستجابة 97٪.
  2. اطلب من المستجيبين الإجابة على أسئلة مثل ، أي من تجارب خدش الخلايا أزعجتك أكثر؟ وما الأداة التي تم استخدامها لإجراء خدش الخلية؟ اتبع هذه الأسئلة بأسئلة فرعية لتتبع الأسباب.
  3. تحقق من تصورات التجريبيين لأدوات مثل أطراف الماصة وإدراج زراعة الخلايا في تجارب التئام الجروح الخلوية. فهم وجمع أسبابهم لاختيار أداة على أخرى ، باستخدام نظرية سلسلة نهاية الوسائل القائمة على تقنيات التدرج في قسم الاستبيانات14،15.
    ملاحظة: تنقسم طريقة السلم إلى نوعين: طريقة السلم الناعم مع المقابلات المتعمقة وطريقة السلم الصلب مع الاستبيانات أو اختبارات الورق والقلمالرصاص 16. كانت طريقة السلم الصلب هي التقنية الأساسية المستخدمة في هذه الدراسة. تشير نظرية سلسلة الوسائل والنهاية إلى أن المعرفة الصريحة التي يحتفظ بها المستخدمون المستهدفون سطحية وملموسة ، في حين أن المعرفة الضمنية عميقة ومجردة17،18،19.

2. التصميم والنمذجة ثلاثية الأبعاد

  1. ارسم رسما تخطيطيا من الأفكار التي تم جمعها من مسح الاستبيان السابق وابدأ عملية التصميم. استخدم هذا الرسم الأولي كمخطط أساسي.
    1. قم بتوضيح أبعاد وتخطيط كل مكون من خلال تطبيق وظائف DimRadius و DimRadius و DimDiameter في برنامج النمذجة.
    2. قم بإجراء قياسات بواسطة الفرجار الورني بدقة 0.02 مم على ألواح 6 آبار فعلية للتأكد من الأبعاد النهائية لمكشطة الخلية. تأكد من أن طولها 42.1 مم وعرضها 42.1 مم وارتفاعها 18.5 مم. انتبه إلى التفاصيل في مرحلة التصميم ، وخاصة ارتفاع المنتج واللياقة البدنية في البئر ، لتسهيل تجميع أكثر سلاسة.
  2. بناء نموذج ثلاثي الأبعاد وتقديمه.
    1. ابدأ تصميم 3D في برنامج عن طريق إنشاء نموذج أساسي. انقر فوق أزرار مثل ExtrudeCrv للتمدد و Loft لتشكيل التصميم. قم بتحسين النموذج ثم انقر FilletEdge للحصول على حواف ناعمة.
      ملاحظة: تشمل أزرار الوظائف الأخرى المستخدمة ، الخطوط - لرسم مقاطع خط مستقيم ، خطوط متعددة - لإنشاء خطوط متصلة تتكون من مقاطع متعددة ، المستطيلات - لرسم أشكال مستطيلة ، الدوائر - لرسم أشكال دائرية ، الأقواس - لرسم أشكال قوسية أو بيضاوية الشكل ، النقاط - لوضع علامات نقطة واحدة ، النص - لإضافة تسميات نصية ، الأبعاد - لإضافة أبعاد مقاسة إلى النماذج ، صفيف - لإنشاء أنماط منسوخة من الكائنات ، تدوير - لتدوير الكائنات إلى الزوايا المطلوبة ، نقل - لنقل الكائنات إلى مواقع جديدة ، مقياس - لتغيير حجم الكائنات أكبر أو أصغر ، تقليم / تمديد - لقص أو توسيع الكائنات لتلبية هندسة أخرى ، الاتحاد المنطقي / الاختلاف / التقاطع - لدمج الكائنات أو طرحها أو إيجاد تقاطعها ، الطبقات - لتنظيم الكائنات على طبقات مختلفة ، عرض - لإنشاء طرق عرض معروضة باستخدام المواد والإضاءة والتصدير - لتصدير هندسة النموذج إلى تنسيقات ملفات أخرى.
    2. استيراد النموذج إلى برنامج تقديم 3D. قم بتطبيق المواد بما في ذلك البلاستيك والإسفنج والفولاذ ، ثم اضبط الإضاءة للحصول على عرض واقعي.
      ملاحظة: تتضمن قائمة أزرار الوظائف المعممة ، السحب والإفلات - لتطبيق المواد مباشرة على الأجزاء أو النماذج عن طريق سحب مادة من المكتبة وإفلاتها في المكون المطلوب في العرض في الوقت الفعلي ، انقر بزر الماوس الأيمن - عند النقر بزر الماوس الأيمن فوق مادة في المكتبة ، سترى عادة خيارات من أجل: تطبيق على التحديد - قم بتطبيق المادة على جزء محدد في العرض في الوقت الفعلي. تحرير المواد - ضبط خصائص المواد. خصائص المواد (بعد اختيار مادة) - للوصول إلى خصائص محددة للمادة وتعديلها ، مثل اللون والخشونة ومعامل الانكسار والسمات الأخرى. شريط البحث - للعثور بسرعة على مادة في المكتبة عن طريق كتابة اسمها أو الكلمات الرئيسية المرتبطة بها. الفئات / المجلدات - للتنقل عبر فئات أو مجلدات مختلفة من المواد مثل المعادن والبلاستيك والزجاج وما إلى ذلك. إضافة إلى المفضلة - لوضع علامة على مواد معينة كمفضلة لسهولة الوصول إليها خلال الجلسات المستقبلية. مفاتيح الاختصار - يمكن الوصول إلى بعض العمليات عبر مفاتيح الاختصار. على سبيل المثال ، عادة ما يكون M هو مفتاح الاختصار لإظهار خصائص المواد لجزء محدد بسرعة.
    3. أخيرا ، قم بتحسين تباين الصورة (+56) والتشبع (Vibrance +19 ، Saturation +7) في برامج الصور والتصميم ، وأضف عناصر الخلفية (معلومات النص واللون من الأبيض إلى خلفية التدرج الرمادي الفاتح) للسياق لضمان تمثيل منتج واقعي عالي الجودة.
      1. استخدم تعديلات > الصورة ، السطوع / التباين لضبط تباين الصورة. استخدم صبغة الصورة >/التشبع لتعديل مستوى تشبع الصورة. استخدم أداة النص (أيقونة T) لإضافة معلومات نصية إلى الصورة .
        ملاحظة: تتضمن قائمة أزرار الوظائف المعممة أداة القطع الناقص (U) - لرسم النقاط / الدوائر. قم بتعيين الأداة لرسم شكل، واختر لون التعبئة الذي تريده، ثم انقر واسحب (اضغط باستمرار على مفتاح العالي للحفاظ على دائرة مثالية) لإنشاء نقطة. أداة الخط (U) - لرسم خطوط مستقيمة على الصورة. حدد الأداة، واضبط عرض الخط المطلوب، ثم انقر واسحب لرسم خط. أداة الفرشاة (B) - طريقة بديلة لرسم النقاط والخطوط. حدد حجم الفرشاة وشكلها، ثم انقر (للنقاط) أو انقر واسحب (للخطوط).
  3. بعد الانتهاء من النموذج ثلاثي الأبعاد ، تابع إنتاج مكشطة الخلية عبر طريقة الطحن والتجميع20،21،22.

3. الإنتاج

  1. توظيف نظرية اللون والمواد والتشطيب (CMF) في الدراسة الحالية لتصميم النماذج الأولية لمكشطة الخلية. تعمل نظرية CMF كمنهجية تصميم في البحث العلمي. إنه يعزز قابلية استخدام المنتج ، ويشكل تصور المستخدم ، ويوجه اختيار المواد23،24،25.
    1. حدد الألوان المراد استخدامها في مكشطة الخلايا من نظام الألوان القياسي ، بما في ذلك Black 6 C و Cool Gray 6 C و 11-0601TPG26,27.
    2. لبناء مكشطة الخلايا التي تلبي معايير المختبر ، اختر المواد المناسبة بما في ذلك البولي بروبلين (PP) والإسفنج والفولاذ عالي الكربون. لتصنيع النماذج المادية ، ابدأ باستخدام طابعة 3D لإنتاج الإطار الهيكلي. بعد ذلك ، استخدم الموصلات أو العوامل اللاصقة لإكمال تجميع الكاشطة.
      ملاحظة: لتحضير المنتج المادي لمكشطة الخلية ، قم بطحن وتجميع المواد اللازمة. يجب اتباع بروتوكولات السلامة طوال العملية بأكملها لضمان منتج نهائي آمن وفعال.
    3. انتقل إلى عملية التشطيب ، والتي قد تتضمن القطع أو الطحن أو التلميع أو الختم أو غيرها من التقنيات. ابدأ بصنفرة النموذج باستخدام ورق صنفرة متوسط الحبيبات و 120 حبيبة رملية لإزالة أي حواف خشنة.
    4. اتبع ذلك بورق صنفرة ناعم الحبيبات 220 حبيبة رملية لتحقيق سطح أملس.
    5. بعد الصنفرة لتنعيم الأسطح ، مما يضمن مطابقة الموصلات الإضافية أو المدمجة بشكل صحيح.
    6. قم بربط الشريحة I و II بأمان باستخدام الموصلات (القضبان الثابتة) لضمان تجميع قوي ودائم لمكشطة الخلايا. حقق الشكل النهائي الثابت لمكشطة الخلية من خلال مزيج من التثبيت الميكانيكي والترابط اللاصق. استخدم السحابات ، وتحديدا هيكل نقر و tenon ، لتأمين الأجزاء معا من خلال القوة الميكانيكية. بالإضافة إلى ذلك ، لتعزيز قوة التجميع ، ضع مادة لاصقة (غراء) لربط المكونات بشكل أكبر.
    7. الأوتوكلاف مكشطة على حرارة 121.3 درجة مئوية لمدة 30 دقيقة لضمان احتفاظها بشكلها الأصلي وخصائصها الفيزيائية.

4. ثقافة الخلية

  1. تنمو خلايا HOS في الحد الأدنى من الوسط الأساسي المكمل بمصل بقري جنيني بنسبة 10٪ (FBS) و 1٪ بنسلين ستربتومايسين. استزراعهم عند 37 درجة مئوية مع 5٪ CO2.
  2. تغيير وسط الثقافة كل 2 أيام.
  3. عندما يتجاوز نمو الخلايا التقاء 80٪ ، أضف 1 مل من التربسين مع 0.25٪ EDTA واهضمه لمدة 60 ثانية. بعد ذلك ، قم بطرد الخلايا عند 300 × جم لمدة 5 دقائق للزراعة الفرعية. إزالة الطافات وإضافة وسط الاستزراع للحصول على تركيز نهائي من 5 × 104 خلايا لكل بئر. استخدم عداد خلايا آلي لحساب عدد الخلايا.

5. تقييم إمكانات جرح الخلية لمكشطة الخلية والطريقة القائمة على النصائح

  1. تحضير جميع المواد للجرح وتعقيمها بالأشعة فوق البنفسجية عن طريق تعريضها لمدة 30 دقيقة.
  2. بعد التعقيم ، قم بجرح خلايا HOS المتقاربة بنسبة 100٪ في ألواح ذات 6 آبار بتركيز 5 × 104 خلايا لكل بئر باستخدام طريقة مكشطة الخلايا أو الطريقة القائمة على النصائح.
    1. بالنسبة للطريقة القائمة على الطرف ، استخدم طرفا بحجم 100 ميكرولتر واسحبه عبر الخلية التي تحتوي على وسيط بضربة واحدة في الاتجاه الأفقي والآخر في الاتجاه الرأسي.
    2. بالنسبة لطريقة مكشطة الخلايا ، ضع النموذج الأولي للمكشطة في أحد الآبار وبمساعدة الملقط اضغط برفق مرة واحدة. الخلايا مصابة. نفذ كل تجربة جرح في ثلاث نسخ.
  3. تحليل جميع جروح الخلايا باستخدام نظام المجهر الرقمي وبرامج التصوير.

6. قياس صلاحية الخلية وتكاثر الخلايا

  1. قم بإجراء جميع فحوصات صلاحية الخلية باتباع البروتوكول المقدم في مجموعة CCK-8.
  2. احتضان الخلايا بمحلول CCK-8 لمدة 2 ساعة عند 37 درجة مئوية ، ثم قم بقياس امتصاصها عند 450 نانومتر باستخدام قارئ صفيحة دقيقة لتحديد صلاحية الخلية.
  3. صمم مقايسة دمج 5-ethynyl-20-deoxyuridine (EdU) لتحديد تكرار الحمض النووي بدقة وتحديد نسبة تكاثر الخلايا مباشرة. تحديد تأثير الطرق المختلفة لتوليد جروح الخلايا على تكاثر الخلايا باستخدام مقايسة EdU ، باتباع البروتوكول الموضح في المنشور السابق28.
  4. قم بتلطيخ الخلايا وتصويرها باستخدام نظام المجهر الرقمي. تأكد من إجراء كل تجربة في ثلاث نسخ.

النتائج

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,

تشريح مطالب المستخدم للحصول على أدوات لتوليد جروح الخلايا
تتطلب الطريقة التجريبية الحالية لتوليد جروح الخلايا مزيدا من التحسين لمعالجة العديد من المشكلات التي تعرض للخطر التكاثر البيولوجي والمتانة والاستهلاك الاقتصادي وتجربة المستخدم لمقايسة التئام الجروح الخلوية. استخدمنا طريقة السلم الصلب لتحليل متطلبات المستخدمين المشاركين في التجارب البيولوجية عبر الاستبيانات29 (الشكل 1 أ). كانت المعلومات الواردة في الاستبيان ، مثل الأسماء ، مجهولة المصدر لحماية خصوصيتهم. وترد تفاصيل الاستبيان في الجدول 1. وخلال 6 أسابيع من الدراسة الاستقصائية ل 100 فرد، ورد 97 استبيانا مكتملا بالكامل، واستبعدت 3 استبيانات مشبوهة وغير صحيحة؛ كان معدل الاستجابة 97.00٪.

تظهر النتائج أن المشاكل الأكثر إثارة للقلق في مقايسة التئام الجروح الخلوية كانت الحافة المسننة (غير المستقيمة) والعرض غير المستقر أو مناطق الجروح ، وهو ما يمثل 55.67٪ و 29.90٪ على التوالي. كانت هذه أعلى بكثير من تلك الخاصة بمعدل نمو الخلايا المنخفض وتلوث الخلايا وخيارات أخرى بنسبة 3.09٪ و 5.15٪ و 6.19٪ على التوالي (p < 0.001 ، الشكل 1B). فيما يتعلق باختيار الأدوات لإنشاء الجروح ، كان استخدام أطراف الماصة أكثر انتشارا من إدراج ثقافة الخلية (الشكل 1C). ويعزى ذلك بشكل أساسي إلى حقيقة أن إدخالات زراعة الخلايا باهظة الثمن وغير قابلة لإعادة الاستخدام (الشكل 1 د) ، في حين أن أطراف الماصة رخيصة ، وتظهر قابلية التكاثر التجريبي (6.59٪) وقابلية بقاء الخلية (20.88٪ ، الشكل 1E). الأهم من ذلك ، جادل ما يصل إلى 69.23٪ من المستخدمين بأن سعر إدراج زراعة الخلايا كان أعلى من ميزانيتهم (الشكل 1 د). في المقابل ، اختار 6 أشخاص فقط إدراج زراعة الخلايا ، حيث اعتقد 16.67٪ فقط أن سعرهم مقبول (الشكل 1F). أخيرا ، بالنسبة للأداة المبتكرة لتوليد جروح الخلايا ، كان 86.60٪ منهم متفائلين ، في حين أن عددا أقل فقط من المستخدمين كانوا غير راغبين (4.12٪ ، الشكل 1G).

بعد ذلك ، تم تشريح ميزات المنتج التي يحتاجها المستخدمون بشكل عاجل30،31،32. وشملت هذه الميزات الجروح المستقيمة ، والعرض المستقر ومنطقة الجروح ، والتكاثر العالي ، والسعر المقبول. وفقا لذلك ، تم تنفيذ أنشطة التصميم اللاحقة.

قرار تصميم العناصر والمواد المستخدمة في تطوير مكشطة الخلايا
تظهر البيانات الواردة أعلاه أن الإمدادات المختبرية المنفذة في البحوث البيولوجية الروتينية يجب أن تكون معقمة تماما لتجنب تلوث الخلايا33. لذلك ، يجب أن تكون مكشطة الخلية المقترحة معقمة. على الرغم من أنه يمكن تعقيم الأدوات التي تستخدم لمرة واحدة بواسطة أكسيد الإيثيلين ، إلا أن التكلفة التجريبية ستزيد حتما34،35،36. لذلك ، بدلا من المواد التي تستخدم لمرة واحدة ، نقترح تصميم مكشطة الخلايا بمادة قابلة لإعادة الاستخدام مع تحمل كبير للتعقيم بالبخار عالي الضغط (121.3 درجة مئوية) ، لتقليل التكلفة وزيادة المرونة عند تطبيقها في حالات مختلفة37. لتلبية هذه المتطلبات ، يجب أن تحتوي المواد المستخدمة في بناء مكشطة الخلية على ميزات فيزيائية وكيميائية معينة ، بما في ذلك مقاومة الحرارة والضغط العالي وتآكل بخار الماء.

للاستخدام المقصود لمكشطة الخلايا ، بالإضافة إلى تلبية الوظائف الأساسية مثل صنع الجروح المستقيمة على الحافة ، يجب أن يكون لها أيضا تصميم ولون جذاب. من حيث النمذجة ، مع الأخذ في الاعتبار المجالات المستهدفة والتطبيق ، يجب أن يكون النمط العام مناسبا للمختبرات. لا ينبغي أن يكون المظهر متفاخرا جدا لإعاقة الموظفين من مراقبة التقدم التجريبي. علاوة على ذلك ، يجب أن يكون حجمها مناسبا لألواح الآبار الستة ، ويجب أن يكون للسطح نتوء للملاقط لالتقاطه بثبات.

CMF في التصميم هو جانب حاسم من تصميم المنتج الذي يؤثر على الجماليات وتجربة المستخدم. يؤثر اختيار اللون على الاستجابة العاطفية ، ويؤثر اختيار المواد على الوظائف والاستدامة ، وتحدد النهاية الشعور باللمس والجاذبية البصرية. يقوم مصممو CMF بتنسيق هذه العناصر ، مع مراعاة اتجاهات السوق وهوية العلامة التجارية ، لإنشاء منتجات يتردد صداها مع المستخدمين.

وفقا لنظرية CMF ، تم النظر في ثلاثة عوامل حاسمة ، بما في ذلك اللون والمواد وعملية التشطيب ، لتحديد تأثيراتها على الوظيفة والتأثير البصري24. تم إجراء اختيار اللون أولا. في هذا السياق ، يشير اللون إلى اللون الجوهري ، وهو اللون المتأصل لكائن أو مادة في ظل ظروف الإضاءة القياسية ، ويخلو من تأثير مصادر الضوء الخارجية أو الانعكاسات. بالنظر إلى أن اللوحة المكونة من ستة آبار مصنوعة من PP بسطح شفاف ، فقد تم اختيار اللون الرمادي الداكن كلون جوهري. تم إجراء هذا الاختيار لسهولة التعرف والتشغيل ، حيث يوفر اللون الرمادي الداكن تباينا ورؤية مثاليين عند تراكبه بألوان أخرى. إلى جانب ذلك ، من غير المرجح أن يتسبب اللون الرمادي الداكن في تشويه اللون عند دمجه مع ألوان أخرى ، وهو أمر بالغ الأهمية أيضا للمراقبة. تم تمييز المكونات الوظيفية الأساسية باللون الأسود (الشكل 2 أ).

تم اختيار نظام مطابقة الألوان التجاري كمعيار لاختيار الألوان نظرا لقبوله واستخدامه على نطاق واسع في مختلف الصناعات. بالاعتماد على قدرة الشركة على إعادة إنتاج ألوان متسقة عبر وسائط مختلفة ، تم اختيارها للدراسة لأن هذا أمر بالغ الأهمية لضمان تمثيل دقيق ومتسق للألوان.

تم اختيار المواد بناء على نتائج الاستبيانات المذكورة أعلاه. تم تصنيع غلاف ومكونات الكاشطة من البلاستيك المقاوم للحرارة ، البولي بروبلين (PP) ، لتلبية متطلبات التعقيم عن طريق التعقيم كمثال موضح في الشكل 2B. الفولاذ عالي الكربون مناسب للنوابض ، لأنه مستقر ضد بيئات المختبرات ذات درجات الحرارة العالية والمنخفضة والمقاومة للتآكل. تم استخدام الإسفنج عالي الكثافة للتخزين المؤقت ووضعه في نهاية الشريحة.

أخيرا ، تم تطوير عملية التشطيب. نظرا لأن مكشطة الخلايا تستخدم بشكل متكرر وسهلة التلوث وتؤثر جودة السطح على التعقيم ، يفضل وجود سطح أملس ولامع لمكشطة الخلايا لأنها تساعد المستخدم على تحديد مصدر التلوث بسرعة والتعامل معه ، مما يعطي إحساسا بالنظافة. يتم صنفرة الأطراف جزئيا لتجنب تلف قاع طبق الاستزراع ، مما قد يؤثر على بيئة الاستزراع ويؤدي إلى تقييد تكاثر الخلايا38.

تصميم ونموذج مكشطة الخلية
تم تصميم ثلاثة نماذج أولية من مكشطة الخلايا بناء على النتائج المذكورة أعلاه (الشكل 3 أ). تشير الدراسات إلى أن جروح الخلايا الأكثر استخداما داخل لوحات زراعة الخلايا كانت متقاطعة الشكل39 ، وهو ما يختلف تماما عن النموذج الأولي الأول الذي استخدم جروحا مستطيلة. وبالتالي تم التنازل عن النموذج الأولي (الشكل 3 أ). على الرغم من أن النموذجين الأوليين الثاني والثالث يمكنهما إنشاء مناطق خالية من الخلايا على شكل متقاطع ، إلا أنه كان من الصعب إصلاح سكة الانزلاق للنموذج الأولي الثاني في أقراص زراعة الخلايا وكانت بنيتها التحتية معقدة إلى حد ما (الشكل 3 أ). بعد مناقشات حكيمة ، تم تمييز النموذج الأولي الثالث كنموذج نهائي لإنتاج مكشطة خلوية.

والجدير بالذكر أنه بالنظر إلى أن شكل الأطراف يمكن أن يؤثر بشكل مباشر على المنطقة الخالية من الخلايا من حيث الحواف والأحجام ، فقد تم تصميم ثلاثة رسومات للاختيار. الرسم كان لدي قمة حادة ، والتي يمكن أن توفر حواف مستقيمة للغاية. ومع ذلك ، قد تضعف واجهة الثقافة التي تسمح بتكاثر الخلايا إذا كانت الأطراف حادة جدا (الشكل 3 ب). قدم الرسم الثاني قمة مربعة ، والتي قد تتجنب ضعف لوحات زراعة الخلايا. ومع ذلك ، نظرا لأن سطح التلامس بين طرف وأسفل لوحة الاستزراع مربع ، فإنه غير مستقر عند استخدامه (الشكل 3 ب). قدم الرسم الثالث طرفا مستديرا حادا ، وتجنب بشكل فعال المشاكل المذكورة أعلاه (الشكل 3C). لذلك ، تم اختياره كتصميم نهائي.

تم تحسين التصميم في ثلاثة جوانب: طريقة تثبيت المثبت ، وإسفنجة الوسادة المدمجة ، وسهولة الإمساك ، على التوالي. أولا ، تضمنت طرق تثبيت المنتج المتوقعة التواء40 ، نقر وtenon 41 ، والتمحور42. بالنظر إلى تكلفة الإنتاج الفعلية وقابلية التشغيل ، تم تصميم مخلب تحت المثبت المتقاطع لتسهيل تثبيت حافة البئر. بالإضافة إلى ذلك ، في اختبار شفاء خدش الخلية ، لاحظنا أن الأطراف ارتدت مرة أخرى بعد لمس الحائط بالقرب من النهاية بسبب الطول الثابت وصلابة الشرائح ، مما أثر على حالة الخدش. لذلك ، أضفنا إسفنجة توسيد إلى نهاية الشريحة لتثبيت حركة الأطراف. (الشكل 3 أ ، ج). أخيرا ، تمت إضافة انخفاض سطحي إلى النتوء لتسهيل الإمساك بالملقط.

تم بناء نموذج ثلاثي الأبعاد باستخدام برنامج تصميم 3D. يظهر عرضه في الشكل 4 أ. توضح المؤامرة المتفجرة الهياكل الداخلية التفصيلية لمكشطة الخلية ، والتي توضح خصائصها الضرورية التي نوقشت أعلاه (الشكل 4 ب). بالإضافة إلى ذلك ، لتحقيق هدف الانزلاق السلس للأطراف والحواف المستقيمة ، تم اعتماد هيكل نقل الطاقة الميكانيكية الداخلي. تتكون الوحدة الوظيفية الكاملة لمكشطة الخلية من جزء التحكم. في العمل الفعلي ، يتم توصيل ذراع الربط داخل مكشطة الخلية بالزر العلوي ، وتتحرك النهاية لأسفل بعد الضغط لجعل مشبك النهاية. يتم تحرير الزنبرك داخل الشريحة لدفع النصائح للتحرك. أخيرا ، يتوقف عند الإسفنجة ذات الشق الضيق لإنهاء الكشط ثم يغير الضبط عند استخدامه مرة أخرى (الشكل 5 أ). علاوة على ذلك ، فإن سهولة التعلم والتشغيل المريح هي معايير عالم الأحياء لقياس جودة المنتج. لذلك ، بالنسبة لتصميم مظهر المنتج ، اتبع تخطيط السطح مبدأ التماثل والدقة43,44 ، وتمييز وإبراز المكونات المختلفة من خلال ظلال مختلفة من الألوان الأسود والأبيض والرمادي (الشكل 5 أ).

مكشطة الخلايا تتفوق على طريقة خدش النصائح في الاستخدام العملي
تم تحضير المنتج المادي لمكشطة الخلية باستخدام طريقة الطحن والتجميع (الشكل 5 ب). كما هو متوقع ، تم دمج مكشطة الخلايا بشكل ممتاز مع اللوحة ذات الستة آبار ، مع تركيب الحامل العلوي المتقاطع بشكل وثيق مع حافة اللوحة ، مما يوفر تثبيتا قويا (الشكل 5C). علاوة على ذلك ، تم تركيب الأطراف بدقة في الجزء السفلي من لوحة الآبار الستة ، مما يسهل التوليد السلس للمناطق الخالية من الخلايا. أخيرا ، تم تعقيم مكشطة الخلايا لاختبار ما إذا كان يمكن إعادة استخدامها. كما هو موضح في الشكل 5D ، حافظت مكشطة الخلية الحالية على الشكل الأصلي والأداء البدني حتى بعد التعقيم تحت 121.3 درجة مئوية لمدة 30 دقيقة.

تفوقت مكشطة الخلايا على طريقة إنشاء جرح الخلية الحالية في الاختبار المعياري. بعد الاختبارات المتكررة ، أظهر خدش الخلية ثباتا عاليا وقابلية للتكاثر في تحضير الجرح ، وقدم تقلبا منخفضا في منطقة كل جرح وحواف مستقيمة تقريبا ، مع انحراف معياري للمنطقة الخالية من الخلايا يبلغ 483.73 وانحرافا إلى الحافة المستقيمة 5041.33 ± 2420.00. في المقابل ، أظهرت مساحة كل جرح أعدته أطراف الماصة تقلبا أعلى ، مع انحراف معياري للمنطقة الخالية من الخلايا يبلغ 3905.80 وانحراف إلى الحافة المستقيمة 19562.33 ± 1068.39 (الشكل 6A-C).

أخيرا ، تم تقييم التأثير على صلاحية الخلية بعد جروح الخلية (الشكل 6 د). أظهرت النتائج أنه بعد 12 ساعة من اكتمال جرح الخلية ، كانت صلاحية الخلية أعلى قليلا ولكن بشكل ملحوظ في مجموعة مكشطة الخلايا مقارنة بمجموعة الأطراف. تم إجراء اختبار EdU لتأكيد هذه النتائج بشكل أكبر وتوضيح تأثير طرق تحضير جرح الخلايا المختلفة على تكاثر الخلايا ، أي تكرار الحمض النووي. أظهرت نتائج فحص EdU أن النسبة المئوية للخلايا المتكاثرة في مجموعة مكشطة الخلايا (24.41٪ ± 0.48) كانت أعلى بكثير من تلك الموجودة في طريقة النصائح (18.79٪ ± 1.46) بعد 12 ساعة (الشكل 6E ، F).

تشهد هذه البيانات بقوة على أن مولد جرح الخلية الحالي تفوق على الطريقة الحالية لإنشاء جروح الخلايا من حيث الاستقرار والتكاثر البيولوجي. كان له تأثير منخفض على بقاء الخلية وانتشارها. أكدت كل هذه المزايا الرائعة لمولد جرح الخلية قدرته على تحسين فحوصات جرح الخلية الحالية من خلال ضمان موثوقية وتكرار البيانات الناتجة.

figure-results-1
الشكل 1: تحليلات طلبات المستخدم. (أ) يعرض مخطط سانكي سير عمل التحقيق القائم على الاستبيانات للمجربين. (ب) إلى (ز) عرض نتائج الاستبيانات، بما في ذلك الأسئلة من 1 إلى 6. يرجى النقر هنا لعرض نسخة أكبر من هذا الرقم.

figure-results-2
الشكل 2: تصميم المنتج مع الألوان والمواد المستخدمة. أ: اختيار الألوان. ب: الأوتوكلاف المستخدم في التجارب البيولوجية. يرجى النقر هنا لعرض نسخة أكبر من هذا الرقم.

figure-results-3
الشكل 3: تصميم المنتج للهياكل التفصيلية. أ: ثلاثة نماذج أولية مرشحة للمكشطة الخلوية. (ب) ثلاثة مخططات لتصميم الأطراف. (ج) رسم ثلاثي المناظر للنموذج الأولي الثالث المختار يعرض تصميمه العام والبارامترات المادية والمكانية. يرجى النقر هنا لعرض نسخة أكبر من هذا الرقم.

figure-results-4
الشكل 4: عرض نموذج ثلاثي الأبعاد والهياكل الداخلية. (أ) تقديم نموذج ثلاثي الأبعاد. (ب) مخطط متفجر يوضح الهياكل الداخلية لمكشطة الخلايا المقترحة. يرجى النقر هنا لعرض نسخة أكبر من هذا الرقم.

figure-results-5
الشكل 5: آليات عمل مكشطة الخلايا. (أ) يوضح الشكلان كيفية عمل مكشطة الخلايا. ب: الناتج المادي للمكشطة الخلوية. (ج) تلائم مكشطة الخلايا صفيحة ذات 6 آبار. يرجى النقر هنا لعرض نسخة أكبر من هذا الرقم.

figure-results-6
الشكل 6: التحقق التجريبي من مكشطة الخلايا. (أ) الجروح الخلوية الناتجة عن طرق مختلفة ونتائج مقارنتها المجمعة موضحة في (ب) و (ج) ، شريط المقياس هو 100 ميكرومتر. (د) نتائج صلاحية الخلية. (E) و (F) نتائج مقايسة Edu ، شريط المقياس هو 50 ميكرومتر. بالنسبة للتقييم الإحصائي ، تم إجراء اختبار t للمقارنة المجمعة ، وتم تعديل القيمة p الأصلية بواسطة اختبار Holm-Bonferroni لتجنب النتائج الإيجابية الخاطئة. يرجى النقر هنا لعرض نسخة أكبر من هذا الرقم.

ط) أي مما يلي هو المشكلة الأكثر إثارة للقلق بالنسبة لك في تجربة خدش الخلية؟
أ) لا حواف مستقيمة
ب) عرض غير مستقر
جيم - الانتشار البطيء
د) تلوث الخلايا
ه) أخرى
II) ما هي الأدوات التي تستخدمها لتوليد جروح الخلايا
أ) أطراف الماصة (انتقل إلى السؤال الثالث)
ب) إدراج ثقافة الخلية (انتقل إلى السؤال IV-V)
III) لماذا لا تختار إدراج ثقافة الخلية؟
أ) صلاحية الخلية
ب) غير قابلة لإعادة الاستخدام
ج) التكلفة
د) أخرى
IV) لماذا اخترت إدراج ثقافة الخلية؟
أ) التكلفة
ب) التكرار
ج) أخرى
V) ما هي برأيك أخطر المشاكل مع إدراج زراعة الخلايا؟
أ) حالة الخلية
ب) غير قابلة لإعادة الاستخدام
ج) باهظة الثمن
د) أخرى
ه) راض
سادسا) إذا كانت هناك أداة خدش غير مكلفة وقابلة لإعادة الاستخدام (قابلة للتعقيم بالأوتوكل) وقابلة للتكرار بدرجة كبيرة ، فما مدى استعدادك لشرائها واستخدامها؟
أ) راغب جدا
ب) راغب
ج) غير متأكد
د) غير راغب

الجدول 1: يتضمن الاستبيان المستخدم في هذه الدراسة ستة أسئلة تهدف إلى فهم المواقف التي يواجهها علماء الأحياء أثناء فحوصات التئام الجروح الخلوية.

المناقشة

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,

تهدف الدراسة الحالية إلى تطوير أداة ميكانيكية أوتوماتيكية لمقايسة التئام الجروح الخلوية. على حد علمنا ، فإنه يمثل المحاولة الأولى لتطبيق بنية مدفوعة ميكانيكية لإنشاء جروح الخلايا بنقرة واحدة تلقائيا. من خلال هذا ، نهدف إلى معالجة أوجه القصور في الطريقة التقليدية القائمة على النصائح ، مثل قابلية التكاثر المنخفضة وحالة الخدش غير المستقرة. بالاستفادة من النتائج الإيجابية وردود الفعل المشجعة من مجتمع المستخدمين ، من المتوقع أن توفر مكشطة الخلايا للمجربين بديلا فعالا ومستقرا لإنشاء جروح الخلايا ، وبالتالي تحسين مستوى الثقة في نتائج التحليل التجريبي بشكل كبير.

لاستخدام مكشطة الخلايا الحالية ، يجب على المستخدم 1) إعداد الخلايا المعلقة لإنشاء فجوة خالية من الخلايا مماثلة للطرق التقليدية مثل الطريقة القائمة على الطرف ، أي زرع الخلايا على صفيحة من ستة آبار بكثافة معينة ؛ 2) انتظر حتى يصل معدل التقارب الخلوي إلى > 90٪ ؛ 3) ضع مكشطة الخلايا المعقمة في بئر اللوحة ، وانقر فوق الزر كما هو موضح في الشكل 5 ، وسيتم إنشاء الفجوة الخالية من الخلايا تلقائيا في غضون 1-2 ثانية.

تم استخدام مقايسة التئام الجروح الخلوية على نطاق واسع لقياس قدرة هجرة الخلايا. عادة ، يستخدم المجربون أطراف الماصة لإنشاء جروح خلوية. على سبيل المثال ، استخدم طارق وآخرون طرف ماصة لإنشاء جروح خلوية لتقييم قدرة هجرة الخلايا45; ليس من قبيل الصدفة ، استخدم رحيمي وآخرون طرف ماصة في الفحص لمراقبة القدرة المهاجرة لخلايا PC346. في فحص هجرة الخلايا المتوسطة للفأر Cormier et al. استخدم أيضا مسدس ماصة47 ؛ في إظهار تأثير الزرنيخ على هجرة خلايا الجلد ، استخدم Pinto et al. طرف ماصة للكشط الرأسي48 ، من بين أمور أخرى.

ومع ذلك ، كما ذكرنا سابقا ، فإن استخدام طرف لإنشاء جروح خلوية له العديد من المشكلات ، مثل المنطقة الخالية من الخلايا المتغيرة ، والحواف الخشنة ، والاعتماد على قوة المشغل وزاوية الخدش ، مما يؤدي إلى انخفاض قابلية التكاثر49. أثبتت النتائج الحالية للاستبيانات أيضا أن الطريقة القائمة على النصائح لها مزايا أكثر وضوحا على إدخالات زراعة الخلايا ، وتحديدا من حيث السعر ومعدل بقاء الخلية وإمكانية إعادة استخدام الأداة. بدلا من ذلك ، تكون إدخالات الخلايا مكلفة للغاية ويصعب إعادة استخدامها ، بينما تحتوي أي من الأداتين على عيوب. لذلك ، فإن مجتمع المستخدمين متفائل بشكل عام ومستعد لتجربة أدوات مبتكرة. صممت هذه الدراسة وطورت أداة جديدة لإعداد منطقة خالية من الخلايا لتسهيل وتثبيت تكوين جرح الخلايا.

تكمن أهم مساهمة للدراسة الحالية في التطوير والتحقق التجريبي من مكشطة الخلايا. بالمقارنة مع الدراسات السابقة ، تتضمن تحسينات مكشطة الخلايا الحالية النقاط الرئيسية الثلاث التالية. 1) تلفيق مستقر ومريح لجروح الخلايا. أظهرت هذه الدراسة أنه بالمقارنة مع الطريقة التقليدية القائمة على النصائح ، فإن جروح الخلايا المصنعة بواسطة مكشطة الخلايا الحالية لها حواف مستقيمة ويمكن أن تخلق جروحا مماثلة في التجارب المتكررة ، مما أدى إلى تحسن كبير في قابلية استنساخ وموثوقية تجارب التئام الجروح الخلوية. 2) كان لمكشطة الخلية الحالية تأثير أقل على حالة الخلية. لم يؤثر على صلاحية الخلية وانتشارها (تضخيم الحمض النووي) ، والذي كان أفضل بكثير من الطريقة القائمة على الأطراف. لذلك ، من المتوقع أن تقلل مكشطة الخلايا هذه من تأثير العوامل الخارجية على مقايسة التئام الجروح الخلوية في التجارب الروتينية. 3) مكشطة الخلايا هذه تتفق بشكل جيد مع متطلبات مجتمع المستخدمين. أظهرت نتائج مسح الاستبيان السابق أن متطلبات المستخدمين لأداة جروح الخلايا الجديدة تشمل بشكل أساسي عرض شوط موحد ، وقابلية عالية للتكرار ، وإجراءات تشغيل بسيطة ، وسعر معتدل ، والتي تم تحقيقها في مكشطة الخلية الحالية. بالإضافة إلى ذلك ، تم تصميم مكشطة الخلايا بألوان محايدة لنقل مفهوم التصميم البسيط والعملي لهذا المنتج. في الوقت نفسه ، يبرز التباين القوي بالأبيض والأسود بشكل فعال مجالاته الوظيفية. النمط العام هو شكل متقاطع يتكون من المفصل المستدير للسطح المنحني ، ويشير إلى شكل الجرح التقليدي ، ويقترح دور المنتج. يتم تقليل صعوبة العملية عن طريق تبسيط التشغيل ووظيفة إعادة الضبط اليدوي. باختصار ، تشير النتائج إلى أداة بديلة واعدة للمجربين لإعداد خدوش الخلايا بنقرة واحدة ، بطريقة آلية وقوية ، وبالتالي تحسين قابلية استنساخ النتائج العلمية.

يجب الاعتراف بقيود هذه الدراسة. يحد حجم عينة الاستبيان الذين تمت مقابلتهم من قابلية تعميم هذه الدراسة. لذلك ، سنقوم بتوسيع حجم العينة في دراسة متابعة لتحسين مكشطة الخلايا. ثانيا ، يجب تضمين خدش الخلية في دراسة جيدة التخطيط مع عدد أكبر من المستخدمين بحيث يمكن تقييم أداء مكشطة الخلايا هذه بشكل أكثر شمولا.

الإفصاحات

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,

يعلن أصحاب البلاغ أنه ليس لديهم تضارب في المصالح.

شكر وتقدير

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,

هذه الدراسة مدعومة بمنحة من المؤسسة الوطنية للعلوم الاجتماعية (22FYSB023) ، ومؤسسة أبحاث مركز هوبى للتصميم الصناعي (08hqt201412046) ، ومؤسسة العلوم الإنسانية والاجتماعية التابعة لإدارة التعليم بمقاطعة هوبى (15Y054).

المواد

قائمة المواد المستخدمة في هذه المقالة
الاسمالشركةرقم فهرسيالتعليقات
CCK-8 كيتشركة Beyotime ، الصينC0037
نظام المجهر الرقميOlympusIX81
مصل الأبقار الجنينيGibco ، الولايات المتحدة الأمريكية16000044
HOS & nbsp ؛علوم الحياة Procell و التكنولوجيا المحدودةCL-0360
Image-Pro PlusMedia Cyberneticsالإصدار 6.0
KeyShotLuxionالإصدار 11.03D البرمجيات
التقديم قارئ الألواح الدقيقةBioTek ، الألمانيةELX808
الحد الأدنى من Essential MediumGibco ، الولايات المتحدة الأمريكية11095080
نظام مطابقة PantonePantoneمطابقة الألوان التجارية
البنسلين ستربتومايسينشركة Beyotime ، الصينST488
PhotoshopAdobeللصور والتصميم
برنامج Rhinoceros 3Dروبرت ماكنيل & Associatesالإصدار 7.0برنامج تصميم ثلاثي الأبعاد
TC20 عداد الخلايا الآليBio-RadTC20
TrypsinCytiva   ؛ HyClone ، الولايات المتحدةSH30042.01

المراجع

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,
  1. Trepat, X., Chen, Z., Jacobson, K. Cell migration. Compr Physiol. 2 (4), 2369-2392 (2012).
  2. Moncharmont, C., et al. Radiation-enhanced cell migration/invasion process: a review. Crit Rev Oncol Hematol. 92 (2), 133-142 (2014).
  3. Verbeek, B. S., Adriaansen-Slot, S. S., Vroom, T. M., Beckers, T., Rijksen, G. J. F. I. Overexpression of EGFR and c-erbB2 causes enhanced cell migration in human breast cancer cells and NIH3T3 fibroblasts. FEBS Lett. 425 (1), 145-150 (1998).
  4. Vaideeswar, P., Aswani, Y., Damani, S., Singaravel, S. Pulmonary microvascular metastases in cervical carcinoma: A case series. J Postgrad Med. 66 (3), 155-158 (2020).
  5. Liang, Y., Zhang, H., Song, X., Yang, Q. Metastatic heterogeneity of breast cancer: Molecular mechanism and potential therapeutic targets. Semin Cancer Biol. 60, 14-27 (2020).
  6. Sasaki, R., Osaki, M., Okada, F. MicroRNA-based diagnosis and treatment of metastatic human osteosarcoma. Cancers (Basel). 11 (4), 553(2019).
  7. Spaeth, E., Klopp, A., Dembinski, J., Andreeff, M., Marini, F. Inflammation and tumor microenvironments: defining the migratory itinerary of mesenchymal stem cells. Gene Ther. 15 (10), 730-738 (2008).
  8. Zhang, M., Li, H., Ma, H., Qin, J. A simple microfluidic strategy for cell migration assay in an in vitro wound-healing model. Wound Repair Regen. 21 (6), 897-903 (2013).
  9. Yue, P. Y., Leung, E. P., Mak, N., Wong, R. N. A simplified method for quantifying cell migration/wound healing in 96-well plates. J Biomol Screen. 15 (4), 427-433 (2010).
  10. Roch, T., et al. Immunological evaluation of polystyrene and poly (ether imide) cell culture inserts with different roughness. Clin Hemorheol Microcirc. 52 (2-4), 375-389 (2012).
  11. Jonkman, J. E., et al. An introduction to the wound healing assay using live-cell microscopy. Cell Adh Migr. 8 (5), 440-451 (2014).
  12. Freshney, R. I. Culture of animal cells: a manual of basic technique and specialized applications. , John Wiley & Sons, Inc. (2015).
  13. Kato, T., et al. Reuse of cell culture inserts for in vitro human primary airway epithelial cell studies. Am J Respir Cell. 64 (6), 760-764 (2021).
  14. Veludo-de-Oliveira, T. M., Ikeda, A. A., Campomar, M. C. Discussing laddering application by the means-end chain theory. Qualit Rep. 11 (4), 626-642 (2006).
  15. Yang, T., Yang, F., Men, J. Recommendation content matters! Exploring the impact of the recommendation content on consumer decisions from the means-end chain perspective. Int J Info Manage. 68, 102589(2023).
  16. Sadeghlou, S., Emami, A. Residential preferences and satisfaction: a qualitative study using means-end chain theory. J Housing Built Env. 38, 1711-1734 (2023).
  17. Pieters, R., Baumgartner, H., Allen, D. A means-end chain approach to consumer goal structures. Int J Res Market. 12 (3), 227-244 (1995).
  18. Valette-Florence, P., Rapacchi, B. J. J. Improvements in means-end chain analysis: using graph theory and correspondence analysis. J Advert Res. 31, 30-45 (1991).
  19. Nunkoo, R., Ramkissoon, H. Applying the means-end chain theory and the laddering technique to the study of host attitudes to tourism. J Sustain Tourism. 17 (3), 337-355 (2009).
  20. Development of an automatic mold polishing system. Tsai, M. J., Chang, J. L., Haung, J. F. IEEE Int Conf Robot Auto, 3, 3517-3522 (2005).
  21. Altan, T., et al. Advanced techniques for die and mold manufacturing. CIRP Annals. 42 (2), 707-716 (1993).
  22. Kalt, E., Monfared, R., Jackson, M. Towards an automated polishing system: Capturing manual polishing operations. Int J Res Eng Tech. 5 (7), 182-192 (2016).
  23. Becerra, L. CMF design: the fundamental principles of colour, material and finish design. , Frame Publishers, UK. (2016).
  24. Pan, C., et al. Next-generation immuno-oncology agents: current momentum shifts in cancer immunotherapy. J Hematol Oncol. 13 (1), 29(2020).
  25. Kim, S., Nah, K. The development direction of emotional materials by increasing sensorial experiences-Focusing on the case study of CMF design. Arch Des Res. 27 (2), 121-135 (2014).
  26. Eiseman, L. The complete color harmony, pantone edition: expert color information for professional results. , Rockport Publishers. (2017).
  27. Eiseman, L., Recker, K. Pantone: The twentieth century in color:(coffee table books, design books, best books about color). , Chronicle Books. (2011).
  28. Deng, P., Jin, W., Liu, Z., Gao, M., Zhou, J. Novel multifunctional adenine-modified chitosan dressings for promoting wound healing. Carbohydr Polym. 260, 117767(2021).
  29. Ares, G., Giménez, A., Gámbaro, A. Understanding consumers' perception of conventional and functional yogurts using word association and hard laddering. Food Quality Prefer. 19 (7), 636-643 (2008).
  30. Lee, W. J. A study on word cloud techniques for analysis of unstructured text data. J Converg Culture Tech. 6 (4), 715-720 (2020).
  31. Word Cloud Explorer: Text Analytics Based on Word Clouds. Heimerl, F., Lohmann, S., Lange, S., Ertl, T. 47th Hawaii international conference on system sciences, , IEEE. (2014).
  32. Kulevicz, R. A., et al. Influence of sustainability reports on social and environmental issues: bibliometric analysis and the word cloud approach. Env Rev. 28 (4), 380-386 (2020).
  33. Rubbo, S. D., Gardner, J. F. A review of sterilization and disinfection. Lloyd-Luke. , (1965).
  34. Kelsey, J. C. Sterilization by ethylene oxide. J Clin Pathol. 14 (1), 59-61 (1961).
  35. Shintani, H. Ethylene oxide gas sterilization of medical devices. Biocontrol Sci. 22 (1), 1-16 (2017).
  36. Rutala, W. A., Gergen, M. F., Weber, D. J. Comparative evaluation of the sporicidal activity of new low-temperature sterilization technologies: ethylene oxide, 2 plasma sterilization systems, and liquid peracetic acid. Am J Infect Control. 26 (4), 393-398 (1998).
  37. Dion, M., Parker, W. Steam sterilization principles. Pharm Eng. 33 (6), 1-8 (2013).
  38. Környei, Z., et al. Cell sorting in a Petri dish controlled by computer vision. Sci Rep. 3, 1088(2013).
  39. Hsu, J. T., et al. Chronic wound assessment and infection detection method. BMC Med Inform Decis Mak. 19 (1), 99(2019).
  40. Katoh, M. Test-retest reliability of isometric ankle plantar flexion strength measurement performed by a hand-held dynamometer considering fixation: examination of healthy young participants. J Phys Ther Sci. 34 (6), 463-466 (2022).
  41. Li, X., Zhao, J., Ma, G., Huang, S. Experimental study on the traditional timber mortise-tenon joints. Adv Str Eng. 18 (12), 2089-2102 (2016).
  42. Cottle, R. W. The principal pivoting method revisited. Mathematical Prog. 48, 369-385 (1990).
  43. Cross, N. Engineering design methods: strategies for product design. , John Wiley & Sons. (2021).
  44. Otto, K., Wood, K. Product design: techniques in reverse engineering and new product development. , Pearson. (2001).
  45. Tariq, M., et al. Gefitinib inhibits M2-like polarization of tumor-associated macrophages in Lewis lung cancer by targeting the STAT6 signaling pathway. Acta Pharmacol Sin. 38 (11), 1501-1511 (2017).
  46. Rahimi, S., et al. CRISPR/Cas9-mediated knockout of Lcn2 effectively enhanced CDDP-induced apoptosis and reduced cell migration capacity of PC3 cells. Life Sci. 231, 116586(2019).
  47. Cormier, N., Yeo, A., Fiorentino, E., Paxson, J. Optimization of the wound scratch assay to detect changes in murine mesenchymal stromal cell migration after damage by soluble cigarette smoke extract. J Vis Exp. (106), e53414(2015).
  48. Pinto, B. I., Cruz, N. D., Lujan, O. R., Propper, C. R., Kellar, R. S. In vitro scratch assay to demonstrate effects of arsenic on skin cell migration. J Vis Exp. (144), e58838(2019).
  49. Rodriguez, L. G., Wu, X., Guan, J. L. Wound healing assay. Methods Mol Biol. 294, 23-29 (2005).

إعادة الطباعة والأذونات

طلب إذن لإعادة استخدام النص أو الأشكال في مقالة JoVE هذه

طلب إذن

الوسوم

EdU

مقالات ذات صلة