يصف هذا البروتوكول جهازا بسيطا يحاكي طريقة لفة دينغ ، وينشئ نموذجا للفئران لإصابة العضلات الهيكلية ، ويستخدم تلطيخ الهيماتوكسيلين-يوزين لمراقبة أمراض الأنسجة التالفة ومقايسة الممتز المناعي المرتبط بالإنزيم للكشف عن التغيرات في علامات تلف المصل.
يتطلب اشتراك JoVE لعرض هذا المحتوى. تسجيل الدخول أو ابدأ نسخة تجريبية مجانية
مقالة منهجية
يصف هذا البروتوكول جهازا بسيطا يحاكي طريقة لفة دينغ ، وينشئ نموذجا للفئران لإصابة العضلات الهيكلية ، ويستخدم تلطيخ الهيماتوكسيلين-يوزين لمراقبة أمراض الأنسجة التالفة ومقايسة الممتز المناعي المرتبط بالإنزيم للكشف عن التغيرات في علامات تلف المصل.
تعد طريقة لفة دينغ واحدة من أكثر عمليات التلاعب شيوعا في عيادات التدليك الصينية التقليدية (Tuina) وواحدة من أكثر عمليات التلاعب المعاصرة تأثيرا في الصين. يعتمد على طريقة الدرفلة التقليدية المستخدمة بشكل شائع في نوع Zen بإصبع واحد ويسمى طريقة لفة Ding. نظرا لآثارها المضادة للالتهابات والمعززة للدورة الدموية ، فإن طريقة دينغ المتدحرجة لها تأثيرات علاجية سليمة على اعتلال عضلي. بسبب المساحة الكبيرة للقوة المطبقة على جلد الإنسان ، فإن طريقة لفة دينغ تمثل تحديا في الأداء على التجارب ذات مناطق الجلد الصغيرة ، مثل الفئران والأرانب. بالإضافة إلى ذلك ، تختلف قوة Tuina المطبقة على جسم الإنسان عن تلك المطبقة على التجارب ، لذلك قد يحدث أن تكون القوة عالية جدا أو منخفضة جدا لتحقيق التأثير العلاجي ل Tuina أثناء التجربة. تهدف هذه التجربة إلى إنشاء مدلك بسيط مناسب للفئران بناء على معلمات التلاعب المتداول الخاصة ب Ding (القوة ، التردد ، مدة Tuina). يمكن للجهاز توحيد التلاعب في التجارب على وتقليل التباين في قوة Tuina المطبقة على المختلفة بسبب عوامل ذاتية. تم إنشاء نموذج فئران لإصابة العضلات الهيكلية التي يسببها notexin ، وتم استخدام علامات إصابة البلازما الكرياتين كيناز (CK) وبروتين ربط الأحماض الدهنية 3 (FABP3) لتقييم التأثير العلاجي لتوينا على إصابة العضلات الهيكلية. أظهرت النتائج أن مدلك Tuina هذا يمكن أن يقلل من مستويات تعبير CK و FABP3 ويبطئ درجة إصابة العضلات الهيكلية. لذلك ، فإن مدلك Tuina الموصوف هنا ، والذي يحاكي طريقة لفة Ding ، يساهم في توحيد معالجة Tuina في البحث التجريبي ويساعد بشكل كبير في الأبحاث اللاحقة حول الآلية الجزيئية ل Tuina للاعتلال العضلي.
إصابات العضلات هي إصابات رضحية شائعة في الحياة السريرية واليومية ، ناتجة عن ضربات خارجية (كدمات) أو إجهاد مزمن لألياف العضلات (السلالات) ، وما إلى ذلك ، مما يؤدي إلى خلل وظيفي في العضلات والألم ، حتى يؤثر بشكل خطير على نوعية حياة المريض1. بدء إعادة التأهيل في أقرب وقت ممكن بعد إصابة إجهاد حاد هو المفتاح لتقليل وقت العودة إلى الرياضة2 وفي تقليل الألم 3,4. في الطب الغربي الحديث ، تتبع الإسعافات الأولية السريرية لإصابات العضلات مبادئ الراحة والجليد والضغط والارتفاع (RICE) لوقف النزيف الضار في الأنسجة العضلية5 والعقاقير غير الستيرويدية المضادة للالتهابات لتخفيف الألم6. أصبح اكتشاف علاجات جديدة مثل exosomes7 وهندسة الأنسجة8 استراتيجيات علاجية محتملة لأمراض العضلات والهيكل العظمي ، مما يعوض عن أوجه القصور في العلاجات الدوائية السابقة. ومع ذلك ، يمكن أن يزيد أيضا من تكلفة العلاج للمرضى ، مما يضعهم تحت ضغط مالي هائل9. لذلك ، يوصى بالعلاجات البديلة والتكميلية لعلاج مشاكل العضلات والعظام10. يستخدم Tuina على نطاق واسع سريريا في الصين كطريقة طبية تقليدية ويحظى بشعبية بين المرضى لفعاليته وآثاره الجانبية الأقل. علاج Tuina للاضطرابات العضلية الهيكلية يمكن أن يخفف الألم ويحسن الوظيفة11،12،13. أسس السيد دينغ جيفنغ ، وهو ممارس مشهور في شنغهاي توينا ، طريقة لفة دينغ14. إنها تقنية فريدة من نوعها للدحرجة والسحق مع مساحة قوة كبيرة وقوة موحدة ولطيفة واختراق مكثف.
تعتمد النماذج الحيوانية المختلفة على مسببات مختلفة. لها مزايا وعيوب ، واختيار النماذج الحيوانية الصحيحة والمناسبة له أهمية كبيرة للتجارب الأساسية ، مما يساعد على فهم مسارات الإشارات الخلوية والجزيئية للتجديد والإصلاح بعد إصابة العضلات الهيكلية لتطوير علاجات جديدة لعلاج أمراض العضلات الهيكلية. تستخدم النماذج المستحثة كيميائيا لإصابة العضلات على نطاق واسع ، مع حقن العضلات الهيكلية التي تسبب نخر الألياف العضلية وتنتج مناطق متجددة يمكن أن تتجدد بشكل فعال في غضون أسبوعين15. يمكن أن يسبب كل من notexin و bupivacaine تلف العضلات. ومع ذلك ، يمكن أن يسبب notexin أضرارا سامة عضلية أكثر حدة للعضلات الهيكلية من bupivacaine ، والانتعاش الوظيفي الطبيعي أبطأ نسبيا16. لا يستغرق صب الحقن العضلي للأدوية وقتا أقل فحسب ، بل له أيضا تأثيرات خاضعة للرقابة ومدى تلف العضلات الهيكلية. هذا التحكم الكمي يجعل القولبة الناجحة أقل صعوبة15,17.
الاستجابة الالتهابية هي استجابة بيولوجية أساسية تمت دراستها على نطاق واسع في سياق اعتلال عضلي18,19. في المراحل المبكرة من إصابة العضلات الهيكلية ، يعطل نخر الألياف العضلية توازن العضلات المحلي ، وتتسلل العديد من الخلايا الالتهابية إلى موقع الإصابة ، وتفرز العديد من السيتوكينات المؤيدة للالتهابات19. الكرياتين كيناز (CK) هو علامة حيوية تقليدية في المصل لتقييم إصابة العضلات والهيكل العظمي. ومع ذلك ، فإنه يفتقر إلى خصوصية الأنسجة20 والحساسية21 ، مما يحد من قدرته على تقييم مدى تلف العضلات الناجم عن المخدرات والإبلاغ بشكل غير مباشر عن مدى تعافي العضلات بعد الإصابة. أظهرت المؤشرات الحيوية الجديدة ، بما في ذلك بروتين ربط الأحماض الدهنية 3 (FABP3) ، مؤخرا خصوصية وحساسية عالية نسبيا للأنسجة في نماذج القوارض لإصابة العضلات والهيكل العظمي. FABP3 هي عائلة من البروتينات الملزمة التي يتم التعبير عنها بشكل أساسي في خلايا العضلات القلبية والهيكلية والمتورطة في استقلاب الأحماض الدهنية ونقلها وإشاراتها22. لذلك ، اخترنا مزيجا من اثنين من المؤشرات الحيوية ، CK و FABP3 ، لتقييم مدى تلف العضلات الهيكلية الناجم عن notexin والتعافي بعد العلاج.
في القوارض ، تكون العضلات ضحلة ، ومنطقة الجلد صغيرة ، مما يحدد أيضا أن المعلمات المختلفة للتدليك في القوارض لن تكون هي نفسها كما هو الحال في البشر ، كما هو الحال في العلاج الحيواني ، يجب على المعالج بالتدليك معالجتها بقوة أقل باستخدام طريقة لفة دينغ ، وقد لا تكون مواتية لتشغيل هذه التقنية بسبب صغر حجم المنطقة المصابة ، والتي يمكن أن تؤدي في النهاية إلى انخفاض في فعالية التدليك. لذلك ، استخدمت التجربة مدلك الدرفلة المصنوع داخليا ، والذي يتوافق مع خصائص طريقة لفة دينغ ، للتدخل وتقييم التأثير العلاجي لنموذج إصابة العضلات الهيكلية الناجم عن notexin في الفئران ، مما يساعد على توحيد معلمات Tuina في الدراسات على التجريبية من أجل التحقيق بعمق في الآلية الجزيئية لعمل Tuina ، طريقة علاج الطب الصيني التقليدي ، على أمراض العضلات والعظام.
الوصول مقيد. يرجى تسجيل الدخول أو بدء فترة تجريبية لعرض هذا المحتوى.
تمت الموافقة على الإجراءات المتعلقة بالحيوانات من قبل لجنة الرعاية المؤسسية والاستخدام في جامعة هونان للطب الصيني.
1. تجميع مدلك المتداول
2. إنشاء نموذج الفئران لإصابة العضلات والهيكل العظمي
3. علاج توينا
4. جمع الدم والأنسجة من الفئران بعد التجربة
5. الكشف عن مستويات البلازما CK و FABP 3 بواسطة ELISA
6. التحليل النسيجي لإصابة عضلات الساق التي يسببها notexin في الفئران
7. معالجة الصور وتحليل البيانات
) ، وتحليل المقارنات بين المجموعات بواسطة ANOVA أحادي الاتجاه ، مع اختبار LSD عندما كان التباين منتظما ، وطريقة Tamhane T2 عندما كان التباين غير منتظم. واعتبر الفرق ذا دلالة إحصائية عند قيمة p أقل من 0.05.الوصول مقيد. يرجى تسجيل الدخول أو بدء فترة تجريبية لعرض هذا المحتوى.
من أجل مراقبة الخصائص المورفولوجية لعضلات الهيكل العظمي للفئران بعد الإصابة ، تم تلطيخ عضلة الساق بالهيماتوكسيلين والإيوزين ، وتمت قراءة الصور الملطخة باستخدام برنامج تحليل كما هو موضح في البروتوكول ل 8 فئران لكل مجموعة. في الفئران المصابة بإصابة عضلية في الساق ناتجة عن notexin (مجموعة NTX) ، تمزق العديد من خلايا العضلات وضمور ونخرية وترتيبها بشكل غير منتظم. كان هناك أيضا تسلل مرتفع للعدلات والخلايا الليمفاوية حول المنطقة المصابة (الشكل 4 ب). ومع ذلك ، بعد علاج Tuina بمدلك التدحرج ، تحسنت ال...
الوصول مقيد. يرجى تسجيل الدخول أو بدء فترة تجريبية لعرض هذا المحتوى.
هنا وصفنا بروتوكولا لعلاج توينا لإصابة العضلات الهيكلية في الفئران ثم قمنا بتحليل درجة إصابة العضلات الهيكلية بعد العلاج للتحقق من فعالية الطريقة. والجدير بالذكر أن نماذج إصابة عضلات الهيكل العظمي للفئران ، بما في ذلك على سبيل المثال لا الحصر تحريض الدواء (notexin ، bupivacaine) 16 ، والكدمة الحادة26 ، والسحق 27 ، ونقص التروية28 ، يمكن أن تتداخل مع Tuina. من خلال تلطيخ HE لمراقبة التغيرات النسيجية المرضية واكتشاف ELISA لتحديد ...
الوصول مقيد. يرجى تسجيل الدخول أو بدء فترة تجريبية لعرض هذا المحتوى.
ليس لدى المؤلفين ما يكشفون عنه.
تم دعم هذا البحث بمنح من المؤسسة الوطنية للعلوم الطبيعية في الصين (رقم المنحة 82174521) ، مشروع الابتكار لطلاب الدراسات العليا بجامعة هونان للطب الصيني (2022CX109)
الوصول مقيد. يرجى تسجيل الدخول أو بدء فترة تجريبية لعرض هذا المحتوى.
| الاسم | الشركة | رقم فهرسي | التعليقات |
|---|---|---|---|
| 1 مل حقنة | JIANGXI FENGLIN | 20220521 | |
| 1.5 أنابيب دقيقة ؛ | Servicebio | EP-150X-J | |
| 15 مل أنبوب الطرد المركزي | Servicebio | EP-1501-J | |
| 30G إبرة | CONPUVON | 220318 | |
| 5 مل أنبوب جمع الدم | Servicebio | QX0023 | |
| مقبض أكريليك | قوانغدونغ قوانغشينغوانغ المواد البلاستيكية المحدودة | 65643645 | |
| جبيرة تعديل | CREROMEM | مسحة قطنية 20220729 | |
| INOHV | 22080215 | ||
| أداة تحمل علامة الإنزيم | Rayto | RT-6100 & nbsp ؛ | |
| حامل شوكة الإيثانول | INOHV | 211106 | |
| Yongkang Kangzhe Health Technology Co.، Ltd | JL001 | ||
| كريم إزالة الشعر | Veet ، فرنسا | LOTC190922002 مجموعة حلول | |
| ووهان Google Biotech | G1005 | ||
| نظام التصوير ؛ | نيكون ، اليابان | نيكون DS-U3 | |
| IODOPHOR حل نزع الفتيل | Hale& مجهر | 20221205 | |
| القلبي الخفيف | نيكون ، اليابان | نيكون Eclipse E100 | |
| Limit Baffle | CREROMEM | 20220724 | |
| Notexin | Latoxan SAS | L8104-100UG | |
| بنتوباربيتال الصوديوم | ميرك KGaA | P3761 | |
| الفئران الكرياتين كيناز (CK) مجموعة ELISA | LunChangShuoBiotech | YD-35237 | |
| الفئران الأحماض الدهنية ملزمة البروتين 3 (FABP3) ELISA kit | LunChangShuoBiotech | YD-35730 | |
| الأسطوانة المطاطية | Hebei Mgkui Chemical Technology Co.، Ltd | 202207 | |
| المسمار | Weiyan Hardware | B05Z122 | |
| Sprague Dawley rats | Hunan Slake Kingda Laboratory Animal Co. | SYXK2019-0009 | |
| Spring | Bingzhang Hardware | TH001 | |
| شفرة جراحية | Covetrus | # 23 | |
| وحدة تحكم الوزن | Iyoys | HY-XSQ |
الوصول مقيد. يرجى تسجيل الدخول أو بدء فترة تجريبية لعرض هذا المحتوى.