هنا ، نصف بروتوكولا لتحفيز اللدونة طويلة المدى للاستثارة الجوهرية العصبية في الخلايا العصبية المتتابعة من النواة الركبية الجانبية الظهرية المحفوظة في شرائح الدماغ خارج الجسم الحي.
يتطلب اشتراك JoVE لعرض هذا المحتوى. تسجيل الدخول أو ابدأ نسخة تجريبية مجانية
مقالة منهجية
إحداث اللدونة طويلة المدى للاستثارة العصبية الجوهرية في الخلايا العصبية في النواة الركبية الجانبية الظهرية
في هذه المقالة
ملخص
الملخص
لطالما تم الاحتفاظ بالنواة الركبية الجانبية الظهرية (dLGN) لتعمل كمرحل أساسي للمعلومات المرئية التي تنتقل من شبكية العين إلى المناطق القشرية ، لكن النتائج الحديثة تشير إلى التقليل إلى حد كبير من اللدونة الوظيفية للخلايا الرئيسية dLGN. ومع ذلك ، لم يتم استكشاف الآليات الخلوية التي تدعم هذه التغييرات بشكل كامل. هنا ، نبلغ عن بروتوكول للحث على تقوية استثارة الخلايا العصبية الجوهرية على المدى الطويل (LTP-IE) في خلايا ترحيل dLGN الظهرية من شرائح الدماغ الحادة للفئران الصغيرة. يتم تحفيز اللدونة الجوهرية بشكل عام بالتوازي مع اللدونة المتشابكة. ومع ذلك ، في الخلايا العصبية dLGN ، يتم تحفيز LTP-IE بشكل موثوق عن طريق نشاط الارتفاع بتردد 40 هرتز لمدة 10 دقائق. LTP-IE في الخلايا العصبية المرحلية dLGN طويلة الأمد حيث يمكن متابعتها لمدة تصل إلى 40 دقيقة بعد بروتوكول الحث. في الختام ، تقدم نتائج هذه الدراسة أول دليل على تحريض اللدونة الجوهرية في خلايا ترحيل dLGN ، مما يشير بشكل أكبر إلى دور الخلايا العصبية المهادية في اللدونة البصرية المعتمدة على النشاط.
المقدمة
الهدف العام من ورقة الطريقة هذه هو توفير طريقة بسيطة للحث على مرونة طويلة الأمد لاستثارة الخلايا العصبية في الخلايا العصبية المهادية البصرية للفئران في المختبر ، باستخدام وضع المشبك الحالي القياسي لتقنية مشبك التصحيح < فئة الدعم = "xref" >1 ، < فئة الدعم = "xref" >2. الأساس المنطقي وراء تطوير هذه التقنية هو بساطتها وقابليتها للتكرار. الميزة على التقنيات البديلة ، مثل تحفيز المدخلات المشبكية المقترنة أو غير المقترنة بإمكانيات عمل ما بعد المشبكي التي يتم تسليمها بتوقيت معين ، هي موثوقيتها.
< p class = "jove_content">يعتقد تقليديا أن اللدونة في النظام البصري يتم التعبير عنها حصريا على المستوى القشري ، في حين أن النواة الركبية الجانب....الوصول مقيد. يرجى تسجيل الدخول أو بدء فترة تجريبية لعرض هذا المحتوى.
البروتوكول
تم إجراء جميع التجارب وفقا للمبادئ التوجيهية الأوروبية والمؤسسية (توجيه المجلس 86/609 / EEC والمجلس الوطني الفرنسي للبحوث ووافقت عليها السلطة الصحية المحلية (الخدمات البيطرية ، Préfecture des Bouches-du-Rhône ، مرسيليا)).
< p class = "jove_title" >1.- قم بإجراء تجارب باستخدام فئران لونغ إيفانز البالغة من العمر 19-25 يوما من كلا الجنسين (يتراوح وزنها بين 50-90 جم).
- قم بإيواء في أقفاص بلاستيكية تقليدية ، مع والدتها وزملائها في القمامة. حافظ على درجة الحرارة ثابتة مع دورة ضوء/ظلام مدتها 12 ساعة والوصول إلى الماء والطعام.
الوصول مقيد. يرجى تسجيل الدخول أو بدء فترة تجريبية لعرض هذا المحتوى.
النتائج
تم تسجيل عصبونات dLGN بتكوين الخلية الكاملة، وحُفز LTP-IE عن طريق إطلاق جهد الفعل بتردد 40 Hz لمدة 10 min في وجود مضادات مستقبلات الغلوتامات وGABA الأيونية (الشكل 3A). ولوحظت زيادة بمقدار ثلاثة أضعاف في عدد جهود الفعل بعد 20-30 min من التحفيز (الشكل 3B) دون أي تغيير في مقاومة الدخل، Rin (الشكل 3C). لقد نجح هذا البروتوكول في تحفيز LTP-IE في عصبونات dLGN بشكل موثوق (الشكل 3D)2.......
الوصول مقيد. يرجى تسجيل الدخول أو بدء فترة تجريبية لعرض هذا المحتوى.
المناقشة
نبلغ هنا عن تحريض LTP-IE في الخلايا العصبية dLGN التي تم الحفاظ عليها على قيد الحياة في شرائح الدماغ الحادة عن طريق تحفيز الخلايا العصبية المسجلة لاستحضار إمكانات العمل بتردد 40 هرتز لمدة 10 دقائق. هذا البروتوكول سهل التنفيذ في أي مختبر للفيزيولوجيا العصبية لأنه يتطلب الحد الأدنى من المعدات (قطاعة ، مجهر ، مكبر صوت واحد ، لوحة اكتساب واحدة وكمبيوتر). ومع ذلك ، يجب احترام بعض الخطوات الحاسمة من أجل جمع بيانات قيمة. الخطوة الحاسمة الأولى في البروتوكول هي جودة أنسجة المخ. تحتوي شريحة المهاد الصحية على العديد من الخلايا العص.......
الوصول مقيد. يرجى تسجيل الدخول أو بدء فترة تجريبية لعرض هذا المحتوى.
الإفصاحات
يعلن المؤلفون عدم وجود تضارب في المصالح.
شكر وتقدير
بدعم من INSERM و CNRS (إلى DD) و AMU (إلى MR) و FRM (DVS20131228768 إلى DD و DEQ20180839583 إلى DD) و NeuroSchool (برنامج "France 2030" عبر A * Midex (مبادرة التميز في جامعة مرسيليا ، AMX-19-IET-004) وتمويل ANR (ANR-17-EURE-0029 إلى AW) ، و ANR (LoGiK ، ANR-17-CE16-0022 إلى DD ، Plastinex ، ANR-21-CE16-013 إلى DD). نشكر A Venture & K Milton على العناية الممتازة بالحيوانات.
....الوصول مقيد. يرجى تسجيل الدخول أو بدء فترة تجريبية لعرض هذا المحتوى.
المواد
| الاسم | الشركة | رقم فهرسي | التعليقات |
|---|---|---|---|
| شفرة الاهتزاز الأوتوماتيكية ميكروتوم | Leica | VT-1200S | الاهتزاز / التقطيع |
| أنبوب زجاجي البورسليكات | Phymep | B-15086-10 | |
| وحدة تحكم Typ V | Luigs & | جهاز التحكم في درجة الحرارة | Typ V |
| برنامج Igor | تحليل | المتريات | |
| الموجية الأشعة تحت الحمراء الفحص المجهري | للفيديو Olympus | XM-10 Camera | |
| Kynurenate | Merk / Sigma | K3375 | AMPA / NMDA |
| مستقبلات منخفض الضوضاء نظام الحصول على البيانات | Axon - الأجهزة الجزيئية | Digidata 1440A | واجهة تناظرية / رقمية |
| المتلاعبون الدقيقة | Luigs & amp Neumann | LN Mini25 | |
| Multiclamp 200B | Axon - الأجهزة الجزيئية | N / A | مكبر للصوت |
| المشبك 700B | Axon - الأجهزة الجزيئية | N / A | مكبر للصوت PC-100 |
| مجتذب | Narishige | PC-100 | مجتذب ماصة |
| دقيقة PClamp10 | Axon - الأجهزة الجزيئية | N / A | برنامج |
| Picrotoxin | AbCam | ab120315 | GABAA مستقبلات مانع |
| شريحة غرفة صغيرة | لويجز & نيومان | LN Chambre شريحة صغيرة I-II | مغمورة الغرفة |
| المجهر العمودي | أوليمبوس | BX51 WI |
المراجع
- Hamill, O. P., Marty, A., Neher, E., Sakmann, B., Sigworth, F. J. Improved patch-clamp techniques for high-resolution current recording from cells and cell-free membrane patches. Pflugers Arch. 391 (2), 85-100 (1981).
- Sakmann, B., Neher, E.
الوصول مقيد. يرجى تسجيل الدخول أو بدء فترة تجريبية لعرض هذا المحتوى.
إعادة الطباعة والأذونات
