يصف البروتوكول الحالي تقنية الكفة لنموذج زراعة الرئة اليسرى للفأر. تم تطوير هذه التقنية على مدى عدة سنوات وكان أداؤها جيدا ، حيث تعمل بشكل فعال في الأبحاث المناعية.
يتطلب اشتراك JoVE لعرض هذا المحتوى. تسجيل الدخول أو ابدأ نسخة تجريبية مجانية
مقالة منهجية
يصف البروتوكول الحالي تقنية الكفة لنموذج زراعة الرئة اليسرى للفأر. تم تطوير هذه التقنية على مدى عدة سنوات وكان أداؤها جيدا ، حيث تعمل بشكل فعال في الأبحاث المناعية.
على مدار العقد الماضي ، حقق مختبرنا تقدما كبيرا في تطوير وتحسين نماذج زراعة رئة الفئران الوعائية باستخدام "تقنية الكفة" الفعالة والموثوقة للغاية للزرع. تصف هذه المقالة طريقة متطورة وشاملة لزراعة الرئة التقويمية في نموذج رئة تقويم العثم الوعائي ، وهو النموذج الأكثر صلة من الناحية الفسيولوجية والسريرية لزراعة رئة الفئران حتى الآن. تتكون عملية الزرع من مرحلتين متميزتين: حصاد المتبرع والزرع اللاحق في المتلقي. تم إتقان الطريقة بنجاح ، وبعد عدة أشهر من التدريب الكافي ، يمكن للممارس الماهر إجراء العملية في حوالي 90 دقيقة من الجلد إلى الجلد. من المثير للدهشة أنه بمجرد أن يتغلب الأفراد على منحنى التعلم الأولي ، يقترب معدل البقاء على قيد الحياة خلال الفترة المحيطة بالجراحة من 100٪ تقريبا. يسمح نموذج الفأر باستخدام العديد من السلالات المعدلة وراثيا والمتحورة المتاحة تجاريا من الفئران ، مما يتيح دراسة التسامح والرفض. بالإضافة إلى ذلك ، فإن الميزات الفريدة لهذا النموذج تجعله أداة قيمة للتحقيق في بيولوجيا الورم وعلم المناعة.
في حين أن العلاجات البديلة ، مثل غسيل الكلى وأجهزة المساعدة البطينية ، موجودة لأولئك الذين يعانون من الفشل الكلوي والقلب ، تظل زراعة الرئة هي خيار العلاج الأساسي للمرضى الذين يعانون من مرض رئوي في المرحلة النهائية. يعمل هذا الإجراء كخيار وحيد منقذ للحياة للأفراد الذين تم تشخيص إصابتهم بالتليف الرئوي1. بالإضافة إلى ذلك ، يتم استخدامه لإطالة عمر أولئك الذين يواجهون أمراض الرئة الانسدادية في المرحلة النهائية مثل انتفاخ الرئة ، وكذلك أولئك الذين يعانون من حالات قيحية مثل التليف الكيسي1.
في حين أن معدلات البقاء على قيد الحياة على المدى القصير قد تحسنت بسبب التحسينا....
الوصول مقيد. يرجى تسجيل الدخول أو بدء فترة تجريبية لعرض هذا المحتوى.
تم إجراء جميع الإجراءات المتعلقة بالحيوان وفقا للجنة رعاية المؤسسي واستخدامه في جامعة ماريلاند ، بالتيمور وحصلت على الموافقة منه. يوصى باستخدام الفئران الذكور ، 8-12 أسبوعا (20-25 جم) ، BALB / c كمتبرع والفئران C57BL / 6 كمتلقي. تم الحصول على من مصدر تجاري (انظر جدول المواد).
1. تحضير الأصفاد القصبية والأوعية الدموية
التوقيت: 10 دقائق (لثلاثة أصفاد)
الوصول مقيد. يرجى تسجيل الدخول أو بدء فترة تجريبية لعرض هذا المحتوى.
بناء على الخبرة مع هذا النموذج على مدى السنوات العشر الماضية ، يحتاج الأفراد الذين يتمتعون بمهارات الجراحة المجهرية الأساسية عادة إلى منحنى تعليمي من حوالي 50. بمجرد تحقيق الكفاءة ، تستغرق إجراءات المتبرع عادة من 15 إلى 30 دقيقة ، بينما تستغرق إجراءات المتلقي حوالي 60 دقيقة. بعد منحنى التعلم الأولي ، يميل معدل الوفيات في الفترة المحيطة بالجراحة إلى أن يكون منخفضا جدا.
في الشكل 4 أ ، ب ، يظهر مورفولوجيا الرئة بعد سبعة أيام من نقش الرئتين اليسار للم.......
الوصول مقيد. يرجى تسجيل الدخول أو بدء فترة تجريبية لعرض هذا المحتوى.
تمثل تقنية الكفة لزراعة الرئة اليسرى في الفئران تقدما كبيرا في أبحاث الزرع10،11. تشمل الخطوات الحاسمة تشريح هيكل الهير الدقيق والدقيق وتأمين مفاغرة. يمكن إجراء تعديلات لتناسب الاحتياجات التجريبية ، ولكن هناك منحنى تعليمي. قامت مجموعتنا بتعديل موضع الفأر المتلقي من الخلف إلى الأمامي ، واكتسبت رؤية نقير أفضل عن طريق ثني الماوس المتلقي ، مما يقصر منحنى التعلم.
تشمل القيود التحديات مع الفئران خارج نطاق الو.......
الوصول مقيد. يرجى تسجيل الدخول أو بدء فترة تجريبية لعرض هذا المحتوى.
ليس لدى المؤلفين ما يكشفونه عن ما يتعلق بموضوع هذه المخطوطة.
يتم دعم ASK و AEG و DK بواسطة P01 AI116501. يتم دعم ASK و EJ أيضا من قبل R01AI145108-01 ، R01HL166402. ASK مدعوم من قبل I01 BX002299-05. يتم دعم AEG و DK بشكل إضافي من قبل RO1HL09601. CL مدعوم بواسطة R01 HL128492. هذا العمل مدعوم جزئيا من قبل تشاك وماري مايرز وريتشارد وإيلين هينجلر.
....الوصول مقيد. يرجى تسجيل الدخول أو بدء فترة تجريبية لعرض هذا المحتوى.
| الاسم | الشركة | رقم فهرسي | التعليقات |
|---|---|---|---|
| 10-0 خياطة النايلون | التخصصات الجراحية ، قراءة PA | AK-0106 | |
| 2 Dumont # 5 ملقط | Fine Science Tools Inc. ، فوستر سيتي ، كاليفورنيا | 11251-20 | |
| 2 Halsted-Mosquito المشبك طرف منحني | Fine Science Tools Inc. ، فوستر سيتي ، كاليفورنيا | 91309-12 | |
| 6-0 خياطة حريرية مضفرة | Henry Schein Inc. ، Melville ، NY ، & nbsp ؛ | 100-5597 | |
| 6-0 خياطة Polydioxanone PDS II و | Ethicon Inc. ، Somerville ، NJ. ؛ | Z117H | |
| 70٪ Ethanol | Pharmco Products Inc. ، Brookfield ، CT | 111000140 | |
| Adson | Fines Science Tools Inc. ، فوستر سيتي ، كاليفورنيا | 91127-12 | |
| Balb / c الفئران | مختبرات جاكسون ، بار هاربور ، مين ، الولايات المتحدة الأمريكية | 000651 | ؛ 8 & ndash ؛ 12 أسبوعا ذكر |
| التخثر ثنائي القطب | Valleylab Inc. ، بولدر ، CO | SurgII-20 ، E6008 / E6008B | |
| C57BL / 6 الفئران | مختبرات جاكسون ، بار هاربور ، مين ، الولايات المتحدة الأمريكية | 000664 | ؛ 8 & ndash ؛ 12 أسبوعا ذكر |
| واضح الكلورهيكسيدين | Hibiclens, M & ouml; lnlycke Health Care US، LLC، Norcross، GA | 57591 | |
| Electrocautery | Bovie | ||
| Fine vannas style Spring Tool | Inc. ، Foster City، CA | 15000-03 | |
| حامل إبرة Halsey | Fine Science Tools Inc. ، فوستر سيتي ، كاليفورنيا | 91201-13 | |
| هارفارد جهاز التنفس الصناعي VentElite | Harvard Apparatus ، Holliston ، MA | 55-7040 | إعدادات 3L O 2< / sub> / دقيقة ، معدل التنفس 130 نبضة في الدقيقة ، 0.4 سم مكعب حجم المد والجزر |
| محلول الهيبارين ؛ | Abraxis Pharmaceutical Products, Schaumburg, IL | 504031 | 100 U / mL |
| حقن الصف الملحي العادي | Hospira Inc., Lake Forest, IL | NDC 0409-4888-20 | |
| Ketamine | VetOne ، Boise ، ID | 501072 | 50 مجم / كجم |
| Konig Mixter Micro Pediatric Macrops Right-Angle Jaws | Medline ، Northfield ، IL ، | MDS1247714 | Extra Fine ، الطول الكلي 5 1/2 بوصة (14 سم) |
| Medline درجة حرارة عالية ، W / Fine Tip | Leica Microsystems، Inc. ، Allendale ، NJ | 10 450 290 | |
| Microscope Leica M80 F12 حامل أرضي | شركة أدوات العلوم الجميلة ، فوستر سيتي ، كاليفورنيا | 15396-00 | |
| مقص زنبركي فائق النعومة من موريا | باركلاند ساینتفيك ، كورال سبرينغز ، فلوريدا | V3000i | |
| أوهايو إيزوفلوران مبخر | Vitrolife Inc. ، إنجليوود ، كولورادو ، ؛ | 19001 | |
| بيرفادكس محلول جلوكوز منخفض البوتاسيوم ديكستران | Becton Dickinson Labware ، Franklin Lakes ، نيوجيرسي | 353025 | محلول الحفاظ على المنحل بالكهرباء |
| البوليسترين بتريديش | Fine Science Tools Inc. ، فوستر سيتي ، كاليفورنيا | 00632-11 و 00649-11 | 150 & مرات ؛ 25 مم و 60 & مرات ؛ 25 مم & nbsp ؛ |
| رز & T SuperGrip ملقط مستقيم وزاوية | طرف Fine Science Tools Inc. ، فوستر سيتي ، كاليفورنيا | 18200-20 | |
| نظام سحب الصغيرة | شركة بيوريتان الطبية ذ م م ، جيلفورد ، مين | 823-WC | مدبب قطن صغير مائلة 3 بوصات أدوات تطبيق |
| معقمة Q-tips | Terumo Medical Corporation ، Elkton ، MD | & nbsp ؛ SROX2419Z | |
| قسطرة Surflo etfe IV ، صفراء ، 24 جم × 0.75 بوصة | Terumo Medical Corporation ، Elkton ، MD | SROX1851Z | |
| Surflo etfe IV القسطرة ؛ أخضر ، 18 جم × 2 " | Terumo Medical Corporation ، Elkton ، MD | SROX2032Z | |
| Surflo etfe IV القسطرة ؛ وردي ، 20 جم × 1.25 بوصة | Thermocare، Inc. ، قرية المنحدرة ، NV & nbsp ؛ | ||
| نظام وحدة العناية المركزة للحيوانات الصغيرة ThermoCare ، | من الألف إلى الياء Vet Supply ، دريسدن ، TN | 008679 | 10 مجم / كجم |
| Xylazine ؛ | Aesculap، Inc.، سنتر فالي، بنسلفانيا، | FT480T | |
| Yasargil Clip Applier | Aesculap, Inc., Center Valley, PA, | FT264T | |
| Yasargil مقاطع تمدد الأوعية الدموية المؤقتة | Medline ، Northfield ، IL ، | & nbsp ؛ ESCT001 |
الوصول مقيد. يرجى تسجيل الدخول أو بدء فترة تجريبية لعرض هذا المحتوى.
تم نشر هذه المقالة
الفيديو قريباً