Aplysia تطوير الخلايا العصبية californica مخاريط النمو الكبير في الثقافة التي هي ممتازة لتصوير عالية الدقة في القدرة على الحركة مخروط النمو والتوجيه. هنا ، نقدم بروتوكول للتشريح والطلاء خلية من الخلايا العصبية Aplysia حقيبة فضلا عن انشاء غرفة للتصوير الخلايا الحية.
يتطلب اشتراك JoVE لعرض هذا المحتوى. تسجيل الدخول أو ابدأ نسخة تجريبية مجانية
مقالة منهجية
الخلية العصبية من الثقافات Aplysia عن التصوير عالية الدقة من المخاريط النمو
في هذه المقالة
ملخص
الملخص
المخاريط نمو الخلايا العصبية هي هياكل متحركة غاية في غيض من المحاور التي يمكن الكشف عن توجيه اشارات في البيئة وتنبيغ هذه المعلومات في حركة الاتجاه نحو الخلية المستهدفة المناسبة. لنفهم تماما كيف يتم نقل المعلومات على توجيه من سطح الخلية الأساسية للشبكات هيكل الخلية الحيوية ، يحتاج المرء إلى نموذج مناسب لنظام التصوير خلية حية من البروتين في الديناميات عالية الدقة الزمنية والمكانية. نموذجي مخاريط النمو الفقاريات هي صغيرة جدا لتحليل كمي F - أكتين وديناميات أنيبيب. الخلايا العصبية من californica البحر Aplysia الأرنب 5-10 مرات أكبر من الخلايا العصبية الفقاريات ، ويمكن بسهولة أن تبقى في درجة حرارة الغرفة وخلايا قوية للغاية والقياسات الفيزيائية الحيوية المجهرية. حددت المخاريط نموها جدا هيولي المناطق ونظام جيد وصفها هيكل الخلية. يمكن microinjected الهيئات الخلايا العصبية مع مجموعة متنوعة من التحقيقات لدراسة حركية النمو مخروط والتوجيه. في هذا البروتوكول أن نبرهن على إجراء تشريح العقدة في البطن ، والثقافة ، من الخلايا العصبية الخلية كيس وإنشاء غرفة للتصوير التصوير خلية حية من مخاريط النمو.
البروتوكول
الحلول
- L15 - ASW مستنبت الخلية (1L)
- 1 كيس من مسحوق L15
- إضافة 800 مل من O 2 H عالى النقاء
- كلوريد الصوديوم 400 ملم
- MgSO 4 27 ملي
- MgCl 2 28 ملي
- الجلوتامين L - 4 مم
الوصول مقيد. يرجى تسجيل الدخول أو بدء فترة تجريبية لعرض هذا المحتوى.
المناقشة
الخلية العصبية Aplysia حقيبة توفير المصل خالية من الخلايا العصبية ثقافة النظام مع الخلايا العصبية غير قليلة جدا. هذه الخلايا العصبية شكل مخاريط نمو كبيرة جدا مناسبة لمعالجة عدد من المسائل الهامة الخلية البيولوجية. يمكن أن الخلايا العصبية الخلية كيس يمكن بسهولة التلاعب بها وتصويرها في درجة حرارة الغرفة على مدى عدة ساعات. باستخدام الميكروسكوب الرقطة نيون (FSM) واحد يمكن تحليل كمي المعلمات مختلف أكتين - F والبلمرة أنيبيب وديناميات إزفاء. هذه الأدوات التصوير جنبا إلى جنب مع المعلومات الصادرة مؤخرا Aplysia.......
الوصول مقيد. يرجى تسجيل الدخول أو بدء فترة تجريبية لعرض هذا المحتوى.
شكر وتقدير
نود أن نشكر Maneri ريان (Oystercatcher إنتاجات ، ذ م م) للتصوير الداخلي لدينا ورودني ماكفيل (قسم العلوم البيولوجية ، جامعة بوردو) للمساعدة في تحرير الفيديو تشريح. ويدعم البحوث في المختبر سوتر من المنح المقدمة من المعاهد الوطنية للصحة (R01 NS049233) ومركز العلوم البيولوجية بيندلي في جامعة بوردو في DMS
....الوصول مقيد. يرجى تسجيل الدخول أو بدء فترة تجريبية لعرض هذا المحتوى.
المواد
| الاسم | الشركة | رقم فهرسي | التعليقات | |
|---|---|---|---|---|
| أغطية شرائح زجاجية #1 بمقاس 22x22 mm | أداة | VWR international | 48366067 | |
| أغطية شرائح زجاجية #1.5 بمقاس 22x22 mm | أداة | Corning | 2870-22 | |
| أطباق بتري بمقاس 35 mm | أداة | Falcon BD | 353001 | |
| مرشحات لترشيح الوسط الغذائي | أداة | EMD Millipore | SVGV010RS | |
| شحم تفريغ عالٍ | أداة | Dow Corning | 1597418 | |
| جهاز قياس الأسموزية | أداة | Wescor | 5520 | |
| رقائق بلاستيكية | أداة | Small Parts, Inc. | SHSP-200 | |
| كلوريد الكالسيوم | كاشف | Fisher Scientific | C79-500 | |
| جنتاميسين | كاشف | Invitrogen | 15750-060 | |
| HEPES | كاشف | Sigma-Aldrich | H4030 | |
| وسط L15 | كاشف | Invitrogen | 41300-039 | |
| L-glutamine | كاشف | Sigma-Aldrich | G8540 | |
| كلوريد المغنيسيوم | كاشف | Mallinckrodt Baker Inc. | 5958-04 | |
| كبريتات المغنيسيوم | كاشف | Mallinckrodt Baker Inc. | 6070-12 | |
| Poly-L-lysine (70-150 kD) | كاشف | Sigma-Aldrich | P6282 | |
| كلوريد الصوديوم | كاشف | Mallinckrodt Baker Inc. | 7581 | |
| بروتياز متعادل (Dispase) | كاشف | Worthington Biochemical | LS02111 |
المراجع
- Forscher, P., Kaczmarek, L. K., Buchanan, J. A., Stephen, S. J. Cyclic AMP induces changes in distribution and transport of organelles within growth cones of Aplysia bag cell neurons. J. Neurosci. 7, 3600-3611 (1987).
- Suter, D. M., Errante, L. D., Belotserkovsky, V., Forscher, P.
الوصول مقيد. يرجى تسجيل الدخول أو بدء فترة تجريبية لعرض هذا المحتوى.
إعادة الطباعة والأذونات
