يوفر هذا البروتوكول معلومات فنية لإعادة بناء الأوعية باستخدام تقنية الكفة في زراعة الكبد التقويمية للفئران.
يتطلب اشتراك JoVE لعرض هذا المحتوى. تسجيل الدخول أو ابدأ نسخة تجريبية مجانية
مقالة منهجية
إعادة بناء الأوعية الدموية بتقنية الكفة في زراعة الكبد التقويمية للفأر
في هذه المقالة
ملخص
الملخص
زرع الكبد التقويمي للفأر هو منهجية فعالة للتحقيق في الآليات الكامنة وراء نقص تروية الكبد وإصابة التروية. ومع ذلك ، فإن التحديات التقنية تشكل عائقا أمام استخدام هذا النموذج التجريبي القيم ونقل هذه المهارات إلى الجيل التالي. الجانب الأكثر تحديا في هذا الإجراء هو إعادة بناء الأوعية الدموية ، بما في ذلك الوريد البابي (PV) ، والوريد الأجوف السفلي تحت الكبدي (IHIVC) ، والوريد الأجوف السفلي فوق الكبدي. يسمح استخدام الأصفاد البلاستيكية ، بدلا من الغرز ، بإعادة بناء PV و IHIVC بشكل أكثر سلاسة. يتم إعادة بناء الأوعية عن طريق ربط الكفة المصنوعة من قسطرة وريدية بطرف وعاء الكسب غير المشروع وإدخال الكفة في الوعاء المتلقي. الجانبان الأكثر أهمية هما تصور التجويف الداخلي للسفينة بشكل صحيح وتجنب استخدام القوة المفرطة. هدفنا هو تقديم نظرة عامة فنية على إعادة بناء الأوعية الدموية باستخدام تقنية الكفة في جراحة المتلقي. من المتوقع أن تساعد هذه النصائح الفنية لتقنية الكفة الجراحين المجهريين على تسهيل إعادة بناء الأوعية الدموية وتطوير أبحاثهم.
المقدمة
زرع الكبد التقويمي للفأر (MOLT) هو طريقة تجريبية فعالة تم الإبلاغ عنها لأول مرة في عام 19911. لعب هذا النموذج التجريبي ، الذي يستخدم الفئران المعدلة وراثيا وكواشف الأبحاث المختلفة ، دورا محوريا في التحقيق في نقص التروية الدافئ والبارد وإصابات التروية. ومع ذلك ، فإن التعقيد التقني العالي للنموذج قد أعاق تطوير الطب الأساسي لزراعة الكبد2. يتضمن MOLT ثلاث خطوات رئيسية: (1) استرجاع الكبد من فأر المتبرع ، (2) جراحة الطاولة الخلفية ، و (3) زرع الكبد في المتلقي. من بين هذه الإجراءات المتلقية ، تشكل مفاغرة الأوعية الدموية التحدي الأكبر. في حين أن مفاغرة الوريد الأجوف السفلي فوق الكبدي تكتمل عادة عن طريق خياطة اليد
الوصول مقيد. يرجى تسجيل الدخول أو بدء فترة تجريبية لعرض هذا المحتوى.
البروتوكول
تمت الموافقة على البروتوكول التجريبي من قبل لجنة التجارب على في جامعة كيوتو. استخدمت الدراسة الفئران C57BL / 6 ، التي يزيد عمرها عن 10 أسابيع وتزن ما بين 25 جم و 30 جم ، والتي تم الحصول عليها من مصدر تجاري (انظر جدول المواد). تم تخدير جميع بنسبة 2.5٪ إيزوفلوران (وفقا للبروتوكولات المعتمدة مؤسسيا) ، وتم الحفاظ عليها في ظل ظروف محددة خالية من مسببات الأمراض ، وتم إجراء جميع الإجراءات التجريبية وفقا للوائح جامعة كيوتو بشأن التجارب على. الأدوات المناسبة المستخدمة للدراسة مدرجة في جدول المواد والموضحة في الشكل 1 والشكل 2.
1. اختيار
الوصول مقيد. يرجى تسجيل الدخول أو بدء فترة تجريبية لعرض هذا المحتوى.
النتائج
تنجح إعادة البناء الكهروضوئية عندما لا يكون هناك تعرج عند فك الوريد البابي ، ويتم ترشيح الكبد بشكل موحد. يجب أن يكون وقت الكبد أقل من 20 دقيقة ، لأن الأوقات الكبدية التي تتجاوز 25 دقيقة تزيد من خطر وفاة الفئران. تعتبر إعادة بناء IHIVC ناجحة إذا لم يكن هناك قلس دم من الكسب غير المشروع.
يؤدي تخزين الكسب غير المشروع في درجات حرارة باردة لمدة 1 ساعة باستخدام محلول الحفاظ على الأعضاء إلى مستوى مصل ألانين أمينوترانسفيراز يبلغ حوالي 2000 وحدة / لتر عند 6 ساعات بعد إعادة الإرواء (.......
الوصول مقيد. يرجى تسجيل الدخول أو بدء فترة تجريبية لعرض هذا المحتوى.
المناقشة
تعلم إعادة بناء الأوعية الدموية هو الجانب الأكثر تحديا لتحقيق نجاح MOLT. تؤثر جودة الكفة بشكل كبير على صعوبة إعادة الإعمار ، نظرا لصغر حجم الفئران5. توفر هذه المقالة بروتوكولا مفصلا لإعداد الكفة وتعلقها وإعادة بنائها.
على الرغم من عدم وجود اختلافات كبيرة عن التقارير السابقة فيما يتعلق بإعداد الكفة والاتصال 2,5 ، إلا أنه يجب مراعاة بعض النقاط الثانوية. أولا ، يجب أن يقتصر سمك مقبض الكفة على حوالي 1/6 من المحيط ال.......
الوصول مقيد. يرجى تسجيل الدخول أو بدء فترة تجريبية لعرض هذا المحتوى.
الإفصاحات
ليس لدى أي مؤلفين أي تضارب في المصالح للكشف عنه.
شكر وتقدير
تم دعم هذا العمل من خلال البحث الأساسي JST لعام 2022 (الجمعية اليابانية للزرع).
....الوصول مقيد. يرجى تسجيل الدخول أو بدء فترة تجريبية لعرض هذا المحتوى.
المواد
| الاسم | الشركة | رقم فهرسي | التعليقات |
|---|---|---|---|
| 16 جرام قسطرة وريدية | TERUMO | SR-FF2032 | IHIVC صفعة |
| 20 جرام قسطرة وريدية | TERUMO | SR-FF1651 | PV صفعة |
| 8-0 جديلة الحرير | Natsume Seisakusho | CR9-80B2 | 8-0 الحرير |
| Belzer UW محلول التخزين البارد | سائل الحفاظ على الأعضاء Astellas | ||
| مشبك البلدغ | B BRAUN | FB329R | مشبك البلدغ |
| C57BL / 6 فئران ؛ | إيزوفلوران الشرقي بيو سيرفيس | ||
| فياتريس | مخدر | ||
| مايكرو أطراف حادة 0.1 مم × 0.06 مم ؛ | FST | 11253-20 | مستقيم الملقط الصغير |
| Serrefine المشبك قضيب مع قفل | FST | 18056-14 | قضيب مشبك |
| الوعاء Micro Serrefines ؛ | FST | 18055-4 | مشبك السفينة |
| رقم 11 شفرات احتياطية | شفرة شفرة السلامة الريشة | 11 | شفرة |
| مقص العيون ، مقبض دائري | B BRAUN | FD103R | Microscissor |
| حاوية بلاستيكية مستطيلة الشكل ؛ | Daiso | بطول 10 سم وعرض 15 سم وارتفاع 6 سم | |
| أطراف SuperGrip | FS T | 00649-11 | ملقط صغير منحني |
| SZX7 | أوليمبوس | SZX7 | مجهر |
| ملزمة | نيغاتاسيكي | 00505351 | أداة ميكانيكية لتأمين ملقط البازلاء على الطاولة |
المراجع
- Qian, S. G., Fung, J. J., Demetris, A. V., Ildstad, S. T., Starzl, T. E. Orthotopic liver transplantation in the mouse. Transplantation. 52 (3), 562-564 (1991).
- Yokota, S., et al. Orthotopic mouse liver transplantation to study liver biology and allograft tolerance. Na....
الوصول مقيد. يرجى تسجيل الدخول أو بدء فترة تجريبية لعرض هذا المحتوى.
إعادة الطباعة والأذونات
الوسوم
