يتطلب اشتراك JoVE لعرض هذا المحتوى. تسجيل الدخول أو ابدأ نسخة تجريبية مجانية

مقالة منهجية

تربية أكسينيك ديليا أنتيكا مع الوجبات الغذائية المعقمة نصف المخمرة

1.4K مشاهدة

⸱

DOI:

10.3791/66259

⸱

ديسمبر 22, 2023

 ,  ,  ,  ,  ,  ,  , 

في هذه المقالة

ملخص

تم وصف إجراء بسيط لتربية أكسينيك ديليا أنتيكا مع الوجبات الغذائية المعقمة نصف المخمرة. تم الكشف عن سلالة Wolbachia واحدة فقط في كل من النجوم من Axenic D. antiqua باستخدام تفاعل البوليميراز المتسلسل.

الملخص

يتم الحصول على الحشرات المحورية من أنظمة التربية الاصطناعية المعقمة باستخدام وسائط معقمة. هذه الحشرات ، التي تتميز بصغر حجمها ، ودورة نموها القصيرة ، ومتطلبات التغذية المنخفضة ، مثالية لدراسة العلاقة بين الكائنات الحية الدقيقة والمضيفين. تؤثر ميكروبيوتا الأمعاء بشكل كبير على الخصائص الفسيولوجية لمضيفات الحشرات ، ويوفر إدخال سلالات معينة في الحشرات المحورية طريقة للتحقق من وظائف ميكروبات الأمعاء. Delia antiqua ، وهي آفة مهددة في رتبة Diptera ، وعائلة Anthomyiidae ، وجنس Delia ، تتغذى بشكل أساسي على البصل والثوم والكراث والخضروات الأخرى من عائلة Liliaceae. تتغذى يرقاتها على المصابيح ، مما يتسبب في تعفن وذبول وحتى موت نباتات بأكملها. من خلال تربية اليرقات المحورية ، يمكن إجراء دراسات متابعة لمراقبة آثار البكتيريا المعوية على نمو وتطور D. antiqua. على عكس الطريقة التي تنطوي على القضاء على المضادات الحيوية من الميكروبات المرتبطة بها ، تقدم هذه المقالة نهجا منخفض التكلفة وعالي الكفاءة لرفع axenic D. antiqua. بعد التعقيم السطحي لبيض D. antiqua ، تم استخدام وجبات معقمة نصف مخمرة لتربية اليرقات ، وتم التحقق من الحالة المحورية ل D. antiqua من خلال المقايسات المعتمدة على الثقافة والمستقلة عن الثقافة. في الختام ، فإن الجمع بين تعقيم بيض الحشرات وإعداد الوجبات الغذائية المعقمة لتربية اليرقات قد مكن من تطوير طريقة فعالة وبسيطة للحصول على axenic D. antiqua. توفر هذه الطريقة نهجا قويا لدراسة تفاعلات الحشرات والبكتيريا.

المقدمة

المحورية ، التي تعرف بأنها لا يمكن فيها اكتشاف كائنات دقيقة أو طفيليات قابلة للحياة ، هي نماذج تجريبية قيمة لدراسة تفاعلات الكائنات الحية الدقيقة المضيفة 1,2. الحشرات ، أكبر مجموعة من اللافقاريات ، يمكن أن تشكل علاقات تكافلية مع الكائنات الحية الدقيقة3. يمكن استخدام الحشرات المحورية لدراسة تفاعلات المضيف والتعايش في الأنظمة التكافلية4. على سبيل المثال ، أنشأ Nishide et al.5 إجراء عمليا لتربية الدودة ذات الرائحة الكريهة Plautia stali ، مما يتيح تحليلا موثوقا ودقيقا للتفاعلات بين المضيف والمتعايش في الأنظمة التكافلية النموذجية. يمكن....

الوصول مقيد. يرجى تسجيل الدخول أو بدء فترة تجريبية لعرض هذا المحتوى.

البروتوكول

يتم الحصول على D. antiqua من مجال Fanzhen ، تايان.

1. إعداد الوجبات الغذائية المعقمة

  1. انزع الطبقات الخارجية للبصل الأخضر وتخلص من الأوراق الخضراء. احتفظ بالجزء الأبيض من البصل الأخضر (الشكل 1 أ) واغسله بالماء المعقم ، كرر عملية الشطف ثلاث مرات. قطع الجزء الأبيض من البصل الأخضر إلى قطع مكعبات 1-2 سم باستخدام مقص (انظر جدول المواد) معقمة بمحلول EtOH بنسبة 75٪ (مذكور في الخطوة 2.5) لاستخدامها لاحقا.
  2. قم بوزن 50 جم من مكعبات البصل الأخضر وضعها في محضر الطعام (انظر جدول المواد). أضف 50 مل من الماء المعقم وطحنها خمس مرات لمدة 2 دقيقة لكل من....

الوصول مقيد. يرجى تسجيل الدخول أو بدء فترة تجريبية لعرض هذا المحتوى.

النتائج

يتم تصوير مراحل حياة D. antiqua في الشكل 4. تتكون دورة الحياة الكاملة من البيض واليرقات والخادرة (الشكل 4C) والبالغين (الشكل 4D). يتم زراعتها في أنابيب طرد مركزي معقمة ، ولا يمكن تمييز مظهرها ومعدل بقائها عن D. antiqua التي أثيرت في ظل ظروف غير محورية. يمكن العثور على أوقات النمو والتطور لكل مرحلة من مراحل D. antiqua في الشكل 6. مرحلة البيض من D. antiqua غير المرباة م.......

الوصول مقيد. يرجى تسجيل الدخول أو بدء فترة تجريبية لعرض هذا المحتوى.

المناقشة

تمتلك الحشرات ميكروبيوتا الأمعاءالمعقدة للغاية 20،21 ، مما يستلزم استخدام الحشرات المحورية الملقحة بسلالات ميكروبية معوية محددة لدراسة تفاعلات الحشرات والكائنات الحية الدقيقة. يعد تحضير الحشرات المحورية أمرا بالغ الأهمية لمثل هذه المساعي البحثية. العلاج بالمضادات الحيوية هو طريقة تستخدم للقضاء على ميكروبات الأمعاء. على سبيل المثال ، قام Jung و Kim22 بتغذية Spodoptera exigua بالبنسلين ، بينما قام Raymond23 ب.......

الوصول مقيد. يرجى تسجيل الدخول أو بدء فترة تجريبية لعرض هذا المحتوى.

الإفصاحات

ليس لدى المؤلفين أي تضارب في المصالح للكشف عنه.

شكر وتقدير

تم دعم هذا العمل من قبل المؤسسة الوطنية للعلوم الطبيعية في الصين (32272530) ، ومشروع السياسات العشرين الجديدة للجامعة في جينان (2021GXRC040) ، ومشاريع الابتكار العلمي والتكنولوجي الرئيسية في مقاطعة شاندونغ (2021TZXD002) ، ومشروع تكامل العلوم والتعليم بجامعة تشيلو للتكنولوجيا (2022PYI009 ، 2022PY016 ، 2022PT105).

....

الوصول مقيد. يرجى تسجيل الدخول أو بدء فترة تجريبية لعرض هذا المحتوى.

المواد

قائمة المواد المستخدمة في هذه المقالة
الاسمالشركةرقم فهرسيالتعليقات
0.22 & زجاجة فلتر MThermo Scientific450-0045
0.22 & مرشح حقنة MBiosharpBS-QT-011
غربال 100 شبكةZhejiang Shangyu Jinding مصنع غربال قياسيلا يوجد أرقام
1x حل PBSSolarbioP1020
2x Taq PCR Master MixGENVIEWGR1113-1ML
5.2٪ NaClOsolution Sinopharm Chemical Reagent Co.، Ltd.80010428
500 مل قارورة مخروطية ThermoScientific4103-0500
50 مل أنبوب طرد مركزي مهواة 50 ملJET BIOFILBRT-011-050
50x TAE عازلةGENVIEWGT1307
مسحوق أجاردينغ قوهDH010-1.1
حاضنة كيميائيةحيوية STIK21040121500010
غربال الخليةSAINING5022200
كلوريد الكولينسانغون التكنولوجيا الحيويةA600299-0100
ddH2< / sub>ODing GuoPER018-2
مدقة طحن يمكن التخلصمنها JET BIOFILCSP-003-002
طقم استخراج الحمض النوويSangon BiotechB518221-0050
علامة الحمض النوويSangon BiotechB600335-0250
الإيثانول المطلقسينوفارم الكاشف الكيميائي المحدودة10009218
ورق الترشيحNEWSTAR1087309025
معالج الطعامقوانغدونغ ميديا الحياة الكهربائية للأجهزة التصنيعية المحدودةWBL25B26
مضيئة   حاضنةشنغهاي ESTABLISHED Instrumentation Co.، Ltd.A16110768
L-Ascorbic acidSangon BiotechA610021-0100
مفرشة على شكل حرف LSAINING6040000
مغرات المغذيات المتوسطةHope BioHB0109
مقصBing Yu& nbsp ؛ BY-103الشراء على حاضنة Jingdong
ShockShanghai Zhichu Instrument Co.، Ltd.2020000014
السكروزGENVIEWCS326-500G
صبغة الحمض النووي الأخضرالفائقة BiosharpBS355A
طاولة فائقة النظافةقوة الشفاءAC130052 TSB
Hope BioHB4114
مضخة فراغتشجيانغ تايتشو تبحث عن مضخة فراغ دقيقة المحدودة22051031
مستخلص الخميرةLP0021Bالعلمي الحراري
كتالوج

المراجع

  1. Al-Asmakh, M., Zadjali, F. Use of germ-free animal models in microbiota-related research. Journal of Microbiology and Biotechnology. 25 (10), 1583-1588 (2015).
  2. Bhattarai, Y., Kashyap, P. C. Germ-free mice model for studying host-microbial interaction....

الوصول مقيد. يرجى تسجيل الدخول أو بدء فترة تجريبية لعرض هذا المحتوى.

إعادة الطباعة والأذونات

استكشف المزيد من المقالات

الحشرات المعقمةعلم البيئة الميكروبيةميكروبيوم الأمعاءتعقيم بيوض الحشراتتربية اليرقاتالفلورا الميكروبية المعويةالمقاييس المعتمدة على المزارعالتربية الخالية من المضادات الحيوية