تم وصف إجراء بسيط لتربية أكسينيك ديليا أنتيكا مع الوجبات الغذائية المعقمة نصف المخمرة. تم الكشف عن سلالة Wolbachia واحدة فقط في كل من النجوم من Axenic D. antiqua باستخدام تفاعل البوليميراز المتسلسل.
يتطلب اشتراك JoVE لعرض هذا المحتوى. تسجيل الدخول أو ابدأ نسخة تجريبية مجانية
مقالة منهجية
تم وصف إجراء بسيط لتربية أكسينيك ديليا أنتيكا مع الوجبات الغذائية المعقمة نصف المخمرة. تم الكشف عن سلالة Wolbachia واحدة فقط في كل من النجوم من Axenic D. antiqua باستخدام تفاعل البوليميراز المتسلسل.
يتم الحصول على الحشرات المحورية من أنظمة التربية الاصطناعية المعقمة باستخدام وسائط معقمة. هذه الحشرات ، التي تتميز بصغر حجمها ، ودورة نموها القصيرة ، ومتطلبات التغذية المنخفضة ، مثالية لدراسة العلاقة بين الكائنات الحية الدقيقة والمضيفين. تؤثر ميكروبيوتا الأمعاء بشكل كبير على الخصائص الفسيولوجية لمضيفات الحشرات ، ويوفر إدخال سلالات معينة في الحشرات المحورية طريقة للتحقق من وظائف ميكروبات الأمعاء. Delia antiqua ، وهي آفة مهددة في رتبة Diptera ، وعائلة Anthomyiidae ، وجنس Delia ، تتغذى بشكل أساسي على البصل والثوم والكراث والخضروات الأخرى من عائلة Liliaceae. تتغذى يرقاتها على المصابيح ، مما يتسبب في تعفن وذبول وحتى موت نباتات بأكملها. من خلال تربية اليرقات المحورية ، يمكن إجراء دراسات متابعة لمراقبة آثار البكتيريا المعوية على نمو وتطور D. antiqua. على عكس الطريقة التي تنطوي على القضاء على المضادات الحيوية من الميكروبات المرتبطة بها ، تقدم هذه المقالة نهجا منخفض التكلفة وعالي الكفاءة لرفع axenic D. antiqua. بعد التعقيم السطحي لبيض D. antiqua ، تم استخدام وجبات معقمة نصف مخمرة لتربية اليرقات ، وتم التحقق من الحالة المحورية ل D. antiqua من خلال المقايسات المعتمدة على الثقافة والمستقلة عن الثقافة. في الختام ، فإن الجمع بين تعقيم بيض الحشرات وإعداد الوجبات الغذائية المعقمة لتربية اليرقات قد مكن من تطوير طريقة فعالة وبسيطة للحصول على axenic D. antiqua. توفر هذه الطريقة نهجا قويا لدراسة تفاعلات الحشرات والبكتيريا.
المحورية ، التي تعرف بأنها لا يمكن فيها اكتشاف كائنات دقيقة أو طفيليات قابلة للحياة ، هي نماذج تجريبية قيمة لدراسة تفاعلات الكائنات الحية الدقيقة المضيفة 1,2. الحشرات ، أكبر مجموعة من اللافقاريات ، يمكن أن تشكل علاقات تكافلية مع الكائنات الحية الدقيقة3. يمكن استخدام الحشرات المحورية لدراسة تفاعلات المضيف والتعايش في الأنظمة التكافلية4. على سبيل المثال ، أنشأ Nishide et al.5 إجراء عمليا لتربية الدودة ذات الرائحة الكريهة Plautia stali ، مما يتيح تحليلا موثوقا ودقيقا للتفاعلات بين المضيف والمتعايش في الأنظمة التكافلية النموذجية. يمكن....
الوصول مقيد. يرجى تسجيل الدخول أو بدء فترة تجريبية لعرض هذا المحتوى.
يتم الحصول على D. antiqua من مجال Fanzhen ، تايان.
1. إعداد الوجبات الغذائية المعقمة
الوصول مقيد. يرجى تسجيل الدخول أو بدء فترة تجريبية لعرض هذا المحتوى.
يتم تصوير مراحل حياة D. antiqua في الشكل 4. تتكون دورة الحياة الكاملة من البيض واليرقات والخادرة (الشكل 4C) والبالغين (الشكل 4D). يتم زراعتها في أنابيب طرد مركزي معقمة ، ولا يمكن تمييز مظهرها ومعدل بقائها عن D. antiqua التي أثيرت في ظل ظروف غير محورية. يمكن العثور على أوقات النمو والتطور لكل مرحلة من مراحل D. antiqua في الشكل 6. مرحلة البيض من D. antiqua غير المرباة م.......
الوصول مقيد. يرجى تسجيل الدخول أو بدء فترة تجريبية لعرض هذا المحتوى.
تمتلك الحشرات ميكروبيوتا الأمعاءالمعقدة للغاية 20،21 ، مما يستلزم استخدام الحشرات المحورية الملقحة بسلالات ميكروبية معوية محددة لدراسة تفاعلات الحشرات والكائنات الحية الدقيقة. يعد تحضير الحشرات المحورية أمرا بالغ الأهمية لمثل هذه المساعي البحثية. العلاج بالمضادات الحيوية هو طريقة تستخدم للقضاء على ميكروبات الأمعاء. على سبيل المثال ، قام Jung و Kim22 بتغذية Spodoptera exigua بالبنسلين ، بينما قام Raymond23 ب.......
الوصول مقيد. يرجى تسجيل الدخول أو بدء فترة تجريبية لعرض هذا المحتوى.
ليس لدى المؤلفين أي تضارب في المصالح للكشف عنه.
تم دعم هذا العمل من قبل المؤسسة الوطنية للعلوم الطبيعية في الصين (32272530) ، ومشروع السياسات العشرين الجديدة للجامعة في جينان (2021GXRC040) ، ومشاريع الابتكار العلمي والتكنولوجي الرئيسية في مقاطعة شاندونغ (2021TZXD002) ، ومشروع تكامل العلوم والتعليم بجامعة تشيلو للتكنولوجيا (2022PYI009 ، 2022PY016 ، 2022PT105).
....الوصول مقيد. يرجى تسجيل الدخول أو بدء فترة تجريبية لعرض هذا المحتوى.
| الاسم | الشركة | رقم فهرسي | التعليقات |
|---|---|---|---|
| 0.22 & زجاجة فلتر M | Thermo Scientific | 450-0045 | |
| 0.22 & مرشح حقنة M | Biosharp | BS-QT-011 | |
| غربال 100 شبكة | Zhejiang Shangyu Jinding مصنع غربال قياسي | لا يوجد أرقام | |
| 1x حل PBS | Solarbio | P1020 | |
| 2x Taq PCR Master Mix | GENVIEW | GR1113-1ML | |
| 5.2٪ NaClO | solution Sinopharm Chemical Reagent Co.، Ltd. | 80010428 | |
| 500 مل قارورة مخروطية Thermo | Scientific | 4103-0500 | |
| 50 مل أنبوب طرد مركزي مهواة 50 مل | JET BIOFIL | BRT-011-050 | |
| 50x TAE عازلة | GENVIEW | GT1307 | |
| مسحوق أجار | دينغ قوه | DH010-1.1 | |
| حاضنة كيميائية | حيوية STIK | 21040121500010 | |
| غربال الخلية | SAINING | 5022200 | |
| كلوريد الكولين | سانغون التكنولوجيا الحيوية | A600299-0100 | |
| ddH2< / sub>O | Ding Guo | PER018-2 | |
| مدقة طحن يمكن التخلص | منها JET BIOFIL | CSP-003-002 | |
| طقم استخراج الحمض النووي | Sangon Biotech | B518221-0050 | |
| علامة الحمض النووي | Sangon Biotech | B600335-0250 | |
| الإيثانول المطلق | سينوفارم الكاشف الكيميائي المحدودة | 10009218 | |
| ورق الترشيح | NEWSTAR | 1087309025 | |
| معالج الطعام | قوانغدونغ ميديا الحياة الكهربائية للأجهزة التصنيعية المحدودة | WBL25B26 | |
| مضيئة حاضنة | شنغهاي ESTABLISHED Instrumentation Co.، Ltd. | A16110768 | |
| L-Ascorbic acid | Sangon Biotech | A610021-0100 | |
| مفرشة على شكل حرف L | SAINING | 6040000 | |
| مغرات المغذيات المتوسطة | Hope Bio | HB0109 | |
| مقص | Bing Yu | & nbsp ؛ BY-103 | الشراء على حاضنة Jingdong |
| Shock | Shanghai Zhichu Instrument Co.، Ltd. | 2020000014 | |
| السكروز | GENVIEW | CS326-500G | |
| صبغة الحمض النووي الأخضر | الفائقة Biosharp | BS355A | |
| طاولة فائقة النظافة | قوة الشفاء | AC130052 TSB | |
| Hope Bio | HB4114 | ||
| مضخة فراغ | تشجيانغ تايتشو تبحث عن مضخة فراغ دقيقة المحدودة | 22051031 | |
| مستخلص الخميرة | LP0021B | العلمي الحراري |
الوصول مقيد. يرجى تسجيل الدخول أو بدء فترة تجريبية لعرض هذا المحتوى.