يتطلب اشتراك JoVE لعرض هذا المحتوى. تسجيل الدخول أو ابدأ نسخة تجريبية مجانية

مقالة منهجية

طريقة فلورسنت خالية من الخلايا قابلة للقياس الكمي وغير مكلفة لتأكيد قدرة المركبات الجديدة على تخمير الحديد

1.2K مشاهدة

⸱

DOI:

10.3791/66421

⸱

فبراير 23, 2024

 ,  , 
1Department of Applied Sciences, Faculty of Health and Life Sciences, Northumbria University

في هذه المقالة

ملخص

وصفنا مقايسة الفلورسنت التي يمكن أن تؤكد بسرعة وبتكلفة زهيدة قدرة المركبات الجديدة على تخليب الحديد. يقيس الفحص قدرة المركبات على التفوق على نشاط ربط الحديد لمسبار الفلورسنت المخلب الضعيف للحديد Calcein ، مما يؤدي إلى زيادة قابلة للقياس الكمي في التألق عند حدوث الاستخلاب.

الملخص

تتطلب الخلايا السرطانية كميات كبيرة من الحديد للحفاظ على انتشارها. يعتبر استقلاب الحديد سمة مميزة للسرطان ، مما يجعل الحديد هدفا صالحا للنهج المضادة للسرطان. يتطلب تطوير مركبات جديدة وتحديد الخيوط لمزيد من التعديل إجراء فحوصات إثبات الآلية. وهناك العديد من المقايسات لتقييم الأثر على الانتشار؛ ومع ذلك ، فإن القدرة على تخليب الحديد هي مقياس مهم وأحيانا يتم تجاهله في نقطة النهاية بسبب ارتفاع تكاليف المعدات والتحدي المتمثل في تحديد قوة الاستخلاب بسرعة وبشكل متكرر. هنا ، نصف طريقة فلورية خالية من الخلايا قابلة للقياس الكمي وغير مكلفة لتأكيد قدرة المركبات الجديدة على تخليب الحديد. يعتمد فحصنا على صبغة الفلورسنت غير المكلفة المتاحة تجاريا Calcein ، والتي يمكن قياس مضانها على معظم قارئات ألواح المعايرة الدقيقة الفلورية. Calcein هو مخلب حديدي ضعيف ، ويتم إخماد مضانه عندما يربط Fe2 +/3+ ؛ يتم استعادة التألق عندما يتفوق مخلب جديد على Calcein في Fe2 +/3+. تسمح إزالة التبريد الفلوري والزيادة الناتجة في التألق بتحديد قدرة الاستخلاب لمخلب مفترض جديد. لذلك ، نحن نقدم مقايسة غير مكلفة وعالية الإنتاجية تسمح بالفحص السريع لمركبات المخلب المرشحة الجديدة.

المقدمة

يشار الآن إلى التغيرات الظاهرية للخلايا التي تتعلق بتطور السرطان من خلال مجموعة مشتركة من القدرات البيولوجية المتغيرة على أنها السمات المميزة للسرطان. من بينها التغييرات الناتجة عن إعادة برمجة استقلاب الطاقة ، والتي تنتشر على نطاق واسع في بيولوجيا الخلايا السرطانية1. تتضمن إعادة البرمجة الأيضية هذه زيادة متطلبات الحديد لدعم الانتشار السريع ونمو الورم2. يؤدي هذا التعطش للحديد إلى استقلاب الحديد غير المنظم ، والذي يعتبر في حد ذاته سمة مميزة للسرطان 3,4 ، مع حدوث خلل في جميع المراحل5. تشمل السمات المميزة للورم الخبيث ، التي اقترحها ويلش وهيرست مؤخرا ، دورا للحديد6 لأن الحديد يمكن أن يحفز الإجهاد التأكسدي ، وهذا بدوره يمكن أن يتوسط في التغييرات في الجينوم والإبيجينوم والبروتين ، مما يعزز إمكانية ورم خبيث7. تم إثبات وجود صلة بين مستويات الحديد وزيادة حدوث السرطان من خلال الدراسات الوبائية8.

نظرا لأن الخلايا السرطانية تتطلب كميات كبيرة من الحديد ، فهي عرضة لنقص الحديد ، وبالتالي استخلاب الحديد. لقد نشرنا مؤخرا مقالة مراجعة تسلط الضوء على إمكانية استخلاب الحديد في عكس العديد من السمات المميزة للسرطان من خلال NDRG1 الذي يعطل مسارات الإشارات السرطانية9. ومع ذلك ، فإن استخدام استخلاب الحديد كعلاج مستقل للسرطان لم يسفر عن نتائج إيجابية في التجارب السريرية بسبب سميتها ، وعمر النصف القصير ، والتمثيل الغذائي السريع ، وآليات المقاومة الناشئة. ومع ذلك ، فقد أظهرت مخلبات الحديد واعدة في التحقيقات في المختبر وفي الجسم الحي ، مما يشير إلى أن هناك حاجة إلى مزيد من العمل لتطوير مخلبات الحديد الفعالة لعلاج السرطان. استخلاب الحديد المحدد هو استراتيجية تم التحقق من صحتها في اكتشاف الأدوية المضادة للسرطان ، ولكن تم الإبلاغ عن عدد قليل فقط من الفئات حتى الآن10.

يتطلب تحديد وتوصيف مخلبات الحديد الجديدة القدرة على قياس تأثيرها على العديد من نقاط النهاية. يتم قياس العديد من هذه (مثل الانتشار ، موت الخلايا المبرمج ، تكوين أنواع الأكسجين التفاعلية) بشكل روتيني وقد تم تحديدها ومراجعتها في الأدبيات كطرق لتقييم السمات المميزة للسرطان11. عند تقييم مخلب الحديد الجديد ، تقوم العديد من المجموعات بشكل روتيني بفحص التأثير على الأنشطة المضادة للتكاثر والاختزال وكذلك التأثيرات على تدفق الحديد أو تدفقه. في تقنيات التنبؤ بالسيليكو 12 زيادة المجموعة المتزايدة من مخلبات الحديد التي يمكن فحصها.

يتطلب إنشاء Sمن مخلبات الحديد القدرة على قياس تأثيرها على مستويات الحديد كوسيلة لإثبات إثبات المبدأ بشكل فعال. حاليا ، الطريقة الأكثر شيوعا للقيام بذلك هي قياس التدفقالخلوي 13 وهو مكلف ويستغرق وقتا طويلا ولا يمكن قياسه كميا. غالبا ما يعتمد اختيار الفحص على توفر المعدات التجريبية والسرعة وتكلفة الفحص. لذلك ، يمكن أن تكون القدرة على تخليب الحديد مقياسا لنقطة النهاية يتم التغاضي عنه بسبب ارتفاع تكاليف المعدات والتحدي المتمثل في تحديد قوة الاستخلاب بسرعة وبشكل متكرر. هنا ، نصف طريقة فلورسنت خالية من الخلايا قابلة للقياس الكمي وغير مكلفة لتأكيد قدرة المركبات الجديدة على تخليب الحديد.

الوصول مقيد. يرجى تسجيل الدخول أو بدء فترة تجريبية لعرض هذا المحتوى.

البروتوكول

1. إعداد حل الأسهم

  1. عند تحضير حلول مخزون Calcein ، امنع تدهور الصورة عن طريق إبقاء المحاليل في الظلام. قم بإعداد محلول 1 مللي متر من الكالسيين في برنامج تلفزيوني من Dulbecco ، بدون المغنيسيوم أو الكالسيوم14. للحصول على 5 مل من محلول 1 مللي مول Calcein ، أضف 3.1 مجم من الكالسيين (622.5 جم / م) إلى 5 مل من برنامج تلفزيوني Dulbecco. باستخدام جورب 1 مليمتر من الكالسيين ، قم بإعداد حصص 1 مل من محاليل المخزون الثانوية في أنبوب الميكروفوج كما هو مفصل في الجدول 1.
  2. تحضير مخزون سداسي هيدرات كبريتات الأمونيوم الحديديك عن طريق إذابة 19 ملغ من سداسي هيدرات FAS (392.1 جم / م) في 5 مل من برنامج PBS الخاص ب Dulbecco للحصول على محلول كبريتات الأمونيوم الحديديك (FAS) 10 mM. إعداد المخزونات الثانوية من FAS عن طريق التخفيف. لتحضير مخزون 2 مللي متر FAS (fA) ، قم بتخفيف 200 ميكرولتر من مخزون FAS 10 mM مع PBS مع 800 ميكرولتر من PBS من Dulbecco. لإعداد مخزون من 100 ميكرومتر FAS (fB) تمييع 50 ميكرولتر من الأسهم fA مع 950 ميكرولتر من PBS Dulbecco.
  3. لتحضير 10 ملليمتر من مخزون ديفيريبرون، قم بإذابة 2.8 مجم (139.15 جم/م) في 2 مل من برنامج دولبيكو الإذاعي. قم بإعداد مخزون ثانوي من مخلب الحديد 2 مللي متر عن طريق تخفيف 200 ميكرولتر من مخزون 10 مللي متر مع 800 ميكرولتر من برنامج تلفزيوني من Dulbecco.
    ملاحظة: في هذا الفحص ، يجب إذابة مخلب الحديد المفضل في برنامج تلفزيوني من Dulbecco بدون المغنيسيوم أو الكالسيوم. كنموذج عملي ، استخدمنا مخلب الحديد Deferiprone.

2. التحقق من صحة الفحص عن طريق تحديد النطاق الخطي لمضان الكالسيين

  1. قم بإعداد مجموعة من مخزونات الكالسيين من 1 mM إلى 1 μM كما هو موضح في جدول محلول المخزون (انظر الجدول 1). حافظ على حلول المخزون في الظلام لمنع التدهور الكيميائي الضوئي.
  2. ماصة 90 ميكرولتر من محلول ملحي مخزن بالفوسفات (PBS) إلى الآبار من A إلى H و 1 إلى 12 من لوحة بئر 96 باستخدام ماصة يدوية أحادية القناة أو ماصة يدوية متعددة القنوات.
  3. أضف 10 ميكرولتر من مخزون 1 mM Calcein إلى العمود 12 ، الصفوف من A إلى H ، من لوحة البئر 96 باستخدام ماصة يدوية أحادية القناة.
  4. أضف 10 ميكرولتر من مخزون الكالسيين 800 ميكرومتر المعد مسبقا (الجدول 1) إلى صفيحة بئر 96 في العمود 11 ، الصفوف من A إلى H ، باستخدام ماصة يدوية أحادية القناة.
  5. كرر إجراء الإضافة مع المخزونات من الجدول 1 بحيث يحتوي العمود 10 على 10 ميكرولتر من مخزون 400 ميكرومتر ، ويحتوي العمود 9 على 10 ميكرولتر من مخزون 200 ميكرومتر وما إلى ذلك. استمر في هذا الإجراء التدريجي عبر الأعمدة حتى يحتوي العمود 2 على 10 ميكرولتر من مخزون 1 ميكرومتر.
    ملاحظة: التركيز النهائي للكالسيين في كل بئر أقل بمقدار 10 أضعاف من محاليل المخزون بسبب التخفيف 1:10.
  6. أضف 10 ميكرولتر من PBS إلى العمود 1 ، الصف A إلى E.
  7. احتضان في درجة حرارة الغرفة لمدة 30 دقيقة واضبط المحلل على قارئ الصفائح الدقيقة على إثارة 490 نانومتر واكتشاف 530 نانومتر (أو مجموعة مرشح مناسبة لمضان الكالسيان).

3. التحقق من صحة الفحص عن طريقالتبريد الأيوني Fe2+ لتقليل مضان الكالسيين

  1. قم بإعداد مخزون Calcein (cB) بمقدار 10 ميكرومتر ومخزون FAS (fA) يبلغ 2 مللي متر (انظر جدول المواد). احتفظ بمخزون Calcein في الظلام لمنع التحلل الضوئي.
  2. باستخدام ماصة يدوية أحادية القناة أو ماصة يدوية متعددة القنوات ، أضف 50 ميكرولتر من PBS إلى الأعمدة من 2 إلى 10 ، الصفوف من A إلى E. لا تقم بإضافة PBS إلى العمود 11.
  3. أضف 100 ميكرولتر من مخزون FAS (fA) البالغ 2 مللي متر إلى صفيحة بئر 96 في العمود 11 (الصفوف من A إلى E) باستخدام ماصة يدوية أحادية القناة.
  4. باستخدام ماصة يدوية متعددة القنوات ، قم بإزالة 50 ميكرولتر من fA من العمود 11 وماصة في PBS الموجود بالفعل في العمود 10 ، واخلطها جيدا عن طريق الماصة.
  5. استمر في إجراء التخفيف المزدوج التدريجي هذا عبر الأعمدة 9-2 ، الصفوف من A إلى E من لوحة البئر 96 ، واخلطها عن طريق الماصة.
  6. قم بإزالة 50 ميكرولتر من المحلول عن طريق السحب من العمود 2 وتخلص من المحلول للنفايات.
  7. أضف 40 ميكرولتر من PBS إلى جميع الآبار مع وجود محلول فيها ، الأعمدة 2-12 ، الصفوف من A إلى E.
  8. أضف 90 ميكرولتر من PBS إلى عمود الآبار 1 ، الصفوف من A-E. تعمل هذه الآبار كتحكم إيجابي في 1 ميكرومتر Calcein و 0 μM FAS.
  9. أضف 10 ميكرولتر من مخزون الكالسيين 10 ميكرومتر (cB) إلى كل بئر بمحلول فيه (الأعمدة من 1 إلى 12 ، الصفوف من A إلى E). ينتج عن هذا تركيز أعلى قدره 1000 ميكرومتر FAS في العمود 11 ، مع انخفاض تركيز FAS إلى النصف للأعمدة 10 و 9 و 8 عبر العمود 2. يحتوي كل بئر من الآبار الناتجة من الأعمدة على 1 ميكرومتر Calcein وتخفيف FAS.
  10. أضف 100 ميكرولتر من PBS إلى الصف F من الأعمدة من 1 إلى 5 لعنصر تحكم PBS وحده. أضف 100 ميكرولتر من 2 mM من FAS إلى الصف F من الأعمدة من 6 إلى 10 للتحكم في FAS وحده. احتضان في درجة حرارة الغرفة لمدة 10 دقائق في الظلام.
  11. قم بالتحليل على قارئ صفيحة مجهرية مضبوط على إثارة 490 نانومتر واكتشاف 530 نانومتر (أو مجموعة مرشح مناسبة لمضان الكالسيين).

4. مقايسة لتحديد قدرة مخلبات الحديد على التفوق على المخلب الضعيف Calcein لأيونات Fe2+

  1. قم بإعداد مخزون Calcein (cB) من 10 μM ، ومخزون FAS (fB) من 100 μM ومخزون مخلب الحديد من 2 mM كما هو موضح في الجدول 1. احتفظ بمخزون Calcein في الظلام لمنع التحلل الضوئي.
  2. باستخدام ماصة يدوية أحادية القناة أو ماصة يدوية متعددة القنوات ، أضف 50 ميكرولتر من PBS إلى الأعمدة من 2 إلى 10 ، الصفوف من A إلى E ، من لوحة بئر 96. لا تقم بإضافة PBS إلى العمود 11.
  3. أضف 100 ميكرولتر من مخزون 2 مللي متر (fA) من مخلبات الحديد ، إلى صفيحة بئر 96 في العمود 11 ، الصفوف من A إلى E باستخدام ماصة يدوية أحادية القناة.
  4. باستخدام ماصة يدوية متعددة القنوات ، قم بإزالة 50 ميكرولتر من fA من العمود 11 وماصة في PBS في العمود 10 ، الصفوف من A إلى E ، واخلطها جيدا عن طريق الماصة.
  5. استمر في إجراء التخفيف المزدوج التدريجي هذا عبر الأعمدة المتبقية 9-2 ، الصفوف من A إلى E من اللوحة ، وامزج كل بئر عن طريق الماصة. قم بإزالة 50 ميكرولتر من العمود 2 وتجاهلها. وهذا يضمن تخفيفا مزدوجا قدره 2 مللي متر من مخلب الحديد (Deferiprone) عبر 96 عمودا من صفيحة البئر من 11 إلى 2 ، الصفوف من A إلى E.
  6. ماصة 30 ميكرولتر من PBS في جميع الآبار مع محلول فيها (على سبيل المثال ، الأعمدة 2-11 الصفوف من A إلى E).
  7. باستخدام ماصة متعددة القنوات ، أضف 10 ميكرولتر من مخزون FAS 100 ميكرومتر (fB) في الأعمدة 2-12 ، الصفوف من A إلى E. ينتج عن هذا تركيز 1 ميكرومتر كالسيين و 10 ميكرومتر FAS في كل بئر ، وتخفيف مزدوج للمخلبات ، مع تركيز كل عمود إلى النصف عبر اللوحة ، الأعمدة 11-2 ، مع أعلى تركيز لمخلب الحديد عند 1000 ميكرومتر في العمود 11 من الآبار من A إلى E.
  8. باستخدام ماصة متعددة القنوات ، أضف 10 ميكرولتر من مخزون Calcein 10 μM (cB) في الأعمدة 2-12 ، الصفوف من A إلى E.
  9. ماصة 80 ميكرولتر من PBS و 10 ميكرولتر من مخزون Calcein (cB) و 10 ميكرولتر من مخزون FAS (fB) إلى العمود 1 ، الصفوف A-E باستخدام ماصة. امزج العينات عن طريق الماصة. يوفر هذا التحكم في 1 ميكرومتر Calcein مع 10 ميكرومتر FAS ولا يوجد مخلب.
  10. ماصة 100 ميكرولتر من PBS في أعمدة الصف F من 1 إلى 5. هذا يوفر التحكم السلبي في PBS.
  11. أضف 100 ميكرولتر من 2 mM من مخلب الحديد (Deferiprone) إلى الصف F ، الأعمدة من 6 إلى 10. هذا يوفر التحكم في المخلب وحده.
  12. احتضان في درجة حرارة الغرفة لمدة 10 دقائق في الظلام. قم بالتحليل على قارئ صفيحة مجهرية متعدد الوسائط مضبوط على الإثارة عند 490 نانومتر والكشف عند 530 نانومتر (أو مجموعة مرشح مناسبة لمضان الكالسيان).

5. تحليل البيانات

  1. تحليل للتحقق من صحة الفحص عن طريق تحديد النطاق الخطي لمضان الكالسيين.
    1. احسب متوسط وحدات التألق النسبية (RFU) للصفوف A-H لكل تركيز من الكالسيين في أعمدة صفيحة البئر 96 من الخطوة 1 وارسم مقابل التركيز. ارسم الرسم البياني الخطي لتركيز Calcein على المحور x مقابل متوسط RFU على المحور y واستخدم الانحدار الخطي لتوفير خط أفضل ملاءمة.
    2. تحديد الدلالة الإحصائية من خلال مقارنة تركيزات الكالسيين في كل عمود (2-11) بالتحكم في PBS في صفوف العمود 1 من A إلى E. قم بإجراء تحليل التباين (ANOVA) وتطبيق التحليل اللاحق باستخدام الفرق الأقل أهمية (LSD) مع عتبة p <0.001 لتحديد الدلالة الإحصائية ، (يشار إليها ب ** في الشكل 1).
  2. تحليل للتحقق من صحة الفحص بواسطة التبريد الأيوني Fe2+ لتقليل مضان الكالسيين.
    1. احسب متوسط وحدات التألق النسبية (RFU) للصفوف من A إلى E لكل تركيز من FAS في الأعمدة 2-11. مخطط متوسط RFU لكل تركيز FAS على المحور ص. على تركيزات مخطط المحور السيني ل FAS باستخدام مقياس Log2 حيث يقوم بتوزيع البيانات بشكل أفضل. ارسم خطا مناسبا باستخدام الانحدار الخطي.
    2. حدد الدلالة الإحصائية من خلال مقارنة كل عمود يعني متوسط RFU للتحكم في PBS ، 1 μM Calcein ، 0 μM FAS (العمود 1 الصف A إلى E). قم بإجراء تحليل ANOVA مع تحليل LSD اللاحق مع عتبة p <0.001 لتحديد الدلالة الإحصائية.
  3. تحليل للفحص: تحديد قدرة مخلبات الحديد على التفوق على المخلب الضعيف Calcein لأيونات Fe2+ .
    1. احسب متوسط وحدات التألق النسبية (RFU) للصفوف من A إلى E لكل تركيز من المخلب في الأعمدة 2-11. مخطط متوسط RFU لكل تركيز مخلب على المحور ص. على المحور السيني ، يتم رسم تركيزات المخلب باستخدام مقياس Log2 لأنه يوزع البيانات بشكل أفضل.
    2. تحديد الدلالة الإحصائية من خلال مقارنة كل عمود يعني متوسط RFU للتحكم في PBS 1 μM Calcein و 10 μM FAS (العمود 1 الصف A إلى E). قم بإجراء تحليل ANOVA مع تحليل LSD اللاحق مع عتبة p <0.001 لتحديد الدلالة الإحصائية.

الوصول مقيد. يرجى تسجيل الدخول أو بدء فترة تجريبية لعرض هذا المحتوى.

النتائج

بالنسبة للطريقة الموضحة في الخطوة 2 ، حددت هذه التجربة الأولى (الشكل 1) النطاق الخطي لقارئ لوحة مضان المعايرة الدقيقة عند اكتشاف انبعاثات الفلورسنت Calcein. تظهر نتائجنا التمثيلية نطاقا خطيا واسعا من مضان الكالسيين من 0-100 ميكرومتر. يوضح تحليل ANOVA مع LSD اللاحق أن هناك فروقا ذات دلالة إحصائية في متوسط RFU لجميع تركيزات الكالسيين عند مقارنتها بعنصر تحكم قدره 0 ميكرومتر من الكالسين. في تجارب أخرى ، تم استخدام 1 ميكرومتر Calcein (الخطوتان 3 و 4) لأنه ينتج اختلافات ذات دلالة إحصائية عن عنصر ا...

الوصول مقيد. يرجى تسجيل الدخول أو بدء فترة تجريبية لعرض هذا المحتوى.

المناقشة

إن الاعتماد المفرط للسرطانات على الحديد لتغذية عملية التمثيل الغذائي يجعل استخلاب الحديد إضافة محتملة للأنظمة العلاجية4. ومع ذلك ، هناك قدرة محدودة على فحص مخلبات الأيونات المعدنية الجديدة بسرعة لقدرتها على ربط أيونات الحديد. من المعروف أن مسبار الفلورسنت Calcein الشائع الاستخدام والمتاح على نطاق واسع يعمل كمخلب حديدي ضعيف وملزم بواسطة أيونات الحديد يروي مضان Calcein. يمكن بعد ذلك استعادة التألق من خلال التنافس على الارتباط بالحديد باستخدام مخلب حديدي أقوى. إن الح...

الوصول مقيد. يرجى تسجيل الدخول أو بدء فترة تجريبية لعرض هذا المحتوى.

الإفصاحات

يعلن أصحاب البلاغ عدم وجود تضارب في المصالح.

شكر وتقدير

نود أن نشكر جامعة نورثمبريا على دعمها.

الوصول مقيد. يرجى تسجيل الدخول أو بدء فترة تجريبية لعرض هذا المحتوى.

المواد

قائمة المواد المستخدمة في هذه المقالة
الاسمالشركةرقم فهرسيالتعليقات
حديد الأمونيوم (II) كبريتات سداسي هيدراتسيجما ألدريتش215406حكمة أخرى تعرف باسم FAS
CalceinSigma-AldrichC0875
DeferiproneSigma-Aldrich379409
Dulbecco & prime; s فوسفات مخزن محلول ملحيSigma-AldrichD5652المغنيسيوم والحرة من الكالسيوم
Greiner CELLSTAR 96 ألواح بئرSigma-AldrichM0812أي لوحة بئر 96 شفافة بصريا ستعمل

المراجع

  1. Hsu, P. P., Sabatini, D. M. Cancer cell metabolism: Warburg and beyond. Cell. 134 (5), 703-707 (2008).
  2. Hsu, M. Y., Mina, E., Roetto, A., Porporato, P. E. Iron: An essential element of cancer metabolism. Cells. 9 (12), 2591(2020).
  3. Torti, S. V., Torti, F. M. Iron and cancer: More ore to be mined. Nat Rev Cancer. 13 (5), 342-355 (2013).
  4. Zhang, C., Zhang, F. Iron homeostasis and tumorigenesis: Molecular mechanisms and therapeutic opportunities. Protein Cell. 6 (2), 88-100 (2015).
  5. Torti, S. V., Manz, D. H., Paul, B. T., Blanchette-Farra, N., Torti, F. M. Iron and cancer. Annu Rev Nutr. 38, 97-125 (2018).
  6. Welch, D. R., Hurst, D. R. Defining the hallmarks of metastasis. Cancer Res. 79 (12), 3011-3027 (2019).
  7. Lehmann, U., et al. Epigenetic defects of hepatocellular carcinoma are already found in non-neoplastic liver cells from patients with hereditary haemochromatosis. Hum Mol Genet. 16 (11), 1335-1342 (2007).
  8. Fonseca-Nunes, A., Jakszyn, P., Agudo, A. Iron and cancer risk--a systematic review and meta-analysis of the epidemiological evidence. Cancer Epidemiol Biomarkers Prev. 23 (1), 12-31 (2014).
  9. Abdelaal, G., Veuger, S. Reversing oncogenic transformation with iron chelation. Oncotarget. 12 (2), 106-124 (2021).
  10. Brown, R. A. M., et al. Altered iron metabolism and impact in cancer biology, metastasis, and immunology. Front Oncol. 10, 476(2020).
  11. Menyhárt, O., et al. Guidelines for the selection of functional assays to evaluate the hallmarks of cancer. Biochim Biophys Acta. 1866 (2), 300-319 (2016).
  12. Basu, A., et al. Discovering novel and diverse iron-chelators in silico. J Chem Inf Model. 56 (12), 2476-2485 (2016).
  13. Prus, E., Fibach, E. Flow cytometry measurement of the labile iron pool in human hematopoietic cells. Cytometry A. 73 (1), 22-27 (2008).
  14. Cold Spring Harb. Phosphate-buffered saline (pbs). 2006 (1), Cold Spring Harb Prot. (2006).
  15. Kontoghiorghes, G. J., Pattichis, K., Neocleous, K., Kolnagou, A. The design and development of deferiprone (l1) and other iron chelators for clinical use: Targeting methods and application prospects. Curr Med Chem. 11 (16), 2161-2183 (2004).

الوصول مقيد. يرجى تسجيل الدخول أو بدء فترة تجريبية لعرض هذا المحتوى.

إعادة الطباعة والأذونات

الوسوم

استخلاب الحديدمقايسة فلوريةاستقلاب السرطانمستخلبات الحديدفلورية الكالسئينقارئ الأطباق الدقيقةالفحص عالي الإنتاجيةكبريتات أمونيوم الحديديكمقايسة خالية من الخلايا
طريقة فلورسنت خالية من الخلايا قابلة للقياس الكمي وغير مكلفة لتأكيد قدرة المركبات الجديدة على تخمير الحديد
تواصل معنا
أوصِ به للمكتبة

الخصوصية

شروط الاستخدام

السياسات

حقوق الطبع والنشر © 2026 MyJoVE Corporation. جميع الحقوق محفوظة.