هنا ، نصف بروتوكولا للإنشاء الجراحي لإصابة فقدان العضلات الحجمي (VML) في مدع الفئران ، مما يوفر نموذجا قابلا للتكرار ويمكن الوصول إليه لدراسة إصابات العضلات القحفية الوجهية وعلاجها باستخدام المواد الحيوية مثل الهيدروجيل الجديد.
يتطلب اشتراك JoVE لعرض هذا المحتوى. تسجيل الدخول أو ابدأ نسخة تجريبية مجانية
مقالة منهجية
نموذج القوارض لفقدان العضلات الحجمي لدراسة مواد الهندسة الحيوية
في هذه المقالة
ملخص
الملخص
يمكن أن تحدث إصابات فقدان العضلات الحجمي القحفية الوجهية (VML) نتيجة للصدمات الشديدة والاستئصال الجراحي والالتهاب والحالات الخلقية أو غيرها من الحالات المكتسبة. يتضمن علاج VML القحفي الوجهي نقل العضلات الجراحي والوظيفي. ومع ذلك ، فإن هذه الإجراءات غير قادرة على استعادة الوظيفة الطبيعية أو الإحساس أو التعبير ، والأكثر شيوعا ، لا يتم علاج هذه الحالات. تم إجراء القليل جدا من الأبحاث حول تجديد العضلات الهيكلية في النماذج الحيوانية ل VML القحفية الوجهية. تصف هذه المخطوطة نموذجا للفئران لدراسة إصابة VML في القحف الوجهي وبروتوكولا للتقييم النسيجي للمواد الحيوية في علاج هذه الإصابات. يتم تطبيق الهيدروجيل السائل والسقالات المجففة بالتجميد في وقت إنشاء VML الجراحي ، ويتم استئصال المضغات في نقاط زمنية نهائية تصل إلى 12 أسبوعا مع معدلات احتفاظ عالية ومضاعفات ضئيلة. يستخدم الهيماتوكسيلين واليوزين (HE) ، وثلاثي اللون ماسون ، والتحليل الكيميائي المناعي لتقييم معلمات تجديد العضلات الهيكلية بالإضافة إلى التوافق الحيوي والتعديل المناعي. بينما نوضح دراسة هيدروجيل قائم على حمض الهيالورونيك ، يوفر هذا النموذج وسيلة لتقييم التكرارات اللاحقة للمواد في إصابات VML.
المقدمة
يمكن أن تؤدي الصدمات الشديدة والاستئصال الجراحي والالتهاب والحالات المكتسبة الأخرى إلى درجة من فقدان الأنسجة تطغى على آليات إصلاح العضلات الهيكلية الداخلية. يمكن أن يؤدي فقدان الخلايا والهياكل المقيمة التي تعزز عملية التجدد الأولية إلى إعادة تشكيل مرضية وتليف الأنسجة ، مما يؤدي إلى عجز طويل الأمد في الوظيفة والإحساس ويشار إليها باسم فقدان العضلات الحجمي (VML) 1،2،3. تتضمن الاستجابة الالتهابية لإصابات VML آلية موثقة جيدا ومعقدة تشمل البلاعم والسيتوكينات والخلايا العضلية التي تقدم العديد من الأهداف النظرية في الطبالتجديدي 4
الوصول مقيد. يرجى تسجيل الدخول أو بدء فترة تجريبية لعرض هذا المحتوى.
البروتوكول
أجريت هذه الدراسة وفقا لجميع اللوائح المعمول بها، بما في ذلك الالتزام بالتوصيات الموضحة في دليل رعاية واستخدام المختبر. وافق برنامج رعاية واستخدام المؤسسي بجامعة كاليفورنيا في سان فرانسيسكو على جميع الإجراءات الحيوانية ورعاية ما بعد الجراحة (بروتوكول IACUC #AN195944-01).
1. جراحة VML
- تخدير ذكور فئران Sprague-Dawley في عمر 12 أسبوعا بوزن 276-300 جم في وعاء محكم الغلق باستخدام التخدير العام المتشادم بالإيزوفلوران بمعدل 1٪ -5٪ قبل نقلها إلى مجال جراحي معقم.
- ضع القوارض على جانبها الأيسر بحيث يتم تمديد الرقبة في وضع محايد وتركيب الأنف في مخروط الأنف المخدر ، مما يسمح بالتعر....
الوصول مقيد. يرجى تسجيل الدخول أو بدء فترة تجريبية لعرض هذا المحتوى.
النتائج
تشمل نتائج تقييم VML القحفية الوجهية وتجديد الأنسجة باستخدام المواد الحيوية كلا من النتائج الكمية والنوعية.
يصور الشكل 2 مثالا على التقييم النوعي باستخدام النموذج الموصوف سابقا. تعد ملاحظة نمو ألياف العضلات الجديدة داخل الهيدروجيل لدينا نتيجة إيجابية نوعية (الشكل 2 أ) وتشير إلى أن المادة الحيوية يمكن أن توفر دعما معماريا كافيا وعامل نمو أو توصيل المغذيات. يظهر الاحتفاظ بالهيدروجيل داخل سرير الجرح (الشكل 2.......
الوصول مقيد. يرجى تسجيل الدخول أو بدء فترة تجريبية لعرض هذا المحتوى.
المناقشة
هناك العديد من الخطوات الحاسمة في البروتوكول حيث يلزم إيلاء اهتمام خاص لتحقيق النتيجة المثلى. تصف الخطوة 1.4 الشق الأولي والفصل الحاد للجلد عن لفافة المضغ السطحية. يجب إجراء التشريح الحاد مباشرة على طول الجلد مع مقص مشيرا بعيدا عن العضلات واللفافة الأساسية لمنع الوخز وإنشاء نافذة عبر اللفافة عن غير قصد. يجب تجنب الجانب الذيلي للمضغ السطحي لمنع الإصابة غير المقصودة للوريد تحت الفك السفلي أو الشريان السباتي الخارجي. تصف الخطوتان 1.5 و 1.6 إنشاء نافذة اللفافة وعيب VML ، على التوالي. يجب توخ.......
الوصول مقيد. يرجى تسجيل الدخول أو بدء فترة تجريبية لعرض هذا المحتوى.
الإفصاحات
المؤلفون ليس لديهم ما يكشفون عنه.
شكر وتقدير
يتم دعم هذا البحث من قبل برنامج الزمالة البحثية لمدة عام في جامعة كاليفورنيا في سان فرانسيسكو وبرنامج مشروع C-Doctor متعدد التخصصات الانتقالي. شكرا لأعضاء مختبر بوميرانتز وبرنامج بيولوجيا القحف الوجهي في جامعة كاليفورنيا سان فرانسيسكو على مساهماتهم.
....الوصول مقيد. يرجى تسجيل الدخول أو بدء فترة تجريبية لعرض هذا المحتوى.
المواد
| الاسم | الشركة | رقم فهرسي | التعليقات |
|---|---|---|---|
| F1.652 الميوسين الجسم المضاد أحادي النسيلة ذو السلسلة الثقيلة (الجنينية) | DSHB | F1.652 | |
| الماعز المضاد للفأر IgG2b الجسم المضاد الثانوي الممتز ، Alexa Fluor 647 | Invitrogen | A-21242 | |
| الماعز المضاد للأرانب IgG (H + L) الجسم المضاد الثانوي عالي الامتصاص ، Alexa Fluor 488 | Invitrogen | A-11034 | |
| لكمات الخزعة القياسية Integra ، لكمة الخزعة القياسية التي يمكن التخلص منها ؛ 5 مم ، القطر: 0.19 بوصة ، 0.5 سم | وسط تركيب 12460411 | ||
| مع DAPI - مائي ، Fluoroshield | Abcam | ab104139 | |
| أرنب مضاد للفأر IgG H& L (Alexa Fluor 647) ممتص | Abcam | ab150127 | |
| Sulfamethoxazole / Trimethoprim معلق عن طريق الفم ، بنكهة الكرز ، 473 مل | Med-Vet International | رمز المنتج: RXBAC-SUSP |
المراجع
- Gilbert-Honick, J., Grayson, W. Vascularized and innervated skeletal muscle tissue engineering. Adv Healthc Mater. 9 (1), 1900626(2020).
- Aguilar, C. A., et al. Multiscale analysis of a regenerative therapy for treatment of volumetric muscle los....
الوصول مقيد. يرجى تسجيل الدخول أو بدء فترة تجريبية لعرض هذا المحتوى.
إعادة الطباعة والأذونات
