إرقاء الجرح البزلي وإعداد العينات لتحليل المجهر الإلكتروني واسع النطاق

Kelly Ball; Irina Pokrovskaya; Brian Storrie

doi:10.3791/66479

يتطلب اشتراك JoVE لعرض هذا المحتوى. تسجيل الدخول أو ابدأ نسخة تجريبية مجانية

مقالة منهجية

إرقاء الجرح البزلي وإعداد العينات لتحليل المجهر الإلكتروني واسع النطاق

1.1K مشاهدة

⸱

DOI:

10.3791/66479

⸱

مايو 24, 2024

Kelly Ball¹ , Irina Pokrovskaya¹ , Brian Storrie¹

¹Department of Physiology and Cell Biology, University of Arkansas for Medical Sciences

في هذه المقالة

ملخص

يتم تقديم إجراء الجرح البزل لتشكيل الجلطة المرقئة هنا. الجلطات المشكلة كبيرة وقطرها مئات الميكرون. ومن ثم ، فإن طرق التصوير الحجمي مناسبة. نقترح الفحص المجهري الإلكتروني للإرسال على نطاق واسع كنهج عالي الدقة متاح للكثيرين وتفصيل بروتوكول تحضيري.

الملخص

الإرقاء ، عملية التحكم الفسيولوجي الطبيعي لتلف الأوعية الدموية ، أمر أساسي لحياة الإنسان. نعاني جميعا من جروح طفيفة وجروح ثقب من وقت لآخر. في الإرقاء ، يؤدي تراكم الصفائح الدموية ذاتية الحد إلى تكوين جلطة منظم يأتي فيها توقف النزيف من تغطية الثقب من الخارج. يمكن أن يؤدي التوصيف التفصيلي لهذا الهيكل إلى التمييز بين الإرقاء والتخثر ، وهي حالة من التراكم المفرط للصفائح الدموية مما يؤدي إلى تخثر انسدادي. يتم تقديم نهج قائم على التصوير لهيكل الجلطة الجرحية الثقب هنا يعتمد على قدرة المجهر الإلكتروني الرقيق على تصور الجزء الداخلي من الجلطات المرقئة. الخطوة الأساسية في أي بروتوكول تجريبي قائم على التصوير هي إعداد العينة بشكل جيد. يوفر البروتوكول إجراءات مفصلة لإعداد الجروح الثقبية والجلطات الغنية بالصفائح الدموية في الفئران للفحص المجهري الإلكتروني اللاحق. يتم إعطاء إجراء مفصل للتثبيت في الموقع لجلطة الجرح المكونة ومعالجتها اللاحقة للتلوين والتضمين للفحص المجهري الإلكتروني. يتم تقديم المجهر الإلكتروني كتقنية تصوير نهائية نظرا لقدرته ، عند دمجه مع التقسيم المتسلسل ، على تصور تفاصيل الجلطة الداخلية بدقة عالية. كطريقة تصوير ، يعطي المجهر الإلكتروني أخذ عينات غير متحيزة ومخرجات تجريبية تمتد من نانومتر إلى ملليمترات في 2 أو 3 أبعاد. تم الاستشهاد ببرنامج المجهر الإلكتروني المجاني المناسب الذي سيدعم الفحص المجهري الإلكتروني واسع النطاق حيث يمكن مزج مئات الإطارات لإعطاء تصوير بمقياس نانومتر للمقاطع العرضية للجلطة الجرحية الثقب بالكامل. وبالتالي ، يمكن وضع أي منطقة فرعية من ملف الصورة بسهولة في سياق المقطع العرضي الكامل.

المقدمة

يعد تكوين جلطة الجرح الثقب الذي يؤدي إلى توقف النزيف أحد أهم الأحداث في الحياة¹. ومع ذلك ، على الرغم من هذه الضرورة ، فإن معرفة ما يحدث هيكليا أثناء تكوين الجلطة ، سواء كان ذلك في الوريد أو الشريان أو حدث تصلب الشرايين أو جلطة انسدادية ، كانت محدودة بالدقة وعمق التصوير. الفحص المجهري الضوئي التقليدي محدود في العمق عند مقارنته بخثرة الجرح المكتملة التكوين ، 200 إلى 300 ميكرومتر في Z¹ ، وفي مستوى الدقة عند مقارنتها بحجم عضيات الصفائح الدموية وتباعدها ، غالبا أقل من 30 نانومتر². يمكن أن ينتج عن الفحص المجهري الضوئي ثنائي الفوتون العمق المطلوب للتصوير ولكنه لا يحسن ال....