يصف البروتوكول الحالي طريقة إنشاء نموذج فأر xenograft (PDX) مشتق من المريض باستخدام أنسجة الساركوما العظمية البشرية.
يتطلب اشتراك JoVE لعرض هذا المحتوى. تسجيل الدخول أو ابدأ نسخة تجريبية مجانية
مقالة منهجية
إنشاء نموذج فأر Xenograft مشتق من المريض مع أنسجة الساركوما العظمية البشرية
* These authors contributed equally
في هذه المقالة
ملخص
الملخص
الساركوما العظمية هي أكثر أورام العظام الخبيثة الأولية شيوعا لدى الأطفال والمراهقين. على الرغم من وضع خطط علاجية جديدة في السنوات الأخيرة ، إلا أن تشخيص مرضى الساركوما العظمية لم يتحسن بشكل ملحوظ. لذلك ، من الأهمية بمكان إنشاء نموذج قوي قبل السريري بدقة عالية. يحافظ نموذج xenograft المشتق من المريض (PDX) بأمانة على الخصائص الجينية واللاجينية وغير المتجانسة للأورام الخبيثة البشرية لكل مريض. وبالتالي ، تعتبر نماذج PDX أصلية في نماذج الجسم الحي لدراسة أنواع السرطان المختلفة في دراسات التحول. تقدم هذه المقالة بروتوكولا شاملا لإنشاء وصيانة نموذج ماوس PDX يعكس بدقة السمات المورفولوجية للساركوما العظمية البشرية. وهذا ينطوي على الزرع الفوري لأنسجة الساركوما العظمية البشرية التي تم استئصالها حديثا في الفئران التي تعاني من نقص المناعة ، تليها عمليات تمرير متتالية. يعمل النموذج الموصوف كمنصة لدراسة نمو الساركوما العظمية ومقاومتها للأدوية والانتكاس وورم خبيث. بالإضافة إلى ذلك ، فإنه يساعد في فحص العلاجات المستهدفة وإنشاء خطط علاج شخصية.
المقدمة
الساركوما العظمية هي ورم خبيث عظمي أولي مشتق من خلايا الفص بين العظام وهو أكثر شيوعا عند المراهقين وكذلك الأطفال. غالبا ما يحدث في المشاش للحاجز الطويل ويتميز بورم خبيث مرتفع ، ورم خبيث مبكر ، وسوء التشخيص 1,2. ورم خبيث في الرئة هو السبب الرئيسي للوفاة في مرضى الساركوما العظمية. معدل البقاء على قيد الحياة لمدة 5 سنوات للمرضى الذين يعانون من الساركوما العظمية غير النقيلي هو 65٪ -70٪ 3. ومع ذلك ، على مدى السنوات ال 40 الماضية ، لم يتحسن معدل البقاء على قيد الحياة لمدة 5 سنوات (20 ٪ فقط) من المرضى الذين يعانون من الساركوما العظمية النقيلي بشكل ملحوظ ، و 25....
الوصول مقيد. يرجى تسجيل الدخول أو بدء فترة تجريبية لعرض هذا المحتوى.
البروتوكول
تمت الموافقة على جميع الدراسات التي تنطوي على الأنسجة البشرية من قبل لجنة مراجعة الأخلاقيات المؤسسية لمستشفى لونغهوا ، التابعة لجامعة شنغهاي للطب الصيني التقليدي (شنغهاي ، الصين) (2013LC52) ، وتم الحصول على موافقة خطية مستنيرة من المرضى وفقا لإعلان هلسنكي. رقم IACUC لهذه الدراسة على هو PZSHUTCM221017013. تم تزويد ذكور الفئران البالغة من العمر أربعة أسابيع CAnN.Cg-Foxn1nu / Crl بأسد مزدوج حمية القوارض المشععة GB 14924.3 ومياه معقمة ، وتم إيواؤها في قفص الفئران IVCs مع خمسة فئران لكل قفص ، في ظل ظروف SPF مع دورة ضوء / مظلمة لمدة 12 ساعة. يتضمن جدول المواد معلومات مفصلة حول جميع المواد والكواشف والأدوات المستخدم....
الوصول مقيد. يرجى تسجيل الدخول أو بدء فترة تجريبية لعرض هذا المحتوى.
النتائج
يصف هذا البروتوكول الإجراء التفصيلي لإنشاء نموذج فأر PDX ، مع الحفاظ على السمات المورفولوجية للساركوما العظمية البشرية بعد الزرع الفوري لأنسجة الساركوما العظمية البشرية التي تم استئصالها حديثا والممرات المتتالية في الفئران. هنا ، تم إنشاء نموذج فأر PDX بنجاح باستخدام أنسجة الساركوما العظمية البشرية.
يوضح الشكل 3 أ فأرا تمثيليا ل PDX عند P0 ، بعد شهرين من زرع أنسجة الساركوما العظمية الفخذية من مريض يبلغ من العمر 15 عاما. يصور الشكل 3B .......
الوصول مقيد. يرجى تسجيل الدخول أو بدء فترة تجريبية لعرض هذا المحتوى.
المناقشة
يمكن لنماذج PDX محاكاة خصائص السرطانات البشرية والاحتفاظ بمزيد من التشابه مع الورم الرئيسي ، بما في ذلك التغيرات الجينية والجينومية ، والأنسجة ، وعدم التجانس ، وملف تعريف التعبير الجيني16،17،18،19. لذلك ، فإنها تحافظ على الأنماط الظاهرية الجزيئية والأنماط الجينية لمرضى السرطان ، وتوفر مناهج مبتكرة لدراسة علم الأحياء وتقييم العلاجات المحتملة. تشمل هذه الأساليب ا.......
الوصول مقيد. يرجى تسجيل الدخول أو بدء فترة تجريبية لعرض هذا المحتوى.
الإفصاحات
يعلن أصحاب البلاغ عدم وجود مصالح مالية متنافسة.
شكر وتقدير
يتم دعم هذا العمل بمنح من (1) المؤسسة الوطنية لعلوم الطبيعة (81973877 و 82174408) ؛ (2) مشروع بناء مركز شنغهاي للأبحاث ذات الأولوية القصوى (2022ZZ01009) ؛ (3) البرنامج الوطني للبحث والتطوير الرئيسي في الصين (2020YFE0201600) ؛ (4) مركز شنغهاي للابتكار التعاوني للتحول الصناعي لإعداد الطب الصيني التقليدي في المستشفى و (5) مشاريع بحثية ضمن ميزانية جامعة شنغهاي للطب الصيني التقليدي (2021LK047).
....الوصول مقيد. يرجى تسجيل الدخول أو بدء فترة تجريبية لعرض هذا المحتوى.
المواد
| الاسم | الشركة | رقم فهرسي | التعليقات |
|---|---|---|---|
| 10 ٪ فورمالين الحل المحايد | ووهان Saiweier التكنولوجيا الحيوية المحدودة | G1101-500 مل | إصلاح الأنسجة |
| الأوتوكلاف | اليابان شركة هيرياما | HVE-50 | التعقيم الأدوات الجراحية |
| CAnN.Cg-Foxn1nu / < / em> Crl | شنغهاي SLAC مختبر المحدودة. | / | الفرجار الحيواني |
| Yantai Green Forest Tools Co.، Ltd. | 034180A | قياس حجم | |
| الورم طبق (60 مم) | Shanghai NianYue Biotechnology Co.، Ltd | 430166 ، Corning | عينة placment أثناء الزرع |
| كرات قطنية مطهرة | Shanghai Honglong Industrial Co.، Ltd. | 20230627 | تطهير جلد الفئران |
| قفازات معقمة يمكن التخلص منها | Guilin Hengbao Health Protection Co.، Ltd. | YT21131 | عملية معقمة |
| حمية القوارض المشعة الأسد | سوتشو شوانغشي التجريبية لتغذية المحدودة | GB 14924.3 | الأعلاف الحيوانية |
| شنغهاي NianYue Biotechnology Co.، Ltd | 1-2000 | وزن وزن الورم | |
| Eosin | Shanghai Gengyun Biotechnology Co.، Ltd | E4009-25G | Hematoxylin eosin stain |
| Hematoxylin | Shanghai Gengyun Biotechnology Co.، Ltd | H3136-25G | Hematoxylin eosin stain |
| Isoflurane | Shenzhen RWD Life التكنولوجيا المحدودة | VETEASY | فأر التخدير |
| IVCs قفص الفئران | سوتشو الملك المعدات التجريبية التكنولوجيا المحدودة | HH-MMB-2 | حاجز |
| مارك القلم | حمار وحشي للتجارة (شنتشن) المحدودة. | YYST5 | وضع علامة على الشق الجراحي |
| أوليمبوس المجهر البصري | أوليمبوس اليابانية | BH20 | مسح شرائح الأنسجة |
| مرهم العيون | شنغهاي Gengyun التكنولوجيا الحيوية المحدودة | SOICOEYEGRL | تجنب جفاف عيون الفئران أثناء التخدير |
| مقص العيون | شنغهاي NianYue التكنولوجيا الحيوية المحدودة | Y00030 JZ | قطع الجلد |
| ملاقط العيون | شنغهاي NianYue التكنولوجيا الحيوية المحدودة | BS-ZER-S-100 Biosharp | عقد أنسجة الساركوما العظمية أثناء زرع |
| البارافين | جيانغسو شيتاي المعدات التجريبية المحدودة. | 80200-0015 | آلة تقطيع أنسجة الساركوما العظمية المدفونة |
| Lyca Microsystem (شنغهاي) Trading Co.، Ltd. | RM2235 | قسم أنسجة الساركوما العظمية | |
| ملحي فسيولوجي | قوانغتشو Jinsheng التكنولوجيا الحيوية المحدودة | 605-004057 | شطف وتخزين مؤقت لأنسجة الساركوما العظمية |
| الأدوات الجراحية للمشارط في شنغهاي للأجهزة الطبية (المجموعة) المحدودة. | J11010-10 # JZ | فصل أنسجة الساركوما العظمية وعمل شقوق جراحية | |
| غطاء محرك | المعقم Thermo Fisher Technology (الصين) المحدودة | ECO0.9 | طاولة العمليات الجراحية |
| الستائر الجراحية المعقمة | Henan Huayu Medical Equipment Co.، Ltd. | 20160090 | توفير منطقة الجراحة المعقمة |
| حامل إبرة مستقيم | Shanghai Gengyun Biotechnology Co.، Ltd | J31050 JZ | خياطة خط خياطة |
| الجرح شنغهاي بودونغ جينهوان للمنتجات الطبية المحدودة | F3124 | خياطة الجرح | |
| إبرة | شنغهاي بودونغ جينهوان للمنتجات الطبية المحدودة | F3124 | خياطة محلول |
| حماية أنسجة الجرح | نانجينغ Shenghang التكنولوجيا الحيوية المحدودة | BC-CFM-03 | الحفاظ على نشاط خلايا الأنسجة |
| أنبوب (50 مل) | شنغهاي بايساي ، التكنولوجيا الحيوية المحدودة | BLD-BL2002500 | تثبيت حل تثبيت الفورمالين |
المراجع
- Saraf, A. J., Fenger, J. M., Roberts, R. D. Osteosarcoma: accelerating progress makes for a hopeful future. Front Oncol. 8, 4(2018).
- Ligon, J. A., et al. Pathways of immune exclusion in metastatic osteosarcoma are associated with inferio....
الوصول مقيد. يرجى تسجيل الدخول أو بدء فترة تجريبية لعرض هذا المحتوى.
إعادة الطباعة والأذونات
