يتطلب اشتراك JoVE لعرض هذا المحتوى. تسجيل الدخول أو ابدأ نسخة تجريبية مجانية

مقالة منهجية

الكشف عن الفرص العلاجية مع نماذج الميلانوما العضوية المشتقة من المريض

2.6K مشاهدة

⸱

DOI:

10.3791/66509

⸱

سبتمبر 6, 2024

 ,  ,  ,  ,  , 
1Department of Pathology and Laboratory Medicine, Perelman School of Medicine, University of Pennsylvania

في هذه المقالة

ملخص

هنا ، نقدم بروتوكولا لتوليد عضويات مشتقة من سرطان الجلد عن طريق زراعة معلقات الخلايا المنفصلة من أنسجة سرطان الجلد الطازجة. تلخص هذه الكائنات العضوية بأمانة الأورام الخاصة بالمريض في المختبر ، وتقدم نهجا مبتكرا لاستكشاف آليات تثبيط مناعة الورم ، وفحص الأدوية ، وآليات مقاومة الأدوية ، ونهج مراقبة السرطان.

الملخص

مع تطور العلاج المناعي ، هناك حاجة مستمرة لتطوير نماذج يمكنها تلخيص البيئة المكروية للورم للأورام المحلية. في حين أن النماذج التقليدية ثنائية وثلاثية الأبعاد يمكن أن تقدم نظرة ثاقبة لتطور السرطان وتطوره ، إلا أنها تفتقر إلى الجوانب الحاسمة التي تعيق التقليد المخلص للأورام المحلية. النموذج البديل الذي اكتسب الكثير من الاهتمام هو العضو العضوي المشتق من المريض. يلخص تطوير هذه الكائنات العضوية التواصل المعقد بين الخلايا ، والبيئة المكروية للورم ، والبنية النسيجية للأورام. تصف هذه الورقة بروتوكول إنشاء نماذج عضوي مشتق من سرطان الجلد (MPDO). للتحقق من صحة هذه النماذج ، قمنا بتقييم تكوين الخلايا المناعية ، بما في ذلك مستويات التعبير عن علامات تنشيط الخلايا التائية ، لتأكيد عدم التجانس الخلوي للعضويات. بالإضافة إلى ذلك ، لوصف الفائدة المحتملة ل MPDOs في العلاجات الخلوية ، قمنا بتقييم القدرات السامة للخلايا لعلاج الكائنات العضوية بالخلايا التائية γδ. في الختام ، توفر نماذج MPDO طرقا واعدة لفهم تعقيد الورم ، والتحقق من صحة الاستراتيجيات العلاجية ، وربما تطوير العلاج الشخصي.

المقدمة

نماذج زراعة الخلايا التقليدية 2-D هي أدوات أساسية في أبحاث السرطان لدراسة تطور السرطان والعلاج1. لا تسمح هذه النماذج فقط للظروف التجريبية الخاضعة للرقابة بالتحقيق في الآليات الجزيئية والخلوية الكامنة وراء تطور السرطان وتطوره ، ولكنها توفر أيضا نتائج تجريبية فعالة من حيث التكلفة وسريعة نسبيا. ومع ذلك ، فإن استخدامها مقيد بسبب التنوع الخلوي المحدود في البيئة المكروية للورم (TME) ، والتي لا يمكن تلخيصها في الطبيعة المستوية لنماذج الثقافةالأحادية 2. بالإضافة إلى ذلك ، توفر نماذج زراعة الخلايا بيئة مفرطة في التبسيط مقارنة بجسم الإنسان3. وبالتالي ، لفهم تطور السرطان بشكل أفضل وتطوير علاجات فعالة ، تحول الباحثون إلى نماذج مبتكرة تهدف إلى تلخيص TME في الطبيعة عن كثب. وبالتالي ، فإن الحفاظ على الإخلاص للأورام الأصلية أمر بالغ الأهمية في هذه النماذج. نظرا للطبيعة المعقدة للسرطان ، فإن أي انحراف كبير عن الورم الأصلي يمكن أن يؤدي إلى متغيرات غير متوقعة قد تربك استنتاجات ذات مغزى حول سلوك الورم.

في حين أن الطعوم الخارجية المشتقة من المريض (PDX) قد ظهرت كنظام نموذجي يسمح بمراقبة تطور الورم في الجسم الحي ، فإن بعض القيود تتساءل عن مدى جودة الورم المتطور في تلخيص بيولوجيا السرطان البشري4. على سبيل المثال ، يحتوي سرطان الجلد TME على خلايا مناعية متسللة للورم وخلايا لحمية. عند تمريرها كطعم أجنبي ، ستفقد الخلايا غير السرطانية من المريض تدريجيا ، والتي يمكنها اختيار التكيفات التي تختلف عن تلك الموجودة في أورام المريض. في حين يمكن تخفيف هذه القيود عن طريق إجراء مقاطع محدودة من PDX في الجسم الحي ، فإن الاختلافات بين الأنواع لا تزال تشكل خطر حدوث تغيرات جينية في PDX تنحرف عن تلك الموجودة في الورم الأصلي5. علاوة على ذلك ، يتم إنشاء نماذج PDX عادة في الفئران التي تعاني من نقص المناعة لمنع رفض الأنسجة البشرية. هذا يحد من القدرة على دراسة دور الجهاز المناعي المضيف في السرطان ، وخاصة في دراسات العلاج المناعي6. لقد قمنا نحن وآخرون بنقش PDXs في الفئران "المتوافقة مع البشر" 7,8. ومع ذلك ، فإن إنشاء نماذج PDX في الفئران المتوافقة مع البشر يستغرق وقتا طويلا ومكلفا. قد يستغرق الأمر عدة أشهر إلى سنوات لتطوير نموذج PDX واحد من عينة ورم المريض ، مما يحد من سرعة وحجم البحث. على الرغم من هذه القيود ، فقد ثبت أن نماذج PDX تمثل بدقة بيولوجيا TME ، وبالتالي تم استخدامها على نطاق واسع لتطوير علاجات السرطان والطب الشخصي والعلاج المناعي ، من بين أمور أخرى9.

تقنية الثقافة ثلاثية الأبعاد البديلة التي ظهرت هي العضو المشتق من المريض (PDO) ، حيث يتم زراعة ورم مريض تم استئصاله حديثا لإنشاء نماذج تحافظ على عدم التجانس الظاهري ، والهندسة المعمارية النسيجية ، والاتصالات بين الخلايا10. وقد أثبتت قدرتها على التشابه الوثيق مع الأورام المحلية سابقا حيث نجحت الكائنات العضوية المستزرعة من سرطان المثانة غير الغازية للعضلات (NMIBC) وسرطان المثانة الغازية للعضلات (MIBC) في تلخيص الجوانب الرئيسية لأورام الوالدين11. نظرا لإمكاناتها ومزاياها مقارنة بالموديلات الأخرى ، تقدم PDOs مجموعة متنوعة من التطبيقات المصممة خصيصا والتي تفتقر إليها النماذج الأخرى ، بما في ذلك على سبيل المثال لا الحصر دراسة وتطوير مثبطات نقاط التفتيش المناعية جنبا إلى جنب مع العلاجات الخلوية والمستهدفة. على سبيل المثال ، استخدمنا سابقا المواد العضوية المشتقة من سرطان الجلد (MPDOs) لدراسة قدرة الخلايا الليمفاوية المتسللة للورم (TILs) على التوسع بواسطة IL-2 والأجسام المضادة ل PD1 (αPD-1). أظهرت النتائج أن TILs التي تم توسيعها بواسطة IL-2 و αPD-1 لم يكن لها عدد أكبر فحسب ، بل يمكنها أيضا التسلل بنجاح إلى MPDOs وقتل خلايا سرطان الجلد بكفاءة أعلى من TILs الموسعة باستخدام طرق أخرى12. أظهرت مجموعات أخرى نتائج مماثلة حيث يؤدي استخدام مضاد PD-1 و / أو مضاد PD-L1 إلى بقاء TILs وظيفية في PDOs ، مما يؤدي لاحقا إلى قتلالورم 13. بالإضافة إلى ذلك ، استخدمت مجموعتنا أيضا MPDOs لتقييم تسلل الخلايا التائية وقدرتهاعلى القتل 14. تمتد قابلية تطبيق PDOs إلى مجموعة واسعة من المجالات ، بما في ذلك توسيع TIL ، ودراسات السمية الخلوية ، وفحص الجزيئات الصغيرة. كل هذه التطبيقات تسلط الضوء على الإمكانات وسهولة الاستخدام التي يمنحها هذا النموذج. على هذا النحو ، نصف البروتوكول التفصيلي لثقافة MPDOs.

الوصول مقيد. يرجى تسجيل الدخول أو بدء فترة تجريبية لعرض هذا المحتوى.

البروتوكول

تم الحصول على أنسجة سرطان الجلد البشري من المرضى الذين يتلقون العلاج في جامعة بنسلفانيا باستخدام بروتوكول جمع الأنسجة (UPCC08607) الذي وافق عليه مجلس المراجعة المؤسسية بجامعة بنسلفانيا. وقع جميع المرضى على الموافقة المستنيرة. بعد استئصال أنسجة سرطان الجلد البشري ، يتم وضع أنسجة الورم في وسط النسر المعدل في Dulbecco (DMEM) ويتم الاحتفاظ بها عند 4 درجات مئوية حتى المعالجة (في غضون 6 ساعات). تم اشتقاق العضويات المشتقة من سرطان الجلد (MPDOs) من ورم جديد كما هو موضح في الشكل 1.

1. عزل الخلايا من أنسجة سرطان الجلد البشري

  1. الاستعدادات قبل بدء الإجراء
    ملاحظة: يمكن استخدام طريقتين للاستزراع (ماتريجيل وهلام الكولاجين) لزراعة أنسجة سرطان الجلد المنفصلة:
    1. لطريقة ماتريجيل: تحضير محلول طلاء لمصفوفة الغشاء القاعدي لعامل النمو المنخفض (GFR) عن طريق تخفيف مصفوفة غشاء القاع GFR بوسط استزراع عضوي (انظر الجدول 1) بنسبة 1: 2. أضف ما يقرب من 115 ميكرولتر من المحلول المذاب إلى كل بئر من الآبار العديدة لصفيحة 48 بئرا واتركها لتتجمد لمدة 30 دقيقة عند 37 درجة مئوية في حاضنة مرطبة.
    2. لطريقة هلام الكولاجين: أضف 1 مل من هلام الكولاجين (انظر الجدول 1) إلى حشوة غشاء داخلي 30 مم. اترك الجل يتجمد لمدة 30 دقيقة عند 37 درجة مئوية في حاضنة مرطبة.
  2. تحضير الوسط المكيف L-WRN15. يتم إنتاج الوسط المكيف L-WRN من خط خلية L-WRN مصمم لإفراز Wnt3a و R-spondin 3 و Noggin في وسط واحد مكيف يستخدم على نطاق واسع لزراعة الخلايا.
    1. قم بإذابة أنبوب التبريد لخلايا L-WRN في حمام مائي بدرجة حرارة 37 درجة مئوية. أضف 5 مل من وسط الخلية L (انظر الجدول 1) ومعلق الخلية L-WRN إلى أنبوب مخروطي 15 مل ، وأجهزة طرد مركزي عند 120 × جم لمدة 5 دقائق عند 4 درجات مئوية. نضح الطاف, ضمان ترك ~ 500 ميكرولتر في الأسفل لإعادة تعليق حبيبات الخلايا.
    2. انقل حبيبات الخلية في المادة الطافية إلى 30 مل من وسط الخلية L على الجليد وأضف 150 ميكرولتر من الهيجروميسين (500 ميكروغرام / مل) و 300 ميكرولتر من G418 (500 ميكروغرام / مل). بذر الخلايا بكثافة 3 × 106 على قارورة T-150 واحتضانها عند 37 درجة مئوية في حاضنة مرطبة مع 5٪ CO2 حتى ~ 90٪ متقاربة.
    3. بمجرد أن تصبح الخلايا ~ 90٪ متقاربة ، قم بتقسيم الخلايا إلى خمس قوارير T-150 عن طريق الغسيل ب 20 مل من محلول ملحي مخزن بالفوسفات (PBS) ، والشفط ، والهضم باستخدام 3 مل من بديل التربسين. بعد 5 دقائق ، قم بتحييد 9 مل من وسط الخلية L متبوعا بالطرد المركزي لمدة 5 دقائق عند 120 × جم عند 4 درجات مئوية. عندما ~ 100٪ متقاربة ، قسم قوارير T-150 الخمسة إلى 10 قوارير T-175 ثلاثية الطبقات.
    4. بمجرد أن تتلاقى ، اغسل الخلايا ب 2 × 50 مل من PBS ثم ب 25 مل من وسط الغسيل (انظر الجدول 1).
    5. أضف 75 مل من وسط الاستزراع الأولي إلى كل دورق T-175 ثلاثي الطبقات واحتضانه لمدة 3 أيام عند 37 درجة مئوية في حاضنة مرطبة تحتوي على 5٪ CO2 (انظر الجدول 1).
    6. بعد 3 أيام ، احصد الوسط المكيف إلى مخروطي 50 مل وقم بتدويره عند 1100 × جم لمدة 5 دقائق عند 4 درجات مئوية. اجمع المادة الطافية (الوسط المكيف) ، مع التأكد من ترك 5 مل وراءها.
    7. أضف 75 مل طازجة من وسط زراعة الخلايا الأولية إلى كل دورق T-175 من 3 طبقات واحتضانه لمدة 3 أيام إضافية لجمع وسط مكيف إضافي.
    8. إلى الوسط المشروط الذي تم جمعه ، أضف حجما متساويا من وسط زراعة الخلايا الأولية (حجم 50٪) وقم بتصفية المحتويات باستخدام مرشح 0.22 ميكرومتر. قم بتخزين الحصص في أنابيب سعة 50 مل وتخزينها في درجة حرارة -20 درجة مئوية للاستخدام طويل الأمد أو 4 درجات مئوية لمدة تصل إلى 2-3 أسابيع. استخدم هذه الوسيلة لتكملة وسائط الاستزراع العضوي (انظر الجدول 1).
      ملاحظة: قم بإذابة القسمة عند 4 درجات مئوية طوال الليل قبل الاستخدام.
  3. حصاد الخليط الخلوي من أنسجة سرطان الجلد الطازجة
    1. اغسل أنسجة سرطان الجلد التي تم استئصالها حديثا في طبق بتري سعة 10 مل يحتوي على وسط غسيل. بعد الشطف الأول ، استخدم ملاقط معقمة لنقل الورم إلى طبق بتري ثان لمزيد من الغسيل وكرر هذه العملية 3x على الثلج للحفاظ على سلامة الورم وقابليته للحياة. خلال دورات الشطف هذه ، استخدم مقصا معقما وشفرة لإزالة الأنسجة الضامة الزائدة والدهون والدم المتبقي. بعد الغسلات الثلاث ، ضع الورم في طبق بتري فارغ واستخدم شفرات معقمة لفرمه بدقة.
      ملاحظة: بعد الفرم ، يجب أن يظهر الورم اتساقا يشبه الهلام. كلما كان فرم الورم أدق ، كلما زاد إنتاج الخلية. وذلك لأن الكتل الأكبر من الورم ستكون أكثر صعوبة في الهضم وقد لا تمر عبر مصفاة خلايا النايلون 70 ميكرومتر في الخطوة التالية.
    2. بمجرد غسل أنسجة الورم جيدا وفرمها ، انقلها إلى أنبوب مخروطي سعة 50 مل يحتوي على 10 مل من وسط الهضم المحضر (انظر الجدول 1). ضع المخروط في حمام مائي على حرارة 37 درجة مئوية ، مع التأكد من أن المحتويات دوامة كل 5 دقائق.
    3. بعد 25 دقيقة، أضف 30 مل من وسط ADME/F12 الذي يحتوي على 10٪ FBS لوقف عملية الهضم.
      ملاحظة: هذه الكميات المحددة مخصصة للأورام التي لا يزيد وزنها عن 0.2 جم.
    4. قم بتصفية معلق الخلايا المهضومة من خلال مصفاة خلايا نايلون 70 ميكرومتر ، ثم اشطف المصفاة باستخدام ADMEM / F12 (1x) مصل متوسط مخفض (1: 1) يحتوي على 10٪ FBS. بعد خطوة الغسيل ، استخدم ماصة لاسترداد أي وسائط متبقية في الجزء السفلي من المرشح لضمان استرداد أكبر عدد ممكن من الخلايا. ثم ، أجهزة الطرد المركزي في 300 × غرام لمدة 7 دقائق في 4 درجة مئوية. تخلص من المادة الطافية وأعد تعليق الحبيبات في وسط الاستزراع العضوي (انظر الجدول 1).
    5. استزرع تعليق سرطان الجلد أحادي الخلية في أنظمة زراعة الماتريجيل أو الكولاجين:
      1. Matrigel: عد المعلق أحادي الخلية للتأكد من أن ما يقرب من 2 × 105 خلايا يتم زرعها في الآبار المطلية ب Matrigel المدفأة مسبقا مع استكمال 200 ميكرولتر من وسط الاستزراع العضوي.
        ملاحظة: تستخدم المواد العضوية القائمة على Matrigel لدراسة الفيزيولوجيا المرضية ، وفعالية دواء الشاشة ، واختبار سمية الدواء16.
      2. هلام الكولاجين: عد المعلق أحادي الخلية للتأكد من خلط ما يقرب من 106 خلايا مع 1 مل من هلام الكولاجين. أضف الخليط إلى حشوات غشاء هلام الكولاجين المتصلب مسبقا وضعه في طبق من 6 آبار. أضف ما يكفي من وسط الثقافة العضوية لغمر الحشوات التي تحتوي على الخلايا وهلام الكولاجين.
        ملاحظة: تستخدم عضويات هلام الكولاجين لقياس هجرة الخلايا التائية ودراسة تطور الأنسجة16.
    6. اسمح للعضويات بالنمو مع ضمان إضافة وسط جديد كل 3 أيام.
    7. قم بتمرير المواد العضوية بمجرد وصولها إلى حجم 150-200 ميكرومتر أو حفظها بالتبريد حتى الاستخدام مرة أخرى.
      1. لمرور المواد العضوية ، انقل المواد العضوية إلى مخروطي 15 مل واغسله باستخدام 1x DPSB. يطرد الطرد المركزي الخليط على حرارة 300 × جم لمدة 7 دقائق عند 4 درجات مئوية. قم بإزالة المادة الطافية وإضافة بديل التربسين (50-100 ميكرولتر لكل عضوي) لمدة 10 دقائق في حمام مائي 37 درجة مئوية ، مع ضمان دوامة المحتويات كل 3 دقائق.
      2. أوقف عملية الهضم باستخدام وسط مصل مخفض (1x) ADMEM / F12 (1x) يحتوي على 10٪ FBS. يطرد الخليط على حرارة 300 × جم لمدة 7 دقائق ويعاد تعليقه في وسط الاستزراع العضوي.
      3. قم بزرع المعلق أحادي الخلية في بئر جديد مطلي ب Matrigel / Collagen بنفس كثافة البذر الأولية (2 × 105 خلايا في 200 ميكرولتر من وسائط الاستزراع العضوي للآبار المطلية ب Matrigel في صفيحة بئر 48 أو 106 خلايا في 1 مل من وسائط الاستزراع العضوية لإدخال الغشاء الداخلي 30 مم المطلي بالكولاجين).
      4. للحفظ بالتبريد، هضم MPDOs باستخدام بديل التربسين في معلقات وحيدة الخلية تليها إعادة تعليق 106 خلايا في 1 مل من وسط التجمد (انظر الجدول 1).

الوصول مقيد. يرجى تسجيل الدخول أو بدء فترة تجريبية لعرض هذا المحتوى.

النتائج

تمت مراقبة شكل وحجم MPDOs بمرور الوقت لدراسة ديناميكيات نموها. كما هو موضح في الشكل 2 ، خلال فترة النمو الأولية ، زاد حجم العضو بشكل كبير طوال 7 أيام موضحة. بعد ملاحظة ديناميكيات نمو MPDO ، تحول الانتباه إلى تقييم تكوين الخلايا المناعية للتحقق من التلخيص المخلص للعضويات للأورام الأصلية. قدم هذا التقييم ، الذي يركز بشكل أساسي على وفرة الخلايا التائية αβ ، نظرة ثاقبة على التشابه بين الكائنات العضوية والورم الأبوي. كما رأينا ، يوضح الشكل 3 أنه لم يكن هناك تمييز ذي ...

الوصول مقيد. يرجى تسجيل الدخول أو بدء فترة تجريبية لعرض هذا المحتوى.

المناقشة

عالج ظهور PDOs العديد من القيود التي تفرضها طرق أبحاث السرطان الأخرى التي تم إنشاؤها سابقا مع إدخال تطبيقات تحويلية محتملة في هذا المجال. تم اقتراح هذه التقنية العضوية في البداية في عام 2009 من قبل هانز كليفرز وزملائه ، الذين تمكنوا من إنشاء نظام زراعة عضوي معوي بنجاح عن طريق زراعة الخلايا الجذعية Lgr5 + المشتقة من أمعاء الفئران في هلام مصفوفة ثلاثية الأبعاد يحتوي على عوامل R-sponsin و EGF وNoggin 20. بعد بضع سنوات ، في عام 2020 ، أبلغ فريق كوهلر عن نمو...

الوصول مقيد. يرجى تسجيل الدخول أو بدء فترة تجريبية لعرض هذا المحتوى.

الإفصاحات

ليس لدى المؤلفين أي تضارب في المصالح للإعلان عنه.

شكر وتقدير

تم تمويل هذه الدراسة جزئيا من خلال منح من R01 (CA258113) و SPORE (CA261608) و P01 (CA114046). تم إعداد الشكل 1 في عام BioRender.com.

الوصول مقيد. يرجى تسجيل الدخول أو بدء فترة تجريبية لعرض هذا المحتوى.

المواد

قائمة المواد المستخدمة في هذه المقالة
الاسمالشركةرقم فهرسيالتعليقات
2 مل غطاء أحمر داخلي ملولب من مادة البولي بروبيلين قارورة مبردةCorning431420
50 مل أنبوب مخروطي من مادة البولي بروبيلينCorning352070
100 مم طبق ثقافة الخلية المعالج TCCorning353003
105 مم ملقط البوليسترين المقابس المعقمةدائمة الخضرة & nbsp ؛222-1121-B1I
150 سم 2 < / sup>قارورة ثقافة الخليةCorningCLS430825
A83-01Tocris2939
Advanced DMEM / F12 (1x) مصل متوسط (1: 1) مكملGibco12634-010
B-27 (50x)Gibco17504-044
Brilliant Violet 510 الأجسام المضادة للإنسان المضادة للفيرفورينBioLegend308120
Brilliant Violet 605 الأجسام المضادة للإنسان Ki-67BioLegend350522
Brilliant Violet 650 Anti-Human CD366 (Tim-3) الأجسام المضادةBioLegend345028
Brilliant Violet 711 المضادة للإنسان CD45 الأجسام المضادةBioLegend304050
إدراج ثقافة الخلايا 0.4 & micro ؛ م ، 30 مم قطرMillipore SigmaPIHP03050
Cell Staining BufferBioLegend420201
Cell Strainer 40 & micro ؛ م نايلونكورنينج   ؛352340
مصفاة الخلية 70 & م نايلونكورنينج   ؛352350
كولاجيناز ، النوع الرابع ، مسحوقجيبكو17104019
كولتريكس راتات كولاجين ITrevigen3440-100-01
لوحة الثقافة ، PS ، 48 بئرا ، TC معالج بغطاء ، معقمMax Scientific   ؛07-6048
ثنائي ميثيل سلفوكسيد (DMSO) Hybri-MaxSigma-AldrichD2650
DMEM - نسبة عالية من الجلوكوز 4.5 مجم / ملCorningMT10-0130CV
Dnase I - الدرجة الثانيةMillipore Sigma10104159001
DPBS ، 1٪ & nbsp ؛Corning21-031-CV
مصل الأبقار الجنينية, FBSCorningMT35-010-CV
FITC Annexin V طقم الكشف عن موت الخلايا المبرمج IBD Biosciences 556547
فورسكولينتوكرس1099
الوراثة المضاد الحيوي الانتقائي (كبريتات G418) (50 مجم / مل)ThermoFisher10131035
GlutaMAX الملحقThermoFisher35050061
Ham's F12 مزيج المغذياتThermoFisher11765054
HEPES (1 م)جيبكو15630-080
هيجروميسين ب (50 مجم / مل)ثيرموفيشر10687010
L-جلوتامين 200 ملي مولار (100x)Gibco25030-081
L-WRN cellATCCCRL-3276
Matrigel Phenol Free & حقيقة النمو. مخفضةCorning356231
مرشح حقنة Millex PVDF ، 0.22 مو ؛ MMillipore SigmaSLGVR33RB
N-AcetylcysteineSigma-AldrichA9165-5G
نيكوتيناميدسيجما-ألدريتشN0636-100G
Nunc TripleFlask قارورة ثقافة الخلايا المعالجةThermoFisher132867
PE / Cyanine5 المضادة للإنسان CD8a الأجسام المضادةBioLegend301010
PE-Cy 7 الفأر المضاد للإنسان CD279 (PD-1)BD Biosciences 561272
Pen StrepGibco15140-122
المؤتلف البشري EGFPeprotechAF-100-15-1MG
مؤتلف بشري FGF-حمضيةPeprotech100-17A
بيكربونات الصوديوم (NaHCO3< / sub>) (7.5٪) الجودةالبيولوجية   ؛118-085-721
شفرات جراحية من الفولاذ المقاوم للصدأ رقم 22Integra4-322
TrypLE Express  جيبكو12604-021
محلول

المراجع

  1. Mirabelli, P., Coppola, L., Salvatore, M. Cancer Cell Lines Are Useful Model Systems for Medical Research. Cancers (Basel). 11 (8), 1098(2019).
  2. Shannon, A. E., Boos, C. E., Hummon, A. B. Co-culturing multicellular tumor models: Modeling the tumor microenvironment and analysis techniques. Proteomics. 21 (9), e2000103(2021).
  3. Jubelin, C., Muñoz-Garcia, J., Griscom, L. Three-dimensional in vitro culture models in oncology research. Cell Biosci. 12, 155(2022).
  4. Jin, J., Yoshimura, K., Sewastjanow-Silva, M., Song, S., Ajani, J. A. Challenges and prospects of patient-derived xenografts for cancer research. Cancers (Basel). 15 (17), 4352(2023).
  5. Nabel, C. S., Heiden, M. G. V. Patient-derived xenografts to study cancer metabolism: when does X mark the spot). Cancer Res. 81 (17), 4399(2021).
  6. Choi, Y., et al. Studying cancer immunotherapy using patient-derived xenografts (PDXs) in humanized mice. Exp Mol Med. 50 (8), 99(2018).
  7. Woo, X. Y., et al. Conservation of copy number profiles during engraftment and passaging of patient-derived cancer xenografts. Nat Genet. 53 (1), 86(2021).
  8. Somasundaram, R. Tumor-infiltrating mast cells are associated with resistance to anti-PD-1 therapy. Nat Commun. 12 (1), 346(2021).
  9. Abdolahi, S. Patient-derived xenograft (PDX) models, applications and challenges in cancer research. J Transl Med. 20 (1), 206(2022).
  10. Yang, S., et al. Organoids: The current status and biomedical applications. Med Comm. 4 (3), e274(2023).
  11. Minoli, M. Bladder cancer organoids as a functional system to model different disease stages and therapy response. Nat Commun. 14, 2214(2023).
  12. Ou, L., et al. Patient-derived melanoma organoid models facilitate the assessment of immunotherapies. eBioMedicine. 92, 104614(2023).
  13. Grönholm, M., et al. Patient-derived organoids for precision cancer immunotherapy. Cancer Res. 81 (12), 3149-3155 (2021).
  14. Ou, L., et al. Preclinical platforms to study therapeutic efficacy of human γδ T cells. Clin Transl Med. 12 (6), e814(2022).
  15. Murine L-Wrn conditioned medium protocol. The University of Texas MD Anderson Cancer Center. , Available from: https://www.mdanderson.org/documents/Labs/Taniguchi%20Laboratory/Mouse%20CM.pdf (2024).
  16. Jee, J. H., et al. Development of collagen-based 3D matrix for gastrointestinal tract-derived organoid culture. Stem Cells Int. 13 (2019), 8472712(2019).
  17. Pipkin, M. E., Rao, A., Lichtenheld, M. G. The transcriptional control of the perforin locus. Immunol Rev. 235 (1), 55(2010).
  18. Li, X., et al. Tim-3 suppresses the killing effect of Vγ9Vδ2 cells on colon cancer cells by reducing perforin and granzyme B expression. Exp Cell Res. 386 (1), 111719(2020).
  19. Li, L. T., Jiang, G., Chen, Q., Zheng, J. N. Ki67 is a promising molecular target in the diagnosis of cancer (Review). Mol Med Rep. 11 (3), 1566-1572 (2015).
  20. Sato, T., et al. Single Lgr5 stem cells build crypt-villus structures in vitro without a mesenchymal niche. Nature. 459 (7244), 262-265 (2009).
  21. Li, H. Y., Ren, K., Wang, C., Bu, W. B. Skin organoid research progress and potential applications. International Journal of Dermatology and Venereology. 5 (2), 101-106 (2022).
  22. Sun, L., et al. A human mucosal melanoma organoid platform for modeling tumor heterogeneity and exploring immunotherapy combination options. Sci Adv. 9 (43), eadg6686 (2023).
  23. Vlachogiannis, G., et al. Patient-derived organoids model treatment response of metastatic gastrointestinal cancers. Science. 359 (6378), 920-926 (2018).
  24. Ganesh, K., et al. A rectal cancer organoid platform to study individual responses to chemoradiation. Nat Med. 25 (10), 1607-1614 (2019).
  25. Vilgelm, A. E., et al. Fine-needle aspiration-based patient-derived cancer organoids. iScience. 23 (8), 101408(2020).

الوصول مقيد. يرجى تسجيل الدخول أو بدء فترة تجريبية لعرض هذا المحتوى.

إعادة الطباعة والأذونات

استكشف المزيد من المقالات

نماذج عضويات الميلانوماالعضويات المشتقة من المرضىالبيئة المجهرية للورمزراعة العضوياتتكوين الخلايا المناعيةتنشيط الخلايا التائيةفحص العقاقيرعلاج السرطان الشخصيطريقة هلام الكولاجينطلاء الماتريجيل
الكشف عن الفرص العلاجية مع نماذج الميلانوما العضوية المشتقة من المريض
تواصل معنا
أوصِ به للمكتبة

الخصوصية

شروط الاستخدام

السياسات

حقوق الطبع والنشر © 2026 MyJoVE Corporation. جميع الحقوق محفوظة.