يوفر بروتوكول زراعة الكبد الإضافي غير المتجانس الموصوف هنا أداة استقصائية عملية لاستكشاف آليات رفض الطعم الخيفي الكبدي. يساعد هذا النموذج في تخفيف العقبات الجراحية والإجهاد الحيواني لزراعة الكبد في الفئران.
يتطلب اشتراك JoVE لعرض هذا المحتوى. تسجيل الدخول أو ابدأ نسخة تجريبية مجانية
مقالة منهجية
نموذج زرع فئران الكبد الكامل المساعد غير المتجانس باستخدام فغر الكبد الخيفي لدراسات رفض الطعم الخيفي
في هذه المقالة
ملخص
الملخص
لا غنى عن نماذج زرع الصغيرة لدراسات تحمل الأعضاء التي تبحث في التدخلات العلاجية الممكنة في الدراسات قبل السريرية. عادة ما تستخدم بروتوكولات زراعة كبد الفئران (LTx) نموذجا تقويميا حيث تتم إزالة الكبد الأصلي للمتلقين واستبداله بكبد متبرع. يتطلب هذا الإجراء الجراحي المتطلب تقنيا مهارات جراحية متقدمة ويزداد تعقيدا بسبب أوقات نقص تروية الكبد والجزء السفلي من الجسم. أدى ذلك إلى تطوير طريقة غير متجانسة أقل تعقيدا يمكن إجراؤها بشكل أسرع بدون وقت نقص تروية منزوع الكبد أو الجزء السفلي من الجسم ، مما يقلل من إجهاد ما بعد الجراحة للحيوان المتلقي.
يتضمن بروتوكول LTx غير المتجانس خطوتين رئيسيتين: استئصال الكبد من الجرذ المتبرع وزرع الكبد بالكامل في الجرذ المتلقي. أثناء استئصال الكبد المتبرع ، يقوم الجراح بربط الوريد الأجوف فوق الكبدي (SHVC) والشريان الكبدي (HA). على الجانب المتلقي ، يزيل الجراح الكلية اليسرى ويضع كبد المتبرع مع الوريد البابي (PV) ، والوريد الأجوف تحت الكبدي (IHVC) ، والقناة الصفراوية التي تواجه الأوعية الكلوية. علاوة على ذلك ، يقوم الجراح بمفاغرة الوريد الكلوي للمتلقي من النهاية إلى النهاية باستخدام IHVC للكبد وشريانية PV بالشريان الكلوي باستخدام دعامة. يتم استخدام فغر الكبد والوعيرات لتصريف القناة الصفراوية عن طريق مفاغرة القناة الصفراوية إلى حالب المتلقي ، مما يسمح بتصريف الصفراء عبر المثانة.
كان متوسط مدة الزرع 130 دقيقة ، ومدة نقص التروية الباردة حوالي 35 دقيقة ، وكانت مدة نقص التروية الدافئة أقل من 25 دقيقة. أظهر الهيماتوكسيلين واليوزين في أنسجة الكبد المساعد من عمليات الزرع الزاوية: بنية طبيعية لخلايا الكبد مع عدم وجود تغييرات متني كبيرة بعد 30 يوما من الزرع. في المقابل ، أظهرت عينات الكسب غير المشروع الخيفي بعد الزرع لمدة 8 أيام تسلل واسع النطاق للخلايا الليمفاوية مع درجة مؤشر نشاط رفض مخطط بانف 9. لذلك ، تسهل طريقة LTx هذه نموذج رفض المراضة المنخفضة البديل ل LTx تقويم العظام.
المقدمة
الصغير LTx هو نموذج لا يقدر بثمن للتحقيق في آليات رفض الكبد. تم تقديم زراعة الكبد المساعدة غير المتجانسة مع الشرايين الوريدية البابية (HALT-PVA) في الفئران في عام 1968 من قبل Lee و Edgington1عندما أبلغوا عن استخدام الوريد الكلوي والشريان المتلقي لإعادة إعادة الأوعية الدموية الكبد المساعد المطعم. بعد ذلك ، عزز Hess et al.2 البروتوكول مع التخفيف من المنافسة الوظيفية بين الكبد الأصلي والكبد المساعد عن طريق تقليل حجم الكبد الأصلي والمتبرع جنبا إلى جنب مع إعادة بناء اتصال القناة الصفراوية للمتبرع ، مما أدى إلى بقاء الكسب غير المشروع على المدى الطويل. تم إجراء مزيد من التحسينات مع إدخال مفاغرة....
الوصول مقيد. يرجى تسجيل الدخول أو بدء فترة تجريبية لعرض هذا المحتوى.
البروتوكول
تم تربية وإيواءها في ظروف محددة خالية من مسببات الأمراض في مرافق رعاية في جامعة ويسكونسن (UW) - معهد ماديسون للأبحاث الطبية وفقا للمبادئ التوجيهية المؤسسية. تمت الموافقة على بروتوكول الدراسة (رقم M006022) من قبل اللجنة المؤسسية لرعاية واستخدامه في كلية الطب والصحة العامة بجامعة واشنطن ، وتم التعامل مع جميع بشكل أخلاقي.
1.
- استخدم إناث فئران لويس البالغة التي تزن 205-235 جم وذكور لويس الذين يتراوح وزنهم بين 250 و 280 جراما كفئران مانحة. استخدم ذكور لويس وفئران النرويج البني البالغة التي تزن 365-420 جراما كمتلقين.
- قم بإجراء عمليات زرع متجانسة عن طريق زرع متبرعي لويس في مت....
الوصول مقيد. يرجى تسجيل الدخول أو بدء فترة تجريبية لعرض هذا المحتوى.
النتائج
في الوقت الحاضر ، تم استخدام 29 زوجا من الفئران لإنشاء بروتوكول HALT-PVA ، و 17 عملية زرع متجانسة ، و 12 عملية زرع خيفي. نجت الكبد المزروعة متجانسة إلى نقطة النهاية التجريبية المحددة لمدة 8 أو 30 يوما بمعدل نجاح 70٪ ، بينما نجت الكبد المزروعة خيفية إلى نقاط النهاية المحددة لمدة 3 أو 8 أيام بمعدل نجاح 50٪. تشمل حالات الفشل الفئران التي ماتت بسبب المضاعفات الجراحية والكبد المساعد الذي فشل حتى عندما نجا المتلقي.
كان متوسط مدة العملية 130 دقيقة ، مع وقت نقص تروية بارد يبلغ حوالي 35 دقيقة ، ووقت نق.......
الوصول مقيد. يرجى تسجيل الدخول أو بدء فترة تجريبية لعرض هذا المحتوى.
المناقشة
زراعة الكبد هي الخيار العلاجي الوحيد للمرضى الذين يعانون من أمراض الكبد في المرحلة النهائية ، حيث يتم إجراء ما يقرب من 9,000 LTxs سنويا فيالولايات المتحدة 13. لسوء الحظ ، يظهر الرفض المناعي في ما يصل إلى 25٪ من متلقي LTx ، وهذا الرفض يضر بالعضو المزروع والمريض14،15. لتحسين النتائج بعد LTx ، يلزم تطوير نماذج مبتكرة لدراسة رفض الأعضاء وتنفيذ استراتيجيات لتقليل الرفض.
بالمقارنة مع .......
الوصول مقيد. يرجى تسجيل الدخول أو بدء فترة تجريبية لعرض هذا المحتوى.
الإفصاحات
المؤلفون ليس لديهم ما يكشفون عنه.
شكر وتقدير
تم دعم هذا البحث من قبل المعهد الوطني للصحة (NIH) K08AI155816 ، الممنوح ل DA.
....الوصول مقيد. يرجى تسجيل الدخول أو بدء فترة تجريبية لعرض هذا المحتوى.
المواد
| الاسم | الشركة | رقم فهرسي | التعليقات |
|---|---|---|---|
| 3-0 خياطة الحرير | إيثيكون | ج013د | |
| 5-0 ربطات حرير | أدوات العلوم الجميلة | 18020-50 | |
| 6-0 ربطات عنق حريرية | أدوات العلوم الجميلة | 18020-60 | |
| 7-0 ربطات عنق حريرية | تليفلكس | 103 ثانية | |
| 9-0 خياطة البولي أميد | الجراحة | T05A09N10-13 | أسود |
| الكي ثنائي القطب | كودمان & شركة Shurtleff | ص 234 | |
| بوبرينورفين هيدروكلورايد | هوسبيرا | 409201232 | |
| ملقط ، أدسون براون | أدوات العلوم الجميلة | 11627-12 | 12.5 سم |
| ملقط ، دومون بزاوية ؛ | أدوات العلوم الجميلة | 11253-25 | طبي # 5/45 11 سم |
| ملقط ، ربط خياطة ؛ | أدوات العلوم الجميلة | 18025-10 | 10 سم |
| حقن الهيبارين الصوديوم ، USB | فريسينيوس كابي | 504015 | 10,000 وحدة USP لكل 10 مل |
| التشريح المائي قنية | أمبلر الجراحية | 1021 [إ] | 27 جرام |
| إيزوفلوران | منتجات Dechra Vet. | 17033-091-25 | |
| القسطرة الوريدية | كندال | 2619بور | 26 جم × 3/4 بوصة |
| نظام التراجع المغناطيسي | أدوات العلوم الجميلة | 18200-50 | |
| المشابك الصغيرة | أدوات العلوم الجميلة | 18055-05 | 6 مم |
| المشابك الصغيرة | أدوات العلوم الجميلة | 18055-06 | 4 ملم |
| قضيب المشبك الصغير | أدوات العلوم الجميلة | 18057-14 | 14 سم |
| حامل إبرة صغيرة | S& T | سي -14 | 14 سم |
| مجهر | زييس | يونيفرسال S3 | رأس مزدوج |
| مرهم العيون | بورالوب | 14590500 | |
| أنابيب بوليميدي | كول بارمر | 95820-04 | OD 0.0215 "، معرف 0.0195" ، الجدار 0.0010 " |
| ملح | باكستر | 281324 | 0.9٪ كلوريد الصوديوم |
| مقص زنبركي جراحي | S& T | إسدك-15 | بلانت 14 سم |
| مقص زنبركي جراحي | أدوات العلوم الجميلة | 15021-15 | فاناس 14 سم |
المراجع
- Lee, S., Edgington, T. S. Heterotopic liver transplantation utilizing inbred rat strains. Am J Pathol. 52 (3), 649-669 (1968).
- Hess, F., Jerusalem, C., Van der Heyde, M. N. Advantages of auxiliary liver homotransplantation in rats. Arch Surg. 104, 76-80 (1972).
- M....
الوصول مقيد. يرجى تسجيل الدخول أو بدء فترة تجريبية لعرض هذا المحتوى.
إعادة الطباعة والأذونات
