مقالة منهجية

تقييم مقاييس نتائج اتصال وحدة محرك الحجاب الحاجز للفئران كمؤشرات حيوية كمية لتنكس الخلايا العصبية الحركية الحجابي والتعويض

1.1K مشاهدات

⸱

DOI:

10.3791/66568

⸱

أبريل 19, 2024

 ,  ,  ,  , 
1NextGen Precision Health, University of Missouri, 2Department of Biomedical Sciences, University of Missouri, 3Department of Physical Medicine and Rehabilitation, University of Missouri, 4Department of Neurology, University of Missouri, 5Department of Medical Pharmacology and Physiology, University of Missouri, 6Dalton Cardiovascular Research Center, University of Missouri

* These authors contributed equally

في هذه المقالة

ملخص

في هذه الدراسة ، نقدم طريقة في الجسم الحي لتقدير عدد وحجم الوحدة الحركية لتحديد اتصال الوحدة الحركية للغشاء الفئران. يتم وصف نهج خطوة بخطوة لهذه التقنيات.

الملخص

فقدان وظيفة العضلات التنفسية هو نتيجة لإصابة الخلايا العصبية الحركية والتنكس العصبي (على سبيل المثال ، إصابة الحبل الشوكي العنقي والتصلب الجانبي الضموري ، على التوالي). الخلايا العصبية الحركية الحجابي هي الرابط الأخير بين الجهاز العصبي المركزي والعضلات ، وتمثل الوحدات الحركية الخاصة بكل منها (مجموعات من الألياف العضلية المعصبة بواسطة خلية عصبية حركية واحدة) أصغر وحدة وظيفية في الجهاز التنفسي العصبي العضلي. جهد عمل العضلات المركبة (CMAP) ، جهد الوحدة الحركية المفردة (SMUP) ، وتقدير عدد الوحدات الحركية (MUNE) هي مناهج فيزيولوجية كهربية تم إنشاؤها لتمكين التقييم الطولي لسلامة الوحدة الحركية في النماذج الحيوانية بمرور الوقت ولكن تم تطبيقها في الغالب على عضلات الأطراف. لذلك ، فإن أهداف هذه الدراسة هي وصف نهج في دراسات القوارض قبل السريرية التي يمكن استخدامها طوليا لتحديد كمية MUNE الحجابي ، وحجم الوحدة الحركية (الممثلة باسم SMUP) ، و CMAP ، ثم لإثبات فائدة هذه الأساليب في نموذج فقدان الخلايا العصبية الحركية. يمكن للمؤشرات الحيوية الحساسة والموضوعية وذات الصلة بالترجمة لإصابة الخلايا العصبية والتنكس والتجديد في إصابة الخلايا العصبية الحركية وأمراضها أن تساعد بشكل كبير وتسريع اكتشافات الأبحاث التجريبية للاختبارات السريرية.

المقدمة

تشكل الخلايا العصبية الحركية الحجابي (MNs) ، التي تمتد من مستويات بضع العضل C3 إلى C6 ، الرابط النهائي من الجهاز العصبي المركزي (CNS) إلى عضلة الحجاب الحاجز1. تتكون الوحدات الحركية الحجيبية (MUs) من MN واحد في العمود الفقري وألياف عضلات الحجاب الحاجز المعصبة التي تشكل أصغر وحدة وظيفية في الجهاز العصبي العضلي التنفسي. تتطلب وظيفة التهوية تقلصا كافيا لعضلة الحجاب الحاجز يتحقق من خلال التنشيط المنسق لتجمع MU الحجابي 2,3. تؤدي العديد من الأمراض العصبية ، بما في ذلك التصلب الجانبي الضموري (ALS) ، إلى ضعف شديد في التهوية ، مما يساهم في النهاية في سبب الوفاة4.

يمكن استخدام العديد من الأساليب الفيزيولوجية الكهربية لتقييم ومراقبة سلامة تجمع الوحدة الحركية (MU) في الجسم الحي. تعكس إمكانات عمل العضلات المركبة (CMAP) إزالة الاستقطاب المجمعة لجميع ألياف العضلات في عضلة معينة أو مجموعة عضلية بعد تحفيز الأعصاب الطرفية وهي حساسة لمجموعة من الحالات العصبية العضلية ، بما في ذلك ALS 5,6 وضمور العضلات الشوكي (SMA)7,8,9. يتمثل أحد قيود تقييم CMAP في أن تنبت الضمانات يمكن أن يؤدي إلى الحفاظ على سعة CMAP ومساحتها حتى في وجود خسارة MU10. للتغلب على هذا القيد ، تم إجراء تعديلات على تقنية CMAP لتقييم كل من رقم الوحدة الحركية والحجم11. بالإضافة إلى ذلك ، اقترحت دراسة في الجسم الحي تبحث في التقييم الوظيفي للحجاب الحاجز CMAP بواسطة نظام فيزيولوجي كهربية أنه قد يكون من الممكن أيضا استخدام تقنية تسجيل CMAP للحجاب الحاجز الموصوفة لتقدير رقم الوحدة الحركية12.

تم تقديم تقنية تقدير عدد الوحدات الحركية الإضافية (MUNE) في البداية في أوائل سبعينيات القرن العشرين من قبل McComas et al. لعضلة الباسطة digitorum brevis في البشر13. كان نهج MUNE التدريجي عبارة عن تعديل لتقنية تسجيل CMAP التقليدية التي تم خلالها تقديم تحفيز متزايد تدريجيا لتسجيل الزيادات الكمية ، كل شيء أو لا شيء دون الحد الأقصى كمؤشرات لاستجابات الوحدة الحركية الواحدة. تم استخدام الزيادات المجمعة والمتوسطة لحساب تقدير لحجم جهد وحدة محرك واحدة (SMUP). ثم تم تقسيم هذا الحجم المحسوب إلى سعة CMAP لتقدير عدد MUs التي تعصب العضلات قيد الفحص11. يظهر MUNE حساسية عالية في اكتشاف ومراقبة فقدان الوحدة الحركية ، مما يسمح بتحديد خلل الوحدة الحركية قبل التغييرات الملحوظة في التدابير مثل سعة CMAP أو المنطقة14,15. في مرضى ALS ، أثبت MUNE أنه حساس بشكل استثنائي ، حيث يعمل كعلامة حيوية بارزة لبداية المرض وتطوره وتشخيصه16،17.

تم تطوير العديد من التعديلات على MUNE واستخدامها على نطاق واسع لتقييم وظيفة MU في حالات مثل التنكس العصبي والإصابة العصبية وعملية الشيخوخة الطبيعية18،19،20،21. منذ الوصف الأولي ، تم استخدام العديد من التكيفات باستخدام كل من الاستجابات الكهربية وقياسات القوة الإضافية (الميكانيكية) في كل من الدراسات البشرية والنماذج الحيوانية22. يوفر MUNE تقييما وظيفيا غير جراحي لاتصال الخلايا العصبية الحركية بالعضلات. يتيح تطبيق MUNE طوليا فهم المرض أو تطور النمط الظاهري المستحث وتقييم التأثيرات الوقائية أو التجديدية للتدخلات العلاجية ، سواء في البيئات السريرية أو قبل السريرية. بغض النظر عن فعالية مقاييس MUNE للتكاثر والأهمية السريرية لتقنية حمامات MU في معظم أنحاء جسم الإنسان ، فقد ركزت الجهود إلى حد كبير على عضلات الأطراف في عضلات القوارض10،23،24،25.

لذلك ، كانت أهداف هذه الدراسة هي وصف نهج للحصول على إمكانات عمل العضلات المركبة (CMAP) ، SMUP ، ورقم الوحدة الحركية الحجيبية (MUNE) كما هو الحال في تقييمات الجسم الحي التي يمكن استخدامها طوليا في دراسات القوارض قبل السريرية لتحديد حجم MUNE وحجم الوحدة الحركية (ممثلة باسم SMUP) و CMAP. علاوة على ذلك ، نقدم بيانات تمثيلية تسلط الضوء على فقدان رقم MU الحجاب الحاجز بعد إعطاء عامل تنكسي MN محموم داخل الجنبة ، شظية سم الكوليرا B مترافقة مع سابورين (CTB-SAP).

البروتوكول

تمت الموافقة على جميع الإجراءات وتنفيذها وفقا للمبادئ التوجيهية التي وضعتها اللجنة المؤسسية لرعاية واستخدام في جامعة ميسوري. أجريت التجارب على ذكور الفئران البالغة Sprague-Dawley ، الذين تتراوح أعمارهم بين 11 و 15 أسبوعا. تم إيواء هذه الفئران في أزواج وتم الاحتفاظ بها تحت دورة 12:12 من الضوء والظلام ، مع إمكانية الوصول إلى الأغذية التجارية القياسية والمياه المعالجة بحمض الهيدروكلوريك المتاحة في جميع الأوقات.

1. إعداد وتسليم التخدير

  1. ارتداء معدات الحماية الشخصية المناسبة أثناء التعامل مع الفئران.
  2. تطبيق التخدير بالاستنشاق مع 3-5٪ إيزوفلوران ، مما يضمن الحث المناسب. بمجرد تخدير الفئران بشكل كاف ، ضعه في وضع ضعيف وحافظ على التخدير مع 1-3٪ من الأيزوفلوران المستنشق. تحقق من كفاية عمق التخدير عن طريق الضغط برفق على وسادة القدم الخلفية باستخدام ملقط لضمان عدم وجود استجابة انسحاب.
    ملاحظة: بناء على حجم الفئران ووزنها ، راقب عمق التخدير ، واضبط تركيز الأيزوفلوران وفقا لذلك.
  3. حافظ على درجة حرارة 37 درجة مئوية باستخدام لوحة تسخين ثرموستاتية لمنع التغيرات في درجة الحرارة التي يمكن أن تؤثر على سعة CMAP وزمن الوصول.
  4. ضع مرهما بيطريا قائما على البترول على العينين لمنع الجفاف. راقب عمق التخدير من خلال مراقبة معدل التنفس والتحقق من استجابات الانسحاب عند الضغط على وسادة القدم بالملقط.
  5. إزالة الشعر من الثلث السفلي من الصدر والرقبة لدراسته باستخدام كليبرز . مراقبة تنفس الفئران خلال التجربة بأكملها.
    ملاحظة: بعد تسجيلات CMAP و MUNE والتوقف عن التخدير ، لا تترك الجرذ دون مراقبة حتى يستعيد وعيه الكافي. لا تعيد إلى قفص المنزل حتى يتعافى تماما.

2. وضع القطب والإعداد

  1. ضع زوجا من أقطاب إبرة أحادية القطب 28 G لتسجيل CMAP و SMUP و MUNE كما هو موضح في الشكل 1.
    1. ضع قطب الإبرة النشط (E1) تحت الجلد فوق خط الترقوة الأوسط السفلي من الحد الأخير للضلع ، وقطب الإبرة المرجعي (E2) تحت الجلد في الزاوية بين عملية xyphoid والغضروف القصي الضلعي الأخير.
      ملاحظة: لا ينبغي إدخال أقطاب الإبرة في عضلة الحجاب الحاجز. بدلا من ذلك ، يجب وضعها في المنطقة تحت الجلد.
  2. لتحفيز العصب الحجابي في الصفيحة السباتية ، استخدم زوجا من أقطاب إبرة أحادية القطب 28 G ككاثود وأنود لتحفيز الأعصاب وتوضع تحت الجلد فوق الرقبة الجانبية بين العضلات الأمامية والمتوسطة ، مفصولة بحوالي 1 سم. تأكد من أن وضع الإبر المحفزة في المستوى تحت الفقرات العنقية الرابعة (C4).
    ملاحظة: تجنب إدخال الأقطاب الكهربائية المحفزة عميقا جدا لتجنب إصابة العصب الحجابي أو أي بنية أخرى. يوضح الشكل 1 موضع القطب.
  3. بالنسبة للقطب الأرضي ، ضع قطبا سطحيا يمكن التخلص منه على الذيل.

3. الحصول على البيانات

  1. CMAP المحموم
    1. سجل استجابات CMAP الحجيبية من خلال تطبيق نبضات الموجة المربعة الكاثودية أحادية الطور لمدة 0.1 مللي ثانية وشدة تتراوح من 60 إلى 100 مللي أمبير لتحفيز العصب الحجابي.
    2. احصل على استجابات CMAP مع زيادة شدة التحفيز تدريجيا حتى تتوقف سعة الاستجابة عن إظهار أي زيادة أخرى. لضمان التحفيز فوق الأقصى ، ارفع شدة التحفيز إلى ما يقرب من 120٪ من المستوى المستخدم لاستنباط استجابة قصوى ، وسجل استجابة إضافية. إذا لم يعد حجم CMAP يزداد، فاعتبر هذه الاستجابة الحد الأقصى ل CMAP.
      ملاحظة: يفضل تقديم التحفيز أثناء الزفير لتقليل ضوضاء نشاط العضلات المتزامنة أثناء تسجيل CMAP.
    3. قم بقياس وتوثيق السعات من الذروة إلى الذروة ل CMAP بالمللي فولت (mV) (الشكل 2).
      ملاحظة: يمكن تقييم سعة CMAP من القاعدة إلى الذروة ومن الذروة إلى الذروة. غالبا ما يتم تقصير أنظمة التشخيص الكهربائي السريري لتقييم القاعدة إلى الذروة التي يتم حسابها من خط الأساس متساوي الكهربية إلى الذروة السلبية الأولية.
  2. متوسط حجم جهد وحدة المحرك الفردي (SMUP) وحساب MUNE
    1. احسب متوسط حجم SMUP باستخدام تقنية التحفيز التزايدي.
      1. لاستنباط استجابات تدريجية ، قم بإدارة التحفيز دون الحد الأقصى لمدة 0.1 مللي ثانية بتردد 1 هرتز ، مع زيادة الشدة تدريجيا بزيادات 0.03 مللي أمبير حتى يتم تحقيق الحد الأدنى من استجابة الكل أو لا شيء. احصل على الاستجابة الأولية بشدة تحفيز تتراوح بين 2 مللي أمبير و10 مللي أمبير.
      2. إذا لم تحدث الاستجابة الأولية مع شدة التحفيز بين 2 مللي أمبير و 10 مللي أمبير ، فقم بتعديل موضع الكاثود المنبه ، إما تقريبه أو تحريكه بعيدا عن العصب الحجابي في الرقبة ، لتقليل أو زيادة شدة التحفيز اللازمة ، على التوالي.
      3. إذا تحققت الاستجابة الإضافية الأولى بكثافة تحفيز تتراوح من 2 مللي أمبير إلى 10 مللي أمبير ، احفظ الاستجابة الأولى واكتسب زيادات إضافية ذات كثافة تحفيز أعلى تدريجيا ، مع تعديلها بزيادات قدرها 0.03 مللي أمبير ، لتحقيق ما مجموعه 9 زيادات إضافية تفي بالمعايير التالية في الخطوة 3.2.2.
        ملاحظة: يتم تحديد كل SMUP عن طريق طرح كل زيادة من الزيادة السابقة.
    2. أثناء قياس الاستجابات التزايدية، تأكد من أن كل زيادة تفي بالمعايير التالية:
      1. تأكد من أن الذروة السلبية الأولية للاستجابات الإضافية تتماشى مؤقتا مع الذروة السلبية لاستجابة CMAP القصوى.
        ملاحظة: الحركات الطفيفة التي لوحظت بسبب ضوضاء الخلفية من دورات التنفس متأصلة في طبيعة التجربة. ومع ذلك ، فإن الوجود المستمر ل SMUPs أثناء المراقبة الحية يؤكد هويتهم لهذا CMAP المحدد.
      2. وبما أن الحجاب الحاجز عضلة ديناميكية تشارك في التنفس، فقد تحفز كل دورة تنفس حركة خط الأساس. وبالتالي ، تحقق من استقرار وغياب التجزئة في كل استجابة تدريجية من خلال تأكيد الاتساق عبر ثلاث استجابات مكررة.
        ملاحظة: لتمييز الإمكانات المستثارة منخفضة السعة ، وخاصة SMUP الأول ، من ضوضاء الخلفية بسبب النشاط التنفسي ، من المهم أن تظل متيقظا ومراقبا لمدة 3-4 دورات تنفسية. تأكد أيضا من محاذاة القمم مع تلك الموجودة في CMAP للتأكد من دقتها.
      3. تأكد من أن كل زيادة مميزة وأكبر من سابقتها. لذلك ، قم بتمييز الاستجابات الإضافية بصريا في الوقت الفعلي ، مع مراقبتها أثناء تراكبها على الزيادات المسجلة مسبقا.
        ملاحظة: يمكن إجراء نسخ متعددة من التحفيز عند كل سعة لضمان الاتساق في الزيادات والامتثال للمعايير المحددة مسبقا.
      4. بعد التحقق بصريا من كل زيادة بالمعايير المذكورة أعلاه ، تأكد من أن سعة الزيادة لا تقل عن 25 μV. إذا كانت الزيادة أقل من 25 ميكروفولت ، فتجاهل القياس وأعد تقييم الاستجابة.
      5. بعد تسجيل 10 استجابات تزايدية ، تحقق من أن سعة كل استجابة زيادة لا تزيد عن ثلث السعة المجمعة لجميع الزيادات العشر ، والتي تمثل السعة الإجمالية للاستجابة النهائية. إذا لم يتم استيفاء هذا المعيار ، كرر قياس الاستجابات الإضافية ال 10.
        ملاحظة: تعتمد عتبة الثلث على افتراض أن كل استجابة تزايدية تمثل تنشيط وحدة حركية واحدة. إذا تجاوزت سعة أي استجابة إضافية ثلث السعة المجمعة لجميع الزيادات العشر ، فهذا يشير إلى أن الاستجابة قد لا تعزى فقط إلى تنشيط وحدة محرك واحدة. بدلا من ذلك ، يمكن أن يتأثر بتوظيف وحدات حركية إضافية أو وجود نشاط غير محدد ، مثل الضوضاء الكهربائية أو القطع الأثرية22,26.
      6. لتقدير متوسط سعة SMUPs ، قم بحساب متوسط قيم الزيادات 10. هناك طريقة أخرى لقياس متوسط سعة SMUP وهي قسمة السعة الكاملة للاستجابة الإضافية النهائية على إجمالي عدد الزيادات11.
    3. حدد MUNE بقسمة السعة القصوى ل CMAP (من الذروة إلى الذروة) على متوسط سعة SMUP (من الذروة إلى الذروة). في بعض الأنظمة الفيزيولوجية الكهربية ، يتم تسجيل SMUPs بالميكروفولت (μV) ، بينما يتم التعبير عن CMAP عادة بالمللي فولت (mV). إذا لزم الأمر ، قم بتحويل قياسات CMAP و SMUP إلى نفس الوحدات قبل حساب MUNE.
      ملاحظة: عادة ما يتم حساب CMAP من الذروة إلى الذروة ومتوسط SMUP و MUNE تلقائيا بواسطة أنظمة تخطيط كهربية العضل في العيادة):
      figure-protocol-1
      CMAP = جهد عمل العضلات المركب
      SMUP = إمكانات وحدة محرك واحد
      MUNE = تقدير رقم وحدة المحرك

النتائج

تتيح تقنيات CMAP و SMUP و MUNE الموضحة في هذا التقرير تسجيل الوظيفة العصبية العضلية في عضلة الحجاب الحاجز باستخدام وضع قطب كهربائي طفيف التوغل (الشكل 1). يمكن استخدام معلمات السعة والمساحة لتوصيف حجم CMAP فوق الأقصى ، مما يوفر مقياسا شاملا لإخراج مجموعة العضلات (الشكل 2). ومع ذلك ، في أساليبنا الحالية ، نعتمد على السعة لتحديد أحجام كل من CMAP و SMUP. يمكن استخدام CMAP و SMUP و MUNE لقياس الوظيفة العصبية العضلية في نماذج الفئران المختلفة للأمراض العصبية العضلية. لإثبات فقدان MU في سياق تنكس MN ، خضعت الفئران للحقن الثنائي داخل الجنبة باستخدام CTB-SAP (25 ميكروغرام) لاستهداف MNs الحجابي و CTB الإضافي (25 ميكروغرام) ، وتلقت الفئران الضابطة CTB غير المقترن (25 ميكروغرام) و SAP (25 ميكروغرام) 1،27.

في الشكل 3 ، تمت مقارنة النتائج في فأر مراقبة بالغ وفأر بالغ (12 أسبوعا) بعد سبعة أيام من حقن CTB-SAP داخل الجنبة. بعد الحقن داخل الجنبة ل CTB-SAP ، يتم تقليل MUNE عند 60 وحدة حركية وظيفية مقدرة مقارنة بالنتائج الطبيعية ل 74 وحدة حركية وظيفية في الفئران الضابطة. ومع ذلك ، فإن سعة CMAP في فأر CTB-SAP (14.25 مللي فولت من الذروة إلى الذروة) أظهرت تغييرات طفيفة مقارنة بالتحكم (14. 5 مللي فولت من الذروة إلى الذروة) على الأرجح بسبب النبتة الجانبية. في الشكل 4 ، تم الحصول على الحجاب الحاجز CMAP و SMUP و MUNE بشكل ثنائي ومتوسطه عند خط الأساس / الحقن المسبق (ن = 14) ، وكذلك 7 (ن = 14) ، 14 (ن = 14) ، 21 (ن = 6) ، و 28 (ن = 14) يوما بعد الحقن. في الشكل 4 ، لم يتم العثور على اختلافات خط الأساس بين المجموعات. أظهر MUNE تغيرا كبيرا للوقت (p < 0.05) ، CTB-SAP (p < 0.001) ، ووقت التفاعل x CTB-SAP (p < 0.01) مع ~ 40٪ انخفاض في MUNE في فئران CTB-SAP. أظهر متوسط SMUP لفئران CTB-SAP تغيرا كبيرا مع مرور الوقت (p < 0.05) و CTB-SAP (p < 0.01) ، ولكن لا يوجد تفاعل كبير مع ~ 50-60٪ زيادة في سعة SMUP. لم يظهر CMAP أي تغيير كبير.

figure-results-1
الشكل 1: وضع القطب. يتم إدخال (A) المهبط المحفز و (B) الأنود تحت الجلد في الرقبة الجانبية بين عضلات الميزان الأمامي والمتوسط بمسافة 1 سم تقريبا. يتم وضع القطب (C) "النشط" (E1) و (D) قطب التسجيل "المرجعي" (E2) فوق خط منتصف الترقوة السفلي من الحد الأخير للضلع ، باتباع الزاوية بين عملية الخنجري والغضروف الضلعي الأخير. بالإضافة إلى ذلك ، (ه) يوجد قطب قرص يمكن التخلص منه على الذيل كأرضية لتقليل القطع الأثرية. تم إنشاؤها باستخدام BioRender.com. يرجى النقر هنا لعرض نسخة أكبر من هذا الرقم.

figure-results-2
الشكل 2: جهد الفعالية العضلية المركبة. رسم توضيحي لاستجابة CMAP التمثيلية المسجلة من عضلة الحجاب الحاجز الأيسر. يتم تحديد سعة CMAP من الذروة إلى الذروة من جهد الذروة السلبي إلى جهد الذروة الموجب. اختصار: CMAP = جهد عمل العضلات المركبة. يرجى النقر هنا لعرض نسخة أكبر من هذا الرقم.

figure-results-3
الشكل 3: تسجيلان تمثيليان ل CMAP و MUNE من فأر تحكم ، وفأر بالغ بعد سبعة أيام من الحقن داخل الجنبة CTB-SAP. (أ) جهد عمل العضلات المركبة الحجابي الأيسر (CMAP) في فأر بالغ ضابط (عمره 12 أسبوعا) بسعة من الذروة إلى الذروة تبلغ 14.5 مللي فولت. حساسية الشاشة = 1 مللي فولت / قسم ومدة الشاشة 1 مللي ثانية / قسم. (ب) عشر استجابات تزايدية لاحقة بسعة إجمالية قدرها 1.940 mV مقسومة على 10 لتحديد متوسط حجم SMUP (0.194 mV). حساسية الشاشة = 0.2 مللي فولت / قسم وسرعة مسح 1 مللي ثانية / قسم. MUNE المحسوب = 74 (MUNE = CMAP / متوسط SMUP (14.5 مللي فولت / 0.194 مللي فولت)) (C) CMAP المحموم بعد سبعة أيام من حقن CTB-SAP لا يظهر أي تغيير تقريبا في سعة CMAP من الذروة إلى الذروة 14.25 مللي فولت. حساسية الشاشة = 1 مللي فولت / قسم وسرعة مسح 1 مللي ثانية / قسم. (د) عشر استجابات تزايدية لاحقة بسعة إجمالية من الذروة إلى الذروة تبلغ 2.360 mV مقسومة على 10 للحصول على متوسط حجم SMUP يبلغ 0.236 mV. حساسية الشاشة = 0.2 مللي فولت / قسم وسرعة مسح تبلغ 1 مللي ثانية / قسم. وبالتالي ، كان MUNE المحسوب 60. الاختصارات: CMAP = جهد عمل العضلات المركب. MUNE = تقدير رقم الوحدة الحركية ؛ CTB-SAP = شظية سم الكوليرا B مترافقة مع السابورين ؛ SMUP = جهد وحدة محرك واحد. * يوضح القطع الأثرية الناجمة عن التحفيز الكهربائي. من المهم ملاحظة أنه نظرا للتباين بين سعة المثير الكهربائي و CMAP ، بالإضافة إلى الاستجابات الإضافية ، فقد رسمنا جزءا فقط من التحفيز. تم استخدام الألوان الصديقة للألوان العمياء لتعزيز تصور الاستجابات الإضافية لتحسين إمكانية الوصول. يرجى النقر هنا لعرض نسخة أكبر من هذا الرقم.

figure-results-4
الشكل 4: التقييم الفيزيولوجي الكهربية ل CMAP و SMUP و MUNE بعد CTB-SAP. لم يتم العثور على فروق أساسية بين المجموعات (سبعة فئران ذكور عمرها 11 أسبوعا في كل من CTB-SAP والمجموعات الضابطة). (أ) لم يظهر CMAP أي تغيير كبير. (ب) أظهر متوسط SMUP لفئران CTB-SAP تغيرا كبيرا بمرور الوقت (p < 0.05) ومع CTB-SAP (p < 0.01) ، مع عدم وجود تفاعل كبير ، مما يشير إلى زيادة بنسبة 50-60٪ في سعة SMUP. (ج) بعد سبعة أيام من حقن CTB-SAP ، انخفض متوسط MUNE بشكل ملحوظ بنسبة 27.07٪ ، من 102.58 ± 20.54 إلى 72.43 ± 15.59 وحدة حركية وظيفية تقديرية (متوسط ± SD). استمر هذا الانخفاض ، مع انخفاض إضافي بنسبة 11.75٪ في 28 يوما (MUNE: 60.64 ± 11.33 ، p < 0.01). تم الحصول على جميع القياسات عند خط الأساس ، 7 و 14 و 28 يوما بعد الحقن من 14 فأرا ، مع n = 7 فئران تم حقنها باستخدام CTB-SAP المترافق و n = 7 فئران تتلقى CTB و SAP غير المقترنين كمجموعة تحكم. تم استخدام ستة فئران في اليوم 21. يتم تقديم بيانات CMAP و SMUP و MUNE كمتوسط ، وتم إجراء مقارنات باستخدام ANOVA. تشير العلامات النجمية إلى الاختلافات في نقاط زمنية مختلفة: * p < 0.05 و ** p < 0.01. الاختصارات: CMAP = جهد عمل العضلات المركب. MUNE = تقدير رقم الوحدة الحركية ؛ CTB-SAP = شظية سم الكوليرا B مترافقة مع السابورين ؛ SMUP = جهد وحدة محرك واحد. يرجى النقر هنا لعرض نسخة أكبر من هذا الرقم.

المناقشة

في الأمراض التنكسية MN ، مثل ALS ، من الأهمية بمكان تقييم MUs المشاركة في التهوية28. على الرغم من حدوث تنكس MN التنفسي في مرضى ALS ، إلا أن البداية المحددة وتطور وفاة MN لا تزال غير مفهومة بشكل كامل29،30،31. وإدراكا لأهمية هذا الجانب، تم استخدام نماذج مختلفة، سواء كانت قائمة على الجينات (على سبيل المثال، SOD12،32) وغير وراثية (على سبيل المثال، الحقن داخل الجنبة CTB-SAP3،27،33)، لمحاكاة ضعف الجهاز التنفسي في النماذج الحيوانية للأمراض التنكسية العصبية. وفقا لذلك ، فإن تحديد علامة حيوية لتشخيص ومراقبة وتقييم آثار العلاج المحتملة مفيد لهذه النماذج. بالإضافة إلى ذلك ، يمكن للمؤشرات الحيوية تسهيل الترجمة السريرية لنتائج البحوث قبل السريرية.

لتحديد عدد MNs المعصبة في النماذج التنكسية للقوارض ، تم استخدام تقنيات مختلفة لوضع العلامات ، بما في ذلك المتتبعات الرجعية والفيروسات الغدية ،25،34،35،36. في السابق ، تم استخدام الكيمياء الهيستولوجية المناعية لتسمية الخلايا العصبية الحركية الحجيبة في القرن الأمامي للحبل الشوكي العنقي2،3،33. وعلى الرغم من أن تقنيات وضع العلامات ذات قيمة بالنسبة لتقييمات الشبكات المتعددة الجنسيات، إلا أنها تنطوي على قيود في تقييم وظائف وحدات الرصد المتعددة الجنسيات وليست مناسبة للتقييمات الطولية37. تعد التقييمات الكهربية الموضوعية ضرورية للترجمة الناجحة عبر الأنواع ، لا سيما بالنظر إلى الاختلافات الهيكلية الواضحة في السمات الوظيفية والتشريحية للأنظمة الحركية بين البشر والقوارض 38,39. يمثل دمج الاختلافات البيولوجية العصبية تحديا في ترجمة النتائج من نماذج القوارض إلى المرضى. يتغلب MUNE على هذه العقبات من خلال العمل كمقياس فسيولوجي كهربي موضوعي لوظيفة MN ، مما يسمح بتقييم اتصال MU الوظيفي كعلامة حيوية في تجارب النموذج التنكسية MN 3,40.

يتم استخدام CMAP و SMUP و MUNE بشكل شائع في الدراسات البحثية ولتقييم المرضى الذين يعانون من اضطرابات عصبية عضلية9،10،11. هذه المؤشرات الحيوية المحتملة طفيفة التوغل ، مما يتيح التقييم الطولي للوظيفة داخل نفس الفرد بمرور الوقت. الأهم من ذلك ، في حين أنها لا تقيس بشكل مباشر تنشيط أو تجنيد MU بواسطة MNs القشرية ، إلا أنها توفر تقديرا ذا صلة سريريا لسلامة MN ونظيرتها الوظيفية ، MU. تعد نماذج القوارض للأمراض التنكسية MN ضرورية لفهم الآليات الفسيولوجية المرضية الكامنة وراء الأمراض البشرية وللتقدم قبل السريري للعلاجات الفعالة. يمكن أن يؤدي تطوير مقاييس النتائج والمؤشرات الحيوية التي يمكن ترجمتها عبر الأنواع إلى تبسيط وتسريع ترجمة النتائج قبل السريرية الواعدة إلى التجارب السريرية11. نظرا للتعقيد النسبي للتدابير ، قمنا بتكييف وصقل هذه التقنيات من أطراف الفئران إلى عضلة الحجاب الحاجز. تم تقديم هذه الترجمة في شكل مرئي لتسهيل الاستخدام والتنفيذ على نطاق أوسع في دراسات الفئران.

من تجربتنا ، فإن أنظمة التشخيص الكهربائي السريرية مناسبة تماما للدراسات الموضحة في هذا السياق. تنبع هذه الملاءمة من بيئة العمل المحسنة في الواجهة بين الفاحص ونظام التشخيص الكهربائي ، مما يسهل التحكم المريح. في مجموعة مختبراتنا ، نستخدم نظاما ثنائي القناة يتميز بقناتين لمكبر الصوت بدون تبديل. تم تجهيز هذه القنوات بمحول تناظري إلى رقمي 24 بت وتعمل بمعدل أخذ عينات يبلغ 48 كيلو هرتز لكل قناة. كسب الأجهزة قابل للتعديل في نطاق من 10nV إلى 100 mV لكل قسم. استخدمنا مرشحا منخفض التردد بنطاق يمتد من 0.2 هرتز إلى 5 كيلو هرتز ، وغطت إعدادات المرشح عالي التردد نطاقا من 30 هرتز إلى 10 كيلو هرتز. بالإضافة إلى ذلك ، استخدمنا محفز تيار ثابت بكثافة قابلة للتعديل تتراوح من 0 إلى 100 مللي أمبير ومدة من 0.02 إلى 1 مللي ثانية. تقدم غالبية الأنظمة السريرية ميزات قابلة للمقارنة مناسبة لتسجيل استجابات CMAP و SMUP و MUNE. يمكن تعديل هذه الأنظمة وفقا لذلك لضمان التسجيل الدقيق للبيانات المطلوبة. على سبيل المثال ، يمكن تقييم سعة CMAP من القاعدة إلى الذروة ومن الذروة إلى الذروة. غالبا ما يتم تقصير أنظمة التشخيص الكهربائي السريري لتقييم القاعدة إلى الذروة التي يتم حسابها من خط الأساس متساوي الكهربية إلى الذروة السلبية الأولية.

تتضمن عملية الحصول على استجابات CMAP و SMUP و MUNE من الحجاب الحاجز عدة خطوات حاسمة. يعد وضع القطب المتسق والدقيق ، جنبا إلى جنب مع عمق القطب الكافي ، أمرا ضروريا لقياس السعة بشكل موثوق وتقليل ضوضاء الخلفية أثناء التسجيل. يمكن أن يؤدي الوضع غير الصحيح للأقطاب الكهربائية المحفزة إلى عواقب غير مقصودة. يمكن أن يؤدي وضع أقطاب كهربائية محفزة بشكل خلفي للغاية إلى تقلصات عضلات الأطراف الأمامية المبالغ فيها لإثارة الضفيرة العضدية ، في حين أن وضع مستوى أعلى من C4 يمكن أن يجعل تحفيز العصب الحجابي أكثر صعوبة. ينطوي الوضع الأعمق على خطر إصابة الشريان السباتي أو استحضار العصب المبهم ، مما قد يتسبب في مشاكل في التوصيل القلبي. عند وضع أقطاب تسجيل أعلى أو أقل من الضلع الأخير ، قد تحدث قياسات من التحفيز الوربي أو المستقيم البطني ، على التوالي. لتجنب التسجيل من العضلات الأخرى ، لاحظ أن ذروة الحجاب الحاجز السلبية لكمون CMAP عادة ما تكون 1.5-3.5 مللي ثانية ، ويظهر شكلها المميز في الشكل 2. أشارت ملاحظاتنا إلى أن أقطاب الإبرة تنتج تسجيلات CMAP و SMUP و MUNE أكثر اتساقا مقارنة بالأقطاب الكهربائية على شكل قرص لعضلة الحجاب الحاجز. ويعزى هذا الاتساق المعزز إلى شكل قبة عضلة الحجاب الحاجز ووجود عضلات أخرى على مقربة ، مثل عضلات البطن الوربية والمستقيمة. بالإضافة إلى ذلك ، يعد الوضع المرن لأقطاب الإبرة عاملا مفيدا آخر. فيما يتعلق بكثافة التحفيز الكهربائي ، استخدمنا نطاقا من 60 إلى 100 مللي أمبير لتحفيز العصب الحجابي ، والذي يتجاوز النطاقات المبلغ عنها للأنظمة الحركية الأخرى. ينشأ هذا الاختلاف من الموقع الأعمق للعصب الحجابي في الرقبة مقارنة بالمواقع الأكثر سطحية للعصب الوركي والضفيرة العضدية في الطرف الخلفي والطرف الأمامي ، على التوالي.

يشكل الحصول على متوسط SMUP تحديات فنية أكبر مقارنة ب CMAP. حجم الاستجابة الأصغر ، في نطاق الميكروفولت بدلا من المللي فولت ، يجعل تأثير ضوضاء الخلفية أكثر وضوحا. للتخفيف من ضوضاء الخلفية ، ضع في اعتبارك تحسين موضع القطب عن طريق ضبط القطب الأرضي والكاثود والأنود. بالإضافة إلى ذلك ، تأكد من وجود حد أدنى من التداخل من الأجهزة الكهربائية القريبة في الإعداد التجريبي. قفص فاراداي ، الذي يشيع استخدامه في تطبيقات الفيزيولوجيا الكهربية داخل الخلايا ، ليس ضروريا لهذا الإعداد. يعد التحديد البصري لاستجابات SMUP الفردية مهارة صعبة تتطلب ممارسة للحصول على نتائج متسقة وقابلة للتكرار. نظرا لأن الحجاب الحاجز عبارة عن عضلة ديناميكية ، يمكن أن يتغير خط الأساس مع كل دورة تهوية. إن الانتباه إلى زيادات SMUP لضمان التوافق مع SMUP السابق هو عامل حاسم في التغلب على هذا التحدي. بالإضافة إلى ذلك ، فإن التأكد من أن SMUPs تبدأ ضمن الإطار الزمني لزمن الوصول ل CMAP الأقصى أمر مهم للتسجيلات الدقيقة.

التحدي الآخر لتسجيل الحجاب الحاجز هو الطبيعة غير المتماثلة لهذه العضلة ، التي تتميز بسماكات متفاوتة من اليسار إلى اليمين وتتأثر بالضغط الذي يمارسه الكبد على الجانب الأيمن41. لمعالجة هذا الأمر ، أجرينا قياسات فسيولوجية كهربية بشكل منفصل على الحجاب الحاجز الأيمن والأيسر. بعد ذلك ، قمنا بحساب متوسطات استجابات CMAP و SMUP و MUNE بشكل منفصل.

نظرا لأن استجابة CMAP تعكس الاستقطاب الجماعي لألياف العضلات في عضلة معينة ، فإن أي أمراض تؤثر على MN الحجابي إلى الألياف العضلية الحجاب الحاجز يمكن أن تؤدي إلى انخفاض حجم CMAP. وبالتالي ، فإن حساب متوسط CMAP من الحجاب الحاجز الثنائي يقدم تقييما ممتازا للحالة الوظيفية العامة للجهاز العصبي العضلي التنفسي. يمكن أن تؤدي التغييرات التعويضية ، مثل الإنبات الجانبي ، إلى الحفاظ على حجم CMAP حتى في وجود MN أو فقدان المحور العصبي الحركي11. يسمح تسجيل الزيادات الفردية بتقدير متوسط إنتاج وحدات MUs الفردية (حجم SMUP) ، مما يقدم رؤى أكثر تفصيلا حول الحالة الوظيفية لوحدات MUs في الجهاز التنفسي. ومن ثم ، تصبح تقنية MUNE ضرورية لتقييم مدخلات MNs أو محاور عصبية في الحجاب الحاجز. إن تطبيق هذه المؤشرات الحيوية في التجارب قبل السريرية للعلاجات لدراسة أمراض MN يحمل القدرة على تحسين الترجمة إلى التجارب السريرية.

الإفصاحات

تلقت WDA تمويلا بحثيا من NMD Pharma و Avidity Biosciences ورسوم استشارية من NMD Pharma و Avidity Biosciences و Dyne Therapeutics و Novartis و Design Therapeutics و Catalyst Pharmaceuticals و Novartis.

شكر وتقدير

تم تمويل هذا العمل من خلال منحة برنامج أبحاث إصابات / أمراض الحبل الشوكي من برنامج أبحاث إصابات / أمراض الحبل الشوكي في ميسوري (NLN و WDA).

المواد

قائمة المواد المستخدمة في هذه المقالة
الاسمالشركةرقم فهرسيالتعليقات
2 مل حقنة زجاجيةكينت ساينتفيك كوربوريشنSOMNO-2ML
50 مل ، موديل 705 RN حقنةهاميلتون Company7637-01تستخدم لإجراء الحقن داخل الجنبة
5008 - Formulab DietLabDiet0001325
إبر قابلة للتعقيم 26 جم (26S RN 9.52 مم 40 درجة ؛)شركة هاميلتون7804-04تستخدم لإجراء الحقن داخل الجنبة
الوحدة الفرعية B لتوكسين الكوليرا (CTB)MilliporeSigmaC9903تستخدم للحقن داخل الجنبة لتسمية الخلايا العصبية الحركية الباقية
سم الكوليرا الوحدة الفرعية B المترافقة مع السابورين (CTB-SAP)أنظمة الاستهداف المتقدمةIT-14المستخدمة في الحقن داخل الجنبة لإحداث موت الخلايا العصبية الحركية
كابل قابل للفصلTechnomed202845-0000لتوصيل قطب المسجل بآلة التشخيص الكهربائي
قطب قرصي يمكن التخلص منه مقاس 2 × 2 بوصة مع خيوطCadwell302290-000قطب أرضي
أحادي القطب يمكن التخلص منه 28 GTechnomed202270-000أقطاب كهربائية محفزة للكاثود والأنود - أقطاب تسجيل
إبرة EMG (صندوق تبديل أمبير / ستيم)كادويل190266-200لتوصيل الأقطاب الكهربائية أحادية القطب بمحفز التشخيص الكهربائي
مساعدة الأيدي مشبك التمساح مع قاعدة حديديةراديو شاك64-079الحفاظ على وضع القطب الكهربائي للتسجيل 
Isoflurane (زجاجة 250 مل)Piramal Healthcare
حقنة ري أحادية الطرف منحنيةتستخدم Covidien81412012لتطبيق نظام المراقبة الفسيولوجية للهلام الكهربائي
مع RightTemp HomethermmicKent Scientific CorporationPS-RTيتضمن وسادة تسخين الأشعة تحت الحمراء ، ومسبار المستقيم ، ومسبار درجة حرارة الوسادة
Pro Trimmer Pet مجموعة الحلاقةOster078577-010-003مقص الشعر
Saporin (SAP)أنظمة الاستهداف المتقدمةPR-01المستخدمة للحقن داخل الجنبة (عامل التحكم عند حقنه من تلقاء نفسه)
نظام سييرا ساميت EMGCadwell Industries، Inc. ، Kennewick ، WAنظام التشخيص الكهربائي المحمول
SomnoSuite نظام التخدير الرقمي منخفض التدفقKent Scientific تتضمن شركةSOMNOمحول علوي مضاد للانسكاب ومضاد للبخار. أنابيب محول Y. مرشح كسح الفحم
Sprague-Dawley الفئرانEnvigo مستعمرة 208a ، إنديانابوليس ، IN
مرهم العيون البيطري القائم على البترول   ؛يطبق Puralube26870أثناء التخدير لتجنب إصابة القرنية
كابل

المراجع

  1. Mantilla, C. B., Zhan, W. -Z., Sieck, G. C. Retrograde labeling of phrenic motoneurons by intrapleural injection. J Neurosci Methods. 182 (2), 244-249 (2009).
  2. Nichols, N. L., Satriotomo, I., Harrigan, D. J., Mitchell, G. S. Acute intermittent hypoxia induced phrenic long-term facilitation despite increased sod1 expression in a rat model of als. Exp Neurol. 273, 138-150 (2015).
  3. Nichols, N. L., Craig, T. A., Tanner, M. A. Phrenic long-term facilitation following intrapleural ctb-sap-induced respiratory motor neuron death. Respir Physiol Neurobiol. 256, 43-49 (2018).
  4. Kiernan, M. C., et al. Amyotrophic lateral sclerosis. Lancet. 377 (9769), 942-955 (2011).
  5. Boërio, D., Kalmar, B., Greensmith, L., Bostock, H. Excitability properties of mouse motor axons in the mutant sod1g93a model of amyotrophic lateral sclerosis. Muscle Nerve. 41 (6), 774-784 (2010).
  6. Shibuya, K., et al. Motor cortical function determines prognosis in sporadic als. Neurology. 87 (5), 513-520 (2016).
  7. Lewelt, A., et al. Compound muscle action potential and motor function in children with spinal muscular atrophy. Muscle Nerve. 42 (5), 703-708 (2010).
  8. Mcgovern, V. L., et al. Smn expression is required in motor neurons to rescue electrophysiological deficits in the smnδ7 mouse model of sma. Hum Mol Genet. 24 (19), 5524-5541 (2015).
  9. Arnold, W. D., et al. Electrophysiological biomarkers in spinal muscular atrophy: Preclinical proof of concept. Ann Clin Transl Neurol. 1 (1), 34-44 (2014).
  10. Harrigan, M. E., et al. Assessing rat forelimb and hindlimb motor unit connectivity as objective and robust biomarkers of spinal motor neuron function. Sci Rep. 9 (1), 16699(2019).
  11. Arnold, W. D., et al. Electrophysiological motor unit number estimation (mune) measuring compound muscle action potential (cmap) in mouse hindlimb muscles. J. Vis. Exp: JoVE. (103), e52899(2015).
  12. Martin, M., Li, K., Wright, M. C., Lepore, A. C. Functional and morphological assessment of diaphragm innervation by phrenic motor neurons. J. Vis. Exp: JoVE. (99), e52605(2015).
  13. Mccomas, A., Fawcett, P. R. W., Campbell, M., Sica, R. Electrophysiological estimation of the number of motor units within a human muscle. J Neurol Neurosurg Psychiatry. 34 (2), 121-131 (1971).
  14. Felice, K. J. A longitudinal study comparing thenar motor unit number estimates to other quantitative tests in patients with amyotrophic lateral sclerosis. Muscle Nerve. 20 (2), 179-185 (1997).
  15. Vucic, S., Rutkove, S. B. Neurophysiological biomarkers in amyotrophic lateral sclerosis. Curr Opin Neurol. 31 (5), 640-647 (2018).
  16. Carleton, S., Brown, W. Changes in motor unit populations in motor neurone disease. J Neurol Neurosurg Psychiatry. 42 (1), 42-51 (1979).
  17. Yuen, E. C., Olney, R. K. Longitudinal study of fiber density and motor unit number estimate in patients with amyotrophic lateral sclerosis. Neurology. 49 (2), 573-578 (1997).
  18. Gooch, C. L., et al. Motor unit number estimation: A technology and literature review. Muscle Nerve. 50 (6), 884-893 (2014).
  19. Henderson, R. D., Ridall, P. G., Hutchinson, N. M., Pettitt, A. N., Mccombe, P. A. Bayesian statistical mune method. Muscle Nerve. 36 (2), 206-213 (2007).
  20. Shefner, J., et al. Multipoint incremental motor unit number estimation as an outcome measure in als. Neurology. 77 (3), 235-241 (2011).
  21. Stein, R. B., Yang, J. F. Methods for estimating the number of motor units in human muscles. Ann Neurol. 28 (4), 487-495 (1990).
  22. Shefner, J. M. Motor unit number estimation in human neurological diseases and animal models. Clin Neurophysiol. 112 (6), 955-964 (2001).
  23. Ahad, M., Rutkove, S. Correlation between muscle electrical impedance data and standard neurophysiologic parameters after experimental neurogenic injury. Physiol Meas. 31 (11), 1437(2010).
  24. Kasselman, L. J., Shefner, J. M., Rutkove, S. B. Motor unit number estimation in the rat tail using a modified multipoint stimulation technique. Muscle Nerve. 40 (1), 115-121 (2009).
  25. Ngo, S., et al. The relationship between bayesian motor unit number estimation and histological measurements of motor neurons in wild-type and sod1g93a mice. Clin Neurophysiol. 123 (10), 2080-2091 (2012).
  26. Feasby, T., Brown, W. Variation of motor unit size in the human extensor digitorum brevis and thenar muscles. J Neurol Neurosurg Psychiatry. 37 (8), 916-926 (1974).
  27. Nichols, N. L., Vinit, S., Bauernschmidt, L., Mitchell, G. S. Respiratory function after selective respiratory motor neuron death from intrapleural ctb-saporin injections. Exp Neurol. 267, 18-29 (2015).
  28. Nichols, N. L., et al. Ventilatory control in als. Respir Physiol Neurobiol. 189 (2), 429-437 (2013).
  29. Cifra, A., Nani, F., Nistri, A. Respiratory motoneurons and pathological conditions: Lessons from hypoglossal motoneurons challenged by excitotoxic or oxidative stress. Respir Physiol Neurobiol. 179 (1), 89-96 (2011).
  30. Kobayashi, Z., et al. Fals with gly72ser mutation in sod1 gene: Report of a family including the first autopsy case. J Neurol Sci. 300 (1), 9-13 (2011).
  31. Su, M., Wakabayashi, K., Tanno, Y., Inuzuka, T., Takahashi, H. An autopsy case of amyotrophic lateral sclerosis with concomitant alzheimer's and incidental lewy body diseases. No to shinkei= Brain and nerve. 48 (10), 931-936 (1996).
  32. Lladó, J., et al. Degeneration of respiratory motor neurons in the sod1 g93a transgenic rat model of als. Neurobiol Dis. 21 (1), 110-118 (2006).
  33. Borkowski, L. F., Smith, C. L., Keilholz, A. N., Nichols, N. L. Divergent receptor utilization is necessary for phrenic long-term facilitation over the course of motor neuron loss following ctb-sap intrapleural injections. J Neurophysiol. 126 (3), 709-722 (2021).
  34. Nicolopoulos-Stournaras, S., Iles, J. F. Motor neuron columns in the lumbar spinal cord of the rat. J Comp Neurol. 217 (1), 75-85 (1983).
  35. Tosolini, A. P., Morris, R. Targeting motor end plates for delivery of adenoviruses: An approach to maximize uptake and transduction of spinal cord motor neurons. Sci Rep. 6 (1), 33058(2016).
  36. Mchanwell, S., Biscoe, T. The localization of motoneurons supplying the hindlimb muscles of the mouse. Phil. Trans. R. , 477-508 (1981).
  37. Nair, J., et al. Histological identification of phrenic afferent projections to the spinal cord. Respir Physiol Neurobiol. 236, 57-68 (2017).
  38. Courtine, G., et al. Can experiments in nonhuman primates expedite the translation of treatments for spinal cord injury in humans. Nat Med. 13 (5), 561-566 (2007).
  39. Friedli, L., et al. Pronounced species divergence in corticospinal tract reorganization and functional recovery after lateralized spinal cord injury favors primates. Sci Transl Med. 7 (302), 134(2015).
  40. Arnold, R., et al. Nerve excitability in the rat forelimb: A technique to improve translational utility. J Neurosci Methods. 275, 19-24 (2017).
  41. Boriek, A., Rodarte, J., Reid, M. Shape and tension distribution of the passive rat diaphragm. Am J Physiol Regul Integr Comp Physiol. 280, R33-R41 (2001).

إعادة الطباعة والأذونات

الوسوم

تقييم مقاييس نتائج اتصال وحدة محرك الحجاب الحاجز للفئران كمؤشرات حيوية كمية لتنكس الخلايا العصبية الحركية الحجابي والتعويض
اتصل بنا
أوصِ بها للمكتبة

الخصوصية

شروط الاستخدام

السياسات

2026 © حقوق الطبع والنشر MyJoVE Corporation. جميع الحقوق محفوظة.