$$\rightleftharpoonup{xx}$$
$$\longleftharp{xx}$$,
$$\longrightharp{xx}$$,
تم تطوير التقنية الموصوفة بما يتوافق تماما مع المبادئ التوجيهية للجنة الأخلاقيات المؤسسية لرعاية واستخدام في التجارب (CIECUAE) التابعة لجامعة Icesi ، وفقا للقانون 84 لعام 1989 وقرار رئيس الجامعة رقم 847 (9 يوليو 2012). هذا يضمن كلا من النزاهة العلمية ورفاهية المستخدمة ، مما يقلل من معاناتها. تم استخدام ذكور خنازير Landrace ، التي يبلغ عمرها 3 أشهر وتزن 15-20 كجم ، في هذه الدراسة. الكواشف والمعدات المطلوبة مدرجة في جدول المواد.
1. النموذج الحيوي للخنازير
- تضحية
- قم بإجراء تقييم بيطري عام وقم بالحجر الصحي لعينة الخنازير المختارة لمدة 24 ساعة. إذا لم تظهر على أي أعراض خلال هذه الفترة ، فاستمر في القتل الرحيم.
- تخدير
- يتم تطبيق التخدير العضلي باستخدام الكيتامين + الزيلازين + الأتروبين بجرعات 10 ملغم / كجم و 0.5 مجم / كجم و 0.04 مجم / كجم على التوالي (باتباع البروتوكولات المعتمدة مؤسسيا).
ملاحظة: تأكد من التخدير العميق. تقييم عمق التخدير من خلال الفحص البدني. يشار إلى التخدير العميق من خلال اتساع التلميذ ومركزه ، وغياب المنعكس الجني ، وانخفاض منعكس القرنية ، وانخفاض معدل التنفس ومعدل ضربات القلب وضغط الدم.
- القتل الرحيم
- يجب تطبيق 5 مل من بنتوباربيتال الصوديوم / ثنائي فينيل هيدانتوين (390/50 مجم / مل) عن طريق الوريد. بعد إعطاء عامل القتل الرحيم ، قم بتسمع المعلمات الفسيولوجية للحيوان لأنواع Suis Scrofa : HR ، 60-90 ؛ FR ، 8-18 ؛ و T ° 37-39 °C8.
- راقب معدل ضربات القلب حتى ينخفض تدريجيا ويتوقف تماما. لاحظ التغيرات الفورية مثل استرخاء العضلة العاصرة ، والأغشية الزرقاء ، وغياب الاستجابة لمحفزات الجسم. ضع في اعتبارك إكمال القتل الرحيم بعد 5 دقائق من التسمع القلبي دون اكتشاف نبضات القلب.
- التخزين والنقل
- انقل النموذج الحيوي للخنازير من غرفة العمليات إلى مختبر التشريح في غضون نصف ساعة من القتل الرحيم لمنع التحلل والتكاثر الميكروبي ، وبالتالي تحسين الحفاظ على النموذج الحيوي.
2. محلول حافظة يعتمد على المحلول التشيلي
- تحضير الحل التشيلي المعدل
- استخدم محلولا تشيليا معدلا يحتوي على الإيثانول والجلسرين والفورمالديهايد وكلوريد البنزالكونيوم وجوهر القهوة العطري والماء المقطر. تأكد من أن المحلول يحتوي على درجة حموضة 7.0.
- تحضير المحلول الحافظ في خزان سعة 50 لترا. أولا ، أضف 10.6 لتر من الماء المقطر إلى الخزان. بعد ذلك ، أضف 7.6 لتر من 96٪ إيثانول ، و 5 لتر من الجلسرين ، و 0.5 لتر من 50٪ كلوريد البنزالكونيوم ، و 0.1 لتر من جوهر القهوة العطري.
ملاحظة: يرجى الرجوع إلى الجدول 1 للاطلاع على التركيزات والأحجام المطلوبة لكل مكون اللازم لتحضير 25 لترا من المحلول التشيلي المعدل.
3. إعطاء محلول التحافظة التشيلي المعدل
ملاحظة: بمجرد تحضير المحلول الحافظ ، قم بإدارته من خلال الملء والغمر.
- الإعطاء عن طريق ملء محلول الحافظة التشيلي المعدل
ملاحظة: استخدم ملابس السلامة الحيوية لهذا الإجراء: قناع نصف قابل لإعادة الاستخدام مع مرشحات A1P2 ، ونظارات واقية للسلامة الحيوية ، وثوب جراحي بأكمام طويلة يمكن التخلص منه ، وقبعة جراحية ، وطماق ، وقفازات النتريل.
- النهج الجراحي
- قم بعمل شق على طول الخط ألبا (باستخدام مقبض مشرط 4 ، الشفرة 22) من عملية الخنجري إلى منطقة العانة.
- تحديد الأنسجة الخلوية تحت الجلد والألياف العضلية للعضلة المستقيمة البطنية.
ملاحظة: في لحظة الشق ، حدد الأنسجة الدهنية الضئيلة الملتصقة بالجلد ، والمعروفة باسم الأنسجة الخلوية تحت الجلد ، والألياف العضلية للعضلة المستقيمة البطانية الموجودة بشكل أعمق9.
- قطع بعناية للوصول إلى الصفاق ، مما يضمن فتحه على تجويف البطن دون إصابة الكبد والأمعاء ، والتي سيتم الكشف عنها على الفور.
- اسحب الحلقات المعوية إلى الجانب الأيمن من تجويف البطن. تحديد الصفاق الجداري الذي يغطي الكلية اليسرى والأوعية الكلوية. استخدم هذه الهياكل الوعائية لتحديد موقع الشريان الأورطي البطني.
- ابحث عن ظهور السنيقة الكلوية اليسرى. إزالة الصفاق الذي يغطي الشريان الأورطي 5 سم فوق الشريان الكلوي.
- عند تعريض عنيق الكلى الأيسر ، قم بتعبئة الحلقات المعوية وشق الصفاق الذي يغطي النقير. تشريح الأمامي الخلفي لتحديد الوريد الكلوي أولا ، وهو أكبر ويقع في الأمام.
- حدد موقع الشريان الكلوي للخلف ، باتباع مساره إلى أصله في الشريان الأورطي البطني. أخيرا ، حدد الحوض الكلوي ، وهو الهيكل الخلفي للنقير9.
- قم بتشريح الجزء الخلفي من الشريان الأورطي بعناية. استخدم 0/0 حرير لربط الشريان الأورطي بعقدة أعلى من مستوى الشريان الكلوي وعقدة أخرى 5 سم فوقها.
- قم بتثبيت الشريان الأورطي على الفور باستخدام مشابك كيلي على طرفي الجزء الأبهري المعزول.
- قم بشق جدار الأبهر بطرف مقص Metzembaum ، مع إجراء قطع بحوالي 0.3 سم في الجدار الأمامي للشريان الأورطي ، مع الحرص على عدم ثقبه.
- اربط الطرف البعيد أثناء إزالة مشبك كيلي لإدخال إبرة غير حادة على شكل حرف L مقاس 3.2 مم في التجويف الشرياني. قم بإزالة مشبك كيلي القريب وابدأ في نضح محلول الحفظ التشيلي المعدل.
- نضح الأبهر لمحلول الحفظ التشيلي المعدل
- استمر في نضح محلول الحفظ التشيلي المعدل.
ملاحظة: قم بإدارة 0.25 لتر / كجم بضغط 10 أرطال باستخدام مضخة التروية.
- نهاية التروية
- بمجرد اكتمال نضح محلول الحفظ ، قم بإزالة قنية التروية وعقد موقع الإدخال بحرير 0/0 لمنع ارتجاع محلول الحفظ. أغلق البطن عن طريق خياطة الشق في الخط ألبا ب 0/0 حرير.
ملاحظة: لتقييم ما إذا كان قد تم تحقيق التروية الكافية ، تحقق من المؤشرات الحادة للتشبع: تمديد الأطراف العلوية والسفلية ، وتعدد عنق الرحم والصدر ، والجريان السطحي للمحلول عبر الخياشيم. وقت التروية التقريبي هو 2 ساعة.
- الإدارة عن طريق الانغماس
ملاحظة: استخدم ملابس السلامة الحيوية لهذا الإجراء: قناع نصف قابل لإعادة الاستخدام مع مرشحات A1P2 ، ونظارات واقية للسلامة الحيوية ، وثوب جراحي بأكمام طويلة يمكن التخلص منه ، وقبعة جراحية ، وطماق ، وقفازات النتريل.
- الإدارة عن طريق غمر محلول الحفظ التشيلي المعدل
- قم بتخزين عينة الخنازير في خزان سعة 300 لتر مملوء بنفس محلول الحماية الموضح في الخطوة 2.
ملاحظة: تأكد من غمر النموذج الحيوي بالكامل باستخدام ما يقرب من 150 لترا من المحلول. بعد الغمر ، قم بتخزين النموذج الحيوي عند 20 درجة مئوية لمدة 6 أشهر. تشمل مؤشرات الحفظ الكافي عدم وجود علامات تحلل (على سبيل المثال ، وذمة الجسم ، والتورم ، والرائحة الكريهة ، والشحوم ، وتفتيت الأنسجة).
4. حل إزالة الشكل على أساس الحل التشيلي
- تحضير محلول إزالة الشكل
- استخدم محلولا تشيليا معدلا يحتوي على الإيثانول والجلسرين وكلوريد البنزالكونيوم وجوهر القهوة العطري والماء المقطر. تأكد من أن المحلول يحتوي على درجة حموضة 7.0.
- تحضير محلول إزالة الشكل في خزان سعة 50 لترا. أولا ، أضف 11.1 لترا من الماء المقطر ، ثم 7.8 لتر من الإيثانول بنسبة 96٪ ، و 5 لتر من الجلسرين ، و 1 لتر من كلوريد البنزالكونيوم بنسبة 50٪ ، و 0.1 لتر من جوهر القهوة العطري.
ملاحظة: يرجى الرجوع إلى الجدول 2 للاطلاع على التركيزات والأحجام المطلوبة لكل مكون لازم لتحضير 25 لترا من المحلول التشيلي المعدل الخالي من الفورمالديهايد.
5. إزالة الشكل
ملاحظة: استخدم ملابس السلامة الحيوية لهذا الإجراء: قناع نصف قابل لإعادة الاستخدام مع مرشحات A1P2 ، ونظارات واقية للسلامة الحيوية ، وثوب جراحي بأكمام طويلة يمكن التخلص منه ، وقبعة جراحية ، وطماق ، وقفازات النتريل.
- الإعطاء عن طريق غمر محلول الحفظ التشيلي المعدل الخالي من الفورمالديهايد
- في نهاية فترة الحفظ بالغمر لمدة 6 أشهر ، انقل النموذج الحيوي إلى خزان سعة 300 لتر مملوء بمحلول حفظ تشيلي معدل خال من الفورمالديهايد. قم بتخزين النموذج الحيوي لمدة 4 أسابيع.
ملاحظة: تأكد من غمر النموذج الحيوي بالكامل باستخدام ما يقرب من 150 لترا من المحلول.
6. تليين الجلسرين
- مباشرة بعد عملية إزالة الشكل ، اغمر النموذج الحيوي في المحاليل ذات تركيزات متزايدة من الجلسرين المخفف في الماء: 50٪ و 70٪ و 90٪ من الجلسرين. حافظ على النموذج الحيوي في كل تركيز لمدة أسبوع واحد.