تمت الموافقة على جميع الأنشطة الحيوانية الموضحة هنا من قبل اللجنة المؤسسية لرعاية واستخدامها (IACUC) التابعة لمجلس بادن فورتمبيرغ الإقليمي في كارلسروه ، ألمانيا. تمت إدارة التجارب وفقا للمعايير المؤسسية ووفقا للقوانين الألمانية لاستخدام ورعايتها ووفقا لتوجيهات مجلس الجماعة الأوروبية (2010/63 / EU) بالإضافة إلى إرشادات ARRIVE وتم إجراؤها في مرافق معتمدة. تم استخدام ذكور فئران Spraque Dawley من Janvier Labs بوزن طلب 400 جرام.
1. إعداد الإجراء (الشكل 1)
- قم بإعداد خطافات التحضير الجراحي عن طريق طي القنيات بزاوية 135 درجة عند 1 سم إلى الحافة ، وتوصيلها بأنابيب التروية البلاستيكية عبر قفل Luer ، وتطبيق الشد باستخدام مشبك البعوض الجراحي (الشكل 1 أ ، ب).
- تحضير جهاز التعرض الجراحي للقوارض.
ملاحظة: إلى جانب توفر المنصات التجارية ، يمكن أيضا أن تكون ذاتية البناء بشكل فعال من حيث التكلفة ، كما في هذه الدراسة.
- لهذا ، استخدم صفيحة فولاذية مقاس 40 سم × 50 سم بسماكة 4 مم. قم بإنشاء عدة ثقوب مقاس 8 مم باستخدام مثقاب فولاذي في الموقع المطلوب لنقاط الشد اللاحقة. ضع قضبان التثبيت على شكل حرف Y في هذه المواقع.
- ضع وسادة تسخين أعلى الصفيحة الفولاذية لجهاز التعرض الجراحي لتوفير الدعم الحراري.
- قم بإعداد خطافات التحضير الجراحي بأنابيب بلاستيكية متصلة ومشابك البعوض الجراحية لتطبيق التوتر لاحقا على الأنسجة للتعرض الجراحي.
- قم بإزالة سدادة حقنة بلاستيكية سعة 10 مل بطرف قفل لورير ذكر واقطع الطرف القريب من المحقنة. أدخل الجزء البعيد في كيس التهوية كما هو موضح وأغلقه بإحكام عن طريق تغطيته بأنبوب انكماش حراري وتطبيق حرارة لطيفة باستخدام شعلة مختبر (الشكل 1D-F).
- قم بتقصير وشطبة أحجام مختلفة من القسطرة الوريدية وإدخال سلك توجيه من مجموعة القسطرة الشريانية مع نهاية السلك المرن عند الحافة في حجم القسطرة الأنسب لحجم المعني (من المفترض 14 جم) لتقنية Seldinger اللاحقة22،23 أثناء التنبيب (الشكل 1G ، H).

الشكل 1: الإعداد التجريبي. (أ) قنية مطوية متصلة بأنبوب تروية يستخدم كخطاف تحضير جراحي. (ب) خطاف التحضير مع المشبك الموضوع في قضيب تثبيت معدني. (ج) المخدر قبل التدخل. (د) كيس تهوية من طب حديثي الولادة. (E-F) تركيب محكم لحقنة قفل لور على كيس التهوية باستخدام أنبوب انكماش حراري. (ز) قسطرة وريدية قصيرة ومشطوفة بأحجام مختلفة بسلك توجيه من مجموعة قسطرة الزعيم الشرياني لتقنية Seldinger. (ح) البناء النهائي المصنوع حسب الطلب. الرجاء النقر هنا لعرض نسخة أكبر من هذا الرقم.
2. التخدير والتسكين
- تخدير الجرذ بالدواء المفضل.
ملاحظة: هنا ، تم إنشاء التخدير والتسكين باستخدام الكيتامين 10٪ (100 مجم / مل) ، زيلازين 2٪ (20 مجم / مل) ، كاربروفين 50 مجم / مل ، والأيزوفلوران. تم استخدام تخفيف 1:10 من الزيلازين والكاربروفين كحلول مخزون للتطبيق.
- تحفيز التخدير عن طريق وضع في صندوق تحريضي مغمور بالأكسجين بنسبة 100٪ بمعدل تدفق 5 لتر / دقيقة مكملا بنسبة 4٪ (v) من الأيزوفلوران باستخدام المرذاذ.
- بعد تحقيق فقدان الوعي ، قم بإزالة من صندوق الحث وحقنه (IP) ب 100 مجم / كجم من وزن الجسم كيتامين و 4 مجم / كجم من وزن الجسم زيلازين.
ملاحظة: هذا يعادل 40 مجم من الكيتامين (0.4 مل من المحلول الأصلي) و 1.6 مجم من الزيلازين (0.08 مل من المحلول الأصلي أو 0.8 مل من محلول 1:10) لحيوان 400 ملغ.
- ضع مرة أخرى في صندوق الحث المغمور بالأيزوفلوران حتى يبدأ تأثير حقن IP.
- ضمان عمق التخدير المناسب من خلال اختبار عدم استجابة الفئران لقرص إصبع القدم الثابت.
- ضع مرهم العيون على العينين.
- تقييم عمق التخدير والحفاظ عليه أثناء الجراحة.
- عندما يبدو أن التأثيرات المخدرة تتضاءل بمرور الوقت (كل ساعة تقريبا) ، قم بحقن بكمية إضافية من 50 مجم / كجم من وزن الجسم و 1 مجم / كجم من وزن الجسم زيلازين. هذا يتوافق مع 20 مجم من الكيتامين (0.2 مل من المحلول الأصلي) و 0.4 مجم من الزيلازين (0.2 مل من محلول 1:10) لحيوان 400 مجم.
- توفير تسكين إضافي قبل بضع الصدر بحقن SC بمقدار 5 ملغ/كغ من الكاربروفين. هذا يتوافق مع 2 مجم من الكاربروفين (0.04 مل من المحلول الأصلي أو 0.4 مل من محلول 1:10) لحيوان 400 ملغ.
3. التحضير الجراحي (الشكل 2)
- تشبع الدورة الدموية للحيوان بالأكسجين عن طريق استنشاق الأكسجين بنسبة 100٪ عبر قناع حديثي الولادة عبر الأنف (الشكل 2 أ).
- بعد 5 دقائق ، قم بالتبديل من قناع حديثي الولادة عبر الأنف إلى بناء كيس تهوية لحديثي الولادة مع طرف قفل لور من حقنة بلاستيكية للذكور كما هو موضح أعلاه وقدم الأكسجين في حالة فائض مع طرف المحقنة بالقرب من طرف أنف (الشكل 2 ب).
- قم بإجراء شق متوسط في الجلد الصدري عبر الطول المطلوب وفضح فتحة العين الجراحية باستخدام خطافات التحضير الجراحي (الشكل 2C ، D).
- تقدم في التحضير عن طريق التشريح الحاد بمقص ناعم من خلال لفافة عنق الرحم. كشف القصية الترقوية الخشائية والعضلة تحت اللاهيويد ووضع العضلات تحت اللاويويد المتوسطة إلى اليمين بعد تشريح الغشاء الجانبي الأيسر (الشكل 2E-G).
- قم بإجراء تشريح حاد باتجاه القصبة الهوائية ونفق القصبة الهوائية باستخدام مشابك overholt (الشكل 2H-I).
- حبال القصبة الهوائية باستخدام حلقة وعاء سيليكون وحبال مزدوجة للقصبة الهوائية البعيدة باستخدام خياطة متعددة الشعيرات لتثبيت قنية القصبة الهوائية في وقت لاحق (الشكل 2J-N).

الشكل 2: تحضير القصبة الهوائية. (أ) استنشاق الأكسجين عن طريق القناع. (ب) قم بالتبديل من القناع إلى حقنة قفل Luer الذكور لتطبيق الأكسجين. (ج) شق الجلد الصدري العنقي. (د) التحضير من خلال اللفافة العنقية. (ه) التعرض للعضلة القصية الترقوية الخشائية والعضلة تحت الهيويد. (و) الجانبي للعضلة تحت الهيويدات المتوسطة. (ز) تشريح حاد باتجاه القصبة الهوائية. (ح) حفر نفق للقصبة الهوائية باستخدام مشابك الحفر الزائدة. (ط) حبال القصبة الهوائية باستخدام حلقة وعاء سيليكون. (J-N) حبال ذيلية مزدوجة للقصبة الهوائية باستخدام خياطة خيوط متعددة لتثبيت قنية القصبة الهوائية في وقت لاحق. الرجاء النقر هنا لعرض نسخة أكبر من هذا الرقم.
4. إجراء التنبيب (الشكل 3)
- قم بإطالة القصبة الهوائية باستخدام كماشة غير رضحية (الشكل 3 أ ، ب).
- قم بإجراء شق جزئي في القصبة الهوائية بزاوية 180 درجة من المحيط باستخدام المقص (الشكل 3C-F).
- أدخل سلك توجيه Seldinger بنهاية مرنة في القصبة الهوائية (الشكل 3G-H) ثم أدخل القسطرة الوريدية المعدلة ذات المقاس المناسب في القصبة الهوائية الموجهة بسلك Seldinger (الشكل 3I-N).
- قم بإزالة سلك Seldinger (الشكل 3O) ، وقم بتوصيل طرف قفل Luer لقسطرة القصبة الهوائية بكيس التهوية المعدل ، وابدأ التهوية اليدوية اللطيفة الواقية للرئة بتردد عال وحجم مد وجزر منخفض (الشكل 3P). إجراء التهوية اليدوية طالما لم يتم إجراء بضع الصدر المتوسط ولم تكن الرئة على مرأى من الجميع.
- اربط خياطة القفل الموضوعة مسبقا بعقدة منزلقة لتجنب التسرب الجوي وإزالة القسطرة العرضية (الشكل 3Q-T).

الشكل 3: التنبيب الرغامي عن طريق بضع القصبة الهوائية. (أ) الحالة الأولية بعد التحضير. (ب) إطالة الذيلية للقصبة الهوائية باستخدام كماشة غير رضحية. (C-F) شق جزئي في القصبة الهوائية بزاوية 180 درجة من المحيط. (ز ، ح) إدخال سلك توجيه Seldinger في القصبة الهوائية. (آي إم) إدخال القسطرة الوريدية المعدلة في القصبة الهوائية مسترشدة بسلك Seldinger. (غير رسمي) إزالة سلك Seldinger. (P) توصيل قفل لور لقسطرة القصبة الهوائية بكيس التهوية المعدل. (Q-T) ربط خياطة القفل الموضوعة مسبقا لتجنب إزالة القسطرة عن طريق الخطأ. الرجاء النقر هنا لعرض نسخة أكبر من هذا الرقم.
5. التهوية اليدوية وبضع الصدر المتوسط (الشكل 4)
- ابدأ بضع الصدر المتوسط من الخنجري باستخدام مقص مادة حاد ومستقر (الشكل 4 أ ، ب) واستمر في الجمجمة من خلال القص. أوقف التهوية مؤقتا دائما لبضع ثوان عند التقدم بالمقص تحت الظهر وعند القطع لتجنب صدمة الرئة (الشكل 4C-E).
- اكتسب التعرض الصدري باستخدام خطافات التحضير الجراحي وإزالة الأغشية المصلية المنصف (الشكل 4F-H).
- استمر في التهوية اليدوية بالتردد المطلوب وحجم المد والجزر وتوسيع نطاق المراقبة (على سبيل المثال ، إنشاء قياس ضغط الدم داخل الشرايين ، وتركيب قسطرة شريانية مركزية أو رئوية اعتمادا على الغرض أو سؤال البحث المعني) (الشكل 4I-L).

الشكل 4: التهوية اليدوية وبضع الصدر المتوسط. (أ) الوضع الأولي بعد التنبيب. (ب - ه) متوسط بضع الصدر بدءا من الخنجري. (و-1) التعرض الصدري باستخدام خطافات التحضير الجراحي. (ي) الإعداد النهائي أثناء التهوية. (K-L) عملية التهوية اليدوية. الرجاء النقر هنا لعرض نسخة أكبر من هذا الرقم.
6. القتل الرحيم
- تحقيق القتل الرحيم عن طريق استئصال القلب الحاد المفاجئ باستخدام المقص في المخدر بعمق.