مقالة منهجية

تصوير وقياس الأوعية الدموية الكبدية للفئران باستخدام الموجات فوق الصوتية دوبلر فائقة السرعة

DOI:

10.3791/66789

⸱

يوليو 19, 2024

 ,  ,  ,  ,  ,  ,  ,  ,  , 
1Department of Internal Medicine - Nephrology, Leiden University Medical Center, 2Einthoven Laboratory of Vascular and Regenerative Medicine, Leiden University Medical Center, 3Institute Physics for Medicine Paris, Inserm, ESPCI-Paris-PSL, 4Department of Surgery - Vascular surgery, Leiden University Medical Center, 5Department of Surgery, Brigham & Women's Hospital, Harvard Medical School, 6The Novo Nordisk Foundation Center for Stem Cell Medicine (reNEW), Leiden University Medical Center

في هذه المقالة

ملخص

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,

تمثل الموجات فوق الصوتية دوبلر فائقة السرعة (UFUS) ذات الدقة المكانية العالية (100 ميكرومتر) والحساسية طريقة تصوير غير جراحية مناسبة للحصول على نظرة عامة نوعية شاملة للأوعية الدموية الكبدية. يسهل UFUS أيضا القياسات الكمية للأوعية الدموية الدقيقة ، بهدف تعزيز فهمنا لآليات أمراض الأوعية الدموية.

الملخص

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,

يعد التصوير غير الجراحي للأوعية الدموية أداة قوية لدراسة آليات المرض في القوارض. لتحقيق تصوير عالي الحساسية للأوعية الدموية الدقيقة باستخدام طرق الموجات فوق الصوتية دوبلر ، يفضل استخدام طرق التصوير التي تستخدم مفهوم التصوير فائق السرعة. من خلال زيادة معدل إطارات الماسح الضوئي بالموجات فوق الصوتية إلى آلاف الإطارات في الثانية ، يصبح من الممكن تحسين حساسية تدفق الدم إلى 2 مم / ثانية والحصول على معلومات وظيفية حول دوران الأوعية الدقيقة مقارنة بحساسية حوالي 1 سم / ثانية في أوضاع دوبلر التقليدية. في حين أن التصوير بالموجات فوق الصوتية دوبلر فائق السرعة (UFUS) أصبح معتمدا في علم الأعصاب ، حيث يمكنه التقاط نشاط الدماغ من خلال اقتران الأوعية الدموية العصبية ، إلا أنه يمثل تحديات أكبر عند تصوير الأوعية الدموية لأعضاء البطن بسبب الحركات الكبيرة المرتبطة بالتنفس. الكبد ، الذي يوضع تشريحيا تحت الحجاب الحاجز ، عرضة بشكل خاص للحركة خارج المستوى والحركة التنفسية المتذبذبة. لا تؤثر هذه القطع الأثرية سلبا على تصوير دوبلر فحسب ، بل تعقد أيضا التحليل التشريحي لهياكل الأوعية الدموية وحساب معلمات الأوعية الدموية. هنا ، نقدم تحليلا تصويريا نوعيا وكميا للأوعية الدموية الكبدية في الفئران بواسطة UFUS. نحدد الهياكل الوعائية التشريحية الرئيسية ونقدم رسوما توضيحية لتشريح مجهر الكبد ، ومقارنتها بتقييم تشريحي متعمق للأوعية الدموية الكبدية بناء على قراءات دوبلر. بالإضافة إلى ذلك ، قمنا بتطوير بروتوكول قياس كمي لقياسات قوية لحجم الدم الكبدي للأوعية الدموية الدقيقة بمرور الوقت. للتفكير في مزيد من البحث ، يوفر التحليل النوعي للأوعية الدموية نظرة عامة شاملة ويقترح مصطلحات موحدة للباحثين الذين يعملون مع نماذج الفئران لأمراض الكبد. علاوة على ذلك ، فإنه يوفر الفرصة لتطبيق الموجات فوق الصوتية كطريقة تكميلية غير جراحية لفحص عيوب الأوعية الدموية الكبدية في الجسم الحي وقياس التغيرات الوظيفية في الأوعية الدموية الدقيقة في عمق العضو قبل الكشف عن تشوهات الأوعية الدموية على مستويات مقياس ميكرون باستخدام تلطيخ خارج الجسم الحي على أقسام الأنسجة.

المقدمة

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,

تستخدم نماذج الفئران قبل السريرية على نطاق واسع لدراسة ظهور وتطور مرض الأوعية الدموية الدقيقة الكبدي1،2. تعتبر المتابعة الطولية مفيدة ، حيث تحدث تغيرات الشعيرات الدموية في مرحلة مبكرة من المرض قبل ظهور الالتهاب والتليف ، مما قد يؤدي إلى تليف الكبد بمرور الوقت1. للتحقيق في تطور المرض ، تعد أدوات التصوير القوية ضرورية لتصور وقياس وظيفة الأوعية الدموية في الجسم الحي. تمثل الموجات فوق الصوتية دوبلر فائقة السرعة (UFUS) طريقة مناسبة نظرا لتكلفتها المنخفضة وقابليتها للنقل والبساطة والقدرة في الوقت الفعلي ، ولكن أيضا لأنها إجراء غير جراحي وموفر للوقت3. بالمقارنة مع الموجات فوق الصوتية دوبلر التقليدية ، والتي قد تصل إلى دقة مكانية مماثلة ولكنها تقتصر على تدفق الدم الكبير ، يسمح UFUS بالكشف عن تدفق الدم البطيء إلى 2 مم / ثانية من 1 سم / ثانية ، مما يسمح بفحص مساهمة الأوعية الأصغربكثير 4. يحسن UFUS الحساسية ، والتي يتم إنجازها من خلال إرسال الموجات المستوية مع مجال رؤية كبير في تنافر واحد لزيادة معدل الإطارات وبالتالي عدد صور الموجات فوق الصوتية المتاحة5. يعمل العدد الكبير من العينات الزمنية على تحسين إلغاء الإشارة القادمة من الأنسجة ويعزز اكتشاف الصدى المنعكسة من مبعثرات الدم ، مما يعزز الحساسية دون الحاجة إلى عوامل تباين6. من خلال تقدير أصداء طاقة مبعثر الدم من خلال تقدير دوبلر للطاقة ، يتم الحصول على كمية تتناسب مع حجم الدم في كل بكسل حتى لو كانت الأوعية الدموية صغيرة جدا بحيث لا يمكن حلها في الصورة7.

يقدم UFUS مزيجا مناسبا من الدقة المكانية والزمانية ، مما يجعله أداة مناسبة للتقييم النوعي لبنية الأوعية الدموية في الكبد. في حين أن تشغيل الماسح الضوئي بالموجات فوق الصوتية أمر بسيط نسبيا ، إلا أن هناك حاجة إلى فهم شامل لتشريح الكبد للتنقل عبر الأوعية الدموية الكبدية لفصوص الكبد المختلفة في الفئران. ركزت الدراسات الحديثة على وصف تشريح كبد الفئران وشجرة الأوعية الدموية الكبدية باستخدام التصوير المقطعي المحوسب الدقيق ثلاثي الأبعاد (μ-CT) 8،9. على الرغم من أن بعض الاختلافات المورفولوجية بين كبد الإنسان والفأر موثقة جيدا10 ، إلا أن الأبحاث التي أجريت على القوارض غالبا ما تتبنى مصطلحات تشريحية ذات صلة بالبشر ، مما يؤدي إلى بعض الالتباس في سياق ذات الأرباع. حتى التسميات الموحدة المعترف بها ، مثل Nomina Anatomica Veterinaria (NVA) ، تفتقر إلى المعلومات الكافية حول المصطلحات المتسقة لهياكل الأوعية الدموية الكبديةللقوارض 11. بالإضافة إلى التحدي المتمثل في الهياكل التشريحية الموثقة بشكل سيئ في القوارض ، تنشأ صعوبات أكبر في تفسير قراءات الموجات فوق الصوتية ، خاصة عندما يكون من المتوقع اتباع نهج قابل للتكرار.

يشكل الحصول على معلومات وظيفية غير جراحية عن الأعضاء الحية عبر مختلف المقاييس المكانية تحديات للتصوير في الجسم الحي 3. تعد طرق تصوير الكبد المتطورة مثل التصوير المقطعي المحوسب والتصوير بالرنين المغناطيسي وتصوير الأوعية الدموية (MRI / MRA) ، أو تصوير دوبلر التقليدي باستخدام الموجات المركزة ضرورية لتقييم تطور المرض ، لكنها تفشل في التقاط معظم ديناميكيات تدفق الدم باستثناء التصوير الضوئيالصوتي 12،13،14. يتمتع UFUS بحساسية عالية ويمكنه اكتشاف تدفق الدم البطيء في الأوعية الصغيرة ، والتي لا تقتصر على التدفق الأكبر من سنتيمتر واحد في الثانية4،15. في الآونة الأخيرة ، قمنا بتطوير طريقة تصوير مخصصة بناء على الاعتبارات التشريحية باستخدام UFUS ، مما يتيح قياسا موثوقا لحجم الدم الكبدي في نموذج الفأر مع تمدد الأوعيةالدموية 16.

في هذا البروتوكول ، نحدد إجراء تصوير UFUS غير الجراحي للكبد باستخدام منصة الموجات فوق الصوتية المتاحة تجاريا والتي تم تطويرها في الأصل لتصوير الدماغ الوظيفي. لتبسيط العملية وتعزيز استرجاع المعلومات ، نقدم توضيحا شاملا لكبد الفأر مع التسمية التشريحية وطريقة كاملة للتحليل. بالإضافة إلى ذلك ، نقدم تمثيلا مفصلا لقراءات التصوير المكتسبة كمرجع ، مع الإشارة إلى الهياكل التشريحية والمعالم الشائعة للمساعدة في اختيار المستوى المعتمد على المشغل. علاوة على ذلك ، نقوم بتضمين توضيح ذي صلة لكل من التحليلات النوعية والكمية للأوعية الدموية الكبدية.

البروتوكول

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,

تم إجراء جميع التجارب على بموجب التشريعات الأوروبية (التوجيه 2010/63 / EU) وإرشادات الحكومة الهولندية ووافقت عليها لجنة أخلاقيات في المركز الطبي بجامعة ليدن.

1. تحضير الماوس لتصوير UFUS (التوقيت ~ 10 دقائق)

  1. تحضير إعداد التصوير
    1. جل نقل الموجات فوق الصوتية بأجهزة الطرد المركزي في أنابيب 50 مل عند 100 × جم لمدة 3-5 دقائق لمنع تكوين فقاعة الهواء.
    2. قم بتشغيل وسادة التدفئة وقم بتسخينها حتى 35 درجة مئوية. املأ خزان المياه المطبوع ثلاثي الأبعاد بالماء منزوع الأيونات.
      ملاحظة: قد تزعج فقاعات الماء أو الجزيئات الصغيرة الموجودة في الماء قياس دوبلر.
  2. تخدير
    1. وزن. تم استخدام رفقاء القمامة من الذكور والإناث الذين تتراوح أعمارهم بين 8 و 16 أسبوعا ويبلغ وزن الجسم 19-32 جم. تحضير مزيج تخدير من الكيتامين بجرعة 100 مجم / كجم وزيلازين 10 مجم / كجم في 0.9٪ كلوريد الصوديوم. تحضير الخليط معقما وطازجا كل يوم لأن الخليط غير مستقر وقد يفقد فعاليته.
      ملاحظة: يتراوح وزن جسم المفضل بين 23-30 جم.
    2. تطهير موقع الحقن ، أي الربع السفلي الأيمن أو الأيسر من البطن ، باستخدام الشاش و 70٪ الإيثانول. حقن 10 ميكرولتر / غرام من وزن الجسم داخل الصفاق (ip) بإبرة 27G وحقنة 1 مل يمكن التخلص منها أو حقنة أنسولين 30G.
    3. ضع مرة أخرى في قفص على وسادة تدفئة دون إغلاق غطاء القفص. مؤقت البدء.
      ملاحظة: يجب أن يستمر التخدير العميق لمدة 40 دقيقة تقريبا. إذا كنت ترغب في الحصول على جلسة تصوير أطول ، ففكر في استخدام التخدير القابل للعكس ، مثل مخاليط الكيتامين 60 مجم / كجم وميديتوميدين 0.4 مجم / كجم في 0.9٪ كلوريد الصوديوم متبوعا بعكس الحقن تحت الجلد من أتيباميزول 1 مجم / كجم. يفضل التخدير بالحقن على التخدير الاستنشاقي بسبب إعداد التصوير.
    4. تحقق من فعالية التخدير. تأكد مما إذا كان التخدير يعمل عن طريق الضغط برفق على الكفوف الخلفية بعد حوالي 5 دقائق. إذا كان لا يزال يتفاعل ، فانتظر 2-3 دقائق أخرى لتحقيق التخدير الكامل.
    5. ضع مرهم العين لمنع جفاف القرنية وصدمات العين عندما يكون نائما عميقا. تحقق من ردود الفعل مرة أخرى وابدأ الإجراء فقط عندما لا يظهر أي رد فعل على القرص.
  3. تحضير منطقة التصوير (الشكل 1)
    1. قم بقص بطن برفق باستخدام ماكينة حلاقة الطبيب البيطري أثناء وضعه على وسادة تدفئة. قم بإجراء التشذيب برفق شديد دون الضغط على الصدر أو البطن.
    2. ضعي كريم إزالة الشعر لمدة لا تزيد عن 2 دقيقة.
      تنبيه: لا تقم بتمديد وقت حضانة كريم إزالة الشعر ، لأنه قد يسبب التهاب الجلد. هذا لا يؤثر فقط على جودة التصوير ولكن قد يسبب أيضا إزعاجا للحيوان.
    3. قم بإزالة كريم إزالة الشعر ببعض المناديل الورقية ونظفه برفق بالماء الدافئ.
  4. ضع إعداد والتصوير لقياسات دوبلر (الشكل 2 أ).
    1. ضع ظهريا على وسادة تدفئة وقم بتأمين الكفوف برفق باستخدام شريط لاصق. رطب البشرة بكمية صغيرة من الماء الدافئ.
    2. ضع جل الإرسال بالموجات فوق الصوتية بالطرد المركزي مباشرة على الجلد المحلوق باستخدام حقنة سعة 20 مل.
      ملاحظة: قد تؤثر فقاعات الهواء على تصوير دوبلر وتسبب القطع الأثرية.
    3. ضع خزان المياه المطبوع ثلاثي الأبعاد المملوء بالماء فوق. تأكد من أن ارتفاع خزان المياه مناسب للحيوان ، حوالي 1 مم فوقه ، ولا يضغط على.
    4. تحقق من وجود أي هواء بين هلام نقل الموجات فوق الصوتية والبلاستيك الحراري من البولي ميثيل بنتين (PMP) لخزان المياه.

2. عملية المسبار واختيار الطائرة (التوقيت ~ 10 دقائق)

  1. ابدأ البرنامج وقم بإنشاء جلسة تجريبية على النظام. ابدأ تشغيل برنامج المسح.
    ملاحظة: تم دمج برنامج المسح الضوئي في النظام.
  2. قم بتوسيط المحركات بالنقر فوق نعم في النافذة المنبثقة. يتم استخدام نظام آلي للتحكم عن بعد في المسبار عن طريق برنامج المسح. من خلال توسيط المحركات ، سيتحرك المسبار تلقائيا في ثلاثة اتجاهات ، أي عموديا وجانبيا وتدويره. تأكد من عدم وجود أجسام تعيق مسار المسبار لتجنب إتلاف المعدات.
    ملاحظة: من الأهمية بمكان توسيط المحركات. يمكن أن يؤدي عدم القيام بذلك إلى خلل في البرامج.
  3. قم بإنشاء جلسة تجريبية جديدة عن طريق تحديد جلسة من القائمة. املأ المعلومات المطلوبة في لوحة الجلسة، بما في ذلك المشروع والموضوع والجلسة واسم المستخدم والتعليق والعلامة. انقر على التحقق من الصحة.
    ملاحظة: يجب إنشاء الجلسة قبل الحصول على بيانات التصوير أو حفظها. يمكن تغيير معلومات الجلسة أثناء التجربة ، ولكن ضع في اعتبارك أنها ستغير أيضا وجهة حفظ البيانات.
  4. ضع المسبار. يتم توصيل المسبار الخطي بالموجات فوق الصوتية 15 ميجاهرتز مع 128 عنصرا بالنظام من خلال نظام آلي يتكون من وحدة محرك رباعية المحاور ، أي ثلاثة اتجاهات حركة انتقالية واتجاه حركة دوراني واحد.
    1. انتقل إلى قائمة مسبار Move واستخدم نظام تحديد المواقع الذي يتم التحكم فيه بواسطة الكمبيوتر لنقل المسبار إلى الماء في خزان المياه المطبوع ثلاثي الأبعاد. استخدم أزرار التحكم المشار إليها في موضع المسبار لتحريك المحركات ، وتحديد الخطوات بالملم للحركة الانتقالية (X و Y و Z) أو بالدرجة للحركة الدورانية (R). لمنع وقوع حوادث في الاتجاه Z ، حدد حد Z في السلامة.
      ملاحظة: من الأهمية بمكان أن تكون عناصر المسبار على اتصال بالماء. ومع ذلك ، تجنب تحريك المسبار بالكامل في الماء ، لأن ذلك قد يضر بالجهاز. إذا لم تتمكن المحركات من الوصول إلى الموضع ، عرض تحذير خارج مساحة العمل.
    2. احفظ الإحداثيات كموضع مرجعي بالنقر فوق تعيين الصفحة الرئيسية. لا تقم بتعديل الترجمات والتناوب بشكل متزامن لأن R مرتبط ب X وY وZ. انقر دائما فوق تعيين الصفحة الرئيسية قبل تعديل R.
    3. تحديد معلمات التصوير والتصور. انتقل إلى قائمة العرض المباشر وانقر فوق تشغيل لتحديد مستوى الاهتمام.
      تنبيه: قم بتشغيل عرض مباشر أو اقتناء فقط عندما تكون عناصر مسبار الموجات فوق الصوتية محاطة بوسيط يطابق المعاوقة الصوتية لضمان عمر الجهاز ومنع ارتفاع درجة الحرارة.
  5. اختر معلمات التصوير في الإعداد المسبق.
    1. قم بتحميل تسلسل الموجات فوق الصوتية دوبلر فائق الحساسية بسعة 10 مللي ثانية باستخدام زر تسلسل الحمل ، على سبيل المثال ، 11 موجة مستوية مركبة (زوايا من -10 درجات إلى 10 درجات) بجهد تصوير يبلغ 25 فولت ومعدل إطارات دوبلر يبلغ 10 مللي ثانية.
      ملاحظة: ليست هناك حاجة لاستخدام تسلسل دوبلر سريع (على سبيل المثال ، 10 مللي ثانية) من أجل تصوير وتصفية حركات الجهاز التنفسي للعضو أثناء التحليل.
    2. حدد عمق التصوير بين 1 مم و 50 مم ، مع عمق قابل للتصوير بحد أقصى 50 مم. الإعداد الافتراضي هو عمق 9 مم من 1 مم إلى 10 مم ، مع العمق الموصى به بين 2 مم و 12 مم.
      ملاحظة: اعتمادا على حجم وخزان المياه ، يمكن تصميم عمق التصوير وفقا لاحتياجات محددة.
  6. حدد معلمات المرئيات.
    1. اختر دوبلر لتصوير الأوعية الدموية.
      ملاحظة: تمثل شدة البكسل في A.U. حجم الدم ويجب مقارنتها فقط عند استخدام نفس المسبار والتسلسل.
    2. اختر متوسط لتطبيق المتوسط الزمني لتحسين نسبة الإشارة إلى الضوضاء.
      ملاحظة: يؤدي حساب المتوسط الزمني للصور إلى زيادة جودة الصورة ولكنه يقلل من معدل الإطارات. اعتمادا على الهدف ، يجب إجراء مقايضة مناسبة.
    3. اختر ضغط الصور: لوغاريتمي (مرتفع) أو جذر تربيعي (متوسط) أو خطي (منخفض). بدلا من ذلك، قم بتكييف نطاق التباين تلقائيا أو يدويا باستخدام أشرطة التمرير لخيارات التباين العالي والمنخفض.
      ملاحظة: لا تتأثر البيانات باختيار ضغط الصورة. إنه يؤثر فقط على عرض التصوير في الوقت الفعلي.
    4. حدد مقياس خريطة الألوان من الأسود إلى الأبيض عن طريق تحديد خيار الرمادي أو من الأسود المحمر إلى الأصفر عن طريق تحديد ساخن.
  7. اختيار المستوى (الشكل 2 ب)
    1. حدد مستوى التصوير على المعالم التشريحية. قم بالتبديل بين تصور دوبلر والوضع B للتعرف على تشريح فصوص الكبد والأوعية الدموية.
    2. أوقف العرض المباشر بالنقر فوق أيقونة إيقاف .
    3. انتقل إلى قائمة مسبار النقل للتنقل في المسبار وتحديد مستوى بالنقر فوق تعيين الصفحة الرئيسية لحفظ الإحداثيات كموضع مرجعي. تأكد من أن شجرة الأوعية الدموية محددة جيدا ومرئية بأقل قدر ممكن من الإشارة خارج المستوى.
    4. ارجع إلى قائمة العرض المباشر وانقر على أيقونة إيقاف .

3. اقتناء مسح دوبلر (التوقيت ~ 20 دقيقة)

  1. قم بتشغيل عملية استحواذ دوبلر بمعدل إطارات يبلغ 10 مللي ثانية.
    1. انتقل إلى قائمة fUS 2D لتصوير الاختلافات الديناميكية الدموية بمرور الوقت في موضع معين (الشكل 3). لزيادة التباين ، قم بإعطاء بلعة من 50 ميكرولتر عن طريق الوريد (iv) فقاعات دقيقة محقونة بتركيز 2 × 108 فقاعات دقيقة لكل مل في الوريد الذيل.
    2. في النقر على الإعداد المسبق، حدد إجمالي مدة التسجيل بالثواني (30 ثانية). اختر وضعا مستمرا بدون توقف مؤقت بين الصور عن طريق ضبط الوقت بين الصور على 0 ثانية.
    3. اضغط على زر التسجيل لبدء الاستحواذ ثنائي الأبعاد. يمكن إلغاء التسجيل بالضغط على زر إيقاف . قد تفقد البيانات عند مقاطعة الاستحواذ قبل الانتهاء.
  2. تصور وتكييف التسجيل المكتسب.
    1. قم بتعديل التباين وخريطة الألوان إذا رغبت في ذلك في النقر فوق المرئيات. أعد تشغيل التسجيل إذا لزم الأمر عن طريق التمرير عبر الإطارات باستخدام شريط التمرير ، والذي يتم تضمينه في وظيفة الوقت.
  3. احفظ البيانات.
    1. قم بتوفير اسم للتسجيل الذي تم الحصول عليه لحفظ الملف بتنسيق .scan في مجلد الجلسة. يتم اقتراح نافذة منبثقة لحفظ البيانات تلقائيا في نهاية كل تسجيل. يتم حفظ البيانات تلقائيا.
  4. ابدأ عملية استحواذ أخرى بالنقر فوق علامة التبويب Preset وكرر من الخطوة 3.1.1 فصاعدا.
  5. قم بإزالة إعداد التصوير واعتني بالحيوان.
    1. انتقل إلى قائمة مسبار النقل لتحريك المسبار عموديا خارج خزان المياه المطبوع ثلاثي الأبعاد. قم بإزالة الإعداد والهلام بالموجات فوق الصوتية وفك.
    2. القتل الرحيم للحيوان عندما يصل التصميم التجريبي إلى نقطة النهاية ؛ وإلا، تابع الخطوات التالية.
    3. ضع بعض كريم الترطيب على منطقة الجلد المحلوقة للحيوان إذا كانت القياسات الطولية مقصودة.
    4. ضع مرة أخرى في القفص واتركه يستيقظ من التخدير تحت مصباح حراري لمنع انخفاض حرارة الجسم. راقب أثناء التعافي.
    5. ضع مرة أخرى في رف القفص ذو التهوية الفردية عندما يمشي بشكل طبيعي مرة أخرى. قم بإنهاء التجارب على المعملية قبل تحليل مجموعة البيانات.

4. التحليل الكمي (التوقيت ~ 1 ساعة)

  1. افتح البرنامج النصي للتحليل gui_analysis.m المتوفر في الملف التكميلي 1.
  2. حدد الفحص وقم بتعيين المعلمات الكمية في الإعدادات: 10 مناطق ذات أهمية (ROIs) بحجم فوكسل 2 × 2. اختر 40 مللي ثانية لكل إطار لإجراء تكامل دوبلر.
  3. ارسم محيط الأوعية الدموية للعضو ؛ يتم وضع عائد الاستثمار ال 10 تلقائيا بين الشرايين المرئية بوضوح ويمكن تعديلها يدويا إذا لزم الأمر (الشكل 4 أ). أغلق مربع الحوار العائم عندما تكون راضيا عن الموضع. تأكد من اكتساب مستقر (الشكل 4 ب) لحساب حجم الدم القوي ، وتجنب عمليات الاستحواذ المتأثرة بالقطع الأثرية ذات الحركة القوية (الشكل 4 ج).
  4. حدد متوسط حجم الدم الكبدي في A.U. من إجمالي 10 عائد استثمار عن طريق التقدير التلقائي للمتوسط والانحراف المعياري لقيم الإطار الهادئ ضمن تسجيل 30 ثانية (الشكل 4 د).
    ملاحظة: يمكن نسخ/لصق جدول بيانات شدة عائد الاستثمار مباشرة إلى ملف جدول بيانات.
  5. كرر التحليل لطائرتين إضافيتين على الأقل ، -0.3 مم ، و -0.6 مم ، في اتجاه الذيلي. حدد جميع بيانات الاقتناء قبل إجراء التحليل الإحصائي.
  6. تحقق من الانحراف المعياري للشدة على الصورة بأكملها وحدد القطع على أنه المتوسط الكلي (μ) مع انحرافين معياريين (2σ) لاستبعاد القياسات المعرضة للقطع الأثرية المتحركة بشكل موضوعي (الشكل 4E).
    ملاحظة: يتم توفير المتوسط والانحراف المعياري لقيم الإطار الهادئ المقدرة على الصورة بأكملها في الصف الأول من جدول البيانات.
    تنبيه: تمنع القطع الأثرية للحركة القياس الكمي القوي ويجب تحديدها بشكل موضوعي بناء على تحليل الصورة الزمنية بأكملها.
  7. خذ متوسط متوسط حجم الدم الكبدي المقاس كميا على 3 مستويات مختلفة في 30 عائد استثمار لكل في الخطوة 4.3 (الشكل 4F). قم بتطبيق اختبار ROUT 1٪ في برنامج تحليل إحصائي لتحديد عائد الاستثمار القيم الخارج قبل متوسط 30 عائد استثمار لكل. لتحسين تقدير حجم الدم ، قم بتسجيل طائرات إضافية لكل.
  8. لإدارة علاج السيارة ، قم بتطهير موقع الحقن ، أي الربع السفلي الأيمن أو الأيسر من البطن ، باستخدام الشاش و 70٪ الإيثانول. حقن 20 ميكرولتر من محلول ملحي أو DMSO ip بإبرة 27G وحقنة 1 مل يمكن التخلص منها أو حقنة أنسولين 30G أو إعطاء 100 ميكرولتر من (هيدروكسي بروبيل) ميثيل السليلوز عن طريق التزقيم باستخدام إبرة تغذية قابلة لإعادة الاستخدام 30G بطرف دائري. رسم بيانات 3 مجموعات تتلقى محلول ملحي أو DMSO عن طريق IP أو الإعطاء الفموي (po) من السليلوز (الشكل 4G). إجراء التحليل بطريقة عمياء دون الكشف عن الحالة و / أو تلقي العلاج.
    ملاحظة: لا يؤثر إعطاء السيارة على قياسات حجم الدم.

النتائج

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,

باتباع البروتوكول ، يتم تسهيل تصوير الأوعية الدموية الكبدية بناء على توحيد الهياكل التشريحية والمصطلحات المقابلة (الشكل 1). لاقتراح تسمية موحدة للباحثين الذين يستخدمون نماذج الكبد قبل السريرية ، عرضنا بشكل تخطيطي وضع الكبد المشترك في تجويف البطن للفئران (الشكل 1 أ) ، وقدمنا الترتيب الهيكلي للفصوص الكبدية المختلفة (الشكل 1 ب) ، وحددنا شبكة الأوعية الدموية الشريانية (الشكل 1 ج). مجهزة بالخبرة التشريحية ، تم إجراء تصوير UFUS في الجسم الحي باستخدام خزان مياه مطبوع ثلاثي الأبعاد لتقليل القطع الأثرية للحركة (الشكل 2 أ). تم تصحيح المعاوقة الصوتية عن طريق إدخال المسبار في الماء وتطبيق هلام الإرسال بالموجات فوق الصوتية مباشرة على جلد المحلوق. من خلال اعتماد هذا الإعداد ، يتم تقليل التنفس والتحف الحركية الأخرى لأن المسبار لا يكون على اتصال مباشر بصدر وبطن المتحركين. بهذه الطريقة ، تخيلنا بنية الأوعية الدموية للفصين الأيمن والأيسر ، والتي يمكن الوصول إليها بسهولة بواسطة UFUS نظرا لموقعها السطحي (الشكل 2 ب). تقع فصوص الكبد الأخرى ، مثل الفص المذنبي والرباعي ، في عمق الجسم ، مما يجعل تحديد الأوعية الدموية الكبدية تشريحيا بشكل صحيح بواسطة UFUS أكثر صعوبة.

بعد أن أثبتنا أهمية المؤشرات والتفسيرات التشريحية الموحدة والمقبولة عموما لهياكل الأوعية الدموية ، أجرينا العديد من فحوصات دوبلر في مستويات مختلفة لتقديم نظرة عامة شاملة على الأوعية الدموية الكبدية التي تم تصويرها بواسطة UFUS المعزز بالتباين في الفئران (الشكل 3). حددنا الشبكة الشريانية الكبدية لفصوص الكبد الفردية ، أي الفصوص الجانبية اليسرى (LL) ، والسفلية الإنسية اليسرى (LM) ، والجانبية اليمنى (RL) ، والفصوص الإنسية اليمنى (RM). علاوة على ذلك ، يتم تصنيف الشرايين الرئيسية ، مثل الشريان الأورطي البطني (AA) ، والشريان الكبدي (HA) ، والشريان الكبدي الجانبي الأيسر (LLHA) ، والشريان الكبدي الإنسي الأيمن (RMHA). من المهم ملاحظة أن فصوص الكبد يمكن وضعها بشكل مختلف قليلا اعتمادا على موضع الأمعاء الدقيقة وحركتها التمعجية (SM) ، بالإضافة إلى حالة ملء المعدة (S). توفر هذه النظرة العامة المحسنة على التباين لأوعية كبد الفأر بأكملها أطلسا شاملا للأوعية الدموية لتصوير الكبد في الجسم الحي بواسطة UFUS.

يعد الاختيار الدقيق للمستويات التشريحية أمرا بالغ الأهمية للحصول على قراءة كمية مشتقة من فص كبد واحد. يمكن تحقيق قياسات قوية لحجم الدم عن طريق الاختيار يدويا ل 10 مناطق ذات أهمية (ROI) لكل مستوى (الشكل 4 أ). من أجل القياس الكمي لحجم الدم الموثوق به لدوران الأوعية الدقيقة ، هناك حاجة إلى اكتساب مستقر مع تباين منخفض في متوسط شدة الصورة. يتم تحديد ذلك بناء على متوسط قيمة الصورة (MIV) للصورة بأكملها بمرور الوقت (الشكل 4 ب) ، على عكس التسجيل المعرض للقطع الأثرية المتحركة المهمة (الشكل 4 ج). للتعامل مع القطع الأثرية للحركة ، تم استخدام الاختيار التلقائي ل MIV المنخفض للقياس الكمي الموثوق به لقياسات حجم الدم الكبدي (الشكل 4D) عن طريق رسم الانحراف المعياري لجميع MIV المنخفض الزمني لصورة بأكملها (الشكل 4E). تظهر فحوصات دوبلر لطائرات متعددة لكل تباينا مقبولا داخل وبين الفئران من 3 مجموعات مختلفة بعد العلاج الخارج على 30 عائد استثمار لكل مع اختبار ROUT 1٪ (الشكل 4F). لتحسين تقدير حجم الدم لكل ، يوصى بتسجيل طائرات إضافية أو زيادة عدد عائد الاستثمار المختار لكل طائرة. بالإضافة إلى ذلك ، يمكن استخدام قراءات حجم الدم لمراقبة العلاج بالعقاقير ، واستهداف الأوعية الدموية الدقيقة على وجه التحديد. من خلال إدارة السيارة من خلال طريقين للإدارة ، أظهرنا أنه لا يوجد تأثير على قياسات حجم الدم الكبدي (الشكل 4G). تشير هذه النتائج إلى أن حذف الجينات أو توصيل العلاج لا يتأثر بإعطاء السيارة ، مما يضمن تصميما تجريبيا قويا. بشكل عام ، يتم توفير بروتوكول كمي موضوعي وقابل للتكرار للبحث المستقبلي لاستكشاف عيوب الأوعية الدموية الكبدية في نماذج الفئران المختلفة.

مخططات تشريح الكبد القوارض. يشمل الفصوص والشرايين والأوردة المصنفة.
الشكل 1: تشريح كبد الفئران. (أ) نظرة عامة تخطيطية على وضع الكبد في تجويف البطن تحت الحجاب الحاجز للفأر. (ب) الوصف التخطيطي لكبد الفئران بأربعة فصوص كبد ، أي اليسار والتربيعي والذنب والفص الأيمن ، والثالوث البابي الذي يتكون من الوريد البابي والشريان الكبدي والقناة الصفراوية. (ج) رسم تخطيطي للشبكة الشريانية للأوعية الدموية اللمسية. تحديد الشرايين الكبدية (HA) والفروع (الراموس) مع التسمية اللاتينية المقدمة. اختصار: HA = الشريان الكبدي. الرجاء النقر هنا لعرض نسخة أكبر من هذا الرقم.

إعداد التصوير بالموجات فوق الصوتية بالماوس ، يوضح مخطط المرارة وفصوص الكبد ونتائج فحص UFUS.
الشكل 2: التصوير بالموجات فوق الصوتية دوبلر فائق السرعة (UFUS) للأوعية الدموية الكبدية في الفئران. (أ) نظرة عامة تخطيطية على الإعداد التجريبي للتصوير غير الجراحي في الجسم الحي . (ب) الرسوم التوضيحية التخطيطية لاتجاه التصوير والممثلين المرتبطين به للفص الإنسي الأيمن والأيسر ، وكذلك الفص الجانبي الأيسر ، المصورين بواسطة UFUS. اختصار: AA = الشريان الأورطي البطني ، LLL = الفص الجانبي الأيسر ، أحب حياتي = الفص الإنسي الأيسر ، RML = الفص الإنسي الأيمن. شريط المقياس = 1 مم. الرجاء النقر هنا لعرض نسخة أكبر من هذا الشكل.

التصوير المقطعي البصري. الرسم التشريحي أجزاء الكبد, الجمجمة إلى منظور الذيلي; تحليل الصور.
الشكل 3: الموجات فوق الصوتية دوبلر فائقة السرعة المحسنة بالتباين (UFUS) لالأوعية الدموية الكبدية في الفئران. نظرة عامة على الأوعية الدموية الكبدية بأكملها للفأر البالغ تم تصويرها في 3 أوضاع ، أي اليمين الجانبي ، واليسار الإنسي ، والجانبي ، في 4 مستويات من الجمجمة باتجاه الذيلية. يقع المرجع مباشرة تحت الحجاب الحاجز المصور في الإنسي و 1 سم جانبي على اليمين واليسار ، مع نفس المستويات في اتجاه الذيلي. الاختصار: AA = الشريان الأورطي البطني ، HA = الشريان الكبدي ، LLL = الفص الجانبي الأيسر ، LLHA = الشريان الكبدي الجانبي الأيسر ، أحب حياتي = الفص الإنسي الأيسر ، RLL = الفص الجانبي الأيمن ، RMHA = الشريان الكبدي الإنسي الأيمن ، RML = الفص الإنسي الأيمن ، SI = الأمعاء الدقيقة ، S = المعدة. شريط المقياس 1 مم. الرجاء النقر هنا لعرض نسخة أكبر من هذا الشكل.

صور الفحص المجهري ومخططات البيانات. تحليل الأوعية الدموية العصبية ، مقارنة عمق الطائرة ، الرسوم البيانية الإحصائية.
الشكل 4: القياس الكمي بالموجات فوق الصوتية دوبلر فائق السرعة (UFUS) لحجم الدم الكبدي. (أ) ممثلو الفص الإنسي (ML) لفئران التحكم من النوع البري C57BL / 6 البالغة في المستوى 1 المختارة تحت الحجاب الحاجز ، المقابل 0 مم ، والمستوى 2 عند -0.3 مم ، والمستوى 3 عند -0.6 مم مع مجموعة مختارة من 10 مناطق ذات أهمية (ROIs). شريط المقياس 1 مم. رسم توضيحي لدوبلر الطاقة لمدة 30 ثانية مع (ب) اكتساب مستقر (رمادي) و (ج) حركة الأنسجة (أحمر) بناء على متوسط قيم الصورة في الوحدات التعسفية (A.U.) للصورة بأكملها للتقييم الكمي. (د) التعرف الآلي على الشدة المنخفضة (A.U.) للقياس الكمي لحجم الدم بمرور الوقت. (ه) الانحراف المعياري (St. Deviation) للشدة المنخفضة المرسومة لتحديد عمليات الاستحواذ غير المستقرة (الحمراء) الناتجة عن القطع الأثرية للحركة المشار إليها بقطع المتوسط الكلي (μ) من عدد (N) للحيوانات من 3 مجموعات مع 2 SD (2σ) تقييم للانحراف المعياري (SD) للشدة المنخفضة (A.U.) في الحالة الفسيولوجية (الرمادي) في الفئران البالغة C57BL / 6 من النوع البري. (F) يتم تمثيل القياس الكمي لتغيرات حجم الدم المقاسة في الجسم الحي بمرور الوقت بمتوسط أكثر من 3 مستويات ، أي 30 عائد استثمار في المجموع لكل ، على أنها شدة بكسل (A.U.). الكشف عن القيم المتطرفة عن طريق اختبار ROUT 1٪. (ز) لا يوجد فرق بين نوع مركبة التوصيل وطريقة الإعطاء. تلقت المجموعة 1 (ن = 6) حقنة داخل الصفاق (ip) من محلول ملحي ، والفوج 2 (ن = 3) حقن IP من DMSO والأرجاب 3 (ن = 6) الإعطاء الفموي (po) للسليلوز. ANOVA أحادي الاتجاه مع اختبار المقارنات المتعددة ل Dunnett ، ns P > 0.05. اختصار: A.U. = وحدات تعسفية ، DMSO = ثنائي ميثيل سلفوكسيد ، ip = داخل الصفاق ، po = إعطاء عن طريق الفم ، عائد استثمار = منطقة الاهتمام ، St. الانحراف = الانحراف المعياري ، UFUS = الموجات فوق الصوتية دوبلر فائقة السرعة. الرجاء النقر هنا لعرض نسخة أكبر من هذا الرقم.

الملف التكميلي 1: النص الكمي بالموجات فوق الصوتية دوبلر فائق السرعة (UFUS) لقياسات حجم الدم الكبدي. يوفر البرنامج النصي gui_analysis.m واجهة رسومية لتحديد المواقع التلقائي لمنطقة الاهتمام (ROI) لقياسات حجم الدم. الرجاء النقر هنا لتنزيل هذا الملف.

المناقشة

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,

في هذا البروتوكول ، نوضح كيفية إجراء تصوير UFUS غير جراحي للأوعية الدموية الكبدية للفأر. نقدم وصفا مفصلا لإجراء التصوير ، بما في ذلك التعامل مع ، وتشغيل الماسح الضوئي بالموجات فوق الصوتية ، وتحليل البيانات لحساب تغيرات حجم الدم في الجسم الحي. لتسهيل تفسير بيانات الموجات فوق الصوتية ، نقدم نظرة عامة شاملة على الهياكل التشريحية التي يمكن تصورها بوضوح بواسطة UFUS. علاوة على ذلك ، نصف إجراء قياس كمي موحد للقياسات القوية لمعلمات الأوعية الدموية. يمكن تحقيق دقة مناسبة دون استخدام عامل تباين ، مما يتيح تقييما كميا آمنا ومباشرا لحجم الدم الكبدي في دوران الأوعية الدقيقة. نؤكد على استخدام التسميات التشريحية الموحدة لمنع الارتباك وسوء التفسير ، خاصة عند تقييم القياسات الكمية للأوعية الدموية الدقيقة.

تم الإبلاغ سابقا عن تصوير UFUS لأوعية الفئران ، في المقام الأول في مجال علم الأعصاب7. لا يتأثر تصوير الدماغ سلبا بالقطع الأثرية الحركية على عكس الكبد ، وهو شديد التأثر بحركة التنفس. نظرا لموقعه التشريحي تحت الحجاب الحاجز ، يجب إجراء إزالة الشعر في منطقة البطن برفق شديد لتجنب إدخال التنفس غير المنتظم عن طريق تقليل القوى الجسدية على منطقة الصدر والبطن. علاوة على ذلك ، يعد تحقيق درجة مناسبة من التخدير أمرا ضروريا لضمان التنفس المتذبذب المنتظم ، وهو عامل يمكن تصحيحه بسهولة نسبيا في خطوات ما بعد المعالجة. تم تحسين حساسية UFUS هنا من خلال تطبيق مرشح تحلل القيمة المفردة (SVD) لإزالة القطع الأثرية للحركة6 وعن طريق فرض المزيد من الرقابة على إطارات الحركة العالية. يتم الحصول على أفلام Power Doppler ذات معدل الإطارات العالي هنا بسرعة 10 مللي ثانية للسماح لنا بتصور وقياس تأثير حركة التنفس على الإطارات التي ولدت قمم عالية القيمة بسبب القطع الأثرية للحركة. يمكن بعد ذلك تحديد معدل التنفس من الذروة في تحويل فورييه السريع لإشارة الصورة المتوسطة ، ويمكن التخلص من إطارات الذروة المقابلة للحركة العالية للعضو.

لا يزال من الممكن أن يواجه تصوير دوبلر بالموجات فوق الصوتية القابلة للتكرار داخل واحد بمرور الوقت ، وكذلك بين ذات أوزان الجسم المختلفة ، العديد من القيود. أولا ، يمكن أن يتأثر وضع الكبد بعوامل مثل المعدة الممتلئة للغاية والحركة التمعجية للأمعاء. يظهر هذا التأثير بشكل خاص عند اختيار فص الكبد الجانبي الأيسر كمرجع. لذلك ، نوصي باختيار الفص الجانبي الأيسر فقط في الكبيرة ونفضل الفص الإنسي الأيمن أو الأيسر في الصغيرة. ثانيا ، يمكن أن تحدث حركات التنفس الثقيلة غير المتذبذبة في المنكوبة ، مما يؤدي إلى قطع أثرية متحركة يصعب تصحيحها ، وبالتالي لا يمكن استخدامها لحساب حجم الدم. وبالتالي ، فإن الاختيار المناسب للتخدير ، جنبا إلى جنب مع جرعة مصممة خصيصا لوزن الجسم ، أمر بالغ الأهمية. أخيرا ، يقيد حد الدقة تصور الأوعية الدموية الدقيقة الكبدية ، أي يمكن تصور الأوعية الدموية بأقطار تتراوح حتى 100 مم3.

تم اقتراح استخدام عوامل التباين مؤخرا للحصول على صورة مفصلة لالأوعية الدموية للفأر عن طريق تتبع الفقاعات الدقيقة. يمكن لمثل هذا النهج أن يحقق دقة مكانية عالية ويوفر قياسات كمية لسرعة الدم17. ومع ذلك ، لا يزال تتبع الفقاعات الدقيقة يمثل تحديا كبيرا لتحريك الأعضاء الداخلية خاصة عند الحصول عليها في 2D.

هنا ، أظهرنا أنه يمكن الحصول على قياسات حجم الدم الكبدي المستقرة التي تم الحصول عليها بواسطة دوبلر فائق السرعة في الفئران الضابطة من ثلاث مجموعات تتلقى مركبات مختلفة تدار عن طريق حقن IP أو التزقيم الفموي. في الآونة الأخيرة ، تم استخدام قياسات حجم الدم هذه بنجاح في نموذج فأر مرض الكبد16. للتوضيح ، تم الكشف عن تمدد الأوعية الدموية على المستوى المجهري الإلكتروني وتم تأكيده من خلال القياسات الكمية باستخدام UFUS. أكدت هذه الدراسة على حساسية التقييم في الجسم الحي للتحقيق في عيوب الأوعية الدموية على المستويين الوظيفي والكمي ، حتى مع الحفاظ على بنية الأوعية الدموية الكبدية ، وهو أمر واعد للتشخيص السريري والمراقبة.

باختصار ، يعمل هذا البروتوكول كدليل للدراسات النوعية والكمية غير الغازية للأوعية الدموية الكبدية في الفئران. يمكن استخدامه أيضا للمتابعة الطولية بسبب إجراءاته غير الغازية والمباشرة. بالإضافة إلى ذلك ، فإنه يحمل القدرة على تقديم تقييمات وظيفية للأوعية الدموية.

الإفصاحات

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,

M. Tanter و T. Deffieux هما مؤسسان مشاركان ومساهمان في Iconeus. جميع المؤلفين الآخرين ليس لديهم تضارب في المصالح للإفصاح عنهم.

شكر وتقدير

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,

نشكر MS Zuurmond (المركز الطبي بجامعة ليدن) على إعداد الرسوم التوضيحية الرسومية. تم اشتقاق هذا البروتوكول وتكييفه من عملنا الأصلي المنشور سابقا de Haan et al. 202216. تلقى هذا المشروع تمويلا من برنامج البحث والابتكار Horizon 2020 التابع للاتحاد الأوروبي بموجب اتفاقية منحة Marie Skłodowska-Curie رقم 813839. المنظمة الهولندية للبحث والتنمية الصحية (ZonMw) PTO 446002501 بالتعاون مع CVON-PHAEDRA Impact. الصحة الهولندية (مكالمة PPS-Match LUMC Top sector LSH 2020) ، مشروع NV-STAB ؛ مركز مؤسسة نوفو نورديسك لطب الخلايا الجذعية المدعوم بمنحة مؤسسة نوفو نورديسك (NNF21CC0073729) ؛ من قبل مشروع برنامج EIC Pathfinder لمجلس الابتكار الأوروبي MICROVASC n° 101070917 ؛ الوكالة الوطنية الفرنسية للبحوث ANR-17-T171105J-RHUS-0009 مشروع RHU Quid-Nash; وكالة البحوث الوطنية الفرنسية ANR-22-CE19-0034-03 ، مشروع Peri-fUS. و INSERM (المعهد الوطني للسانتي والبحوث الكيميائية) مسرع البحوث التكنولوجية في الموجات فوق الصوتية الطبية الحيوية.

المواد

قائمة المواد المستخدمة في هذه المقالة
الاسمالشركةرقم فهرسيالتعليقات
(هيدروكسي بروبيل) ميثيل السليلوز HPMCسيجما-ألدريتشH75090.5٪ HPMC
أجهزة الطرد المركزي ZentriMix 380 RHettich3200
أنابيب الطرد المركزي 50 مل أنابيب البولي بروبيلين المعقمة المخروطية227 261
نصائح القطنMeditip CleanG80215
المياه منزوعة الأيوناتفي المنزل
كريم إزالة الشعربالقرب من الصيدلية
ثنائي ميثيل سلفوكسيد (DMSO)SigmaD2650-5X5MLمعقم
الإيثانول المطلقFRESENIUS KABI010-0622-1
إبرة تغذية ، أدواتالعلوم الدقيقة FSTقابلة لإعادة الاستخدام 18064-20
ملقط بطرف ناعم Dumont # 5 ملقطFST أدوات العلوم الدقيقة11252-00
وسادات شاش 5 × 5 سمKlinipress175 004
GraphPad PrismGraphPad Software، Incالإصدار 9
برنامج تحليل واجهة المستخدم الرسوميةInsermgui_analysis.mيحتاج إلى مسح دوبلر 10 مللي ثانية
وسادة تسخين 17 × 17 سم ، 6 واطThermoLux Acculux461265
30G 0.30 × 8 مم ، 0.3 مل و 0.5 ملBD Microfine + Demi25636
كيتامين أنسكيتينDechraREG NL 111764100 مجم / مل
Kimwipes ممسحة KIMTECH منخفضة الوبرULINES-8115
شريط مختبر 19 مم × 50 م × 0.125 ممبرنامج StokvisM451
MATLABMathWorksالإصدار R2022b
كريم مرطببالقرب من الصيدلية
إبرة صفراء 30 جم 0.3 × 13 ممBD Microlance304000
مرهم العيون Oculentum Simplexمضاف مناديل ورقية مضافة 220201
فارما في المنزل
مختبر دائمVWR52877-310
محلول ملح فسيولوجي (كلوريد الصوديوم 0.9٪)FRESENIUS KABIB102986معقمة
للحواد الطبية 2.5 لترAPmedicalUN3291
قفل آمن معقم 1.5 مل أنابيبEppendorf0030 120.086
حقنة 1 ملBD Plastipak303172
حقنة 20 مل Luer-LokBD Plastipak300629
مؤقتWest Bend40053
ماكينة تشذيبExacta AesculapGT416
فائقة السرعة منصة الموجات فوق الصوتيةIconeus &   INSERM "الموجات فوق الصوتية الطبية الحيوية" ARTIconeus نموذج أولي معتسلسل 10 مللي ثانية
جل نقل الموجات فوق الصوتية Aquasonic 100Parker Laboratories INC.BT-025-0037N
خزان مياه مطبوع ثلاثي الأبعاد 10 × 10 × 1.5 سم بولي ميثيل بنتين (PMP) 0.125 ممGoodFellow Cambridge المحدودME311100 / 2ملف CAD عند الطلب
Xylazine SedamunDechraREG NL 1008420 مجم / مل
حقنة أنسولين علامة حاوية حادة

المراجع

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,
  1. Poisson, J., et al. Liver sinusoidal endothelial cells: Physiology and role in liver diseases. J Hepatol. 66 (1), 212-227 (2017).
  2. Gracia-Sancho, J., Caparrós, E., Fernández-Iglesias, A., Francés, R. Role of liver sinusoidal endothelial cells in liver diseases. Nat Rev Gastroenterol Hepatol. 18 (6), 411-431 (2021).
  3. Deffieux, T., Demene, C., Pernot, M., Tanter, M. Functional ultrasound neuroimaging: a review of the preclinical and clinical state of the art. Curr Opin Neurobiol. 50, 128-135 (2018).
  4. Macé, E., et al. Functional ultrasound imaging of the brain: Theory and basic principles. IEEE Trans Ultrason Ferroelectr Freq Control. 60 (3), 492-506 (2013).
  5. Tanter, M., Fink, M. Ultrafast imaging in biomedical ultrasound. IEEE Trans Ultrason Ferroelectr Freq Control. 61 (1), 102-119 (2014).
  6. Demené, C., et al. Spatiotemporal clutter filtering of ultrafast ultrasound data highly increases Doppler and fUltrasound sensitivity. IEEE Trans Med Imaging. 34 (11), 2271-2285 (2015).
  7. Deffieux, T., Demené, C., Tanter, M. Functional ultrasound imaging: A new imaging modality for neuroscience. Neuroscience. 474, 110-121 (2021).
  8. Fiebig, T., et al. Three-dimensional in vivo imaging of the murine liver: A micro-computed tomography-based anatomical study. PLoS One. 7 (2), e31179(2012).
  9. Sänger, C., et al. Intrahepatic vascular anatomy in rats and mice - Variations and surgical implications. PLoS One. 10 (11), e0141798(2015).
  10. Higashiyama, H., et al. Anatomy of the murine hepatobiliary system: A whole-organ-level analysis using a transparency method. Anat Rec. 299 (2), 161-172 (2016).
  11. World Association of Veterinary Anatomists. , Available from: http://www.wava-amav.org/ (2023).
  12. Szklaruk, J., Bhosale, P., Luersen, G. State-of-the-art cross-sectional liver imaging: beyond lesion detection and characterization. J Hepatocell Carcinoma. 2, 101-117 (2015).
  13. Lv, J., Xu, Y., Xu, L., Nie, L. Quantitative functional evaluation of liver fibrosis in mice with dynamic contrast-enhanced photoacoustic imaging. Radiology. 300 (1), 89-97 (2021).
  14. Sun, T., et al. In vivo liver function reserve assessments in alcoholic liver disease by scalable photoacoustic imaging. Photoacoustics. 34, 100569(2023).
  15. Macé, E., et al. Functional ultrasound imaging of the brain. Nat Methods. 8 (8), 662-664 (2011).
  16. de Haan, W., et al. Endothelial Zeb2 preserves the hepatic angioarchitecture and protects against liver fibrosis. Cardiovasc Res. 118 (5), 1262-1275 (2022).
  17. Couture, O., Hingot, V., Heiles, B., Muleki-Seya, P., Tanter, M. Ultrasound localization microscopy and super-resolution: A state of the art. IEEE Trans Ultrason Ferroelectr Freq Control. 65 (8), 1304-1320 (2018).

إعادة الطباعة والأذونات

طلب إذن لإعادة استخدام النص أو الأشكال في مقالة JoVE هذه

طلب إذن

الوسوم

مقالات ذات صلة