حددت الدراسة الحالية آلية فريدة يمارس بها الساليدروسيد تأثيرات وقائية للميتوكوندريا على خلايا HT22 ناقصة التأكسج ، جزئيا من خلال مسار AMPK / Sirt1 / HIF-1α.
يتطلب اشتراك JoVE لعرض هذا المحتوى. تسجيل الدخول أو ابدأ نسخة تجريبية مجانية
مقالة بحثية
حددت الدراسة الحالية آلية فريدة يمارس بها الساليدروسيد تأثيرات وقائية للميتوكوندريا على خلايا HT22 ناقصة التأكسج ، جزئيا من خلال مسار AMPK / Sirt1 / HIF-1α.
ساليدروسيد (سال), عنصر نشط رهوديولا كرينولاتا (هوك. و. وآخرون تومس.) H. أوهبا وقد وجد أن يمارس آثار وقائية الميتوكوندريا عن طريق تحسين التمثيل الغذائي وتعزيز إمدادات الطاقة لخلايا الدماغ في ظل ظروف نقص الأكسجة. ومع ذلك، لم يتم توضيح آلية عملها بشكل كامل. في هذه الدراسة ، تم استخدام الكروماتوغرافيا السائلة عالية الأداء لأول مرة لتحليل تأثيرات Sal على مستويات النيوكليوتيدات (ATP و ADP و AMP). تم اختيار مقايسة التحول الحراري الخلوي (CETSA) ، وهي طريقة تفاعل جزيئي مستخدمة على نطاق واسع للتحقق من صحة وقياس مشاركة هدف الدواء في الخلايا والأنسجة عبر الأنواع المختلفة ، لتأكيد تقارب Sal للبروتينات المرتبطة بمسار AMPK / Sirt1 / HIF-1α. كشفت النتائج أن Sal زاد من مستويات ATP و ADP في خلايا HT22 التي تعاني من نقص الأكسجين مع تقليل مستويات AMP. علاوة على ذلك ، أظهر Sal ارتباطا مستقرا ببروتينات AMPKα و p-AMPKα و Sirt1 و HIF-1α. في الختام ، قد يمارس Sal تأثيرات وقائية للميتوكوندريا عن طريق تعديل مسار AMPK / Sirt1 / HIF-1α لتنظيم محتوى النيوكليوتيدات. توفر هذه الدراسة مرجعا منهجيا لتحليل محتوى النيوكليوتيدات في عينات الخلايا وتساهم في تحديد واكتشاف أهداف المركبات المشتقة من الطب الصيني التقليدي.
الدماغ حساس للغاية للأكسجين بسبب متطلباته الأيضية العالية ، وقدرته المحدودة على تحلل السكر ، والاعتماد على الفسفرة المؤكسدة. نتيجة لذلك ، يمكن أن يؤدي التعرض لبيئة منخفضة الأكسجين على ارتفاعات عالية بسهولة إلى إصابة الدماغ الناجمة عن نقص الأكسجين (HHBI) 1،2. وتشير الدراسات الوبائية إلى أنه عندما يصعد الأفراد غير المتأقلمين مع الارتفاعات العالية بسرعة إلى المناطق المرتفعة، يمكن أن يصل معدل الإصابة بمرض الجبال الحاد إلى 75٪، مع معدل وفيات يبلغ حوالي 1٪ في الحالات الشديدة. علاوة على ذلك ، في حالة عدم وجود رعاية طبية ، يمكن أن تصل معدلات الوفيات الناجمة عن الوذمة الدماغية أو الرئو....
الوصول مقيد. يرجى تسجيل الدخول أو بدء فترة تجريبية لعرض هذا المحتوى.
وترد التفاصيل التجارية للكواشف والمعدات المستخدمة في هذه الدراسة في جدول المواد.
1. إعداد الحل
الوصول مقيد. يرجى تسجيل الدخول أو بدء فترة تجريبية لعرض هذا المحتوى.
كانت المنحنيات القياسية ل ATP و ADP و AMP التي اكتشفها HPLC هي Y = 7006.5X - 222.99 ، Y = 5217.3X - 17.796 ، و Y = 9280.1X + 22.749 ، على التوالي (الشكل 1A-C). تم حساب محتويات النيوكليوتيدات المقاسة في كل مجموعة بواسطة HPLC باستخدام المنحنيات القياسية (الشكل 1D-I). وجد أن CoCl2 قلل بشكل كبير من مستويات ATP و ADP في خلايا HT22 مقارنة بالمجموعة الضابطة (P < 0.01 ،
الوصول مقيد. يرجى تسجيل الدخول أو بدء فترة تجريبية لعرض هذا المحتوى.
الميتوكوندريا هي عضيات رئيسية تشارك في الوقاية العلاجية من HHBI23،24،25. أكدت الدراسات السابقة التي أجرتها المجموعة أن Sal ينظم تعبير بروتين AMPK و Sirt1 و HIF-1α ، مما يعزز وظيفة الميتوكوندريا العصبية ويحمي من HHBI21،24. ومع ذلك ، فإن التأثير المباشر ل Sal على النيوكليوتيدات في الخلايا الناقصة للأكسجين يتطلب مزيدا من التحقيق. بالإضافة إ.......
الوصول مقيد. يرجى تسجيل الدخول أو بدء فترة تجريبية لعرض هذا المحتوى.
المؤلفون ليس لديهم ما يكشفون عنه.
تم دعم هذا العمل من قبل المؤسسة الوطنية للعلوم الطبيعية في الصين (82274207 و 82474185) ، وإدارة العلوم والتكنولوجيا في مقاطعة سيتشوان (2024NSFSC1845) ، ومؤسسة العلوم لشباب إدارة العلوم والتكنولوجيا في مقاطعة سيتشوان (2023NSFSC1776) ، وبرنامج البحث والتطوير الرئيسي في نينغشيا (2023BEG02012) ، ومشروع دعم المواهب الشابة التابع للجمعية الصينية للطب الصيني لعام 2024-2026 (2024-QNRC2-B07) وأبحاث Xinglin Scholar مشروع الترويج لجامعة تشنغدو للطب الصيني التقليدي (XKTD2022013 و QJJJ2024027).
مساهمة المؤلف:
صمم هذا المشروع Xiaobo Wang و Yating Zhang و Ya Huu و Rui Li و Xianli Meng. أجرى Yating Zhan....
الوصول مقيد. يرجى تسجيل الدخول أو بدء فترة تجريبية لعرض هذا المحتوى.
| الاسم | الشركة | رقم فهرسي | التعليقات |
|---|---|---|---|
| أسيتونيتريل | علاء الدين | A104440 | |
| 0.22 & ميكرو ؛ م غشاء مائي | Jinteng | JTMF0445 | |
| 0.22 & micro ؛ م إبرة نوع غشاء مرشح صغير يسهل اختراقه | Jinteng | JTSFM013001 | |
| 0.45 & م غشاء عضوي | Jinteng | JTMF0448 | |
| برنامج Agilent OpenLab ؛ | Agilent | الإصدار 2.X | |
| الأجسام المضادة-AMPKα | تقنية إشارات الخلية | # 2532 | |
| الأجسام المضادة-HIF-1 & ألفا ؛ | تقنية إشارات الخلية | # 41560 | |
| الأجسام المضادة-p-AMPK & | تقنية إشارات الخلية | # 50081 | |
| إشارات الخلية | للأجسام المضادة-Sirt1 | # 2028 | |
| تقنية إشارات خلية | الأجسام المضادة | بيتا # 4970 | |
| مجموعة فحص تركيز البروتين BCA | بوستر التكنولوجيا البيولوجية | 17E17B46 | |
| ألبومين مصل البقر | Cywin Innovation (بكين) شركة التكنولوجيا الحيوية المحدودة. | SW127-02 | |
| مثبط الفوسفاتيز واسع الطيف (100 مرة) | التكنولوجيا البيولوجية بوستر | AR1183 | |
| العمود الكروماتوغرافي | Agilent | SB-C18< / sub> | |
| CoCl2< / sub> | Sigma | 15862 | |
| شاكر إزالة اللون | Kylin-Bell | TS-2 | |
| Dorsomorphin | MedChemExpress (MCE) | HY-13418A | |
| نسر Dulbecco المعدل متوسط | Gibco | 8121587 | |
| الرحلان الكهربائي عازلة | NCM Biotech | 20230801 | |
| مصل الأبقار الجنين | Gibco | 2166090RP | |
| الماعز المضاد للأرانب IgG H& L (TRITC) | ZenBioScience Co.، Ltd. | 511202 | |
| برنامج GraphPad Prism | برنامج GraphPad ، LLC | الإصدار 9.0.0 | |
| الكروماتوغرافيا السائلة عالية الأداء | Agilent | 1260 Infinity II Prime ؛ | |
| أجهزة طرد مركزي مبردة عالية السرعة | ثيرمو فيشر Scientific | Legend Micro 17R | |
| HRP مترافقة ماعز مضاد للأرانب IgG (H + L) | Boster Biological Technology Co.، Ltd. | خلايا BA1054 | |
| HT22 | قوانغتشو جينيو للتكنولوجيا الحيوية المحدودة | JNO-02001 | |
| طقم تلألؤ كيميائي ECL شديد الحساسية | NCM Biotech | P10300 | |
| Image J برنامج | المعاهد الوطنية للصحة | v1.8.0 | |
| أداة التحكم في درجة حرارة تسخين المعادن | Baiwan Electronictechnology Co.، Ltd. | HG221-X3 | |
| الميثانول | علاء الدين | M116118 | |
| النيوكليوتيدات (ATP و ADP و AMP) مجموعة فحص محتوى | Beijing Solarbio Science & التكنولوجيا المحدودة | BC5114 | |
| PAGE طقم تحضير سريع للهلام | Biosharp | PL566B-5 | |
| Penicillin-Streptomycin | NCM Biotech | C125C5 | |
| محلول ملحي مخزن بالفوسفات (1 مرات ؛) | Gibco | 8120485 | |
| بروتين ملونة مسبقا (10-180 كيلو دالتون) | Cywin Innovation (Beijing) Biotechnology Co.، Ltd. | SW176-02 | |
| عازلة تحميل البروتين (5x) | البيولوجية Boster | AR1112 | |
| PVDF (0.45 & mu; م) | Cywin Innovation (بكين) شركة التكنولوجيا الحيوية المحدودة | SW120-01 | |
| حل نقل الغشاء السريع | Cywin Innovation (بكين) شركة التكنولوجيا الحيوية المحدودة | SW171-02 | |
| RIPA lysate | Boster Biological Technology Co.، Ltd. | AR0105 | |
| Salidroside | Chengdu Herbpurify Co.، Ltd. | RFS-H0400191102 | |
| TBS العازلة | NCM Biotech | 23HA0102 | |
| عازلة عبر الغشاء | NCM Biotech | 23CA2000 | |
| Trypsin (0.25٪ ، 1 & times;) | HyClone | J210045 | |
| Tween 20 | Shanghai Canspec Scientific Instruments Co.، Ltd. | PM12012 | |
| جهاز تعطيل الخلايا بالموجات فوق الصوتية | نينغبو Xinyi معدات الموجات فوق الصوتية المحدودة | نظام التصوير JY92-IIDN | |
| Visionworks | Analytik Jena | UVP ChemStudio | |
| خلاط دوامة | Kylin-Bell | XW-80A |
الوصول مقيد. يرجى تسجيل الدخول أو بدء فترة تجريبية لعرض هذا المحتوى.
تم نشر هذه المقالة
الفيديو قريباً