في حين أن الاضطرابات الرئوية لا تزال الأسباب الرئيسية للمراضة والوفيات العالمية1 ، فقد شهد العقد الماضي تحسنا كبيرا في نتائج المرضى. هذه التحسينات مدفوعة جزئيا بعاملين. أولا ، تعطي المرحلة الثالثة من التجارب السريرية الآن الأولوية للتغييرات في وظائف الرئة كنقاط نهاية بدلا من الوفيات ، مما يؤدي إلى تسريع تجارب الأدوية2،3،4،5. ثانيا ، قدمت التطورات في النماذج الحيوانية المحسنة رؤى حول آليات المرض وساعدت في تطوير العلاج6،7. غالبا ما تفضل نماذج الفئران للأبحاث الانتقالية لأنها توفر أوجه تشابه فسيولوجية مع البشر ، والقدرة على تحمل التكاليف ، والتطور السريع للمرض. وسعت الهندسة الوراثية نطاق وجودة النماذج المتاحة ، حيث يضم المورد الدولي لسلالة الفئران الآن أكثر من 32,000 سلالة فأر8 ، مقارنة ب 4,218 سلالة فقط من الفئران (قاعدة بيانات جينوم الفئران9). فتحت هذه النماذج طرقا جديدة للتحقيق في الدوافع الميكانيكية واستجابات العلاج لمجموعة من أمراض الرئة ، بما في ذلك مرض الانسداد الرئوي المزمن (COPD) 10 ، والتليف الكيسي (CF) 11 ، والتليف الرئوي12،13 ، وارتفاع ضغط الدم الرئوي14،15 ، والربو16.
لسوء الحظ ، فإن أبحاث الرئة التي تشمل الفئران محدودة بالتقنيات المتاحة لتحديد عبء المرض. غالبا ما تعتمد الدراسات على الإجراءات النهائية التي 1) توفر معلومات الرئة الكاملة (المقايسات الكيميائية الحيوية) أو المعلومات الموضعية (الأنسجة) و 2) تتطلب تصميمات مقطعية وأحجام عينات كبيرة. وبالتالي ، فإنها لا تلتقط ديناميكيات المرض المكانية أو الزمنية. في المقابل ، يمكن للتصوير ثلاثي الأبعاد غير الجراحي تقييم البنية والعمليات الجزيئية والوظيفة في الرئتين بمرور الوقت.
يمكن تصور بنية الرئة (على سبيل المثال ، تشوهات مجرى الهواء والتليف الخلالي) باستخدام التصوير بالرنين المغناطيسي لوقت الصدى القصير للغاية (UTE) والتصوير المقطعي المحوسب الدقيق (μCT) بدقة عالية. يمكن الحصول على المعلومات الوظيفية والميكانيكية (على سبيل المثال ، التهوية ، والتروية ، واستقلاب الورم ، والعمليات الالتهابية) باستخدام عوامل التباين الخارجية (على سبيل المثال ، التصوير المقطعي المحوسب المعزز بالزينون والالتهابات المسوبة المعززة بالأكسجين) وأساليب الطب النووي المؤين (على سبيل المثال ، التصوير المقطعي بالإصدار البوزيتروني [PET] ، والتصوير المقطعي المحوسب بإصدار فوتون واحد [SPECT]). ومع ذلك ، فإن التصوير الوظيفي يمثل تحديا بسبب التباين المتواضع مع الضوضاء (خاصة بالنسبة للرطوبة المعززة بالأكسجين في شدة المجال المغناطيسي العالية المستخدمة في التصوير بالرنين المغناطيسي قبل السريري ، حيث يتم إطالة T1 ) المتاحة دون استخدام طرائق مؤينة بمستويات إشعاع أعلى من المعتاد. في حين أن التصوير بهذه الطرائق جيد التحمل في النماذج الحيوانية باستخدام الجرعات التقليدية ، فإن الإشعاع التراكمي قد يربك النتائج في الدراسات التي أجريت على علم المناعة والالتهاب وسرطان الرئة17. ومع ذلك ، فإن التصوير بالرنين المغناطيسي (MRI) زينون 129 (129Xe) مفرط الاستقطاب (HP) يوفر معلومات هيكلية ووظيفية طفيفة التوغل وغير قابلة للإشعاع وحساسة للغاية. في حين تم استخدام هذه التقنية في الأبحاث قبل السريرية لتوصيف الحالات بما في ذلك انتفاخ الرئة18،19 ، والتليف20 ، وسرطان الرئة21 ، ومرض الانسداد الرئويالمزمن 22 ، وإصابة الرئة الناجمة عن الإشعاع23 في نقاط زمنية واحدة أو متعددة ، إلا أنها لا تزال غير مستغلة بشكل كاف في بيئة ما قبل السريرية.
لتمكين التصوير بالرنين المغناطيسي 129Xe الروتيني قبل السريري ، هناك حاجة إلى العديد من المتطلبات الأساسية ، بما في ذلك الدعم التنظيمي المؤسسي ، وجهاز الاستقطاب المفرط ، وملف الترددات الراديوية (RF) 129Xe ، وماسح ضوئي متعدد النواة. على الرغم من أن التطبيقات المتقدمة24،25،26،27،28،29،30،31،32،33 تتطلب برمجة نبضية خاصة بالبائع خارج نطاق هذا البروتوكول ، يمكن تحقيق التطبيقات الأساسية من خلال تعديلات متواضعة على البرامج. لذلك ، نركز على مراقبة الجودة ، ومعالجة المغنطة ، وجمع البيانات ، وإجراءات التعامل مع - بما في ذلك التهوية الميكانيكية - الفريدة من نوعها في التصوير بالرنين المغناطيسي قبل السريري 129Xe (الشكل 1).
حتى الآن ، استخدم تصوير الصغيرة 129Xe ثلاثة طرق لتوصيل الغاز الآمن للتصوير بالرنين المغناطيسي ، ولكل منها مزايا وعيوب: التنفس الحر ، والمدفوع بالمكبس ، وانخفاض الضغط. يسمح التنفس الحر بالاستنشاق التلقائي دون التعرض لخطر الإصابة من التنبيب أو فغر القصبة الهوائية ولكنه يستهلك المزيد من غاز HP بشكل ملحوظ ويمكن أن يقدم قطع أثرية للحركة34،35. الأجهزة التجارية التي تعمل بالمكبس ذاتية المعايرة وسهلة الاستخدام خارج الصندوق ولكنها قد تكون باهظة الثمن36. تم وصف النهج القائم على انخفاض الضغط المستخدم هنا جيدا في الأدبيات ، المعيارية ، والقابلة للتخصيص ، ويتم تشغيلها بواسطة رمز مفتوح المصدر37،38،39،40. علاوة على ذلك ، فهي فعالة من حيث التكلفة ، وعادة ما يبلغ مجموعها أقل من 10 آلاف دولار وبضعة أسابيع من وقت البناء المخصص. يوفر جهاز التنفس الصناعي بالضغط 129Xe من كيس جرعة داخل علبة مضغوطة أثناء مراقبة ضغط مجرى الهواء للفأر التنبيب.

الشكل 1: نظرة عامة على بروتوكول جمع التصوير بالرنين المغناطيسي الروتيني xenon-129 (129Xe) في الفئران. (أ) خطوات الإعداد الأولي. (ملاحظة: برمجة الماسح الضوئي فريدة لكل مورد وغير موصوفة في هذا البروتوكول). (ب) خطوات لجمع البيانات اليومية عن ضمان الجودة. (ج) خطوات النجاح في الانتهاء من التجربة وتحليل البيانات. الرجاء النقر هنا لعرض نسخة أكبر من هذا الرقم.
هنا ، نقوم بجمع وتحليل الفئات الثلاث الشائعة ل 129بيانات التصوير بالرنين المغناطيسي Xe: التهوية ، والتصوير المرجح بالانتشار (حجم المجال الجوي السنخي) ، وتبادل الغازات. تصور صور التهوية توزيع غاز 129Xe المستنشق. تظهر مناطق الرئتين ذات تدفق الهواء المنخفض مظلمة في صور غاز HP ، ويتم قياس علم الأمراض من خلال حجم التهوية المعيبة. في البشر ، أظهرت نسبة عيب التهوية (VDP) قابلية تكرار قوية41،42 وحساسية عالية لانسداد الرئة في أمراض مثل مرض الانسداد الرئويالمزمن 43،44،45 والربو46،47.
يمكن قياس الانتشار المقيد لذرات Xe البالغ عددها 129في المجال الجوي عبر معامل الانتشار الظاهري (ADC) ويعمل كبديل لحجم الفضاء الجوي. يتم حساب ADC عن طريق الحصول على صورة أساسية (b0) بدون ترجيح الانتشار وصورة واحدة أو أكثر تم الحصول عليها في وجود ترجيح الانتشار الناجم عن التدرج ثنائي القطب (bN). يعكس ADC المرتفع زيادة في حجم المجال الجوي بسبب الشيخوخة أو إعادة تشكيل انتفاخالرئة 18،48. علاوة على ذلك ، يسمح استخدام صور متعددة ذات قيمة b (≥4) بحساب معلومات مورفومترية أكثر تفصيلا (على سبيل المثال ، متوسط الاعتراض الخطي)49،50.
يمكن وصف تبادل الغازات بسبب 1) قابلية ذوبان 129Xe في أنسجة الغشاء الشعري والبلازما وكرات الدم الحمراء (خلايا الدم الحمراء) و 2) التحول الكيميائي >200 جزء في المليون في الحقل السفلي ل 129Xe عند إذابته في هذه المقصورات. توفر كل من البيانات الطيفية والتصوير نظرة ثاقبة للأمراض القلبية الرئوية (على سبيل المثال ، ارتفاع ضغط الدم الرئوي وفشل القلب الأيسر51،52،53). في حين أن العديد من الأنواع (البشر والأنياب والجرذان) تعرض قمما طيفية فريدة تنشأ من كل حجرة ، فإن الفئران تفتقر إلى إشارة كرات الدم الحمراء الفريدة بسبب الاختلافات في تفاعلات موقع ربط الهيموجلوبين والزينون. بدلا من ذلك ، يتم دمج جميع المكونات الذائبة في إشارة واحدة في الفئران54. ومع ذلك ، من الممكن ملاحظة رنين صبغي الدم الحمراء المميز في الفئران المعدلة وراثيا التي تعبر عن الهيموجلوبين البشري ، مثل تلك المستخدمة في نماذج مرض فقر الدم المنجلي54. بشكل عام ، يوفر التحليل الطيفي والتصوير المذاب 129Xe رؤى فريدة حول الفيزيولوجيا المرضية القلبية الرئوية في الفئران55،56.
قبل محاولة هذا البروتوكول ، من الضروري فهم المعلومات الأساسية حول ماسح التصوير بالرنين المغناطيسي والتهوية الميكانيكية وتقنيات التعامل مع الفأر المطلوبة لدراسات الفئران. قبل الشروع في الدراسات على ، يجب الموافقة على جميع الإجراءات من قبل اللجنة المؤسسية المحلية لرعاية واستخدامه (IACUC) 57. نظرا لأن إجمالي العزم المغناطيسي المتاح في رئة الفأر منخفض جوهريا (أي حجم المد والجزر ~ 250 ميكرولتر) ، يجب أن يكون حجم الفوكسل أصغر بمقدار 1000 مرة مما هو عليه في البشر لتحقيق دقة مكافئة تشريحيا. معدل تنفس الفئران سريع للغاية (>100 نفس / دقيقة). على هذا النحو ، فإن إجراءات حبس النفس الفردي المستخدمة عادة للتصوير البشري غير مجدية. بدلا من ذلك ، يمكن تطبيق عدد قليل فقط من إثارة الترددات اللاسلكية في كل نفس ، لذلك يجب ترميز 129صورة Xe على عشرات إلى مئات الأنفاس. قد تكون هناك حاجة إلى برمجة النبضات للسماح بالتشغيل الخارجي للعمليات الاستحواذ وتكرار الشرائح بشكل صحيح ، وترميز الطور ، و / أو الصور المرجحة بالانتشار مع موازنة نسبة الإشارة إلى الضوضاء (SNR) والدقة ومدة المسح. هنا ، يقوم جهاز التنفس الصناعي بإخراج نبضة منطق الترانزستور والترانزستور (TTL) مرة واحدة لكل نفس لتحفيز الحصول على البيانات (الشكل 2).

الشكل 2: التهوية الميكانيكية التمثيلية وتوقيت الحصول على البيانات. (أ) يمكن أن تؤدي التهوية التي يتحكم فيها المستخدم إلى الحصول على البيانات عند الإلهام النهائي أو أثناء حبس التنفس أو عند انتهاء الصلاحية. (ب) بالنسبة لتسلسل التهوية الشعاعية ثلاثية الأبعاد هذا ، يحدد المستخدم العدد الإجمالي للإسقاطات المكتسبة وعدد الإسقاطات لكل نفس. (ج) بالنسبة للصورة الانتقائية للشريحة ، ثنائية الأبعاد مرجحة بالانتشار ، يحدد المستخدم ترتيب الشرائح وصور b-value وترميز الطور. الرجاء النقر هنا لعرض نسخة أكبر من هذا الرقم.
لتمكين التهوية الموثوقة والولادة 129Xe ، يلزم إجراء التخدير والتنبيب القوية. لكل دراسة ، يجب مراعاة التأثيرات النهائية لكل مخدر - بما في ذلك التغييرات في التهوية الدقيقة ومعدل ضربات القلب (HR) وضغط الدم58،59،60،61،62،63،64،65،66. بينما تم استخدام مجموعة متنوعة من المهدئات للتصوير بالرنين المغناطيسي لغاز HP قبل السريري ، فإننا نستخدم مزيجا من الكيتامين والزيلازين والأسيبرومازين ، نظرا لتوفره وفعاليته من حيث التكلفة وموثوقيته ومدته67،68. بمجرد التخدير ، يجب تنبيب من أجل التهوية الميكانيكية الفعالة. يصعب تنبيب الفئران بسبب صغر حجم تشريحها ، وبالتالي ، من المهم التدريب الشامل على هذه التقنية. نحن نشجع المحققين على مراجعة بروتوكولات الفيديو المنشورة69،70. نظرا لأن معظم قنيات التنبيب التجارية تحتوي على الفولاذ المقاوم للصدأ ، فإننا نقدم تقنية لصنع قنيات خالية من المعادن (أي متوافقة مع التصوير بالرنين المغناطيسي وغاز HP) ، على شكل إسفين يمكن تخصيصها لتتناسب مع قطر مجرى الهواء لإنشاء ختم محكم مع جدار القصبة الهوائية بالفأر.
نظرا لأنه يتم جمع 129صورة Xe على مدى العديد من الأنفاس ، فإن إعدادات جهاز التنفس الصناعي أمر بالغ الأهمية. يجب النظر بعناية في استراتيجيات التهوية الوقائية لمنع إصابة الرئة71،72،73،74. على وجه الخصوص ، يقلل استخدام حجم المد والجزر المنخفض (TV) ، وضغط الزفير الإيجابي المعتدل (PEEP) ، ومناورات التجنيد السنخية (RMs) من خطر إصابة الرئة التي يسببها جهاز التنفس الصناعي في المرضى من البشر والنماذج الحيوانية75،76،77،78،79،80،81. هنا ، نوصي بتقنية بسيطة متوافقة مع التهوية الميكانيكية لانخفاض الضغط 129Xe وهي واقية وتوفر ما يكفي من 129Xe صورة SNR. على وجه التحديد ، نقوم بتطبيق PEEP عن طريق إضافة صمام PEEP تجاري إلى خط الزفير لجهاز التنفس الصناعي. لأداء RMs ، يجب إغلاق خط الزفير بحيث يتلقى استنشاقا متعدد دون زفير حتى يتم الوصول إلى الضغط المستهدف والمدة.
طوال الوقت ، نقدم إعدادات تهوية عامة ، ولكن ينصح بمراجعة الأدبيات لمعالجة أهداف الدراسة المحددة82،83. بالإضافة إلى مراقبة ذروة ضغط الشهيق أثناء التهوية الميكانيكية ، من المهم مراقبة درجة حرارة ، والتي يمكن إجراؤها باستخدام طرق مراقبة درجة حرارة الفأر القياسية. على الرغم من عدم الحاجة إلى التصوير ، إلا أن مراقبة معدل ضربات القلب عن طريق مخطط كهربية القلب (ECG) يمكن أن تكون مفيدة. يمكن أن يشير مخطط كهربية القلب إلى ما إذا كان يستيقظ من التخدير أو جرعة زائدة أو محزن ، مما يسمح للباحث بالتدخل.
تم تصميم البروتوكول الذي نصفه لجمع 129بيانات تهوية شعاعية Xe 3D61 ، وبيانات 2D GRE مرجحةبالانتشار 76 ، وبيانات تبادل الغازات الطيفية للنبض الديناميكي. يهدف هذا البروتوكول إلى سد الفجوة بين الأبحاث قبل السريرية في نماذج الصغيرة وإمكانية إجراء التصوير بالرنين المغناطيسي 129Xe لتعزيز فهمنا للاضطرابات الرئوية.