يصف هذا البروتوكول تطبيق التقنية الجراحية المستخدمة لنقل أجنة الخنازير المستنسخة عن طريق شق البطن في المذهب.
يتطلب اشتراك JoVE لعرض هذا المحتوى. تسجيل الدخول أو ابدأ نسخة تجريبية مجانية
يصف هذا البروتوكول تطبيق التقنية الجراحية المستخدمة لنقل أجنة الخنازير المستنسخة عن طريق شق البطن في المذهب.
يهدف هذا البروتوكول إلى إظهار التقنية الجراحية لنقل أجنة الخنازير المستنسخة إلى قناة البيض ، وهي طريقة تستخدم على نطاق واسع في إنتاج الخنازير المعدلة وراثيا للأبحاث الطبية الحيوية. خضعت تسعة ذهبيات للتزامن الهرموني وبضع البطن لنقل الأجنة المستنسخة الناتجة عن النقل النووي للخلايا الجسدية (SCNT) في مراحل تصل إلى 4 خلايا في اليوم 2 إلى قناة البيض. تم إجراء تشخيص الحمل عن طريق الفحص بالموجات فوق الصوتية بعد 30 يوما من جراحة النقل. أظهرت ستة من أصل تسعة مذهبات تم تشغيلها علامات الحمل في الفحص بالموجات فوق الصوتية. ومع ذلك ، نظرا لعدم وجود تقدم في نمو الجنين كما تم تقييمه بواسطة تخطيط صدى الشر ، فقد خضعت الذهبية للتشريح في 60 يوما لجمع المواد البيولوجية وتقييم الجهاز التناسلي. لوحظت التصاقات في قرون الرحم والمبيض وقنوات البيض. من تجويف الرحم لاثنين من الذهبات الرحيم ، تم الحصول على واحد وأربعة هياكل جنينية تتراوح أعمار الحمل بين 12 إلى 20 يوما. على الرغم من عدم وجود خنازير حية ، ويرجع ذلك على الأرجح إلى انخفاض معدل الكفاءة لنقل أجنة الخنازير المستنسخة ، والذي يتأثر بعوامل مختلفة ، بما في ذلك عدد ونوعية الأجنة المنقولة ، أثبتت التقنية الجراحية المقدمة أنها سريعة وآمنة.
تعتبر الخنازير نموذجا تجريبيا ممتازا للأبحاث الطبية الحيوية نظرا لأوجه التشابه التشريحية والفسيولوجية والوراثية مع البشر1. غالبا ما تم استخدام هذه في الأبحاث المتعلقة بزرع الأعضاء ، بهدف إنتاج أعضاء أو خلايا أو أنسجة تعزز انخفاض خطر الرفض عند زرعها في البشر. تهدف أبحاث زراعة الأعضاء إلى زيادة إمدادات الأعضاء لزراعة الأعضاء البشرية ، وبالتالي تقليل قائمة انتظار المرضى2.
يتضمن إنتاج الخنازير لزرع الأعضاء عدة خطوات ، بما في ذلك إنتاج المستنسخة من خلايا الخنازير المعدلة وراثيا. بعد الإنتاج المختبري للأجنة المستنسخة المعدلة وراثيا ، يتم نقل الأجنة إلى الجهاز التناسلي للبذر بدورة شبقية متزامنة لإعداد فسيولوجيا الرحم لاستقبال وحمل المفهوم الجديد3.
يمكن إجراء نقل الأجنة في الخنازير بطرق غير جراحية أوغازية 4. من بين الطرق غير الغازية النقل عبر عنق الرحم ، والذي لا يتطلب أي تدخل جراحي. ومع ذلك ، فإن هذه الطريقة تقتصر على نقل الأجنة في مراحل التطور اللاحقة (أي مراحل المورولا أو الكيسة الأريمية) ولا تسمح بالتحديد الدقيق لموقع إدخال القسطرة أو ترسب الجنين5. يعتبر تنظير البطن وبضع البطن طرقا غازية لنقل الأجنة. تنظير البطن أقل توغلا ولكنه يتطلب معدات محددة ومكلفة ، وتختلف كفاءته بشكل كبير (من أقل من 20٪ إلى أكثر من 80٪) بسبب عوامل مختلفة مثل صعوبة التلاعب بالهياكل التناسلية ونوع القسطرة المستخدمة4،6. لذلك ، لا يزال النقل عن طريق تنظير البطن أقل كفاءة مقارنة بطرق النقل الجراحي عن طريق شقالبطن 4.
جراحة نقل الأجنة في البذار عن طريق شق البطن هي إجراء بسيط وسريع نسبيا ، وعادة ما يستغرق حوالي 30 دقيقة. ومع ذلك ، يجب إجراؤه في مركز جراحي مجهز بجهاز تخدير استنشاق وفريق متخصص. بالنسبة لسلالات الخنازير التجارية (مثل Landrace أو Large White أو تهجينها) ، فإن المعدات الخاصة مثل الرافعات لرفع المذهب وطاولة جراحية عريضة ومتينة ضرورية بسبب الوزن الكبير للحيوانات (حوالي 130-150 كجم).
لكي تنجح الجراحة ، يجب تقييم الأجنة لمرحلة تطورها مسبقا. يوصى بنقل الأجنة المكونة من 4 خلايا إلى أنبوب الرحم. يجب نقل الأجنة في مراحل تتجاوز 4 خلايا ، مثل المورولا والكيسات الأريمية ، إلى قرن الرحم7،8.
على الرغم من أن المجموعات البحثية في جميع أنحاء العالم تقوم بإنتاج أجنة الخنازير المستنسخة المعدلة وراثيا ونقلها الجراحي ، إلا أنه لا توجد حتى الآن بروتوكولات محددة جيدا توضح هذا الإجراء من خلال مقاطع الفيديو. هذا النهج ضروري لنجاح الحمل ، حيث تتطلب التقنية ترسب دقيق للأجنة في الموقع الدقيق لقناة البيض ، بما في ذلك توطين أوستيوم البوق وإدخال الماصة التي تحتوي على الأجنة. يمكن فهم هذه التقنية بشكل أفضل من خلال مقاطع الفيديو التوضيحية للإجراء بأكمله. لذلك ، تهدف هذه المقالة إلى توضيح جراحة شق البطن لنقل الأجنة المستنسخة إلى قناة البيض المذهبة ، وهو شرط أساسي أساسي للإنتاج المستقبلي للخنازير المعدلة وراثيا لاستخدامها في زرع الأعضاء أو أغراض أخرى ذات صلة.
الوصول مقيد. يرجى تسجيل الدخول أو بدء فترة تجريبية لعرض هذا المحتوى.
تمت الموافقة على هذه الدراسة من قبل لجنة الأخلاقيات حول استخدام في البحوث التابعة لكلية الطب البيطري وعلوم بجامعة ساو باولو, البروتوكول رقم 6088030523. تم استخدام تسعة مذهبات عمرها سبعة أشهر من تربية الخنازير نواة Água Branca ، الواقعة في مدينة إيتو ، ولاية ساو باولو ، البرازيل ، مباشرة بعد الكشف الثاني عن الشبق9. تفاصيل الكواشف والمعدات المستخدمة في الدراسة مدرجة في جدول المواد.
1. تحضير
2. الإجراء الجراحي
3. رعاية ما بعد الجراحة
4. تشخيص الحمل بالموجات فوق الصوتية للحمل
5. القتل الرحيم للحيوانات
ملاحظة: القتل الرحيم للذهب الذي لم يظهر أجنة ذات حجم ومظهر يتوافق مع عمر الحمل في فحص الموجات فوق الصوتية.
الوصول مقيد. يرجى تسجيل الدخول أو بدء فترة تجريبية لعرض هذا المحتوى.
تهدف هذه المقالة إلى توضيح جراحة شق البطن لنقل الأجنة المستنسخة إلى قناة البيض المذهبة. بقيت جميع في مستوى تخدير مناسب ، دون أي حوادث أو مضاعفات أثناء الجراحة أثناء التعافي من التخدير. استغرق الذهب ، في المتوسط ، 2-3 ساعات للوقوف بعد انتهاء الجراحة.
استمرت جميع العمليات الجراحية ، في المتوسط ، 44 دقيقة. خضعت تسعة جنين ذهبيين لعملية جراحية ، بمتوسط 185 جنينا مستنسخا تم نقلها لكل مذهب ، بإجمالي 1،664 جنينا تم نقلها ثنائيا (الجدول 1). يتوافق توطين المبايض ، وتخارجيتها ، وإدخال قس...
الوصول مقيد. يرجى تسجيل الدخول أو بدء فترة تجريبية لعرض هذا المحتوى.
تم إجراء الطريقة الجراحية الموصوفة سابقا من قبل مجموعات بحثية أخرى تعمل على إنتاج الخنازير المستنسخة أو الخنازير المستنسخة المعدلة وراثيا ، مع تقارير عن الولادات بعد تنفيذ هذه التقنية15،16،17،18،19،20. تتراوح معدلات الحمل والولادة لأجنة نقل نواة الخلية الناتجة عن سلالات الخلايا المختلفة بين 2...
الوصول مقيد. يرجى تسجيل الدخول أو بدء فترة تجريبية لعرض هذا المحتوى.
لا يكشف أي من المؤلفين عن أي تضارب في المصالح
نود أن نشكر مستشفى الخيول البيطري والمستشفى البيطري للحيوانات المجترة التابع لكلية الطب البيطري ، جامعة ساو باولو (FMVZ / USP) ، ساو باولو ، البرازيل ، FAPESP (منحة 2022 / 11459-3 ، مؤسسة ساو باولو للأبحاث) ، EMS Pharma ، CNPq (منحة 405254 / 2022-9) ، و Água Branca لتربية الخنازير ، إيتو ، ساو باولو ، البرازيل.
الوصول مقيد. يرجى تسجيل الدخول أو بدء فترة تجريبية لعرض هذا المحتوى.
| الاسم | الشركة | رقم فهرسي | التعليقات |
|---|---|---|---|
| 0.25 مل قش | عام | - | مادة جراحية |
| 1 مل حقنة | Descarpack | 341001 | المواد الجراحية |
| 10 مل حقنة | Descarpack | 324601 | المواد الجراحية |
| 20 مل حقنة | Descarpack | 324801 | المواد الجراحية |
| 3 مل حقنة | Descarpack | 324201 | المواد |
| 5 مل حقنة | Descarpack | 324401 | المواد الجراحية |
| 60 مل حقنة | Descarpack | 323201 | المواد الجراحية |
| مم أنبوب القصبة الهوائية | Rusch | 112482-000090 | المواد الجراحية |
| Allis ملقط | عام | أداة جراحية | |
| Amox LA | JA Sa ú تسجيل | MAPA: 8.781/2004 | الدواء الصيدلاني |
| Bakhaus ملقط | جراحية | ||
| قسطرة 20G | قسطرة 362401 Descarpack | للوصول الوريدي | |
| Cetamin | Agener Uniã o | تسجيل MAPA: SP-000292-5.000011 | مخدر |
| جل سريري موصل | RMC | ANVISA التسجيل: 80122200013 | المواد الجراحية |
| Dipyrone D-500 | Zoetis | تسجيل MAPA: SP0000728-46 | الدواء الصيدلاني |
| مشرط يمكن التخلص منه ن. 22 | تسجيل Wiltex | ANVISA: 10150470565 | أداة جراحية |
| فرشاة إسفنجية معقمة يمكن التخلص | منها Rioquimica | 7.89778E + 12 | التعقيم الجراحي |
| سهل المسح: Go | IMV | ESCG01 | Ultrasound |
| Endozime AW Plus | Ruhof | 34514 | منظف للأدوات الجراحية |
| Fentanil (Fentanest) | Crist & aacute ؛ | lia ANVISA: 1029800810159 | مخدر |
| Gosset ضام | عام | - | أداة |
| جراحية Halstead - ملقط مرقئ للبعوض | عام | - | |
| جراحية مرهم شفاء - Unguento Pearson | Pearson SA | MAPA التسجيل: SP0000094-16 | |
| بيروكسيد الهيدروجين | Rioquimica | تسجيل ANVISA: 218690015 | المواد الجراحية |
| Isofluorane | Biochimico | ANVISA التسجيل: 100630222 | التخدير |
| IV مجموعة التنقيط الباسطة العامة | للعلاج | بالسوائل | |
| IV مجموعة التنقيط الماكرو | Descarpack | 410301 | العلاج بالسوائل |
| لاكتوفور (ceftiofur) Ourofino | SA | MAPA التسجيل: SP0000051-50 | الدواء الصيدلاني |
| منظار الحنجرة | - | أداة جراحية | |
| Maxicam 2٪ | Ourofino SA | تسجيل MAPA: SP0000051-69 | دواء صيدلاني |
| لاصق Micropore 5 سم × 10 سم & nbsp ؛ | عام | 1530 | المواد الجراحية |
| Midazolam | Hipolabor | ANVISA التسجيل: 1134301430035 | الوريدي متعددة الاتجاهات للتخدير |
| Descarpack | 413201 | إبرة العلاج بالسوائل | |
| 40 مم × 1.2 مم | Descarpack | 353601 | إبرة معقمة لتطبيق الأدوية والتخدير. |
| إبرة 40 مم × 1.6 مم | تسجيل Wiltex | ANVISA: 10150470664 | إبرة معقمة لتطبيق الأدوية والتخدير. |
| حامل إبرة | جراحية | ||
| عامة نايلون 2 خياطة الحملة | Shalon N502CTI40 الطبية | المواد الجراحية | |
| القلم العادي | القلم العام - القلم العادي لتدوين الملاحظات | ||
| الحل الفسيولوجي 0.9٪ 500 مل كيس | JP Farma | MS: 1.0491.0070 | العلاج بالسوائل |
| حمض البولي جليكوليك 2 خيط خياطة | Atramat | G4099-75H | المواد الجراحية |
| كلوريد البوتاسيوم | Samtec | ANVISA التسجيل: 1559200010139 | الأدوية الوريدية |
| Descarpack | 122401 | معدات الحماية الشخصية (PPE) | |
| Propofol (Provive) | Uniã ؛ o Qu & iacute; الميكا | ANVISA التسجيل: 1049714490057 | التخدير |
| Ringer 500 مل | كيس JP Farma | MS: 1.0491.0061 | العلاج بالسوائل |
| Riohex 0.5٪ محلول كحول كلوريكسيدين | Rioquimica | 218690356 | التعقيم الجراحي |
| Riohex محلول كلوريكسيدين مع خافض للتوتر السطحي | Rioquimica | 218690356 | التعقيم الجراحي |
| فروة الرأس 21 جم | Descarpack | 421201 | المواد الجراحية |
| يغطي الحذاء | معدات الحماية الشخصية العامة (PPE) | ||
| الكمادات المعقمة | Cremer | ANVISA التسجيل: 10071150065 | المواد الجراحية |
| وسادة شاش معقمة | Procitex | ANVISA التسجيل: 80245210083 | المواد الجراحية |
| ستائر جراحية معقمة 140 سم × 90 سم & nbsp ؛ | Venkuri | 7010003 | مادة جراحية |
| ستائر جراحية معقمة 150 سم × 190 سم | PolarFix | F00208 | المواد الجراحية |
| القفازات الجراحية المعقمة | Mucambo | CA: 39.317 | معدات الحماية الشخصية (PPE) سماعة |
| المعدات الجراحية | العامة | ||
| قبعة جراحية | Descarpack | 93201 | معدات الحماية الشخصية (PPE) |
| ثوب جراحي | Descarpack | 231101 | معدات الحماية الشخصية (معدات الوقاية الشخصية) |
| القناع الجراحي | Descarpack | 110701 | معدات الحماية الشخصية (PPE) مقص |
| جراحي | حاد | - | جراحية |
| مقص جراحي حاد | أداة جراحية | ||
| دباسة جراحية | Tradevet | - | المواد الجراحية |
| Tekbond الغراء الفائق | Tek Bond | 78072720030 | المواد الجراحية |
| ميزان الحرارة | المعدات الجراحية | ||
| ثلاثية الاتجاهات Stopcock | Solidor | 374 | المواد الجراحية |
| Tramadol hydrocloride | Agener Uni & atilde ؛ o | تسجيل MAPA: SP-000292-5.000002 | مخدر |
| ضمادة فيلم شفافة | Skinupper | ANVISA التسجيل: 82307460014 | مادة جراحية |
| لاصق مقاوم للماء 10 سم × 4.5 سم & nbsp ؛ | الجراحية 364828 |
الوصول مقيد. يرجى تسجيل الدخول أو بدء فترة تجريبية لعرض هذا المحتوى.