يتطلب اشتراك JoVE لعرض هذا المحتوى. تسجيل الدخول أو ابدأ نسخة تجريبية مجانية

مقالة منهجية

نموذج في المختبر لدراسة التمايز والتغيرات في الأوميكس المتعدد على الخلايا الظهارية في مجرى الهواء الفئران المحفزة بمستخلص دخان السجائر

2K مشاهدة

⸱

DOI:

10.3791/67057

⸱

يوليو 12, 2024

 ,  ,  ,  ,  ,  ,  ,  , 
1Department of Immunology, School of Basic Medical Sciences, Capital Medical University, 2Department of Pulmonary and Critical Care Medicine, Center of Respiratory Medicine, China-Japan Friendship Hospital, 3National Center for Respiratory Medicine

في هذه المقالة

ملخص

هنا ، نصف نموذجا في المختبر لعزل وتمييز الخلايا الظهارية في مجرى الهواء الفئران ، مع التركيز على تأقلمها مع مستخلص دخان السجائر المزمن (CSE). يمكن استخدام النموذج لتوصيف شامل للتأثير متعدد الأوميكس ل CSE ، والذي ربما يوفر نظرة ثاقبة للاستجابات الخلوية في ظل التعرض المزمن للدخان.

الملخص

يعزى مرض الانسداد الرئوي المزمن (COPD) إلى حد كبير إلى التعرض لدخان التبغ. يعد التحقيق في كيفية تكيف الخلايا الظهارية في مجرى الهواء وظيفيا مع دخان التبغ أمرا بالغ الأهمية لفهم التسبب في مرض الانسداد الرئوي المزمن. كانت الدراسة الحالية لإنشاء نموذج في المختبر باستخدام الخلايا الظهارية في مجرى الهواء الأولي لتقليد التأثير الواقعي لدخان التبغ. على عكس خطوط الخلايا الراسخة ، تحتفظ الخلايا الأولية بخصائص شبيهة بالجسم الحي ، بما في ذلك أنماط النمو والشيخوخة والتمايز. تظهر هذه الخلايا استجابة التهابية حساسة وتمايز فعال ، وبالتالي تمثل عن كثب الظروف الفسيولوجية. في هذا النموذج ، تم استزراع الخلايا الظهارية الأولية في مجرى الهواء لمدة 28 يوما تحت واجهة الهواء والسائل مع التركيز الأمثل لمستخلص دخان السجائر (CSE) ، مما أدى إلى تحويل طبقة أحادية من الخلايا غير المتمايزة إلى ظهارة عمودية شبه طبقية ، مما يدل على تأقلم CSE. ثم تم تطبيق تحليلات شاملة متعددة الأوميكس لتوضيح الآليات التي يؤثر بها CSE على تمايز خلايا مجرى الهواء القاعدي. توفر هذه الأفكار فهما أعمق للعمليات الخلوية التي يقوم عليها تطور مرض الانسداد الرئوي المزمن استجابة للتعرض لدخان التبغ.

المقدمة

مرض الانسداد الرئوي المزمن (COPD) هو حالة رئوية غير متجانسة ذات خصائص معقدة ، في حين أن المرضى الذين يعانون من مرض الانسداد الرئوي المزمن يميلون تدريجيا إلى أن يكونوا أصغرسنا 1. التدخين ، وهو عامل خطر رئيسي لمرض الانسداد الرئويالمزمن 2 ، له تأثير عميق على الخلايا الظهارية في مجرى الهواء ، والتي تعمل كحاجز أولي ضد دخان التبغ. على الرغم من هذا الارتباط المعروف ، فإن الآليات التفصيلية التي يؤدي من خلالها دخان التبغ إلى تغييرات في الخلايا الظهارية في مجرى الهواء لا تزال غير مستكشفة بشكل كاف. يعد الفهم الشامل لهذه التغيرات الجزيئية أمرا ضروريا لتحديد علامات التشخيص المبكر والأهداف العلاجية لمرض الانسداد الرئوي المزمن.

لمعالجة هذه الفجوة ، قمنا بتطوير نموذج جديد في المختبر باستخدام الخلايا الظهارية في مجرى الهواء الفئران. تعرضت هذه الخلايا لتحفيز طويل الأمد باستخدام مستخلص دخان السجائر (CSE) ، مما مكننا من مراقبة التغيرات الخلوية الديناميكية واستكشاف التغيرات في الخلايا الظهارية في مجرى الهواء تحت تحفيز التبغ على المدى الطويل والآلية الأساسية. في هذا النموذج ، تم استخدام transwell لتوفير واجهة الهواء والسائل للخلايا الظهارية في مجرى الهواء ، وتم تحفيز مستخلص دخان السجائر في المرحلة المبكرة من تمايز الخلايا الظهارية حتى نهاية التمايز في 28 يوما. بحثت الدراسات السابقة فقط في التمايز والتحفيز قصير المدى للخلايا الظهارية في مجرى الهواء (هيمنة خط الخلية). كانت تقتصر على مسار تنظيمي واحد3،4،5،6. ومع ذلك ، فإن البروتوكول المقدم هنا يستخدم الخلايا الظهارية في مجرى الهواء الأولي للفأر ويحسن عملية استخراج الخلايا للحصول على نشاط خلوي أفضل من طرق زراعة الخلايا الظهارية في مجرى الهواء السابقة. يركز هذا النموذج على التغيرات في التمايز الخلوي جنبا إلى جنب مع التحليلات الشاملة للنسخ والبروتينات والتمثيل الغذائي وفوق الجينوم. باستخدام التألق المناعي والتقنيات المتقدمة متعددة الأوميكس ، كنا نهدف إلى توضيح الاستجابات الخلوية للخلايا الظهارية في مجرى الهواء للتعرض المزمن لدخان التبغ ، وبالتالي المساهمة في فهم أعمق للتسبب في مرض الانسداد الرئوي المزمن. يمكن استخدام هذا النموذج لاستكشاف التغيرات في نمط تمايز الخلايا الظهارية في مجرى الهواء وآليتها الناتجة عن التحفيز طويل المدى للملوثات المختلفة.

الوصول مقيد. يرجى تسجيل الدخول أو بدء فترة تجريبية لعرض هذا المحتوى.

البروتوكول

يتطلب البروتوكول العام 44 يوما ، بما في ذلك يوم واحد لإعداد الخلايا الظهارية في مجرى الهواء المعزولة من القصبة الهوائية للفئران ، و 15 يوما لتكاثر الخلايا ، و 28 يوما لتحفيز CSE في واجهة الهواء والسائل. يتم وضع جميع التجارب في غرفة SPF Barrier Animal Room التابعة لمركز التجارب الحيوانية بجامعة كابيتال الطبية وقد تمت مراجعتها والموافقة عليها من قبل لجنة التجارب على وأخلاقيات المختبر بجامعة كابيتال الطبية (AEEI-2020-100) لتلبية متطلبات إرشادات REACH7.

1. عزل الخلايا الظهارية في مجرى الهواء الأولي من القصبة الهوائية الفئران

  1. اعداد
    1. قم بإعداد وسط تمدد كامل من خلال الجمع بين 1 مل من مكمل 50x و 0.05 مل من مخزون الهيدروكورتيزون مع 48.95 مل من الوسط القاعدي للتمدد. يحفظ في درجة حرارة 4 درجات مئوية ويستخدم في غضون 4 أسابيع.
    2. قم بإذابة 7.5 ملغ من البروتيناز و 5 ملغ من ديوكسي ريبونوكلياز I في 5 مل من F-12 من هام لتحضير محلول بروتيناز. قم بترشيحه لتعقيمه وتخزينه على حرارة 4 درجات مئوية واستخدمه في غضون 4 أسابيع.
    3. تحضير محاليل المضادات الحيوية بإضافة 0.05 مل من 100x بنسلين / ستربتومايسين و 0.01 مل من 500x جنتاميسين / أمفوتريسين إلى 5 مل من وسط التمدد الكامل ، PBS ، ومحلول بروتيناز (100 وحدة / مل بنسلين ، 100 وحدة / مل ستربتومايسين ، 10 ميكروغرام / مل جنتاميسين و 0.25 ميكروغرام / مل أمفوتريسين ب). يحفظ في درجة حرارة 4 درجات مئوية ويستخدم في غضون 4 أسابيع.
    4. تعقيم الأدوات الجراحية وإعداد خزانة السلامة البيولوجية لعزل الخلايا. في الوقت نفسه ، تأكد من أن معدات زراعة الخلايا القياسية جاهزة للاستخدام.
    5. قم بإعداد الأطباق المغلفة بالكولاجين في ذيل الفئران عن طريق إضافة كولاجين ذيل الفئران (100 ميكروغرام / مل في 0.02 نيوتن حمض الخليك) في أطباق استزراع 100 مم و 24 مم (0.05 مل / سم2). اتركيه مفتوحا طوال الليل تحت ضوء الأشعة فوق البنفسجية للتعقيم.
  2. عزل الخلايا الظهارية في مجرى الهواء الأولي
    1. استخدم C57BL / 6 الفئران (6-8 أسابيع ، ذكر ، SPF) لعزل الخلايا الظهارية القصبة الهوائية. القتل الرحيم بجرعة زائدة من محلول الصوديوم بنتوباربيتال 1٪ (حوالي 200 مجم / كجم). استخدم خمسة فئران للحصول على إنتاجية كافية من الخلايا.
    2. تعقيم الماوس عن طريق الغمر في محلول الإيثانول 75 ٪ ، وليس غمر الأنف والفم في الكحول لمنع الكحول من التدفق إلى القصبة الهوائية.
    3. تشريح الماوس.
      1. استخدم الشفرات والملقط الجراحي ، وهي مجموعة واحدة من الأجهزة لقطع وفتح البشرة من الفك السفلي إلى تجويف البطن للماوس.
      2. استخدم مجموعة أخرى من الأدوات الجراحية لتمزيق الغدد الدرقية على كلا الجانبين وإزالة الروابط بين القصبة الهوائية والأنسجة العضلية المحيطة والمريء.
      3. بعد ذلك ، قم بقطع الصدر بعناية ، واستخدم الملقط للتعمق في تجويف الصدر ، وإخراج الرئة بأكملها ، والعثور على نهاية القصبة الهوائية.
    4. معالجة القصبة الهوائية.
      1. قطع القصبة الهوائية من غضروف الغدة الدرقية إلى فرع القصبة الهوائية الشعب الهوائية ووضعها في وسط تمدد ما قبل البرودة يحتوي على أربعة مضادات حيوية.
      2. هز الأنبوب لشطف أكبر قدر ممكن من الدم من سطح القصبة الهوائية ، واحتفظ به على الثلج ، ثم ابدأ الجراحة للفأر التالي.
    5. نقل جميع القصبات الهوائية التي تم جمعها إلى مخزن مؤقت قبل البرودة يحتوي على أربعة مضادات حيوية (200 وحدة / مل من البنسلين ، 200 وحدة / مل من الستربتومايسين ، 20 ميكروغرام / مل جنتاميسين ، و 0.5 ميكروغرام / مل من الأمفوتريسين ب) للمعالجة المسبقة قبل الهضم.
    6. استخدم مجموعة من الأدوات الجراحية لإزالة الجلطات والأنسجة الأخرى من أسطح القصبة الهوائية ، ثم قم بتقطيعها إلى حجم 1 سم2 .
    7. احتضان أنسجة القصبة الهوائية في محلول بروتيناز عند 37 درجة مئوية لمدة 40 دقيقة.
    8. بعد 40 دقيقة ، هز الأنبوب عدة مرات واستخدم مصفاة خلية 40 ميكرومتر لإزالة الأنسجة المتبقية. اشطف القصبة الهوائية المفرومة على مصفاة تحتوي على 5 مل من وسط التمدد ، وطرد مركزي معلق الخلية عند 400 × جم لمدة 5 دقائق عند 4 درجات مئوية ، وتخلص من المادة الطافية.
    9. أعد تعليق الخلايا التي تم الحصول عليها في 8 مل من وسط التمدد.
    10. عد الخلايا القابلة للحياة باستخدام التريبان الأزرق ومقياس الدم.
    11. لوحة P0 تعليق الخلية على أطباق 100 مم (1 × 104 خلايا حية / سم2) مغلفة مسبقا بكولاجين ذيل الفئران ، وزرع الخلايا في حاضنة عند 37 درجة مئوية ، 5٪ CO2.

2. ثقافة التوسع ومرور الخلايا الظهارية في مجرى الهواء الأولي

  1. استبدل الوسط لثقافة الخلايا P0 كل 3 أيام حتى تصل الخلايا إلى التقاء 70٪ -80٪ ، عادة في غضون 6 أيام. عند هذه النقطة ، يمكن أن تشكل الخلايا الظهارية القصبة الهوائية للفأر طبقة أحادية سليمة ذات مظهر مرصوف بالحصى (الشكل 1A-D).
  2. قم بتسخين كميات كافية من PBS ، ووسط التمدد الكامل ، ومجموعة تفكك الخلايا الخالية من المكونات الحيوانية (ACF) إلى 37 درجة مئوية.
  3. شطف الخلايا بلطف مع 3 مل من برنامج تلفزيوني.
  4. أداء التفكك الأنزيمي.
    1. أضف 3 مل من محلول التفكك الأنزيمي ACF إلى الطبق واحتضانه على حرارة 37 درجة مئوية لمدة 5 دقائق. بعد سحب العين، قم بإزاحة الخلايا برفق ونقل معلق الخلية إلى 3 مل من محلول تثبيط إنزيم ACF.
    2. كرر إضافة 3 مل من محلول التفكك الأنزيمي ACF واحتضانه مرة أخرى لمدة 5 دقائق لضمان أقصى انفصال للخلايا.
  5. أدر معلق الخلية عند 400 × جم لمدة 5 دقائق عند 4 درجات مئوية. تخلص من المادة الطافية.
  6. أعد تعليق الخلايا في 1 مل من وسط التمدد.
  7. عد الخلايا القابلة للحياة باستخدام التريبان الأزرق ومقياس الدم.
  8. لوحة P1 تعليق الخلية على عدة أطباق 100 ملم (5 × 104 خلايا حية / سم2) مغلفة مسبقا بكولاجين ذيل الفئران ، وزرع الخلايا في حاضنة عند 37 درجة مئوية ، 5٪ CO2.

3. التمايز وتحفيز CSE للخلايا الظهارية في مجرى الهواء الأولي في واجهة الهواء والسائل

  1. قم بتأكيد نوع الخلية.
    1. تحقق من الأصل الظهاري للخلايا المعزولة باستخدام مقايسة التألق المناعي (IFA) مع الأجسام المضادة ضد السيتوكيراتين. خلايا البذور على شرائح زجاجية مغلفة بكولاجين ذيل الفئران وتستخدم بارافورمالدهايد لإصلاحها لمدة 12 ساعة على الأقل بعد أن تصل الخلايا إلى التقاء 80٪.
    2. اغسل الشرائح 3 مرات بمحلول PBS لمدة 5 دقائق واحتضانها بنسبة 3٪ BSA و 0.1٪ triton X-100 في محلول PBS في درجة حرارة الغرفة (RT) لمدة 1 ساعة.
    3. احتضان الشرائح طوال الليل عند 4 درجات مئوية مع الجسم المضاد التجاري المضاد للسيتوكيراتين عند تخفيف 1: 500.
    4. في اليوم التالي ، اغسل الشرائح 3 مرات بمحلول PBS لمدة 5 دقائق واحتضانها بمحلول ثانوي للأجسام المضادة بتخفيف 1: 1000 في RT لمدة 2 ساعة في الظلام.
    5. بعد الحضانة ، اغسل الشرائح 3 مرات باستخدام PBS (5 دقائق لكل غسلة) ، وأضف DAPI بتخفيف 1: 1000 لهم. بعد الحضانة في RT لمدة 15 دقيقة ، اغسل الشرائح مرة واحدة باستخدام PBS لمدة 5 دقائق.
    6. راقب الشرائح تحت مجهر مضان وقارن أنماط التعبير بعنصر تحكم إيجابي (خط خلية A549) وعنصر تحكم سلبي (خط خلية Raw264.7) (الشكل 2).
  2. بذر الخلايا للتمايز.
    1. فصل خلايا P2 وأجهزة الطرد المركزي كما هو موضح سابقا ، وإعادة تعليق حبيبات الخلية في حجم مناسب من وسط التمدد لتسهيل طلاء 1 × 104 خلايا حية / سم2.
    2. ماصة 1 مل من تعليق الخلية على الغرفة القمية لإدراج غشاء البولي كربونات transwell. إلى المقصورة القاعدية للترانسويل ، أضف 1.5 مل من وسائط الانتشار.
  3. احتضان الخلايا عند 37 درجة مئوية وتغيير جميع الوسط بالكامل في الغرف القاعدية والقمية كل 3 أيام باستخدام وسط التمدد حتى يتم الوصول إلى التقاء. يستغرق هذا عادة 3-6 أيام.
  4. تحضير 50 مل من وسط التمايز الكامل بإضافة 5 مل من مكمل ALI 10x ، و 500 ميكرولتر من مكمل صيانة ALI ، و 100 ميكرولتر من محلول الهيبارين ، و 250 ميكرولتر من محلول مخزون الهيدروكورتيزون إلى 44.15 مل من وسط ALI القاعدي.
  5. إعداد CSE.
    1. قم بفقاعة سيجارة واحدة من خلال 12.5 مل من وسط التمايز ثم قم بترشيحها من خلال مرشح مسام 0.22 ميكرومتر لتحضير CSE. لضمان التوحيد القياسي بين التجارب ودفعات CSE ، قم بقياس الامتصاص عند 320 نانومتر على مقياس الطيف الضوئي وحدد الكثافة الضوئية (OD) من 1 على أنها 100٪ 8.
  6. استخدم وسط التمايز الذي يحتوي على تركيز مناسب من CSE لتحفيز الخلايا الظهارية في مجرى الهواء الأولي للكشف عن التأثيرات على تمايز الخلايا.
  7. اسمح للخلايا بالتمايز لمدة 28 يوما ، يتم خلالها تغيير وسائط الغرفة القاعدية ، ويتم غسل الجانب القمي مرتين في الأسبوع عن طريق إزالة وسائط الغرفة القمية واستبدال وسائط الغرفة القاعدية بوسط التمايز الذي يحتوي على التركيز المناسب ل CSE.
  8. تحليل الخلايا بعد التعرض.
    1. بعد التعرض لوسط التمايز الذي يحتوي على CSE ، احصد الخلايا وطافات الثقافة في أي وقت (أي 0-28 يوما) للكشف عن التغيرات المورفولوجية (أي مقايسة التألق المناعي (IFA) أو تلطيخ الهيماتوكسيلين-يوزين (HE) أو للإجراءات التحليلية المعلوماتية الحيوية (أي علم النسخ ، البروتينات ، الأيض ، إلخ).

الوصول مقيد. يرجى تسجيل الدخول أو بدء فترة تجريبية لعرض هذا المحتوى.

النتائج

التمايز
تم تمييز الخلايا الظهارية في مجرى الهواء الفئران بنجاح بعد الاستزراع في واجهة الهواء السائل مع وسط تمايز لمدة 28 يوما. تم إثبات وجود الخلايا الهدبية والكأسية من خلال مقايسة التألق المناعي لأسيتيل علامة الأهداب α-توبولين (أخضر; الشكل 3 أ) وعلامة الخلية الكأسية Mucin5AC ، على التوالي 6 (أحمر ؛ الشكل 3 ب).

تحديد تركيز CSE لتمايز الخلايا
تحفيز الخلايا الظهارية المعزولة بتركيزات مختلفة من CSE...

الوصول مقيد. يرجى تسجيل الدخول أو بدء فترة تجريبية لعرض هذا المحتوى.

المناقشة

مرض الانسداد الرئوي المزمن هو مرض التهابي مزمن شائع. يؤدي التعرض لدخان التبغ إلى التهاب مزمن في مجرى الهواء ، وإعادة تشكيل مجرى الهواء ، وتدمير بنية الرئة ، وهو نتيجة تفاعل الخلايا الهيكلية المختلفة والخلايا المناعية10. باعتبارها الخط الأمامي للجهاز المناعي الفطري في الرئة ، تلعب الخلايا الظهارية الهوائية دورا مهما للغاية أثناء تطور المرض11. من وجهة النظر هذه ، فإن توضيح كيفية تغير الخلايا الظهارية وتنظيم خلايا المصب تحت تحفيز المواد الضارة هو مشكلة علمية تحتاج إلى حل عاجل....

الوصول مقيد. يرجى تسجيل الدخول أو بدء فترة تجريبية لعرض هذا المحتوى.

الإفصاحات

ليس لدى المؤلفين ما يكشفون عنه.

شكر وتقدير

تم دعم هذه الدراسة من قبل المؤسسة الوطنية للعلوم الطبيعية في الصين (82090013).

الوصول مقيد. يرجى تسجيل الدخول أو بدء فترة تجريبية لعرض هذا المحتوى.

المواد

قائمة المواد المستخدمة في هذه المقالة
الاسمالشركةرقم فهرسيالتعليقات
محلول 100x البنسلين / الستربتومايسينGibco15140122
24 مم Transwell مع 0.4 & micro ؛ إدراج غشاء بوليستر مسام ، معقمBIOFILTCS016012
40 & micro ؛ مصفاة خلية mFalcon352340
500x Gentamicin / Amphotericin SolutionGibcoR01510
أسيتيلد &alpha ؛ -TubulinCST# 5335
Acetyl-&alpha Tubulin (Lys40) (D20G3) XP Rabbit mAb  ؛cellsignal# 5335
مجموعة تفكك الخلايا الخالية من المكونات الحيوانيةStemcell05426
الأجسام المضادة للسيتوكيراتينabcamab7753
السجائرMarlboro
Claudin3immunowayYT0949
Deoxyribonuclase I من البنكرياس البقريSigma-AldrichDN25
Deoxyribonuclase I من البنكرياس البقريSigmaDN25
Ham ' s F-12Sigma-AldrichN6658
Heparin Solution خلية جذعية07980
محلول مخزون الهيدروكورتيزونخلية جذعية07925
ميوسين 5ACabcamab212636
أوكلودينبروتينتك27260-1-AP
PBSCytosciCBS004S-BR500
محلول البنسلين والستربتومايسينجيبكو15140122
PneumaCult-ALI
الخلية الجذعية05002   ؛
PneumaCult-ALI 10x مكملخلية جذعية05003   ؛
مكمل صيانة PneumaCult-ALIStemcell05006
PneumaCult-Ex Plus 50x مكملغذائي خلية جذعية05042
خلية جذعيةمتوسطة أساسية PneumaCult-Ex Plus05041
Pronase ESigma-AldrichP5147
ذيل الجرذ الكولاجينCorning354236
تريبان بلوالخلية الجذعية07050   ؛
المتوسطة القاعدية

المراجع

  1. Ritchie, A. I., Martinez, F. J. The challenges of defining early chronic obstructive pulmonary disease in the general population. Am J Respir Crit Care Med. 203 (10), 1209-1210 (2021).
  2. Caramori, G., Kirkham, P., Barczyk, A., Di Stefano, A., Adcock, I. Molecular pathogenesis of cigarette smoking-induced stable COPD. Ann N Y Acad Sci. 1340, 55-64 (2015).
  3. Leino, M. S., et al. Barrier disrupting effects of alternaria alternata extract on bronchial epithelium from asthmatic donors. PLoS One. 8 (8), e71278(2013).
  4. Benediktsdóttir, B. E., Arason, A. J., Halldórsson, S., Gudjónsson, T., Másson, M., Baldursson, Ó Drug delivery characteristics of the progenitor bronchial epithelial cell line VA10. Pharm Res. 30 (3), 781-791 (2013).
  5. Walters, M. S., et al. Generation of a human airway epithelium derived basal cell line with multipotent differentiation capacity. Respir Res. 14 (1), 135(2013).
  6. Prytherch, Z., Job, C., Marshall, H., Oreffo, V., Foster, M., BéruBé, K. Tissue-specific stem cell differentiation in an in vitro airway model. Macromol Biosc. 11 (11), 1467-1477 (2011).
  7. Kilkenny, C., Browne, W., Cuthill, I. C., Emerson, M., Altman, D. G. Animal research: Reporting in vivo experiments: The ARRIVE guidelines. Br J Pharmacol. 160 (7), 1577-1579 (2010).
  8. Brekman, A., Walters, M. S., Tilley, A. E., Crystal, R. G. FOXJ1 prevents cilia growth inhibition by cigarette smoke in human airway epithelium in vitro. Am J Respir Cell Mol Biol. 51 (5), 688-700 (2014).
  9. Bajic, M., Maher, K. A., Deal, R. B. Identification of open chromatin regions in plant genomes using ATAC-seq. Methods Mol Biol. 1675, 183-201 (2018).
  10. Shaykhiev, R., Crystal, R. G. Early events in the pathogenesis of chronic obstructive pulmonary disease. Smoking-induced reprogramming of airway epithelial basal progenitor cells. Ann Am Thorac Soc. 11, Suppl 5 (Suppl 5) S252-S258 (2014).
  11. Raby, K. L., Michaeloudes, C., Tonkin, J., Chung, K. F., Bhavsar, P. K. Mechanisms of airway epithelial injury and abnormal repair in asthma and COPD. Front Immunol. 14, 1201658(2023).
  12. Zhou, J. -S., et al. Cigarette smoke-initiated autoimmunity facilitates sensitisation to elastin-induced COPD-like pathologies in mice. Eur Respir J. 56 (3), 2000404(2020).
  13. Lam, H. C., Choi, A. M. K., Ryter, S. W. Isolation of mouse respiratory epithelial cells and exposure to experimental cigarette smoke at air-liquid interface. J Vis Exp. (48), e2513(2011).
  14. You, Y., Brody, S. L. Culture and differentiation of mouse tracheal epithelial cells. Methods Mol Biol. 945, 123-143 (2012).
  15. Wandalsen, G. F., Lanza, F. deC., Nogueira, M. C. P., Solé, D. Efficacy and safety of chloral hydrate sedation in infants for pulmonary function tests. Rev Paul Pediatr. 34 (4), 408-411 (2016).
  16. Jiang, D., Schaefer, N., Chu, H. W. Air-liquid interface culture of human and mouse airway epithelial cells. Methods Mol Biol. 1809, 91-109 (2018).
  17. Takagi, R., et al. How to prevent contamination with Candida albicans during the fabrication of transplantable oral mucosal epithelial cell sheets. Regen Ther. 1, 1-4 (2015).
  18. Culp, D. J., Latchney, L. R. Mucinlike glycoproteins from cat tracheal gland cells in primary culture. Am J Physiol. 265 (3), Pt 1 L260-L269 (1993).
  19. Cao, X., et al. Invited review: human air-liquid-interface organotypic airway tissue models derived from primary tracheobronchial epithelial cells-overview and perspectives. In Vitro Cell Dev Biol Anim. 57 (2), 104-132 (2021).
  20. Bebök, Z., Tousson, A., Schwiebert, L. M., Venglarik, C. J. Improved oxygenation promotes CFTR maturation and trafficking in MDCK monolayers. Am J Physiol Cell Physiol. 280 (1), C135-C145 (2001).

الوصول مقيد. يرجى تسجيل الدخول أو بدء فترة تجريبية لعرض هذا المحتوى.

إعادة الطباعة والأذونات

استكشف المزيد من المقالات

خلايا الممرات الهوائية الفأريةالواجهة بين الهواء والسائلتمايز الخلاياتحليل الأوميكس المتعددالتعرض المزمن للدخانمقايسة التألق المناعيإمراض مرض الانسداد الرئوي المزمن
نموذج في المختبر لدراسة التمايز والتغيرات في الأوميكس المتعدد على الخلايا الظهارية في مجرى الهواء الفئران المحفزة بمستخلص دخان السجائر
تواصل معنا
أوصِ به للمكتبة

الخصوصية

شروط الاستخدام

السياسات

حقوق الطبع والنشر © 2026 MyJoVE Corporation. جميع الحقوق محفوظة.