يصف هذا البروتوكول عملية التحضير لإعادة تروية انسداد الشريان الدماغي الأوسط عبر الشريان السباتي المشترك.
يتطلب اشتراك JoVE لعرض هذا المحتوى. تسجيل الدخول أو ابدأ نسخة تجريبية مجانية
مقالة منهجية
يصف هذا البروتوكول عملية التحضير لإعادة تروية انسداد الشريان الدماغي الأوسط عبر الشريان السباتي المشترك.
يعد نموذج إعادة ضخ انسداد الشريان الدماغي الأوسط (MCAO / R) أمرا بالغ الأهمية لفهم الآليات المرضية للسكتة الدماغية ولتطوير الأدوية. ومع ذلك ، من بين طرق النمذجة الشائعة الاستخدام ، غالبا ما تواجه طريقة كويزومي تدقيقا بسبب ربطها بالشريان السباتي المشترك (CCA) وعدم قدرتها على تحقيق التروية الكافية. وبالمثل ، تم انتقاد طريقة لونجا لفصل وربط الشريان السباتي الخارجي (ECA). تهدف هذه الدراسة إلى تقديم طريقة إعداد نموذج معدل تحافظ على سلامة ECA ، وتتضمن إدخال خياطة نايلون أحادية الشعيرات من خلال CCA ، وإصلاح شق CCA المربوط ، والحفاظ على إعادة التروية من CCA. تم تأكيد إعادة ضخ تدفق الدم باستخدام تصوير تدفق البقع بالليزر. أظهرت طرق التقييم مثل مقياس لونجا ، ودرجة الخطورة العصبية المعدلة ، وتلطيخ كلوريد ثلاثي فينيل تترازوليوم (TTC) ، ووضع العلامات المناعية للخلايا العصبية أن هذا النهج يمكن أن يؤدي إلى تلف الأعصاب الإقفارية المستقرة. هذا البروتوكول النموذجي المعدل MCAO / R بسيط ومستقر ، ويوفر إرشادات قيمة للممارسين في مجال نقص التروية الدماغية.
وفقا لمنظمة الصحة العالمية ، ظلت السكتة الدماغية السبب الرئيسي الثاني للوفاة في جميع أنحاء العالم على مدى العقد الماضي ، مع ارتفاع معدل الإصابة ، وارتفاع معدل الوفيات ، وارتفاع معدل الإعاقة 1,2. مع تقدم سكان العالم في السن ، من المتوقع أن يزداد معدل الإصابة بالسكتة الدماغية في البلدان النامية ، مما قد يصبح السبب الرئيسي للوفاة المبكرة والعجز لدى البالغين. بالإضافة إلى ذلك ، هناك اتجاه لحدوث السكتات الدماغية في سن أصغر3. كما أن فقدان القوى العاملة بعد السكتة الدماغية يضع عبئا ثقيلا على الأسر والمجتمع4. لذلك ، فإن تطوير علاجات آمنة وفعالة يشكل تحديا كبيرا في أبحاث السكتة الدماغية.
تعمل النماذج الحيوانية كأدوات حاسمة لدراسة الوقاية من الأمراض البشرية وعلاجها. تعتمد الترجمة الناجحة لاستراتيجيات علاج السكتة الدماغية على استنساخ وموثوقية النماذج الحيوانية للسكتة الدماغية 5,6. الشريان الدماغي الأوسط (MCA) هو موقع شائع للسكتة الدماغية السريرية ، مما يجعل نموذج MCAO أقرب نموذج للسكتة الدماغية البشرية. تم تفضيل نموذج MCAO ، الذي تم إعداده باستخدام طريقة الخياطة ، من قبل الباحثين بسبب مزايا مثل عدم حج القحف وسهولة التحكم في الوقت الإقفاري. تم استخدامه في أكثر من 40٪ من تجارب الحماية العصبية7. ومع ذلك ، على الرغم من مزاياه العديدة ، تظل التفاصيل التشغيلية لهذا النموذج موضوعا مثيرا للجدل للعديد من الباحثين.
بالنسبة لنموذج انسداد الشريان الدماغي الأوسط الناجم عن خياطة (MCAO) ، يحدث إعادة التروية عن طريق سحب الخيط. حاليا ، يتم استخدام طريقتين رئيسيتين لإدخال خياطة: طريقة كويزومي8 وطريقة لونغا9. في طريقة كويزومي ، يدخل الخيط إلى الشريان السباتي الداخلي (ICA) بشكل رئيسي من خلال شق الشريان السباتي المشترك (CCA) ، بينما في طريقة لونغا ، يمر عبر الشريان السباتي الخارجي المقطوع (ECA) إلى ICA. أثناء إعادة التروية ، تتطلب طريقة Koizumi ربط شق CCA بشكل دائم وتعتمد على دائرة Willis لإعادة التروية10. ومع ذلك ، تشير بعض الدراسات إلى أنه لا يمكن تحقيق إعادة التروية الفعالة فقط من خلال الإمداد التعويضي لدائرة ويليس بعد فقدان إمدادات CCA. علاوة على ذلك ، تظهر دائرة ويليس تباينا تشريحيا عاليا ، خاصة في الفئران C57Bl / 6 ، مما يزيد من تباين الاحتشاء ويقلل من موثوقية البيانات التجريبية. وبالتالي ، تم التشكيك في هذه الطريقة بشكل متزايد من قبل الباحثين11.
تتضمن طريقة لونجا إدخال خياطة من خلال ECA المقطوع ثم ربط الشريان السباتي الداخلي (ICA) بشكل دائم بمجرد سحب الخيط. هذا يحافظ على سالكية CCA ، مما يسمح بنضح الدم بنسبة تصل إلى 100٪ من القيم الأساسية. ومع ذلك ، تتطلب هذه الطريقة فصل الشريان السباتي الخارجي والفروع الشريانية الصغيرة ، أو قطعها ، أو تخثيرها كهربائيا ، مما يجعل الإجراء صعبا. كما أنه يعطل بنية تدفق الدم الكاملة للدماغ ، والتي تختلف عن حالة المريض السريرية12. الأهم من ذلك ، تشير الدراسات إلى أن قطع أو ربط ECA يمكن أن يسبب آفات نقص تروية في العضلات التي تتحكم في المضغ والبلع ، مما يؤثر على النظام الغذائي للحيوان ويؤدي إلى موت بعد العملية الجراحية والأضرار الحسية والحركية الشديدة في الفئران13،14.
ومن ثم، هناك حاجة ماسة إلى طريقة معدلة لإعداد النموذج لمعالجة هذه المسائل. تقدم هذه الدراسة طريقة نمذجة MCAO معدلة تعمل على إصلاح شق إدخال CCA وتحقق إعادة تروية فعالة. الإجراء بسيط وعملي وممكن ، مما يؤدي إلى تلف عصبي كبير وآفات احتشاء قابلة للتكرار ويوفر إرشادات قيمة للباحثين في السكتة الدماغية.
الوصول مقيد. يرجى تسجيل الدخول أو بدء فترة تجريبية لعرض هذا المحتوى.
تم إجراء البروتوكول التجريبي وفقا لإرشادات استخدام المختبر واللجنة المؤسسية لرعاية واستخدامها في جامعة تشنغدو للطب الصيني التقليدي (رقم السجل: 2019-DL-002). تم توثيق جميع بيانات البحوث الحيوانية باتباع إرشادات REACH (البحوث الحيوانية: الإبلاغ في تجارب الجسم الحي ). تم استخدام ذكور الفئران Sprague Dawley (SD) التي تزن 250 جم ± 20 جم وتتراوح أعمارهم بين 6-8 أسابيع لهذه الدراسة. يتم سرد التفاصيل المتعلقة بالحيوانات والكواشف والمعدات المستخدمة في جدول المواد.
1. إعداد
2. انسداد مولودية الجزائر
3. إعادة ضخ MCAO
4. تقييم وظيفة العصب وإصابة نقص تروية الدماغ

الوصول مقيد. يرجى تسجيل الدخول أو بدء فترة تجريبية لعرض هذا المحتوى.
أظهر تصوير تدفق البقع بالليزر أنه قبل انسداد خياطة النايلون أحادية الشعيرات ، كان هناك تدفق دم وفير في منطقة الشريان الدماغي الأوسط (MCA) ، وتم تسجيل قيم تدفق الدم الأساسية للفئران. بعد انسداد MCA ، انخفضت قيمة تدفق الدم على الجانب الإقفاري من الدماغ بسرعة. قبل سحب الخيط ، تم إعادة فحص قيم تدفق الدم على الجانب الإقفاري للتأكد مما إذا كان الخيط يسد MCA. أشارت النتائج فقط إلى تغيير طفيف في تدفق الدم. عند سحب الخيط ، تعافى نضح تدفق الدم بسرعة (الشكل 2). يظهر الفيديو 1 أيضا نبض ...
الوصول مقيد. يرجى تسجيل الدخول أو بدء فترة تجريبية لعرض هذا المحتوى.
نموذج انسداد الشريان الدماغي الأوسط (MCAO) الناجم عن خياطة نايلون أحادية الشعيرات هو الطريقة الأكثر شيوعا المستخدمة لإعداد نماذج MCAO. تم اعتماد هذا النهج على نطاق واسع في الدراسات قبل السريرية واكتسب اعترافا من العديد من الممارسين بسبب بساطته ، وعدم الحاجة إلى حج القحف ، والحد الأدنى من الصدمات الجراحية ، والقدرة على تحقيق التروية.
هناك نوعان من التقنيات الجراحية الكلاسيكية للخيوط داخل اللمعة MCAO: طريقة كويزومي8 وطريقة لونغا9. يكمن الاختلاف الر...
الوصول مقيد. يرجى تسجيل الدخول أو بدء فترة تجريبية لعرض هذا المحتوى.
تم دعم هذا العمل من قبل المؤسسة الوطنية للعلوم الطبيعية في الصين (82173781 و 82373835) ، ومشروع أبحاث ما بعد الدكتوراه (BKS212055) ، ومشروع الابتكار العلمي والتكنولوجي لمكتب فوشان للعلوم والتكنولوجيا (2320001007331) ، ومؤسسة قوانغدونغ للبحوث الأساسية والتطبيقية (2019A1515010806) ، والمشاريع الميدانية الرئيسية (التصنيع الذكي) للجامعات العامة في مقاطعة قوانغدونغ (2020ZDZX2057) ، ومشاريع البحث العلمي (الابتكار المميز) من جنرال الجامعات في مقاطعة قوانغدونغ (2019KTSCX195).
الوصول مقيد. يرجى تسجيل الدخول أو بدء فترة تجريبية لعرض هذا المحتوى.
| الاسم | الشركة | رقم فهرسي | التعليقات |
|---|---|---|---|
| نظام التخدير الحيواني | Rayward Life Technology Co.، Ltd | R500IE | |
| الحافظ على درجة حرارة | Rayward Life Technology Co.، Ltd | 69020 | |
| Cy3 الجسم المضاد | الثانوي ووهان Saiweier Biotechnology Co.، Ltd | GB21303 | |
| DAP1 الأجسام المضادة | ووهان Saiweier Biotechnology Co.، Ltd | G1012 | |
| DCX الأجسام | المضادةووهان Saiweier التكنولوجيا الحيوية المحدودة | GB13434 | |
| مصل الماعز | Beyotime Biotechnology Co.، LTD | C0265 | |
| GraphPad Prism | GraphPad Software | GraphPad Prism 8.0 | |
| ImageJ | المعاهد الوطنية للصحة | ImageJ برنامج | |
| Isofluran | Rayward Life Technology Co.، Ltd | R510-22 | |
| ليزر بقع الدم نظام تصوير التدفق | Rayward Life Technology Co.، Ltd | PeriCam PSI NR | |
| MAP-2 الجسم المضاد | ووهان Saiweier Biotechnology Co.، Ltd | GB11128 | |
| حفر جمجمة مصغرة باليد | Rayward Life Technology Co.، Ltd | 87001 | |
| خياطة أحادية الشعيرات | Rayward Life Technology Co.، Ltd | 250-280g | |
| NeuN الأجسام المضادة | Wuhan Saiweier التكنولوجيا الحيوية المحدودة | GB11138 | |
| OCT عامل التضمين | BIOSHARP | BL557A | |
| البنسلين الصوديوم | Chengdu Kelong الكيميائية المحدودة | 17121709-2 | |
| حل استرجاع المستضد السريع للأقسام المجمدة | Beyotime Biotechnology Co.، LTD | P0090 | |
| SD الفئران | SPF (بكين) التكنولوجيا الحيوية المحدودة. | 250-280 جرام | |
| تريتون X-100 | Beyotime التكنولوجيا الحيوية المحدودة | ST795 | |
| TTC | تشنغدو كيلونج الكيميائية المحدودة | 2019030101 |
الوصول مقيد. يرجى تسجيل الدخول أو بدء فترة تجريبية لعرض هذا المحتوى.