الغزو هو ظاهرة بيولوجية رئيسية في تطور وتطور السرطان. تتأثر هذه العملية بالخلايا غير الورمية ومكونات البيئة المكروية للورم. الغرض من هذه الدراسة هو وصف طريقة بديلة لتحليل غزو الخلايا السرطانية في المختبر باستخدام الثقافات ثلاثية الأبعاد (3D).
يتطلب اشتراك JoVE لعرض هذا المحتوى. تسجيل الدخول أو ابدأ نسخة تجريبية مجانية
مقالة منهجية
استراتيجية بديلة لتحليل غزو الخلايا في المختبر من الثقافات 3D
في هذه المقالة
ملخص
الملخص
الثقافة الكروية هي نموذج 3D يوفر تكرارا محسنا للبيئة المكروية في الجسم الحي مقارنة بالثقافات التقليدية ثنائية الأبعاد (2D). الغزو هو نتيجة خلوية ذات أهمية قصوى في بيولوجيا السرطان. في هذا البروتوكول ، ابتكرنا استراتيجية بديلة لتقييم غزو الخلايا السرطانية في المختبر ، باستخدام الهيروسفيرويدات المكونة من سرطان الخلايا الحرشفية الفموية (OSCC) ، والخلايا الليفية المرتبطة بالسرطان (CAF) ، والوحيدات. تهدف هذه الفيرويدات غير المتجانسة إلى تقليد البيئة المكروية للورم (TME) ، بما في ذلك نوعان من الخلايا غير الورمية ذات الصلة جنبا إلى جنب مع الخلايا السرطانية. تم تمييز كل نوع من الخلايا بعلامات فلورية حيوية تنبعث منها أطوال موجية مميزة قبل تكوين كروي. بمجرد تشكيلها ، تم زرع الهيرويدات غير المتجانسة على طبقة من مصفوفة خارج الخلية مشتقة من الورم العضلي الأملس البشري في الجزء العلوي من الغشاء الصغير المسامي. تم تقييم الغزو في المحور z باستخدام المجهر متحد البؤر. تم الحصول على الصور الرقمية في قنوات الفلورسنت المقابلة على فترات 10 ميكرومتر ، تغطي عمق 90 ميكرومتر في المحور z. تم إجراء التحليل باستخدام برنامج صور مجاني عن طريق حساب شدة التألق المتكاملة في كل صورة وقناة مضان. يتيح هذا النهج تحليلا أكثر ديناميكية لأنماط غزو الخلايا في سياق متعدد الطبقات ، بالإضافة إلى فحص التوطين المكاني المشترك لأنواع الخلايا المختلفة أثناء الغزو.
المقدمة
الغزو هو عملية تهاجر فيها الخلايا الورمية عبر المصفوفة خارج الخلية إلى الأنسجة المحيطة 1,2. مع تقدم الورم ، تتعرض الخلايا الورمية لبيئات دقيقة معقدة بشكل متزايد. تتضمن البيئة المكروية للورم مكونات مختلفة من المصفوفة خارج الخلية وأنواع الخلايا غير الورمية. الخلايا اللحمية ، بما في ذلك الخلايا الليفية والبلاعم المقيمة ، تعيد تشكيل البيئة المكروية عن طريق إفراز مكونات المصفوفة خارج الخلية وعوامل النمو ، والسيتوكينات ، والتي بدورها تؤثر على وظائف الخلايا الورمية3. تتفاعل خلايا الكريات البيض اللحمية والتسلل أيضا بشكل مباشر مع الخلايا الورمية ، مع بعضها البعض ، ومع المصفوفة خارج الخلية في بيئة دقيقة ثلاثية الأبعاد. إجمالا ، يؤثر تكوين TME على فعالية ونمط غزو الخلايا الورمية4.
تتطلب الطبيعة المعقدة للبيئة المكروية للورم تنفيذ منهجيات فعالة لفهم التفاعلات بين الخلايا داخل أنسجة الورم. تم إجراء معظم المقايسات في المختبر المستخدمة لتقييم الغزو في المقام الأول في نماذج 2D التقليدية و / أو الثقافات من نوع الخليةالمفردة 5،6،7،8 ، مما يبالغ في تبسيط عملية الغزو المعقدة وله قيود متعددة ، مثل الافتقار إلى بنية الأنسجة ، والمكونات اللحمية ، والتكاثر في الجسم الحي. تمثل الثقافات الكروية نموذجا واحدا للثقافات ثلاثية الأبعاد في المختبر التي تحاكي مورفولوجيا كتلة الورم ، مما يسمح بتفاعلات الخلايا الخلوية ومصفوفة الخلايا التي تنطوي على ميزات فيزيائية وكيميائيةحيوية 9. نما استخدام نماذج الثقافة ثلاثية الأبعاد في العقود الماضية ، وهناك أدلة على أن النتائج البيولوجية المختلفة ، مثل الاستجابة للعلاج ، ومورفولوجيا الخلية ، والتعبير الجيني ، تختلف مقارنة بنموذج 2D 9,10.
يوضح هذا البروتوكول طريقة لتقييم الغزو في المختبر في مصفوفة بشرية خارج الخلية باستخدام ثقافة الخلايا الكروية 3D. علاوة على ذلك ، استخدمنا الهيروسفيرويدات المكونة من خلايا الأورام والخلايا الليفية والوحيدات لتقليد البيئة المكروية للورم مع نوعين من الخلايا غير الورمية ذات الصلة. يتيح تصوير الخلايا بواسطة المجهر متحد البؤر على طول مستويات مختلفة من الغزو نحو غشاء صغير يسهل اختراقه تصور هذه العملية في سياق أكثر ديناميكية ومتعدد الطبقات.
الوصول مقيد. يرجى تسجيل الدخول أو بدء فترة تجريبية لعرض هذا المحتوى.
البروتوكول
تمت الموافقة على استخدام الخلايا البشرية الأولية من قبل لجنة أخلاقيات البحوث البشرية المؤسسية (CAAE 57895822.0.0000.5416) التابعة لكلية طب الأسنان في أراراكورا - UNESP. يتم سرد تفاصيل الكواشف والمعدات المستخدمة في الدراسة في جدول المواد.
1. إعداد الخلايا لزراعة الخلايا 3D
ملاحظة: يجب تنفيذ جميع الخطوات في هذا القسم داخل غطاء التدفق الصفحي.
- الحصول على تعليق خلية واحدة من الخلايا التي ستشكل heterosheroid.
ملاحظة: في هذه التجربة ، قمنا بتوليد كرويات (انظر الخطوة 2) تتكون من خط خلايا OSCC (SCC9) ، والخلايا الليفية (الخلايا الليفية الأولية المرتبطة بالسرطان من خزعات سرطان اللسان) ، والوحيدات (الخلايا الوحيدة الأولية من المتبرعين الأصحاء). حدد نوع الخلايا وفقا للاهتمامات التجريبية. - تحقق من رقم الخلية وصلاحيتها باستخدام مقياس الدم وتلطيخ التريبان الأزرق.
ملاحظة: نسبة الخلايا في هذا البروتوكول هي 5: 3: 2 (5000 ورم ورم: 3000 خلية ليفية: 2000 وحيدة) ، بإجمالي 10000 خلية لكل كروية. تحسين النسبة والعدد الإجمالي للخلايا وفقا للاهتمامات التجريبية. - قم بتخفيف الخلايا بشكل منفصل في أنابيب سعة 1.5 مل مع وسط غير مكمل مناسب لكل نوع من الخلايا (على سبيل المثال ، للخلايا الورمية - DMEM / F12 ؛ للخلايا الليفية - DMEM ؛ للوحيدات - RPMI) لتحقيق كثافة بذر مناسبة تبلغ 5000 خلية ورمية لكل بئر ، و 3000 خلية ليفية لكل بئر ، و 2000 خلية وحيدة لكل بئر ، أو 500000 خلية لكل ملليلتر.
ملاحظة: لضمان وجود عدد كاف من الخلايا للتجربة ، استخدم 20٪ أكثر من الإجمالي المطلوب ، مع مراعاة الخسائر المحتملة أثناء خطوات التلوين والطرد المركزي. - قم بتسمية أنواع الخلايا المختلفة بشكل منفصل باستخدام بقع حيوية فلورية مميزة تبقى في الخلايا الحية عبر عدة أجيال. أضف تركيزات محسنة من صبغة الفلورسنت إلى الخلايا المحتوية على الوسط (على سبيل المثال ، الأورام: CFSE - صبغة خضراء ؛ الخلايا الليفية: CMTPX - صبغة حمراء ؛ وحيدات ، بنفسجي BMQC - صبغة زرقاء) واحتضانها عند 37 درجة مئوية لمدة 20 دقيقة.
ملاحظة: حدد مجسات الفلورسنت ذات أطياف الإثارة والانبعاث المختلفة لتجنب التداخل الطيفي وفقا لمواصفات المجهر متحد البؤر الذي سيتم استخدامه. - أجهزة الطرد المركزي الخلايا في 400 × غرام لمدة 5 دقائق في درجة حرارة الغرفة لتشكيل بيليه الخلية. نضح الوسط باستخدام ماصة 200 ميكرولتر وأعد التعليق في 1 مل من 1x PBS.
- جهاز طرد مركزي عند 400 × جم لمدة 5 دقائق لتشكيل حبيبات خلوية وإعادة تعليق العدد الإجمالي للخلايا في 1 مل من وسط الاستزراع المكمل وفقا لنوع الخلية / خط الخلية المستخدم (على سبيل المثال ، الأورام - 100 ميكروغرام / مل ستربتومايسين ، 100 وحدة دولية / مل بنسلين ، 10٪ (حجم) FBS ، و 400 ميكروغرام / مل هيدروكورتيزون ؛ الخلايا الليفية والوحيدات - 100 ميكروغرام / مل ستربتومايسين ، 100 وحدة دولية / مل من البنسلين ، 10٪ (المجلد) FBS). تحقق من شدة التألق على المجهر وعد الخلايا مع تلطيخ التريبان الأزرق.
زراعة الخلايا 2. 3D
ملاحظة: استخدمت هذه الدراسة طريقة المجال المغناطيسي للطباعة الحيوية11 لإنشاء متغايرة الكرويدات. هنا ، يتم مغناطيس الخلايا باستخدام جسيمات نانوية مغناطيسية متوافقة حيويا وتخضع لقوى مغناطيسية لطيفة. تحسين نسبة الجسيمات النانوية إلى الخلايا وفقا لنوع الخلية. يمكن أيضا استخدام طرق بديلة لإنشاء ثقافات كروية. قم بإجراء الخطوات في هذا القسم في غطاء التدفق الصفحي.
- أضف جسيمات نانوية مغناطيسية بنسبة 1 ميكرولتر من الجسيمات النانوية إلى 20000 خلية ، وأعد تعليقها تماما عن طريق الخلط 10 مرات.
- قم بطرد الخلايا عند 400 × جم ، درجة حرارة الغرفة ، لمدة 5 دقائق ، وأعد تعليقها عن طريق الخلط 10 مرات. كرر هذه الدورة من الطرد المركزي / إعادة التعليق مرتين إضافيتين.
ملاحظة: ستشكل الخلايا الممغنطة حبيبات بنية اللون. - بعد الانتهاء من دورة الطرد المركزي الأخيرة ، قم باستنشاق الوسط وإعادة تعليق الخلايا في 34 ميكرولتر لكل بئر (34 ميكرولتر / 5000 خلية أورام ؛ 34 ميكرولتر / 3000 خلية ليفية ؛ 34 ميكرولتر / 2000 خلية وحيدة) من وسط الاستزراع المكمل (DMEM / F12 يحتوي على 100 ميكروغرام / مل من الستربتومايسين ، 100 وحدة دولية / مل من البنسلين ، و 5٪ (حجم) FBS) للخلايا الورمية.
ملاحظة: احسب الحجم بناء على حجم البئر. استخدم هذا البروتوكول 96 لوحة بئر ، بإجمالي 100 ميكرولتر من الوسط لكل بئر. - امزج جميع الخلايا في أنبوب جديد للزراعة المشتركة ، ثم أعد تعليقها.
- انقل 100 ميكرولتر من الخلايا المستزرعة بشكل مشترك إلى كل بئر من لوحة ربط منخفضة للغاية.
- أدخل المجال المغناطيسي للمحرك الكروي تحت اللوحة للحث على التجميع والتكوين الكروي ، وضعه في الحاضنة (5٪ CO2 ، 37 درجة مئوية) لمدة 3 ساعات.
ملاحظة: يمكن أن يختلف وقت التعرض للمجال المغناطيسي وفقا لحجم الكرة أو تكوينها. - قم بإزالة المجال المغناطيسي ووضع اللوحة في الحاضنة (5٪ CO2 ، 37 درجة مئوية) لمدة 24 ساعة على الأقل للسماح بإنتاج بروتينات مصفوفة خارج الخلية وتفاعلات من خلية إلى خلية / من خلية إلى مصفوفة.
3. إعداد غشاء صغير مسامي مغلف بالمصفوفة خارج الخلية
ملاحظة: قم بإجراء الخطوات الواردة في هذا القسم في غطاء التدفق الصفحي.
- أضف 50 ميكرولتر من المصفوفة خارج الخلية المتاحة تجاريا إلى مركز غشاء صغير يسهل اختراقه مكون من 24 بئرا باستخدام طرف 200 ميكرولتر.
ملاحظة: احتفظ بالمصفوفة خارج الخلية على الثلج الرطب. لا تلمس الغشاء الصغير الذي يسهل اختراقه عند وضع المصفوفة في الأعلى. - قم بإزالة الفقاعات باستخدام إبرة معقمة وتأكد من أن المصفوفة تغطي سطح الغشاء بالكامل.
- ضع الغشاء في الحاضنة (37 درجة مئوية) لمدة 1 ساعة للسماح بتكوين هلام للمصفوفة خارج الخلية.
4. مقايسة الغزو
ملاحظة: قم بإجراء الخطوات الواردة في هذا القسم في غطاء التدفق الصفحي.
- أضف 500 ميكرولتر من وسط زراعة DMEM / F12 المكمل بمصل بقري جنيني بنسبة 10٪ إلى الغرفة السفلية للغشاء الصغير الذي يسهل اختراقه كعامل جذب كيميائي.
- قم بإزالة الوسط بعناية من الأجسام الكروية المشكلة وأضف برفق 50 ميكرولتر / بئر من وسط DMEM / F12 الطازج غير المكمل فوق الفيرويد غير المتجانس.
ملاحظة: يمكن تنفيذ هذه الخطوة باستخدام محرك تثبيت لطريقة المجال المغناطيسي للطباعة الحيوية. - اقطع حافة طرف منخفض الاحتفاظ 200 ميكرولتر بمقص معقم.
ملاحظة: يعتمد حجم الطرف على حجم الكروي. - جمع كروي و 50 ميكرولتر من الوسط مع طرف الاحتفاظ المنخفض.
ملاحظة: نفذ هذه الخطوة ببطء وحذر لتجنب تفصيل الكروية. - ضع الكروي برفق فوق المصفوفة خارج الخلية.
ملاحظة: لا تلمس المصفوفة خارج الخلية الهلامية. - أضف بعناية 150 ميكرولتر من DMEM / F12 المتوسط غير المكمل قطرة قطرة للوصول إلى حجم إجمالي يبلغ 200 ميكرولتر.
- ضع اللوحة في الحاضنة (5٪ CO2 ، 37 درجة مئوية) لمدة 48 ساعة.
ملاحظة: يمكن أن يختلف وقت الحضانة حسب خط الخلية أو البروتوكول.
5. الحصول على الصور
- استخدم مجهرا متحد البؤر للتصوير.
- قم بإعداد المجهر بناء على خصائص الإثارة والانبعاث للبقع الفلورية الحيوية المستخدمة (على سبيل المثال ، صبغة CFSE ، ليزر 488 نانومتر ، وطول موجة كشف 520 نانومتر ؛ الخلايا الليفية: صبغة CMTPX ، ليزر 561 نانومتر ، وطول موجة كشف 610 نانومتر ؛ أحاديات ، صبغة بنفسجية BMQC ، ليزر 405 نانومتر ، وطول موجة كشف 516 نانومتر).
- قم بتحميل اللوحة على مرحلة المجهر.
- حدد موقع الخلايا الكروية / الخلايا باستخدام المجال الساطع عند تكبير 10x.
- اضبط التكبير/التصغير على تكبير 40x.
- اضبط طاقة الليزر وكسب الكاشف لكل قناة فلورسنت.
- حدد نقطة انطلاق Z-Stack كمستوى بؤري للغشاء عن طريق تحديد مسام الغشاء باستخدام المجال الساطع.
- التقط ثلاث صور أدناه وخمس إلى ثماني صور فوق الغشاء على طول المحور z لكل قناة ، بما في ذلك المجال الساطع. تأكد من فترات 10 ميكرومتر بين الصور ، تغطي عمقا إجماليا يتراوح بين 90-120 ميكرومتر في المحور z.
- احفظ المشروع كملف ملحق .czi بعد إنشاء الصور.
6. استخراج الصور
ملاحظة: استخدام برنامج الصور موضح أدناه.
- افتح ملف .czi باستخدام برنامج تحرير الصور (انظر جدول المواد).
- انقر فوق المعالجة في الزاوية اليمنى العليا ، ثم حدد فردي. بعد ذلك ، انقر فوق الطريقة واختر تصدير الصور.
- حدد الملف ضمن الإدخال.
- انقر فوق الزر "معلمات " ، ثم حدد الإعدادات التالية: نوع الملف (الموسومة تنسيق ملف الصورة - . TIFF) ، الضغط (LZM) ، تغيير الحجم (100٪) ، تطبيق منحنى العرض ولون القناة ، صور القناة الفردية ، استخدام أسماء القنوات ، تحديد مجموعات فرعية (القناة ، حدد كل القنوات) ، موضع Z (استخراج الكل) ، المنطقة (كامل) ، البلاط (تصدير البلاطات المحددة) والتصدير إلى (حدد ملف الوجهة).
ملاحظة: لاستخراج صور القنوات المدمجة، حدد الإعدادات التالية: نوع الملف (الموسومة تنسيق ملف الصورة -. TIFF) ، الضغط (LZM) ، تغيير الحجم (100٪) ، تطبيق منحنى العرض ولون القناة ، صورة القنوات المدمجة ، استخدام أسماء القنوات ، تعريف المجموعات الفرعية (القناة ، حدد القنوات المحددة للتراكب) ، موضع Z (استخراج الكل) ، المنطقة (كامل) ، البلاط (تصدير البلاطات المحددة) والتصدير إلى (حدد ملف الوجهة). - انقر على أيقونة التطبيق الموجودة في الزاوية اليمنى العليا.
ملاحظة: ستقوم هذه الخطوة بتصدير الصور من القنوات المختلفة في نفس الوقت.
7. تحليل الصور
ملاحظة: يتم شرح استخدام البرمجيات الحرة في هذه الخطوة.
- انقر فوق ملف في الزاوية اليسرى العليا ، وحدد فتح ، واختر الصورة ، ثم انقر فوق موافق.
- انقر فوق تحليل ، ثم تعيين القياسات ، وحدد المنطقة ، والكثافة المتكاملة ، وتسمية العرض. انقر فوق موافق.
- انقر فوق تحليل ، ثم قياس.
ملاحظة: تأكد من أن مساحة جميع الصور هي نفسها. تعرض "الكثافة المتكاملة" قيمتين: (1) الكثافة المتكاملة الخام (RawIntDen): مجموع كل قيم البكسل في الصورة ؛ (2) الكثافة المتكاملة (IntDen): حاصل ضرب متوسط القيمة الرمادية والمساحة. نظرا لأن الصورة بلون RGB ومساحة جميع الصور هي نفسها ، ففكر في استخدام RawIntDen كقيمة قياس مضان. قد تشير الاختلافات في قيم التألق (الكثافة والكمية) بين الصور إلى اختلافات في غزو الخلايا وشدة الانتشار. هناك طريقة أخرى لتطبيع نمط الغزو في المصفوفة خارج الخلية نحو الغشاء الصغير الذي يسهل اختراقه باستخدام الثقافات المشتركة لأنواع الخلايا المختلفة وهي حساب نسبة قيم RawIntDen:
نسبة RawIntDen =
تمثل النسبة 1 الصورة / الموقع على طول المحور z مع أعلى غزو / توطين للخلايا لهذا النوع المحدد من الخلايا.
الوصول مقيد. يرجى تسجيل الدخول أو بدء فترة تجريبية لعرض هذا المحتوى.
النتائج
تقدم هذه الدراسة طريقة بديلة لتقييم غزو الخلايا في المختبر باستخدام كرويات مكونة من أنواع مختلفة من الخلايا. إنه يتيح تحليل أنماط غزو الخلايا في سياق متعدد الطبقات وفحص ديناميكيات التوطين المشترك للخلية أثناء الغزو (الشكل 1).
تمثل صور المجال الساطع توطين كروي / خلية ، تم تحديده بواسطة تكتلات داكنة / سوداء (الشكل 2 أ). يتم تحديد مستوى الغشاء من خلال أفضل تركيز داخل مسام الغشاء ، كما هو موضح في الصورة 4 (ال...
الوصول مقيد. يرجى تسجيل الدخول أو بدء فترة تجريبية لعرض هذا المحتوى.
المناقشة
الثقافات الكروية ثلاثية الأبعاد هي نهج قوي للتحقيق في جوانب مختلفة من بيولوجيا الخلية. في هذه الدراسة ، أبلغنا عن بروتوكول لتقييم غزو الخلايا الورمية باستخدام الهيروسفيرويدات التي تحاكي البيئة المكروية للورم في نهج متعدد الطبقات وأكثر ديناميكية. تسمح هذه الطريقة بتقييم التوطين المشترك وأنماط الغزو في وجود خلايا انسجة غير ورمية.
هناك بعض الخطوات الحاسمة التي تستحق النظر. أولا ، من المهم اختيار الخلايا القادرة على تكوين كرويات12. ثانيا ، تغزو الخلايا بسرعات متفاوتة ، لذلك...
الوصول مقيد. يرجى تسجيل الدخول أو بدء فترة تجريبية لعرض هذا المحتوى.
الإفصاحات
يعلن أصحاب البلاغ أنه ليس لديهم تضارب في المصالح.
شكر وتقدير
تم دعم هذا العمل من قبل مؤسسة أبحاث ساو باولو (FAPESP 20/10544-1 و 20/10664-7). تم إنشاء بعض الصور باستخدام BioRender.com.
الوصول مقيد. يرجى تسجيل الدخول أو بدء فترة تجريبية لعرض هذا المحتوى.
المواد
| الاسم | الشركة | رقم فهرسي | التعليقات |
|---|---|---|---|
| 96 Well Bioprinting Kit | Greiner Bio-one | 655840 | المجال المغناطيسي لمحرك كروي. عقد القيادة. 96 صفيحة دقيقة جيدا ، سطح طارد للخلايا |
| CellTrace CFSE Cell Proliferation Kit | Invitrogen ، ThermoFisher Scientific | C34554 | |
| CellTracker أحمر CMTPX | Invitrogen ، ThermoFisher Scientific | C34552 | |
| CellTracker البنفسجي BMQC صبغ | Invitrogen ، Thermo Fisher | C10094 | |
| DMEM | Gibco ، ThermoFisher Scientific | 31600-034 | |
| DMEM / F12 | Gibco ، ThermoFisher Scientific | 12400-024 | |
| مصفوفة خارج الخلية مع Myogel | doi: 10.1186 / s12885-015-1944-z | مزيج يتكون من myogel (2.4 مجم / مل) ، كولاجين (0.8 مجم / مل) ووسط غير مكمل من الخلايا الورمية ؛ | |
| FBS | Gibco ، ThermoFisher Scientific | 12657-029 | |
| Hydrocortisone | Sigma | H088 | |
| ImageJ | المعاهد الوطنية للبرمجيات الصحية | ||
| Nanoshuttle-PL | Greiner Bio-one | 657841 | الجسيمات النانوية المغناطيسية |
| إبرة 23 جم | Medix | AHMD004 | 25 × 0.60 مم (23 جم × 1) |
| PBS درجة الحموضة 7.2 (1x) | Gibco ، ThermoFisher Scientific | 2012-027 | |
| البنسلين - الستربتومايسين (5,000 وحدة / مل) | جيبكو ، ThermoFisher Scientific | 15070063 | |
| Pipet Tips | Axygen ، Corning Inc. | TF-200-L-R-S | طرف ماصة مع حاجز (فلتر) ، 200 & micro ؛ L مرشح احتفاظ منخفض ، قصير ، أقصى استرداد |
| RPMI | Gibco ، ThermoFisher Scientific | 31800-022 | |
| TransWell 24 well | Costar ، Corning Inc. | 3422 | Transwell Permeable يدعم إدراج 6.5 مم ، 24 لوحة بئر ؛ 0.8 & م غشاء البولي كربونات |
| Zen 3.4 (الإصدار الأزرق) | برنامج | مجموعة |
المراجع
- Steeg, P. S. Tumor metastasis: Mechanistic insights and clinical challenges. Nat Med. 12 (8), 895-904 (2006).
- Friedl, P., Wolf, K. Tumour-cell invasion and migration: diversity and escape mechanisms. Nat Rev Cancer. 3, 362-374 (2003).
- Friedl, P., Alexander, S. Cancer invasion and the microenvironment: Plasticity and reciprocity. Cell. 147 (5), 992-1009 (2011).
- Wu, J. S., et al. Plasticity of cancer cell invasion: Patterns and mechanisms. Transl Oncol. 14 (1), 100899(2021).
- Pijuan, J., et al. In vitro cell migration, invasion, and adhesion assays: From cell imaging to data analysis. Front Cell Dev Biol. 7, 1-16 (2019).
- Nagy, ÁG., Székács, I., Bonyár, A., Horvath, R. Simple and automatic monitoring of cancer cell invasion into an epithelial monolayer using label-free holographic microscopy. Sci Rep. 12 (1), 1-13 (2022).
- Kramer, N., et al. In vitro cell migration and invasion assays. Mutat Res Rev Mutat Res. 752 (1), 10-24 (2013).
- Justus, C. R., Leffler, N., Ruiz-Echevarria, M., Yang, L. V. In vitro cell migration and invasion assays. J Vis Exp. (88), e51046(2014).
- Kapałczyńska, M., et al. 2D and 3D cell cultures - A comparison of different. Arch Med Sci. 14 (4), 910-919 (2016).
- Cacciamali, A., Villa, R., Dotti, S. 3D cell cultures: Evolution of an ancient tool for new applications. Front Physiol. 13, 1-15 (2022).
- Trindade, J., et al. Magnetic 3D cell culture State of the art and current advances. Life Sci. 286, 1-8 (2021).
- Han, S. J., Kwon, S., Kim, K. S. Challenges of applying multicellular tumor spheroids in preclinical phase. Cancer Cell Int. 21 (1), 1-19 (2021).
- Lin, Y. N., et al. Monitoring cancer cell invasion and T-cell cytotoxicity in 3D culture. J Vis Exp. (160), e61392(2021).
الوصول مقيد. يرجى تسجيل الدخول أو بدء فترة تجريبية لعرض هذا المحتوى.
إعادة الطباعة والأذونات
