يظهر البروتوكول نموذجا تجريبيا جديدا في المختبر يمكنه تلخيص بيولوجيا نوعين من خطوط الخلايا الملتصقة بسقالة مطبوعة ثلاثية الأبعاد (ثلاثية الأبعاد). يتم وصف بناء هذا النموذج وإجراءات التشغيل ، من تحضير الخلايا وزراعة الخلايا إلى التحليل والتقييم.
يتطلب اشتراك JoVE لعرض هذا المحتوى. تسجيل الدخول أو ابدأ نسخة تجريبية مجانية
مقالة منهجية
نموذج الزراعة المشتركة باستخدام نوعين من خطوط الخلايا الملتصقة
* These authors contributed equally
في هذه المقالة
ملخص
الملخص
يتأثر زرع الجنين بالتفاعلات بين أنواع الخلايا المختلفة في واجهة الأم والجنين. الاتصالات المباشرة وغير المباشرة بين أنواع الخلايا المختلفة داخل الترس ضرورية لتنظيم تقبل بطانة الرحم. ومع ذلك ، فإن الآليات الجزيئية التي تتوسط هذا التفاعل لا تزال غير واضحة. في هذا الصدد ، هناك حاجة إلى نموذج لدراسة عملية الزرع لإنشاء نموذج شامل في المختبر يمكنه تلخيص بيولوجيا تفاعل ظهارة بطانة الرحم والسدى يتكون هذا النموذج من ألواح زراعة الخلايا العادية وسقالة مطابقة ، والتي يتم إنشاؤها عن طريق الطباعة ثلاثية الأبعاد (3D) من مواد منخفضة التكلفة. هنا ، نقوم بتفصيل مجموعة من البروتوكولات لبناء النموذج ، وإعداد الخلايا ، وبذر الخلايا ، وزراعة الخلايا ، والمراقبة ، والتقييم. علاوة على ذلك ، قمنا بتضمين نتائج تمثيلية مع الخلايا التي تظهر ظروف نمو جيدة تحت المجهر. تهدف هذه الدراسة إلى تطوير نماذج في المختبر من شأنها أن تحاكي التفاعل بين الخلايا اللحمية بطانة الرحم والخلايا الظهارية ، وكذلك بين خلايا الأرومة الغاذية وخلايا بطانة الرحم.
المقدمة
على الرغم من الأبحاث المكثفة حول الحمل البشري ، إلا أن الآليات الجزيئية في الواجهة بين الأم والجنين أثناء الزرع والحمل المبكر لا تزال غير مفهومة جيدا1. يتكون بطانة الرحم البشرية بشكل أساسي من نوعين من الخلايا: الخلايا الظهارية بطانة الرحم (EECs) والخلايا اللحمية بطانة الرحم (ESCs). يتقدم الزرع عبر ثلاث مراحل: التثبيت ، والتعلق ، والغزو ، مما يؤدي إلى تطوير جنين كفء وبطانة الرحم المستقبلية2. بالنظر إلى القيود الأخلاقية للدراسات في الجسم الحي على البشر ، بالإضافة إلى الصعوبات في محاكاة الحالة البشرية في تماما ، أصبح بناء نماذج زراعة بطانة الرحم البشرية في....
الوصول مقيد. يرجى تسجيل الدخول أو بدء فترة تجريبية لعرض هذا المحتوى.
البروتوكول
ملاحظة: يمكن العثور على جميع الكواشف المستخدمة في هذا البروتوكول في جدول المواد. ما لم ينص على خلاف ذلك ، تم موازنة جميع الوسائط مسبقا إلى 37 درجة مئوية قبل الاستخدام.
1. 3D الطباعة للسقالة وبناء النموذج
ملاحظة: تم تنفيذ الخطوات هنا وفقا للكتاب اليدوي لآلة الطباعة المعدنية ثلاثية الأبعاد التجارية. الخطوات موصوفة بإيجاز أدناه (الملف التكميلي 1).
- طباعة تسوية السرير
- اضغط على أيقونة القائمة على لوحة القيادة وانتقل إلى الأدوات المساعدة. حدد مستوى السرير لبدء روتين التسوية. ....
الوصول مقيد. يرجى تسجيل الدخول أو بدء فترة تجريبية لعرض هذا المحتوى.
النتائج
يوضح الشكل 1 السقالة محلية الصنع لشرائح الخلايا المستخدمة في هذه العملية ، والتي تشتمل على حلقة دعم علوية مصممة للربط بألواح زراعة الخلايا القياسية المكونة من 12 بئرا ، تكملها حامل منزلق خلية قاعدية يتميز بأربعة هياكل تشبه القضيب على شكل حرف L.
وفقا للشكل 2 ، ظلت كثافة كلا النوعين من الخلايا في حالة الزراعة المشتركة (الشكل 2 أ ، ب) منخفضة بعد 72 ساعة من الزراعة المشتركة ؛ ومع ذلك ، نمت كث.......
الوصول مقيد. يرجى تسجيل الدخول أو بدء فترة تجريبية لعرض هذا المحتوى.
المناقشة
يتم وصف بروتوكول مبسط وفعال من حيث التكلفة للزراعة المشتركة غير المباشرة للخلايا اللحمية والظهارية في بطانة الرحم. تستخدم هذه الطريقة سقالة محلية الصنع لشرائح الخلايا ، والتي تشتمل على حلقة دعم علوية مصممة للربط بألواح زراعة الخلايا القياسية المكونة من 12 بئرا ، تكملها حامل منزلق للخلية القاعدية يتميز بأربعة هياكل تشبه القضيب على شكل حرف L. يسهل هذا الإعداد فصل الخلايا اللحمية والظهارية في بطانة الرحم مع السماح بتفاعلها من خلال تبادل جزيئات الإشارات في وسط الاستزراع. وتتمثل إحدى المزايا .......
الوصول مقيد. يرجى تسجيل الدخول أو بدء فترة تجريبية لعرض هذا المحتوى.
الإفصاحات
ويعلن أصحاب البلاغ أنه ليس لديهم تضارب في المصالح.
شكر وتقدير
نريد أن نشكر جميع الموضوعات المشاركة في هذه الدراسة. كما نقدر المساعدة التصويرية من قبل Light Innovation Technology Ltd ، شنتشن. تم دعم هذه الدراسة من قبل تمويل العلوم الطبيعية في الصين (المنحة رقم 82201851) ، وبرنامج شنتشن للعلوم والتكنولوجيا (رقم المنحة. JCYJ20210324141403009 ، RCYX20210609104608036) ، صندوق بناء الانضباط الطبي الرئيسي في شنتشن (رقم المنحة. SZXK028) ، ومستشفى شنتشن باوان للنساء والأطفال (رقم المنحة. BAFY 2023003).
....الوصول مقيد. يرجى تسجيل الدخول أو بدء فترة تجريبية لعرض هذا المحتوى.
المواد
| الاسم | الشركة | رقم فهرسي | التعليقات |
|---|---|---|---|
| 10x هانكس & رئيس الوزراء ؛ محلول الملح المتوازن | Solarbio | H1046 | 1/10 |
| 12 بئر ألواح معالجة TC شفافة | Corning | 3513-25 | |
| سم & sup2 ؛ قارورة ثقافة الخلية | كورنينج | ||
| 430639-الألومنيوم | Markforged | 6061-T6-DMEM | |
| / F12 | Sigma-aldrich | D2906-Dulbecco | |
| ' s معدل النسر المتوسط | جيبكو | C11995500BT | |
| FBS | Gibco | 10099141C | 1/10 |
| مصل بقري الجنين | Gibco | 10099141C | |
| ITS Premix | Biocoat | 354350 | 1/100 |
| Matrigel Matrix | Corning | 354248 | ECM |
| Metal X | Markforged | M F-PR-5000-Penicillin-Streptomycin | |
| جيبكو | 15140122 | 1/100 | |
| غطاء دائري | بيوشارب | BS-18-RC-TrypLE | |
| حدد (10X) | جيبكو | A1217701 | إنزيم التفكك |
المراجع
- Iske, J., Elkhal, A., Tullius, S. G. The fetal-maternal immune interface in uterus transplantation. Trend Immunol. 41 (3), 213-224 (2020).
- Dey, S. K., et al. Molecular cues to implantation. Endocrine Rev. 25 (3), 341-373 (2004).
- Li, X., et al.
الوصول مقيد. يرجى تسجيل الدخول أو بدء فترة تجريبية لعرض هذا المحتوى.
إعادة الطباعة والأذونات
