هنا ، نصف بروتوكولا لفصل صفار البيض والخلايا الحبيبية وخلايا theca في بصيلات ما قبل الإباضة للطيور. يتيح هذا التعامل الدقيق إجراء تحقيقات نقدية في دور هذه الطبقات في الوظيفة الإنجابية ، مما يساعد على فهم تطور البصيلات ، والتنظيم الهرموني ، وأبحاث الأمراض من أجل تعزيز الإنتاجية الزراعية والرؤى الطبية الحيوية.
يتطلب اشتراك JoVE لعرض هذا المحتوى. تسجيل الدخول أو ابدأ نسخة تجريبية مجانية
مقالة منهجية
فصل حبيبات بصيلات الطيور قبل الإباضة وطبقات خلايا الثيكا للتطبيقات النهائية
* These authors contributed equally
في هذه المقالة
ملخص
الملخص
تعتبر الدجاجات ذات الطبقات (الدجاج البياض البيض) ومربي الدجاج اللاحم (مخزون تربية الدجاج المنتج للحوم) أمرا بالغ الأهمية للإمدادات الغذائية في العالم كمصدر موثوق للبروتين. كما أنها نموذج حيواني ناشئ لدراسة الأمراض التناسلية البشرية. مع تطور مجال أبحاث الدواجن ، ستكون صحة ووظيفة طبقة الدجاج والمبيض المربي للدجاج اللاحم نقطة مهمة للدراسة لكل من الباحثين الزراعيين والطب الحيوي. أحد التحديات التي يمثلها هذا الاهتمام الناشئ هو الحاجة إلى تقنيات قابلة للتكرار يمكن لجميع الباحثين استخدامها في جمع عينات المبيض. على وجه الخصوص ، يجب إنشاء عملية بصرية مفصلة لتحديد الفصل الصحيح للحبيبات المتخصصة وطبقات الخلايا الثيكية عن بصيلات الدجاج لتحقيق الاتفاق والاتساق بين الباحثين.
تصف هذه الدراسة استخراج بصيلات ما قبل الإباضة وأنسجة المبيض في دجاجات ليغورن البيضاء في سن الإنجاب. يتم فصل هذه البصيلات في ظل ظروف سائلة باردة لتجميد صفار البيض لتسهيل التلاعب ولمنع وزن المسام من تمزيق طبقات الخلايا أثناء عملية الفصل. بمجرد اكتمال الفصل ، يمكن هضم طبقات الخلايا المرغوبة بشكل أكبر لنهج زراعة الأنسجة أو يمكن حفظها بالتبريد للتحليلات الجينومية والبروتينية.
المقدمة
يعد الدجاج المنتج للبيض مكونا رئيسيا في سلسلة الإمداد الغذائي العالمية وهو نموذج حيواني متطور لدراسة الخصوبة وسرطان المبيض. للدجاج تاريخ طويل من الاستخدام المختبري ، من دراسات البيض البيض للقاحات الإنفلونزا1 إلى دراسة نمو الورم السرطاني2 ، وهو رئيسي للتبصر في تطور الغددالتناسلية 3،4،5. يعد فهم دور الجهاز التناسلي للدجاجة ، على وجه الخصوص ، الطبيعة الدورية لتطور بصيلات المبيض وأنواع الخلايا المعنية ، مجالا ذا أهمية كبيرة وتطبيق محتمل. مناهج متعددة الomics لاستجواب مبيض الدجاجة لها تطبيقات لزيادة الغلة الزراعية من خلال تحليل الإنتاجية وتوضيح العوامل نحو صحة الإنسان عن طريق الدجاجة كنموذج للأمراض التناسلية.
يحتوي مبيض الطيور على مراحل بصيلات تنموية مميزة للغاية تتكون من (1) بصيلات بدائية وأولية صغيرة (>1 مم) ، (2) بصيلات ما قبل التجنيد ذات أحجام مختلفة (أبيض إلى أصفر باهت ، 2-8 مم) ، و (3) بصيلات كبيرة مملوءة بصفار البيض (صفراء) (الشكل 1) 5،6،7. يتكون مبيض الطيور الناضج جنسيا من قشرة خارجية تضم بصيلات المبيض والنخاع الداخلي المكون من العضلات الملساء والأعصاب والأوعيةالدموية 8. تحدث الدورة الكاملة لتطور البصيلات في القشرة. ومع ذلك ، لا يظهر المبيض الأيسر فقط التسلسل الهرمي التنموي الكامل لبصيلات ما قبل الإباضة (أي الصفراء) ، وستخضع الدجاجة لأول إباضة ووضع البيض (وضع البيض). تنشئ بصيلات ما قبل الإباضة تسلسلا هرميا مرئيا بشكل صارخ من حوالي 5 إلى 6 بصيلات تتراوح من أكبر الإباضة وبعدها - جريب F1 - إلى أصغر بصيلات أقل تطورا - F5 أو F6. يمكن تمييز بصيلات ما قبل الإباضة بسهولة عن بصيلات ما قبل التجنيد الأصغر نظرا لحجمها الأكبر وتعصيبها الواسع وصفار اللون الأصفر الغامق.
تحتوي جميع البصيلات على أنواع خلايا متخصصة تدعم أدوارا متنوعة في الإشارات والنمو والتطور للجريب أثناء تقدمها خلال مراحل مختلفة قبل الإباضة - وهي الخلايا الحبيبية وخلايا الثيكا والبويضات (الأمشاج الأنثوية) (الشكل 2 أ). على وجه الخصوص ، تخلق طبقات الخلايا الحبيبية الجدار الداخلي للجريب ، وتشكل خلايا الثيكا الجدار الآخر المحيط بالبويضة. مع تقدم الجريب عبر التسلسل الهرمي قبل الإباضة ، تبدأ طبقات خلايا الثيكا والحبيبات في التخفيف ، خاصة على طول نقطة مباشرة على الجانب الآخر من ساق جريب ما قبل التبويضة. القصبة هي نقطة ارتباط الجريب بالمبيض (الشكل 2 ب). يسمى هذا الخط من طبقات الحبيبات والطبقات المقابلة للساق وصمة العار (الشكل 2 ج). إنه يفتقر تماما إلى الأوعية الدموية وسيكون نقطة تمزق البصيلات أثناء الإباضة لبصيلات F1. مرئي أيضا القرص الجرثومي ، أو الطبقة البيضاء الرقيقة من الخلايا الداعمة التي تحيط بالبويضة (الشكل 2 ب).
تعد كل من الخلايا الحبيبية والخلايا الثيكاية من المكونات الرئيسية لتطور البصيلات لأنها تحيط بالبويضة وتدعمها من خلال الإشارات الهرمونية المعقدة. تدعم طبقة الخلية الحبيبية المسارات الستيرويدية عبر إشارات AMP الدورية (cAMP) لتحقيق إنتاج هرمون البروجسترون9،10،11. من ناحية أخرى ، تنتج خلايا Theca مؤقتا الاستراديول ، والذي يختلف إلى حد كبير عن الثدييات التي تنتج خلايا theca فيها الأندروجين والبروجسترون12،13،14. جنبا إلى جنب مع الإشارات الخارجية ، تعتبر الخلايا الحبيبية والخلايا الحبيبية من المحركات الحاسمة في نضوج البصيلات ووضع البيض. تم الإبلاغ عن تقنية فصل طبقات الحبيبات والطبقات في الأصل بواسطة Gilbert et al. في عام 197715. يمكن أن يؤدي تحقيق فصل شامل لطبقات الحبيبات والطبقات الحبيبية والتأكد من عدم بقاء مادة حبيبية وراءها إلى حدوث صعوبات في طريقة جيلبرت. علاوة على ذلك ، فإن عدم وجود دليل مرئي واضح لإكمال الفصل يمكن أن يجعل المهمة صعبة في الأداء. تهدف هذه الدراسة إلى وصف استخراج وفصل طبقات الحبيبات والثيكا والبويضات من بصيلات ما قبل الإباضة ، وتقديم تعديلات وتقديم تمثيل مرئي واضح من خلال استخدام كل من الصور ومقاطع الفيديو (الشكل 3). سيسمح تصور هذه التقنية للعلماء الذين يدرسون بصيلات مبيض الطيور بالتقاط طبقات الحبيبات والثيكا بشكل متكرر لكل من الأساليب الزراعية والطبية الحيوية متعددة الأوميكس.
الوصول مقيد. يرجى تسجيل الدخول أو بدء فترة تجريبية لعرض هذا المحتوى.
البروتوكول
تم الحفاظ على جميع المستخدمة في هذه الدراسة والقتل الرحيم وفقا للبروتوكول المعتمد من قبل اللجنة المؤسسية لرعاية واستخدامه بجامعة ديلاوير (بروتوكول IACUC 110R).
1. التحضير
- تعقيم
- أوعية زجاجية سعة 5 أونصات باستخدام التعقيم بإزاحة الجاذبية (121 درجة مئوية لمدة 20 دقيقة) مغطاة بورق الألمنيوم مع شريط الأوتوكلاف في الأعلى للحفاظ على العقم والإشارة إليه.
ملاحظة: ستكون هناك حاجة إلى وعاء واحد لكل بصيلة يتم الفصل عليها. - أدوات تشريح الأوتوكلاف باستخدام التعقيم بإزاحة الجاذبية (121 درجة مئوية لمدة 20 دقيقة) ، بما في ذلك المقص والملقط المنحني والملقط المستقيم في أكياس التعقيم.
- أوعية زجاجية سعة 5 أونصات باستخدام التعقيم بإزاحة الجاذبية (121 درجة مئوية لمدة 20 دقيقة) مغطاة بورق الألمنيوم مع شريط الأوتوكلاف في الأعلى للحفاظ على العقم والإشارة إليه.
- إعداد منطقة الفصل
- قم بإعداد منطقة فصل البصيلات كما هو موضح في الشكل 4. املأ حاويات التثبيت بالثلج قبل فصل البصيلات مباشرة وتجديدها حسب الضرورة طوال عملية فصل البصيلات.
- محاليل
- خفف إلى تركيز 10x PBS إلى 1x مخزون عمل وضعه في الثلاجة +4 درجة مئوية في اليوم السابق للتشريح.
- خفف الأيزوبروبانول إلى 70٪ من تركيز المخزون العامل في زجاجة الرش.
2. تشريح
- قتل أنثى طائر ناضجة جنسيا.
- اختر أنثى طائر ناضجة جنسيا (يجب أن تضع البيض حاليا) وقتل16 بالطريقة المعتمدة (إرشادات AVMA) وفقا لبروتوكول الرعاية المؤسسية والاستخدام ، مثل خلع عنق الرحم.
- لالتقاط أكبر بصيلات F1 ، قم بالقتل الرحيم للحيوان خلال أول 4 ساعات من بداية الضوء لهذا اليوم. جس أسفل البطن قبل القتل الرحيم لتأكيد وجود بويضة صلبة القشرة في الرحم. هذا يضمن أن وضع البيض ، وبالتالي ، الإباضة التالية لم تحدث بعد.
- الوصول إلى المبيض.
- رش الذبيحة الخارجية والريش بنسبة 70٪ من الأيزوبروبانول. هذا يبلل الريش وينظف نقطة الشق.
- باستخدام مقص التشريح واليد التي ترتدي القفازات ، قم بقرص وقطع شق خط الوسط الأفقي (المستعرض) بطول 7.5 سم (3 بوصات) تقريبا. اضغط على الجلد والعضلات وطبقات الدهون قبل الشق لتجنب ثقب الأعضاء.
- قم بتوسيع الشق بشكل جانبي على الجانب الأيمن للطائر وقم بمسبارها بأصابع مرتدية القفازات لدفع الأعضاء الحشوية بعيدا عن طريق المقص. استمر حتى يتم قطع 2-3 من أضلاع على الجانب الأيمن.
- قم بتوسيع الشق باتجاه الجانب الأيسر من الطائر كما هو الحال على اليمين. استمر بحذر إضافي لأن بصيلات المبيض السابقة للتبويض موجودة هنا ، وتبرز من سطح المبيض ، ويمكن أن تتمزق بسهولة. استخدم ضغطا برفق بالأصابع لإبعاد بصيلات ما قبل الإباضة عن المقص حيث يتم قطع 2-3 أضلاع على الجانب الأيسر للطائر.
- ضع إحدى يديك على أسفل بطن الطائر والأخرى بإحكام على الجانب السفلي من عظم الصدر ، وقم بسحب صدر الطائر يدويا لأعلى للسماح بمزيد من الوصول إلى التجويف الغوفي للطائر.
- أمسك كل من فخذي الطائر بالقرب من مفصل العرقوب ، وادفعهما يدويا للخلف لخلع مفصلي الورك في وقت واحد. يوجد الآن وصول كامل إلى المبيض بصريا ومكانيا.
- إزالة بصيلات ما قبل الإباضة.
- قم بتنفيذ جميع الخطوات عن طريق البصر الروتيني. إذا كان الفرد يواجه مشكلة في التصور في أي مرحلة ، فاستخدم مجهر تشريح.
- باستخدام أصابع القفازات فقط ، ضع برفق كل بصيلات صفراء مرئية قبل الإباضة واستخرجها من المبيض. اضغط فقط على الساق أثناء الاستخراج للمساعدة في قطع الساق. لا تضغط على المسام نفسه ، وإلا فقد تتمزق.
- ضع كل بصيلة في الحاوية المعقمة مع PBS المثلج.
- اترك بصيلات ما قبل الإباضة على الجليد لمدة 5 دقائق على الأقل للسماح بتجمد الصفار. سوف يلتصق الصفار الدافئ بطبقات الخلايا المسامية المحيطة ، مما يجعل من الصعب تنفيذ تقنيات الفصل اللاحقة.
3. الفصل في المختبر
- خذ بصيلات معزولة من الحاوية المعقمة وضع الحاوية مع البصيلات المتبقية مرة أخرى على الجليد. ادرس المسام قبل التلاعب ، مع ملاحظة موقع ثلاث ميزات: الساق ، وصمة العار ، والقرص الجرثومي (الشكل 2).
- ابدأ بإزالة المصل من السطح الجريبي. قم بلف المسام برفق على منشفة ورقية جافة لإزالة الطبقة المصلية ، واسحبها برفق إذا لزم الأمر.
- أمسك المسام من الساق فوق الوعاء المليء ب PBS. استخدم الجاذبية لتصور أين تنتهي القصبة على سطح المسام ، وباستخدام المقص ، قم بقص الساق فقط دون ثقب سطح البصيلات. استمر في إزالة المصل حتى يختفي من الظهور.
- باستخدام الصندوق الضوئي للإضاءة والقرص الجرثومي كمرجع ، انقل وصمة العار على الجانب الآخر وأمسك المسام برفق مع ظهور جانب وصمة العار أمسك المسام مباشرة فوق وعاء PBS المثلج.
- التقط المشرط ، وقم بتقطيعه برفق على طول وصمة العار ، وقم بإسقاط المسام على الفور في PBS عندما يبدأ الصفار في التساقط. لا تمسك المسام بإحكام ، لأن هذا سيدفع الصفار للخارج بدلا من السماح له بالسقوط ببساطة من خلال الجاذبية.
- باستخدام زوج من ملقط الأنسجة المستقيمة غير المسنن ، قم بتقشير الطبقة الوردية من الجدار الجريبي برفق من صفار البيض على جانب واحد من الشريحة. أكمل هذا الاستخراج باستخدام حركات صغيرة من القرص والسحب التي ترفع جدار المسام بعيدا عن الصفار.
- يعمل فصل الطبقة بشكل أفضل عندما يتم سحب ما يقرب من 5 مم من أنسجة الجدار الجريبي بعيدا عن صفار البيض في المرة الواحدة. عندما يتم سحب جزء 5 مم من جدار الجريبي بنجاح من صفار البيض ، استخدم ملقطا مائلا جنبا إلى جنب مع الملقط المستقيم للتحقيق على طول غلاف الجريب.
- في بعض الحالات ، قد ترتبط طبقة الحبيبات ارتباطا وثيقا بالصفار أكثر من طبقة الثيكا. في هذه الحالة ، ما عليك سوى التحقيق برفق شديد عبر سطح الصفار باستخدام أي زوج من الملقط لمحاولة سحب الطبقة الشبيهة بالورق بعيدا عن الصفار. بمجرد تحديد موقع طبقة الحبيبات ، قم بقرصها بإحكام على طبقة الثيكا واستمر في سحب كلتا الطبقتين بعيدا عن صفار البيض كما هو موضح سابقا.
- استخدم الملقط المنحني لتنظيف الصفار برفق بعيدا عن الطبقات المضغوطة. امسح أو أزل الصفار الزائد من الوعاء. لا تكشط طبقة الحبيبات. هذا سوف يسبب تمزق. ستعمل الحركات القوية على غم حل PBS وتقليل التصور. استمر في حركات دقيقة ومتعمدة.
- بعد سحب كل قسم من 5-10 مم من الجدار الجريبي ، توقف مؤقتا لأخذ طبقات الثيكا والحبيبات في كل مجموعة من الملقط وتأكد من تقشير الطبقتين عن بعضهما البعض تدريجيا ، تماما كما يتم تقشيرهما بعيدا عن صفار البيض. استمر في هذه العملية حول الجزء الخارجي من المسام. إذا أصبح التلاعب صعبا بسبب رفرف طبقة الحبيبات ، فقم بتدوير المسام لبدء العملية من الجانب الآخر من الشريحة.
- أثناء عملية الانفصال ، ستصادف القرص الجرثومي (الأمشاج الأنثوية والحويصلة الجرثومة). هذه منطقة ملتزمة للغاية بكل من طبقة الحبيبات وصفار البيض. اقترب من القرص الجرثومي بعناية ، باستخدام الملقط المستقيم لتثبيت طبقة الحبيبات بإحكام على طبقة الثيكا ، حيث يتم استخدام الملقط المنحني في حركات التنظيف الخفيفة لدفع القرص الجرثومي بعيدا عن الخلايا الحبيبية إلى سطح الصفار.
- إذا كان القرص الجرثومي مطلوبا كعينة بحثية ، فقم بتنظيف صفار البيض في هذه المرحلة باستخدام ملقط بزاوية وتخزينه حسب الرغبة.
- استمر في فصل صفار البيض عن الجدار الجريبي باستخدام الملقط المنحني حتى تتم إزالة صفار البيض بالكامل من كرة المسام.
- بمجرد تنظيف ما تبقى من صفار البيض بالفرشاة من الطبقات ، افصل الجزء الأخير من طبقة الحبيبات عن طبقة ثيكا. قد لا تكون طبقة الحبيبات المنفصلة بالكامل خالية تماما من مادة الصفار ، ولكن تأكد من أنها غير مغلفة بها. ضع طبقة الحبيبات وطبقة الطبقة في حاويات منفصلة بدرجة حرارة 4 درجات مئوية PBS.
- بمجرد أن تكون طبقة الحبيبات في حاوية منفصلة عن طبقة الثيكا ، قم بتحريك طبقة الثيكا برفق ذهابا وإيابا في PBS باستخدام ملقط لضمان انفصال أي بقايا متبقية من طبقة الحبيبات.
ملاحظة: قد تفسر بعض طرق المعالجة بعد الفصل إزالة الحطام الدهني عن طريق الهضم أو الطرد المركزي ، اعتمادا على الدراسة المطلوبة. - عند ممارسة هذه التقنية لأول مرة ، قم بإعداد وتحليل العينات المنفصلة التمثيلية من الناحية النسيجية لتأكيد فصل الطبقة وجمعها بدقة.
- للقيام بذلك ، قم بإصلاح أجزاء من الأنسجة المنفصلة في الفورمالين المحايد باستخدام أشرطة الأنسجة الشبكية أو الإسفنج لمنع فقدان العينة ، ثم تضمين البارافين ، وتقسيم القسم ، وتلطيخه بالهيماتوكسيلين والإيوسين (H & E).
- نظرا لطبيعتها الحساسة ، تعامل بعناية مع طبقة الحبيبات وضعها على إسفنج الخزعة في كاسيت نسيجي لضمان بقاء الطبقة الخلوية سليمة.
- ضع طبقة الثيكا مباشرة داخل شريط نسيجي. سيسمح القيام بذلك أيضا بتصور مستوى تلوث العينة بواسطة الأنسجة الجرابية الأخرى (أي عينة طبقة الخلايا الحبيبية مع التصاق ببروتين الصفار أو الخلايا العصيبية).
ملاحظة: قد لا يكون من الممكن دائما الحصول على طبقة واحدة فقط من الاهتمام بسبب الارتباط الوثيق للأنسجة المسامية. ومع ذلك ، فإن معرفة مستوى التلوث المحتمل يمكن أن يسترشد بها في تفسير النهج اللاحقة متعددة الأوميك.
- بمجرد أن تكون طبقة الحبيبات في حاوية منفصلة عن طبقة الثيكا ، قم بتحريك طبقة الثيكا برفق ذهابا وإيابا في PBS باستخدام ملقط لضمان انفصال أي بقايا متبقية من طبقة الحبيبات.
الوصول مقيد. يرجى تسجيل الدخول أو بدء فترة تجريبية لعرض هذا المحتوى.
النتائج
ينتج عن هذا البروتوكول فصل طبقات الخلايا الحبيبية والخلايا عن بصيلات المبيض (الشكل 5 والشكل 6). يمكن بعد ذلك تحضير هذه الطبقات للفحص النسيجي لتأكيد الفصل الناجح. توضح هذه الصور النسيجية ، التي تمت مراجعتها والتقاطها من قبل أخصائي علم الأمراض البيطري المعتمد من مجلس الإدارة (EMB) ، بوضوح الفصل الفعال لطبقات الحبيبات والطبقات الحبيبية لكل من بصيلات ما قبل الإباضة F1 و F5 (الشكل 7). والجدير بالذكر أن طبقة الحبيبات تظهر طيات معقدة ، نتي...
الوصول مقيد. يرجى تسجيل الدخول أو بدء فترة تجريبية لعرض هذا المحتوى.
المناقشة
تحدد هذه الدراسة إجراء الفصل المميز لكل من طبقات الخلايا الحبيبية والخلايا القيصية عن بصيلات ما قبل الإباضة في الدواجن. على عكس الطريقة الحالية التي وضعها جيلبرت وآخرون في عام 1977 ، تسمح التعديلات التي تم إجراؤها في هذه الطريقة ببيئة أكثر تحكما عند فصل طبقة الخلية الحبيبية يدويا عن طبقة ثيكا عن جميع بصيلات ما قبل الإباضة15. علاوة على ذلك ، فإنه يمكن الباحثين من تصور طبقة الخلايا الحبيبية طوال الإجراء بأكمله ، مما يعزز الدقة والقدرات التحليلية. يمكن تكييف هذه التق...
الوصول مقيد. يرجى تسجيل الدخول أو بدء فترة تجريبية لعرض هذا المحتوى.
الإفصاحات
وليس لدى أصحاب البلاغ مصالح متضاربة للإبلاغ عنهم.
شكر وتقدير
نحن ممتنون لميلوس ماركيس (AviServe) للمساعدة في تربية ، ونيكول جوارينو (جامعة ديلاوير) للمساعدة في إعداد المخطوطات ، وإيفلين ويفر وراميش راماشاندران (جامعة ولاية بنسلفانيا) للمساعدة في عرض الإجراءات وإعداد المخطوطات. تم إنشاء الشكل 2 أ والشكل 3 باستخدام BioRender.com باستخدام ترخيص مؤسسي برعاية مكتب أبحاث جامعة ديلاوير. تم دعم هذا العمل من قبل مختبر علم الأمراض المقارن UD CANR. KME مدعوم بمنحة وزارة الزراعة الأمريكية NIFA 2023-67011-40333. تم دعم هذا العمل من خلال منح من مؤسسة أبحاث جامعة ديلاوير (UDRF) وبرنامج ديلاوير INBRE (بدعم من منحة من المعهد الوطني للعلوم الطبية العامة - NIGMS P20 GM103446 من المعاهد الوطنية للصحة وولاية ديلاوير) إلى AD.
الوصول مقيد. يرجى تسجيل الدخول أو بدء فترة تجريبية لعرض هذا المحتوى.
المواد
| الاسم | الشركة | رقم فهرسي | التعليقات |
|---|---|---|---|
| 3.5 بوصة. أوعية زجاجية صغيرة ، 5 أوقية | أوعية | زجاجية قابلة B0BXP5PJTN للتعقيم بقطر لا يقل عن 3.5 بوصة | |
| من رقائق الألومنيوم | كوستكو | 720 | غطاء أوعية الأوتوكلاف |
| وسادات تدريب الأليفة من أمازون ، عادية ، 100 | من أمازون | B0B58WTPFS | للاستخدام كضمادات نخر ، ستعمل أي وسادة ماصة |
| الأوتوكلاف | Fisherbrand | 15-901-111 | |
| كول بارمر LED الألياف البصرية المضيئة | كول بارمر | EW-41723-02 | |
| منحني جدا دقيقة تلميح ملقط | فيشربراند | 16-100-123 | تشريح غير |
| مسنن Leica ؛ | S6E | ||
| مقص دقيق | دقيق Fisherbrand | 12-000-155 | |
| صناديق حاويات طعام غير مسننة مع غطاء مجموعة من 17 فريزر ميكروويف شفاف / أخضر آمن لغسالة | الصحون أمازون | B09QGZCRDB | استخدم أي حاوية يمكنها حمل الثلج ووعاء زجاجي صغير |
| عالي الدقة 45 درجة مدبب مدبب دقيق جدا ملاقط / ملقط | Fisherbrand | 12-000-125 | غير مسنن |
| ملاقط عالية الدقة مستقيمة دقيقة جدا / ملقط | Fisherbrand | 16-100-120 | غير مسنن |
| Isopropanol ؛ | Fisherbrand | A426P-4 | |
| McKesson ، معقمة ، غطاء لولبي ، مقاوم للتسرب ، 120 مل | McKesson | 16-9526 | 4 أونصة / 120 سم مكعب ، محلول |
| ملحي متدرج مخزن بالفوسفات (PBS ، 10x) ، درجة الحموضة 7.6 | ThermoFisher | J62692. يجب أن يتم تصنيع K7 | في زجاجة رذاذ 1x PBS |
| Cole-Parmer | EW-06091-01 | للحصول على شفرات جراحية معقمة بنسبة 70٪ من الأيزوبروبانول | |
| # 22 | Cincinnati Surgical | 122 | |
| Sterilization Pouches 10 × 16 " | Amazon | B07MFB455C | |
| ملقط مدبب متناهية الصغر Fisherbrand & nbsp ؛ | Fisherbrand | 16-100-121 | |
| وسادات خزعة رغوية غير مسننة ، مستطيلة | Fisherbrand | 22-038-221 | |
| محلول فورمالين ، 10٪ (نسيجي) | فيشر كيميكال | SF98-4 | |
| أشرطة معالجة / تضمين الأنسجة مع غطاء | Simport M490-2 | Z672122 |
المراجع
- Finter, N. B., Liu, O. C., Henle, W. Studies on host-virus interactions in the chick embryo-influenza virus system. X. An experimental analysis of the von Magnus phenomenon. J Exp Med. 101 (5), 461-478 (1955).
- Fredrickson, T. N. Ovarian tumors of the hen. Environ Health Perspect. 73, 35-51 (1987).
- Etches, R. J., Petitte, J. N. Reptilian and avian follicular hierarchies: models for the study of ovarian development. J Exp Zool Suppl. 4, 112-122 (1990).
- McCarrey, J. R., Abbott, U. K. Mechanisms of genetic sex determination, gonadal sex differentiation, and germ-cell development in animals. Adv Genet. 20, 217-290 (1979).
- Tilly, J. L., Kowalski, K. I., Johnson, A. L. Stage of ovarian follicular development associated with the initiation of steroidogenic competence in avian granulosa cells. Biol Reprod. 44 (2), 305-314 (1991).
- Gilbert, A. B. Innervation of the ovarian follicle of the domestic hen. Q J Exp Physiol Cogn Med Sci. 50 (4), 437-445 (1965).
- Johnson, P. A., Stoklosowa, S., Bahr, J. M. Interaction of granulosa and theca layers in the control of progesterone secretion in the domestic hen. Biol Reprod. 37 (5), 1149-1155 (1987).
- Apperson, K. D., Bird, K. E., Cherian, G., Lohr, C. V. Histology of the ovary of the laying hen (Gallus domesticus). Vet Sci. 4 (4), 66(2017).
- Johnson, A. L. Ovarian follicle selection and granulosa cell differentiation. Poult Sci. 94 (4), 781-785 (2015).
- Kim, D., Johnson, A. L. Differentiation of the granulosa layer from hen prehierarchal follicles associated with follicle-stimulating hormone receptor signaling. Mol Reprod Dev. 85 (8-9), 729-737 (2018).
- Lu, J., et al. Effects of exogenous energy on synthesis of steroid hormones and expression characteristics of the CREB/StAR signaling pathway in theca cells of laying hen. Poult Sci. 103 (3), 103414(2024).
- Huang, Y., et al. Comparative analysis among different species reveals that the androgen receptor regulates chicken follicle selection through species-specific genes related to follicle development. Front Genet. 12, 752976(2021).
- Tilly, J. L., Johnson, A. L. Regulation of androstenedione production by adenosine 3',5'-monophosphate and phorbol myristate acetate in ovarian thecal cells of the domestic hen. Endocrinology. 125 (3), 1691-1699 (1989).
- Young, J. M., McNeilly, A. S. Theca: the forgotten cell of the ovarian follicle. Reproduction. 140 (4), 489-504 (2010).
- Gilbert, A. B., Evans, A. J., Perry, M. M., Davidson, M. H. A method for separating the granulosa cells, the basal lamina and the theca of the preovulatory ovarian follicle of the domestic fowl (Gallus domesticus). J Reprod Fertil. 50 (1), 179-181 (1977).
- AVMA Panel on Euthanasia. AVMA guidelines for the euthanasia of animals: 2020 edition. , American Veterinary Medical Association. Schaumburg, IL. (2020).
- Mori, M., Kohmoto, K., Shoda, Y. Role of granulosa and theca cells on in vitro progesterone production in preovulatory follicles of the Japanese quail. Japan Poult Sci. 21 (4), 206-214 (1984).
- Porter, T. E., Hargis, B. M., Silsby, J. L., El Halawani, M. E. Characterization of dissimilar steroid productions by granulosa, theca interna and theca externa cells during follicular maturation in the turkey (Meleagris gallopavo). Gen Comp Endocrinol. 84 (1), 1-8 (1991).
- Bahr, J. M., Wang, S. C., Huang, M. Y., Calvo, F. O. Steroid concentrations in isolated theca and granulosa layers of preovulatory follicles during the ovulatory cycle of the domestic hen. Biol Reprod. 29 (2), 326-334 (1983).
- Micke, P., et al. Biobanking of fresh frozen tissue: RNA is stable in nonfixed surgical specimens. Lab Invest. 86 (2), 202-211 (2006).
- Madisen, L., Hoar, D. I., Holroyd, C. D., Crisp, M., Hodes, M. E. DNA banking: the effects of storage of blood and isolated DNA on the integrity of DNA. Am J Med Genet. 27 (2), 379-390 (1987).
- Yang, Y. Z., et al. Histological characteristics of follicles and reproductive hormone secretion during ovarian follicle development in laying geese. Poult Sci. 98 (11), 6063-6070 (2019).
- Wang, Y., et al. Quantitative proteomic analyses during formation of chicken egg yolk. Food Chem. 374, 131828(2022).
- Vanmontfort, D., Rombauts, L., Decuypere, E., Verhoeven, G. Source of immunoreactive inhibin in the chicken ovary. Biol Reprod. 47 (6), 977-983 (1992).
الوصول مقيد. يرجى تسجيل الدخول أو بدء فترة تجريبية لعرض هذا المحتوى.
إعادة الطباعة والأذونات
