تضع هذه الدراسة مجموعة من إجراءات التشغيل القياسية (SOPs) لفحص وعزل البكتيريا المعوية القادرة على شق C-glycosides.
يتطلب اشتراك JoVE لعرض هذا المحتوى. تسجيل الدخول أو ابدأ نسخة تجريبية مجانية
مقالة منهجية
* These authors contributed equally
تضع هذه الدراسة مجموعة من إجراءات التشغيل القياسية (SOPs) لفحص وعزل البكتيريا المعوية القادرة على شق C-glycosides.
توجد جليكوزيدات C بشكل شائع في النباتات الطبية وتظهر تنوعا هيكليا واسعا إلى جانب العديد من الأنشطة الحيوية ، بما في ذلك الأنشطة المضادة للبكتيريا والمضادة للالتهابات والفيروسات ومضادات الأكسدة ومضادات الأورام. في C-glycosides ، يرتبط الكربون الشاذ لجزء السكر مباشرة بمادة aglycone من خلال رابطة الكربون والكربون. بالمقارنة مع O-glycosides ، فإن C-glycosides مستقرة هيكليا ومقاومة للأحماض والإنزيمات. وبالتالي ، فهي عادة ما تكون غير قابلة للكسر ، مما يؤدي إلى ضعف الامتصاص وانخفاض التوافر البيولوجي. ومن المثير للاهتمام أن بعض البكتيريا المعوية يمكن أن تشق الروابط الجليكوسيدية C-C ، مما يوفر نهجا بيولوجيا محددا وصديقا للبيئة لتحلل C-glycosides. في هذه الدراسة ، تم تطوير مجموعة من إجراءات التشغيل القياسية (SOPs) لفحص البكتيريا المعوية القادرة على شق الروابط الجليكوسيدية C-C بناء على نموذج التحول الأحيائي للمركبات الطبيعية. وتشمل الإجراءات التشغيلية الموحدة إعداد وإثراء البكتيريا المعوية، والفحص الموجه نحو النشاط، والتحقق من صحة النشاط في وسط منخفض المصدر الكربوني. توفر هذه المنهجية مرجعا أساسيا للباحثين الذين يهدفون إلى عزل ودراسة هذه البكتيريا الوظيفية المتخصصة.
C-glycosides هي مجموعة من المركبات التي تتميز بالارتباط المباشر لمجموعات الجليكوسيل بالأجليكونات من خلال روابطC-C 1. في الطبيعة ، يتم تحديد أورينتين ، وفيتكسين ، وبورارين ، ومشتقاتها بشكل شائع على أنها C-glycosides2. توجد هذه المركبات بشكل متكرر في النباتات الطبية مثل Trollius chinensis3 وفي مثل Styela plicata4. أظهرت الدراسات أن هذه المركبات توفر فوائد صحية وتظهر أنشطة حيوية مختلفة ، بما في ذلك مضادات البكتيريا5،6،7 ، ومضادة للالتهابات8،9،10،11،12 ، ومضادة للفيروسات3،12،13 ، ومضادات الأكسدة14،15،16 ، و الأنشطة المضادة للأورام17.
نظرا لارتباط مجموعات الجليكوسيل بالهيكل العظمي من خلال روابط C-C ، تظهر هذه المركبات ثباتا عاليا ومقاومة للتحلل المائي الحمضي والأنزيمي18 ، مما يؤدي إلى ضعف الامتصاص وانخفاض التوافر البيولوجي19. يؤثر هذا القيد على تطوير واستخدام جليكوسيدات. ومع ذلك ، فإن الأدوية التي تحتوي على C-glycosides ، والتي غالبا ما يتم تناولها عن طريق الفم ، يتم إزالة الجليكوزيلات بواسطة إنزيمات معينة ، مما ينتج عنه أكثر فعالية من الغليكونات النشطةبيولوجيا 20،21،22،23. في حين أن إنزيمات المضيف الخاصة غير قادرة على إزالة جليكوسيدات C ، فقد تم الإبلاغ عن أن البكتيريا المعوية تستقلب أنواعا معينة. على سبيل المثال ، تقوم بعض البكتيريا المعوية بتحويل المانجيفيرين إلى نوراثيريول ، والذي يظهر فاعلية أكبر كعامل مضاد لمرض السكري أو مضاد للأورام24. على الرغم من هذه النتائج ، تم تمييز عدد محدود فقط من البكتيريا القادرة على شق جليكوسيدات C ، ولا تزال الآليات الأساسية غير مفهومة جيدا. سيؤدي الفحص الفعال والموحد لهذه البكتيريا إلى تعزيز فهم وظائفها وتسريع تطور C-glycosides.
تم تطوير طريقة الغربلة وتحسينها بمرور الوقت لتصبح نظاما ناضجا. تشمل النهج الأساسية الإثراء ، والفحص الموجه نحو النشاط ، والتحقق من صحة النشاط في وسائط المصدر منخفضة الكربون. تسهل هذه الطريقة عزل السلالات المستهدفة النقية ، بالإضافة إلى تحديد الأنواع والبيانات الجينومية وسمات الكائنات الحية الدقيقة المستهدفة. باستخدام هذا النظام ، يمكن فحص البكتيريا المعوية القادرة على شق C-glycosides وعزلها بشكل فعال.
الوصول مقيد. يرجى تسجيل الدخول أو بدء فترة تجريبية لعرض هذا المحتوى.
التزمت التجارب التي أجريت بلوائح احتواء السلامة البيولوجية المحلية والوطنية والدولية المناسبة لمخاطر السلامة البيولوجية المحددة المرتبطة بكل سلالة. تم جمع عينات البراز من متطوعين أصحاء لم يتناولوا أي أدوية لمدة أسبوع واحد على الأقل. وترد تفاصيل الكواشف والمعدات المستخدمة في جدول المواد.
1. بناء نموذج التحول البكتيري المعوي البشري في المختبر
2. عزل السلالات المفردة من الفلورا البكتيرية المعوية البشرية
الوصول مقيد. يرجى تسجيل الدخول أو بدء فترة تجريبية لعرض هذا المحتوى.
تم فحص عينات البراز من عشرة متطوعين أصحاء باستخدام تجارب التحويل ، مما أدى إلى عينة واحدة تظهر نشاطا في إزالة الجليكوزيل أورينتين. أكدت هذه النتيجة جدوى فحص العينات النشطة. تم عزل العينة النشطة باستخدام طريقة تعليم اللوحة. بناء على مورفولوجيا وخصائص المستعمرات ، تم اختيار ما يقرب من 18 مستعمرة بكتيرية مفردة ذات لون أصفر أو أبيض وأشكال متنوعة وحواف غير مستوية لمزيد من التحليل. من بين هؤلاء ، أظهرت مستعمرة واحدة فقط القدرة على شق الشرق في مادة الأجليكون ، اللوتيولين. تم تنقية المستعمرة بشكل أكبر من خلال خمسة تكرارات لعملية...
الوصول مقيد. يرجى تسجيل الدخول أو بدء فترة تجريبية لعرض هذا المحتوى.
تم وضع إجراء التشغيل القياسي (SOP) لفحص البكتيريا المعوية البشرية القادرة على شق C-glycosides. باستخدام هذه الإجراءات ، تم الحصول على سلالة نشطة نقية بنجاح ، وتم تأكيد خاصية إزالة الجليكوزيلات من خلال اختبارات التحول. يتكون الإجراء التشغيلي الموحد من تحضير وإثراء البكتيريا المعوية ، والفحص الموجه نحو النشاط ، والتحقق من صحة النشاط في وسط مصدر منخفض الكربون.
أهم جانب في عملية الفحص هو استخدام وسيط مصدر منخفض الكربون للحث على النشاط البكتيري وزيادة معدل نجاح الف...
الوصول مقيد. يرجى تسجيل الدخول أو بدء فترة تجريبية لعرض هذا المحتوى.
يعلن أصحاب البلاغ عدم وجود تضارب في المصالح.
تم دعم العمل من قبل المؤسسة الوطنية للعلوم الطبيعية في الصين 82374134.
الوصول مقيد. يرجى تسجيل الدخول أو بدء فترة تجريبية لعرض هذا المحتوى.
| الاسم | الشركة | رقم فهرسي | التعليقات |
|---|---|---|---|
| أسيتونيتريل | ثيرمو فيشر العلمي | F2408R205 | HPLC |
| حاضنة اللاهوائية | شنغهاي CIMO Medical Instrument Manufacturing Co. ، LTD | YQX- II | |
| مستخلص لحم البقر | Beijing Abxing Biotechnology Co.، LTD | 01-009 | BR |
| مسحوق مصل الجهاز الهضمي | Beijing Abxing Biotechnology Co.، LTD | 01-087 | BR |
| ثنائي البوتاسيوم فوسفات الهيدروجين | بكين للأشغال الكيميائية | M26298 | AR |
| أنبوب جمع البراز المعقم القابل للتصرف | لانغ فو المحدودة | 5 مل | |
| قسم المياه المقطرة | للمستحضرات الصيدلانية الحيوية ، جامعة بكين للطب | ||
| DMSO | شركة سيجما ألدريتش | WXBD2861V | AR |
| EP أنبوب | بكين بيودي التكنولوجيا الحيوية ، LTD | 10 مل / 1.5 مل | |
| Eppendorf الطرد المركزي | Eppendorf AG | 5418 | |
| الجلوكوز | بكين للأعمال الكيميائية | GC205003 | AR |
| كروماتوجراف سائل عالي الأداء | شركة Shimadzu Corporation | LC-20 | |
| معقم بالبخار عالي الضغط | Sanyo Denki Shanghai Co.، LTD | MLS-3780 | |
| Innoval C18 < / sub>العمود الكروماتوجرافي | Agela Technologies Co.، LTD | 4.6 مم & مرات ؛ 250 مم ، 5 & micro ؛ م | |
| L-سيستين هيدروكلوريد | بكين Abxing التكنولوجيا الحيوية المحدودة | BGASY01 | BR |
| مسحوق استخراج الكبد | بكين Abxing Biotechnology Co.، LTD | 01-085 | BR |
| المعاهد الوطنية لوتيولين للرقابة | والدواء>98٪ | ||
| النمام المغناطيسي | Ika Werke Co.، LTD | RCT أساسي | |
| الميثانول | الحرارية فيشر 20240901312 العلمي | AR | |
| Millipore مرشح غشاء | سانغون للتكنولوجيا الحيوية (شنغهاي) المحدودة | 0.22 وميكرو ؛ L & مرات; 50 مم | |
| Orientin | Yishiming (بكين) التكنولوجيا الحيوية المحدودة | 19120601 | >98٪ |
| Peptone | Beijing Abxing Biotechnology Co.، LTD | 1685787 | BR |
| Petri Dish | Beijing Biodee Biotechnology Co.، LTD | 150 مم | |
| كلوريد الصوديوم | بكين Abxing التكنولوجيا الحيوية المحدودة | BN20008 | AR |
| الصوديوم ثيوغليكولات | الصوديومشنغهاي جيانغلاي التكنولوجيا الحيوية المحدودة | J031S219019 | AR |
| للذوبان النشا | بكين Abxing التكنولوجيا الحيوية المحدودة | S9765 | BR |
| فول الصويا Peptone | بكين Abxing التكنولوجيا الحيوية المحدودة | 2147955 | BR |
| Tryptone | Agela Technologies Co.، LTD | 1685787 | BR |
| منظف بالموجات فوق الصوتية | كون شان بالموجات فوق الصوتية المحدودة | KQ-500DE | |
| مستخلص الخميرة | بكين Abxing التكنولوجيا الحيوية المحدودة | 01-014 | BR |
الوصول مقيد. يرجى تسجيل الدخول أو بدء فترة تجريبية لعرض هذا المحتوى.