يتم تقديم بروتوكول مبسط لإنشاء نموذج التئام جروح الحروق في الفئران باستخدام جهاز تسخين رقمي. تسهل المواقع التجريبية الشبيهة برقعة الشطرنج التي تم إنشاؤها على الجلد مزيدا من التحليل الوظيفي لمقايسة التئام الجروح.
يتطلب اشتراك JoVE لعرض هذا المحتوى. تسجيل الدخول أو ابدأ نسخة تجريبية مجانية
مقالة منهجية
يتم تقديم بروتوكول مبسط لإنشاء نموذج التئام جروح الحروق في الفئران باستخدام جهاز تسخين رقمي. تسهل المواقع التجريبية الشبيهة برقعة الشطرنج التي تم إنشاؤها على الجلد مزيدا من التحليل الوظيفي لمقايسة التئام الجروح.
تعد إصابات الحروق الشديدة من بين أكثر الحالات المؤلمة والمنهكة جسديا ، حيث تؤثر على كل جهاز أعضاء تقريبا وتؤدي إلى مراضة ووفيات كبيرة. نظرا لتعقيدها وتورط أعضاء متعددة ، تم إنشاء نماذج حيوانية مختلفة لتكرار جوانب مختلفة من إصابة الحروق. تختلف الطرق المستخدمة لإنتاج الأسطح المحترقة بين النماذج الحيوانية التجريبية. تصف هذه الدراسة نموذجا بسيطا وفعالا من حيث التكلفة وسهل الاستخدام لعمل حروق متسقة كاملة السماكة باستخدام جهاز تسخين رقمي. تم تطبيق طرف هذا الجهاز على ظهر الفئران لمدة 10 ثوان عند 97 درجة مئوية لإنشاء حرق يشبه رقعة الشطرنج وفحص التئام الجروح تحت علاج ضمادة تجريبية. تم جمع عينات الجلد للتحليل النسيجي ، بما في ذلك تلطيخ الهيماتوكسيلين والإيوسين (H & E) وتلوين ماسون. تم تقييم التئام الجروح من خلال تحليل منطقة الجرح والفحص المجهري للتسلل الالتهابي وإعادة الظهارة وتكوين الأنسجة الحبيبية. يمكن أن يكون نموذج إصابة حروق الفئران بمثابة أداة أساسية في دراسة الفيزيولوجيا المرضية للإصابات الحرارية وتقييم التدخلات العلاجية.
تعتبر الحروق من الإصابات الخطيرة للجلد ، والتي تسببها التعرض للحرارة والكهرباء والمواد الكيميائية والتعرضللإشعاع 1،2. يمكن تصنيفها إلى أربع درجات حسب عمق الإصابة ، بدءا من البشرة إلى السماكة الكاملة للجلد ، وحتى العضلات والعظام. يمكن أن تؤدي الحروق الصغيرة إلى تكوين ندبات وتزيد من خطر الإصابة بالعدوى. لا تسبب مساحة كبيرة من إصابات الحروق أضرارا موضعية فحسب ، بل تحفز أيضا اضطرابات القلب والكلى والأعضاء أو الأنظمة الأخرى في الجسم من خلال الالتهابات الشديدة والطويلة الأمد والاستجابات المناعية ، مما يؤدي إلى عواقب جهازية خطيرة وارتفاع معدلاتالمراضة 3. يرافق معظم الناجين من إصابات الحروق إعاقات جسدية طويلة الأمد وضيق عاطفي وانخفاض نوعيةالحياة 4،5. لذلك ، من المهم دراسة العملية المرضية للحروق وآليات تجديد الأنسجة المحروقة.
تشارك في الاستجابات المناعية ، وتجديد الأنسجة ، والتوازن المنهجي ، لم تستطع الدراسات المختبرية التحقيق بشكل شامل في العملية المرضية لالتئام جروح الحروق. وهكذا ، على مدى العقدين الماضيين ، من أجل استكشاف التدخلات العلاجية المحتملة ، تم تطوير نماذج حيوانية مختلفة لشفاء جروح الحروق لتكرار السمات المختلفة لإصابة الحروق6،7. عادة ما تنتج جروح الحروق على السطح الظهري للخنازير والجرذان والفئران والأرانب الأخرى بعد إزالة الشعر. يمكن أن يستمر وقت الاحتراق لمدة 3 ثوان إلى 30 ثانية لتشكيل ضرر حراري جزئي إلى كامل السماكة مع نطاق من 5٪ إلى 30٪ من إجمالي مساحة سطح الجسم (TBSA) 8. لا توجد حاليا نماذج موحدة لهذه الأساليب في أبحاث الحروق بسبب التباين الكبير في التقنيات المستخدمة. تختلف الطرق المستخدمة لإنتاج الأسطح المحترقة بين النماذج الحيوانية التجريبية ، بما في ذلك لهب الغاز9 ، وحمام الإيثانول المحترق10 ، واللوح / القضيب المعدني المفرد المسخنمسبقا 11،12 ، والماء المغلي أو الساخن13،14. ومع ذلك ، فإن تقنية إحداث الحروق وعمق الحروق الناتج غالبا ما تكون غير متسقة وسيئة الوصف في الدراسات السابقة ، وهو أمر بالغ الأهمية في تحديد شدة الحرق وطريقة علاج الحروق.
تهدف هذه الدراسة إلى تطوير نموذج حيواني بسيط وفعال من حيث التكلفة وسهل الاستخدام لخلق حروق متسقة كاملة السماكة في سيناريوهات سريرية محاكاة. في هذا البروتوكول ، استخدمنا جهاز تسخين رقمي مناسب للتحكم في عمق الحرق عن طريق ضبط درجة الحرارة المطبقة على الجلد. يمكن تبديل طرف هذا الجهاز إلى أحجام مختلفة لإحداث حروق حرارية بنطاقات متفاوتة من TBSA. يسمح ذلك بإنشاء جرح حروق يشبه رقعة الشطرنج على ظهر الفأر ، مما يتيح مقارنة العديد من العلاجات التجريبية والعلاجات الضابطة داخل نفس. لاحظنا وسجلنا عملية إغلاق الجرح. تم حصاد عينات الجلد للتقييم النسيجي (تلطيخ الهيماتوكسيلين والإيوسين (H & E) وتلوين ماسون ثلاثي الألوان) في مراحل مختلفة من التئام الجروح. يقلل هذا النهج من عدد المستخدمة في التجربة ، وبالتالي يقلل من التكاليف الاقتصادية مع كونه أكثر توافقا مع أخلاقيات. ستزود هذه الدراسة الباحثين بالأدوات الأساسية لتسهيل تطوير علاجات جديدة لإصابات الحروق والكشف عن الآليات الفيزيولوجية المرضية لالتئام جروح الحروق.
الوصول مقيد. يرجى تسجيل الدخول أو بدء فترة تجريبية لعرض هذا المحتوى.
تمت مراجعة جميع الإجراءات الحيوانية في هذه الدراسة والموافقة عليها من قبل اللجنة الأخلاقية لكلية غرب الصين لطب الأسنان بجامعة سيتشوان (WCHSIRB-D-2024-499). تم استخدام أربعة وعشرين فأرا C57BL / 6 يبلغ من العمر ثمانية أسابيع (أنثى ، وزن الجسم 25-30 جم) في هذه الدراسة. تفاصيل الكواشف والمعدات المستخدمة مدرجة في جدول المواد.
1. تحضير المعدات والفأر قبل إصابة الحروق
2. إحداث إصابة حروق كاملة السماكة
ملاحظة: تظهر العملية العامة لتحريض الحرق وتحليله في الشكل 2.
3. رعاية وقياس ما بعد الحرق
4. جمع الجروح
5. تقييم التئام الجروح
الوصول مقيد. يرجى تسجيل الدخول أو بدء فترة تجريبية لعرض هذا المحتوى.
في هذا البروتوكول ، تم إنشاء جروح حروق تشبه رقعة الشطرنج بمدة حرق تبلغ 10 ثوان عند 97 درجة مئوية بواسطة جهاز التسخين الرقمي (الشكل 1). طرف الجهاز مصنوع من النحاس النقي المعروف بالتوصيل الحراري الممتاز وقدرات التسخين السريع. القبضة التي يحملها المجرب مصنوعة من مادة البولي كربونات ، والتي توفر مقاومة للحرارة وعدم القابلية للاشتعال. بالمقارنة مع اللوحة / القضيب المعدني المفرد المسخن مسبقا أو طرق الغليان أو الماء الساخن ، يظهر هذا الجهاز أداء أمان فائقا ويقلل من وقت التخدير في الفئران ، وبالتالي...
الوصول مقيد. يرجى تسجيل الدخول أو بدء فترة تجريبية لعرض هذا المحتوى.
بالنسبة لدراسات الحروق ، تركز النماذج المختبرية عادة على التأثيرات المثبطة للعوامل المضادة للميكروبات المحلية أو المضادات الحيوية على البكتيريا المرتبطة بالحروق ، مثل المكورات العنقودية الذهبية و Pseudomonas aeruginosa19 ، بالإضافة إلى تأثير المواد الحيوية المختلفة (مثل الإيلاستين والحرير وضمادات الهيدروجيل14،20) على الخلايا الالتهابية بعد الحرق (مثل العدلات والضامة) أو الخلايا ا...
الوصول مقيد. يرجى تسجيل الدخول أو بدء فترة تجريبية لعرض هذا المحتوى.
ويعلن أصحاب البلاغ عدم وجود تضارب في المصالح.
تم دعم هذا العمل من قبل برنامج سيتشوان للعلوم والتكنولوجيا (23ZYZYTS0120) ، ومنح مستشفى غرب الصين لطب الأسنان بجامعة سيتشوان (RD-03-202011) ، وبرنامج سيتشوان للعلوم والتكنولوجيا (2022NSFSC0614). تم إنشاء الأرقام باستخدام BioRender. كوم.
الوصول مقيد. يرجى تسجيل الدخول أو بدء فترة تجريبية لعرض هذا المحتوى.
| الاسم | الشركة | رقم فهرسي | التعليقات |
|---|---|---|---|
| 1 مل طرف ماصة | KIRGEN ، الولايات المتحدة الأمريكية | KG1333 | تستخدم لتحديد مواقع جرح الحروق |
| 3M فيلم Tegaderm | 3M ، الولايات المتحدة الأمريكية | 1624WCN 6 سم × 7 سم | لغطاء الجرح بعد تحريض الحروق |
| 4٪ بارافورمالدهايد (PFA) | Biosharp ، الصين | BL539A | تستخدم لإصلاح عينات الجلد |
| بوبرينورفين | سيجما ألدريتش ، الولايات المتحدة الأمريكية | PHR8955-50 مجم | لإدارة آلام الفئران |
| C57BL / 6 الفئران | تشنغدو داشو شركة التجريبية ، الصين | لا شيء | لإنشاء نموذج حرق |
| كريم إزالة الشعر | Veet ، الصين | و [مدش] ؛ | لإزالة الشعر الظهري للفئران |
| جهاز التسخين الرقمي | شنتشن كاببر شركة التكنولوجيا ، الصين | No.936D | لتحريض حرق الفئران |
| ماكينة حلاقة كهربائية | AUX ، الصين | AUX-A5 | لإزالة الشعر الظهري لورق ترشيح الفئران |
| و [مدش] ؛ | و [مدش] | تستخدم لكشف عينات الجلد | |
| برنامج | GraphPad &[مدش] ؛ | منشور GraphPad 9.5.0 | لتحليل منطقة جرح الحروق |
| قفازات مقاومة للحرارة | و [مدش] ؛ | و [مدش] | تستخدم لحمل طرف جهاز التدفئة الرقمية |
| هيماتوكسيلين وإيوسين وصمة عار كيت | Solarbio,الصين | G1120 | للتحليل النسيجي للشرائح |
| ImageJ البرمجيات | &[مدش]; | ImageJ 1.54f | لتحليل منطقة جرح الحروق |
| Isoflurane | RWD ، الصين | R510-22-10 | لتخدير الفئران |
| Tychrome Stain Kit | Masson Solarbio ، الصين | G1340 | للتحليل النسيجي للشرائح مجهر |
| أوليمبوس ، اليابان & nbsp ؛ | يستخدم VS200 ASW | لمسح H& E و Masson ملطخة الشرائح | |
| كاسيت الأنسجة | CITOTEST LABWARE MANUFACTURING CO.، LTD، الصين | 31050102W | لتجفيف الأنسجة البارافين وتضمين البارافين |
الوصول مقيد. يرجى تسجيل الدخول أو بدء فترة تجريبية لعرض هذا المحتوى.