يتطلب اشتراك JoVE لعرض هذا المحتوى. تسجيل الدخول أو ابدأ نسخة تجريبية مجانية

مقالة منهجية

التصوير الحي الممتد لمنافذ الخلايا الجذعية الجرثومية ذبابة الفاكهة السوداء

1.4K مشاهدة

⸱

DOI:

10.3791/67389

⸱

ديسمبر 20, 2024

 ,  , 
1Centro Andaluz de Biología del Desarrollo, CSIC/Universidad Pablo de Olavide/JA, 2Departamento de Genética, Facultad de Biología, Universidad de Sevilla

في هذه المقالة

ملخص

هنا ، نقدم بروتوكولا مفصلا لإجراء تصوير مباشر للانقسام غير المتماثل للخلايا الجذعية الجرثومية (GSCs) في ذبابة الفاكهة في مكانة المبيض. نستخدم خطا معدلا وراثيا يعبر في كل مكان عن اندماج البروتين الفلوري الأخضر (GFP) لبروتين الطيف Par-1.

الملخص

تسمح طرق التصوير الحي بتحليل العمليات الخلوية الديناميكية بالتفصيل وفي الوقت الفعلي. ذبابة الفاكهة يمثل المبيض نموذجا ممتازا لاستكشاف ديناميكيات عدد لا يحصى من العمليات التنموية ، مثل انقسام الخلايا ، والجذع ، والتمايز ، والهجرة ، وموت الخلايا المبرمج ، والالتهام الذاتي ، والالتصاق الخلوي ، وما إلى ذلك ، بمرور الوقت. في الآونة الأخيرة ، قمنا بتنفيذ ثقافة ممتدة خارج الجسم الحي وتصوير مباشر لذبابة الفاكهة الأنثوية GSC. باستخدام ذبابة الفاكهة خط يحتوي على GFP: :P ar-1 الجين المعدل كمثال ، تسمح هذه الطريقة بتصور الانقسام غير المتماثل ل GSCs داخل مكانتها ووصف التغييرات في مورفولوجيا الجسيم الطيفي على طول دورة الخلية. هنا ، نقدم بروتوكولا مفصلا لثقافة خارج الجسم الحي ذبابة الفاكهة الجمرة ، مما يتيح التصور المطول لمكانة GSC الأنثوية. الأهم من ذلك ، أن هذا البروتوكول قابل للتطبيق على نطاق واسع على التصوير الحي GSCs مع العديد من البروتينات ذات العلامات الفلورية ذات الأهمية المتوفرة في مراكز المخزون و / أو في مجتمع أبحاث ذبابة الفاكهة. < p class = "jove_content" >

المقدمة

التصوير الحي للعمليات البيولوجية مفيد في الحصول على أدلة تجريبية مباشرة. يسمح الجمع بين الفحص المجهري متحد البؤر المتقدم وتحسين المنهجيات باستكشاف أحداث بيولوجية متعددة بدقة عالية. يعد تحسين الخطوات في بروتوكولات مثل معالجة الأنسجة وتشريحها ، وإعداد العينات وحفظها ، وإعدادات الحصول على الفحص المجهري أمرا بالغ الأهمية لزيادة موثوقية ومتانة النتائج التي تم الحصول عليها. هنا ، نقدم بروتوكولا لمراقبة العينات للتصوير الممتد ، والذي يركز بشكل خاص على ذبابة الفاكهة المبايض السوداء. ذبابة الفاكهة المبيض هو نظام نموذجي ممتاز لتحليلات مجموعة واسعة من العمليات التنموية. من بين أمور أخرى كثيرة ، يحتوي هذا العضو التناسلي لذبابة الفاكهة ذبابة الفاكهة السوداء على مكانة محددة جيدا للخلايا الجذعية البالغة. يحافظ هذا المكانة GSC على تطوير الأمشاج الأنثوية خلال مرحلة البلوغ. ذبابة الفاكهة تتكون المبايض من حوالي 18 مبيضا ، حيث يتم تطوير غرف البيض في جرثوميوم. في طرف كل جرثومي ، يتم الاحتفاظ ب 2-4 GSCs في مكانة خلوية جسدية تتكون بشكل أساسي من خيوط طرفية من 8-10 خلايا ، ووردة من 5-8 خلايا غطاء ، و 2-3 خلايا مرافقة أمامية (<فئة قوية = "xfig" >الشكل 1 أ). يوفر هذا المكان الجسدي ل GSCs إشارات أساسية ودعما ماديا للحفاظ على جذعها ، والتحكم في الانتشار ، ومنع التمايز<فئة sup = "xref">1،2،3،4,5.

تنقسم GSCs عادة بشكل غير متماثل لتوليد خلية جذعية جديدة تحافظ على اتصال مع المكانة الجسدية والخلية الوليدة ، وهي الأرومة المثانية (CB) ، التي تفقد الاتصال المباشر بخلايا الغطاء الجسدي وتتمايز. تحتوي GSCs و CBs على عضية ديناميكية وسيتوبلازمية للغاية ، وهي الطيف ، وتتمثل وظيفتها الرئيسية في الاتجاه الصحيح للمغزل الانقسامي أثناء الانقسام الانقسامي < فئة sup = "xref" >6. ينقسم CB 4 مرات مع الحركية الخلوية غير المكتمل لتطوير أكياس مكونة من 16 خلية ، حيث تحدد إحدى خلايا السلالة الجرثومية في البويضة وتصبح الخلايا ال 15 الأخرى خلايا ممرضة. ينمو الطيف CB إلى بنية متفرعة تسمى الصخور التي تربط خلايا السلالة الجرثومية المترابطة المكونة من 16 خلية. يتم إثراء الطيف في الحويصلات الصغيرة والبروتينات الهيكلية مثل سيرين ثريونين كيناز Par-1 ومكون الغشاء Hu-li tai shao (Hts) < sup class = "xref" >7. خلال دورة خلية GSC ، ينمو الطيف عن طريق إضافة مادة جديدة ويغير شكله ، مما يسمح بتحديد مراحل G1 و S و G2 و M (<فئة قوية = "xfig" >الشكل 1 ب) < فئة الدعم = "xref" >8،< sup class = "xref">9.

لقد قمنا مؤخرا بتنفيذ طريقة ثقافة خارج الجسم الحي لذبابة الفاكهة جرثومرة تسمح بتصوير GSCs الحية لمدة تصل إلى 16 ساعة. نظرا لأن هذه الخلايا تنقسم مرة واحدة كل 15.5 ساعة في المتوسط < فئة sup = "xref" >8 ، فإن هذه الطريقة تسمح بتصوير أجزاء كبيرة من دورة خلية GSC. وبالتالي ، بالاقتران مع أدوات أخرى ، سمحت طريقة الزراعة الخاصة بنا بوصف مورفولوجيا الطيف أثناء دورة خلية GSC وتحليل مدة مراحل دورة الخلية المختلفة في الجسم الحي < sup class = "xref" >8 (< فئة قوية = "xfig" >الشكل 1 ج). هنا ، نقدم بروتوكولا مفصلا لطريقة التصوير المباشر الموسعة هذه مدعومة بفيديو إرشادي خطوة بخطوة يصف المنهجية (<فئة قوية = "xfig" >الشكل 2).

الوصول مقيد. يرجى تسجيل الدخول أو بدء فترة تجريبية لعرض هذا المحتوى.

البروتوكول

ملاحظة: يجب أن تتم الخطوة 1.4 قبل يومين على الأقل. يمكن تنفيذ الخطوتين 2.1 و 2.2 قبل يوم واحد.

1. الإعداد قبل التجريبي I

  1. تحضير 100 ميكرولتر من مزيج المضادات الحيوية الستربتومايسين/البنسلين (10,000 وحدة / مل بنسلين و 10 ملغم / مل من الستربتومايسين) وتخزينها في درجة حرارة -20 درجة مئوية حتى الاستخدام.
  2. قم بإعداد 15 مل من المحاليل التالية باستخدام الماء النقي المعقم ، وقم بتخزينها في درجة حرارة 4 درجات مئوية ، واستخدمها في غضون شهر: بيكربونات الصوديوم (NaHCO3) 0.1 م درجة الحموضة 8.0 و 0.1٪ توين 20.
  3. قم بإعداد وسط الاستزراع والمحلول التالي في غطاء التدفق الصفحي لتجنب التلوث. استخدم أطراف وأنابيب المرشح المعقمة.
    1. تحضير 2 مل من مصل الأبقار الجنينية غير المخفف (FBS) وتخزينها في -20 درجة مئوية حتى الاستخدام في ظروف معقمة.
    2. تحضير ذبابة الفاكهة المتوسطة من شنايدر مع 15٪ FBS و 0.6٪ مزيج المضادات الحيوية الستربتومايسين/البنسلين. تحضير 7 مل من الكميات وتخزينها في درجة حرارة 4 درجات مئوية. تكفي كمية واحدة للوحين من MatTek (انظر القسم 2).
      1. تحضير محلول Ringer (128 ملي كلوريد الصوديوم ، 2 ملي كلوريد كلوريد ، 1.8 ملي كلوريدالكالسيوم 2 ، 4 ملي مللي كلوريد2 ، 35.5 ملي سكروز ، 5 ملي هيبس في ماء نقي معقم ؛ درجة الحموضة 6.9). حضري 1 مل من الكميات واحفظيها على حرارة -20 درجة مئوية حتى الاستخدام.
  4. اجمع الذباب البالغ من العمر 1-2 أيام الذي يعبر بشكل أساسي وفي كل مكان عن بروتين Par-1 المدمجة في GFP (خط بولي يوبيكويتين-mGFP6: :p ar-1) في أنبوب جديد مع طعام الذباب المكمل بمسحوق الخميرة. زرعها لمدة يومين عند 25 درجة مئوية في حاضنة قبل التشريح.
    ملاحظة: يمكن القيام بهذه الخطوة مع أي مراسل يحمل علامة فلورية يهم.
فئة < p = "jove_title" >2. طلاء وإعداد لوحة القاع الزجاجية

  1. ضع قطرة 3 ميكرولتر من مادة لاصقة معينة من Cell-Tak (يشار إليها من الآن فصاعدا باسم لاصق الخلية والأنسجة) في وسط غطاء صفيحة مطلية ب poly-D-lysine مقاس 35 مم (طبق سفلي زجاجي ، انظر جدول المواد) دون النشر اليدوي. استخدم نصائح معقمة.
    ملاحظة: يجب تخزين لاصق الخلية والأنسجة عند 4 درجات مئوية. في حالة التجارب مع حالتين وراثيتين (عادة ، ظروف التحكم والطفرة) ، ضع قطرتين فرديتين منفصلتين جيدا من المادة اللاصقة في نفس اللوحة السفلية الزجاجية. سيضمن ذلك تصوير كلتا الخلفيتين الجينية في نفس الظروف.
  2. بعد ذلك مباشرة، أضف حجما متساويا (3 ميكرولتر في إعداد البروتوكول هذا) يبلغ 0.1 M NaHCO3 pH 8.0 بعناية في قطرة لاصقة 3 ميكرولتر على النحو الموصى به من قبل الشركة المصنعة واخلطها عن طريق سحب العينات.
  3. للتبخر الكامل ، احتضن اللوحة في درجة حرارة الغرفة (RT) لمدة 20 دقيقة ثم احتفظ بها عند 4 درجات مئوية طوال الليل لاستخدامها في اليوم التالي. بدلا من ذلك ، قم باحتضان اللوحة المحضرة عند 37 درجة مئوية لمدة 25 دقيقة حتى التبخر الكامل وانتقل مباشرة إلى الخطوة التالية. في كلتا الحالتين ، حافظ على اللوحة بغطاءها. استخدم أطراف معقمة.
  4. اترك الطبق السفلي الزجاجي المحضر يصل إلى RT عن طريق وضعه على المقعد لمدة 15-20 دقيقة قبل الاستخدام.
  5. اغسل 3 مرات الطبق المجهز بعناية. تجنب لمس وإزعاج الطبقة (الطبقات) اللاصقة. في كل غسلة ، أضف 6 ميكرولتر من الماء النقي المعقم ثم قم بإزالة الماء باستخدام طرف نظيف لكل غسلة من الغسلات الثلاث للتخلص من بقايا محلول NaHCO3.
  6. اسمح بالتبخر الكامل للماء عن طريق وضع الصفيحة النظيفة والمعدة في RT أثناء التشريح لمدة 5-10 دقائق مع وضع غطاءها لتجنب جزيئات الغبار.
< p class = "jove_title" >3. ذبابة الفاكهة تشريح المبيض وعزل المبيض وتركيبه

ملاحظة: يتم إجراء تشريح المبيض في محلول Ringer (بدلا من وسط شنايدر) بدون FBS لمنع وجود البروتينات التي يمكن أن تتداخل مع التصاق أنسجة العينة بالمادة اللاصقة.

  1. نظف طبق تشريح ثلاثي الآبار ، ملقط ، وإبر تشريح بنسبة 70٪ من الإيثانول قبل البدء.
  2. أضف حجما كافيا (~ 200 ميكرولتر) من محلول رينجر في كل من الآبار الثلاثة.
  3. قم بتشريح مبيض 5 إناث تتغذى على الخميرة في 200 ميكرولتر من محلول رينجر في البئر الأول بمساعدة زوجين من الملقط باتباع الإجراءات القياسية< فئة الدعم = "xref" > 10 ، < sup class = "xref" >11. أمسك ذبابة الفاكهة الأنثى عند تقاطع الصدر والبطن بأحد الملقط. بعد ذلك ، قم بتمزيق البشرة برفق في البطن الخلفي واسحب بشرة البطن حتى ينكشف المبيضان.
  4. نقل المبايض المقطعة إلى البئر الثاني لتقليل التلوث ببقايا الأنسجة الأخرى أو الحطام الناتج عن التشريح.
  5. قم بإزالة غمد العضلات المكون من 15-20 مبيضا بمساعدة مجهر مجسم (تكبير 8X-13.5X) مع إضاءة الصمام الثنائي الباعث للضوء (LED) وملقط دقيق. استخدم زوجا واحدا من الملقط لتثبيت جسم المبيض بالكامل ، واستخدم الثاني للاستيلاء بسلاسة على حجرة البويضة في المرحلة المتأخرة وتمتد برفق حتى تنكسر العضلات وتتأخر عن الركب.
    ملاحظة: من الضروري تجنب تلف الجمرة فقط عن طريق تقليل ملامسة هذا الجزء من المبايض. قم بإزالة غرف البيض الأقدم من المراحل 8-9.
  6. انقل المبيض الخالي من غمد العضلات 15-20 واحدا تلو الآخر باستخدام الملقط إلى البئر الثالث الذي يحتوي على 200 ميكرولتر من وسط رينجر.
  7. قم ببلل طرف 20-200 ميكرولتر مسبقا مع 0.1٪ Tween 20 عن طريق سحب العينات. هذا يمنع التصاق المبيض بالجدران البلاستيكية للطرف.
  8. انقل 6 ميكرولتر من محلول Ringer الذي يحتوي على المبيضات الخالية من غمد العضلات باستخدام طرف مبلل مسبقا إلى الصفيحة اللاصقة المحضرة (محفوظة في RT).
    ملاحظة: تجنب كل ملامسة بين الطرف والطبقة اللاصقة لمنع انفصال الجمرة بعد ترسب المبيض (الخطوة التالية). ما يقرب من 30٪ من الجرمانيا لا تلتصق كما هو متوقع.
  9. للتأكد من أن المبيضات المنقولة تلتصق بالسطح اللاصق ، اضغط عليها بعناية حتى أسفل قطرة Ringer حتى تلامس السطح اللاصق باستخدام إبرة تشريح أو ملقط.
    ملاحظة: لا تحاول إعادة ترتيب المبيضات بمجرد استقرارها.
  10. املأ طبق MatTek بعناية ب 3 مل من وسط شنايدر المكمل بمزيج المضادات الحيوية FBS بنسبة 15٪ و 0.6٪ من الستربتومايسين/البنسلين (الخطوة 1.3). لمنع انفصال المبيض ، أضف ببطء 1 مل في المرة الواحدة حول الحافة الخارجية للوحة.
  11. انقل الصفيحة التي تحتوي على المبيضات الخالية من غمد العضلات على سطح مستو إلى محطة المجهر.

4. التصوير المباشر باستخدام المجهر متحد البؤر

  1. ضع اللوحة على هدف 63x لمجهر قرص الغزل أو المجهر متحد البؤر (يمكن استخدام معدات مماثلة) وركز العينة. حدد المستوى z الأوسط لكل جرثومة.
  2. قم بتكوين المعلمات التجريبية التالية: نوع الالتقاط: الفاصل الزمني ثلاثي الأبعاد، ضبط طاقة الليزر البالغة 70/100، الطول الموجي للإثارة: 488 نانومتر، نطاق المكدس z: 30 ميكرومتر والمسافة بين مكدسات Z: 1.2 ميكرومتر، المدة: 17 ساعة، الفاصل الزمني بين النقاط الزمنية: كل 10 دقائق.
  3. إذا كان ذلك متاحا ، باستخدام خيار متعدد المواضع ، أعد تعريف إحداثيات XY للعينات وحدد مستوى Z في منتصف كل جرثومة ، حيث سيتم توسيط المداخن z في هذا الموضع. ابدأ عملية الاستحواذ.
    ملاحظة: نظرا لأن العرض الطبيعي للجراما الماريوم هو 30 ميكرومتر ، فإن كل مكدس Z سيكون ~ 25-27 قسما. اعتمادا على الكونفوكال ، يمكن تصوير ما لا يقل عن 25 جرمرة خلال فترات 10 دقائق. عادة ، يتم استخدام 40x / 1.30 NA أو 63x / 1.40 NA الغمر بالزيت ، والأهداف المصححة بplanapo.
  4. قم بتحليل الصور في الوقت المناسب والمحور Z لتصور تغييرات محددة في مورفولوجيا الطيف باستخدام برنامج Imaris أو ImageJ (Fiji) < sup class = "xref" > 12 ، < sup class = "xref" >13. يتم عرض أوقات محددة عند ملاحظتهم (<فئة قوية = "xfig">الشكل 1 ب'). لتحميل الأفلام ، حدد يدويا أفضل مستوى Z في كل نقطة زمنية.

الوصول مقيد. يرجى تسجيل الدخول أو بدء فترة تجريبية لعرض هذا المحتوى.

النتائج

باستخدام بروتوكول التصوير الحي الممتد هذا، يمكننا تسجيل الانقسام الميتوزي غير المتماثل للخلايا الجذعية الجرثومية (GSCs) الأنثوية داخل مكانها المتخصص (niche) دون اضطرابات بيولوجية ظاهرة. ولتحقيق ذلك، نستخدم مبايض تعبر بشكل شامل عن بروتين GFP::Par-1، الذي يميز بين خمسة أشكال مختلفة للجسيم الطيفي (spectrosome) عبر الدورة الخلوية لـ GSC: الدائري (Round)، والسدادي (Plug)، والشرطي (Bar)، والاندماجي (Fusing)، وعلامة التعجب (Exclamation point) (الشكل 1B،C). وفي وصف أكثر تفصيلاً، لاح...

الوصول مقيد. يرجى تسجيل الدخول أو بدء فترة تجريبية لعرض هذا المحتوى.

المناقشة

نقدم هنا بروتوكولا لمراقبة ذبابة الفاكهة السوداء GSC المتخصصة لفترة طويلة من الزمن ، تصل إلى 16 ساعة. تركز معظم بروتوكولات تصوير ذبابة الفاكهة العمليات البيولوجية خارج الجسم الحي على فترات زمنية أقصر ويمكن العثور على أمثلة متعددة لأقراص الجناح الخيالية15،16،17 أو الغدد التناسلية الجنينية18،19 أو المبايض20،

الوصول مقيد. يرجى تسجيل الدخول أو بدء فترة تجريبية لعرض هذا المحتوى.

الإفصاحات

يعلن المؤلفون أنه ليس لديهم مصالح مالية متنافسة.

شكر وتقدير

نشكر Acaimo González Reyes و María Olmedo López على التعليقات المفيدة على المخطوطة. تم دعم هذه الدراسة من قبل PID2021-125480NB-I00 (H. S-G) ، "Ayudas a la contratación de personal Investigador Doctor" من Junta de Andalucía (J. G-M) ، "Ayuda a proyectos de investigación precompetitivos" من VII و VII PPIT-Seville University (P. R-R) و "Contrato de Acceso de I + D + i" من VI PPIT-Seville University (P. R-R). نتقدم بتقديرنا لشركة علماء الأحياء المحدودة للتفضل بتقديم حقوق مشاركة الصور المقتبسة من المنشور الأصلي (doi: 10.1242 / DEV.199716).

الوصول مقيد. يرجى تسجيل الدخول أو بدء فترة تجريبية لعرض هذا المحتوى.

المواد

قائمة المواد المستخدمة في هذه المقالة
الاسمالشركةرقم فهرسيالتعليقات
9 ألواح زجاجيةCorning 7220-85ن / أ
هيدرات كلوريد الكالسيومسيجما ألدريتشC3881CaCl 2< / sub> & middot ؛ 2H2O; لإعداد حل Ringer
Cell-TakCorning 354240لاصق الخلايا والأنسجة يستخدم لربط الخلايا أو أقسام الأنسجة بأنواع عديدة من الأسطح ، بما في ذلك البلاستيك والزجاج والمعدن وبوليمر FEP والمواد البيولوجية.
Dumont # 5 Fulps Finescience11252-20n / a
Dumont # 55 Plumps فاين ساينس11255-20الأبعاد 0.05 مم × 0.02 مم والطول 11 سم
مصل الأبقار الجنينيGibco10500-064مؤهل ، معطل بالحرارة ، معتمد من الاتحاد الأوروبي ، أصل أمريكا الجنوبية   ؛
أطباق القاع الزجاجيMatTekP35GC-1.5-10-Cطبق 35 مم ، رقم 1.5 غطاء ، قطر زجاج 10 مم ،   ؛ Poly-D-Lysine المغلفة
HEPESSigma AldrichH4034لتحضير محلول Ringer
كلوريد المغنيسيوم  سيجما ألدريتشM1028MgCl2; لتحضير حل Ringer
حامل إبرةRoboz RS-6061خفيف الوزن ، مقبض من الفولاذ المقاوم للصدأ مجوف ؛ 4 3/4 بوصة طويلة.
نيكون SMZ18 مجهر نيكونhttps://www.microscope.
healthcare.nikon.com/products/stereomicroscopes-macroscopes/smz25-smz18
البنسلين ستربتومايسينثيرمو فيشرالعلمي 1514012210,000 وحدة / مل
كلوريد البوتاسيومسيجما ألدريتشP3911KCl ؛ لتحضير حل Ringer's
Drosophila MediumBiowest L0207وسط زراعة الخلايا لخلايا الحشرات
بيكربونات الصوديومSigma AldrichS8875   ؛NaHCO3; > 99.5٪ ، مسحوق
كلوريد الصوديومSigma AldrichS9888كلوريد الصوديوم ؛ لتحضير محلول Ringer
السكروزSigma AldrichS9378& ge ؛ 99.5٪ (GC) ؛ لتحضير محلول Ringer
إبرة تشريح التنغستنRoboz RS-60640.25 مم ، فائق النعومة ، طرف 1 ميكرون (Pk 10)
Tween 20Sigma AldrichP9416للبيولوجيا الجزيئية ،
مسحوق الخميرةSigma Aldrich51475n / a
ثنائي السائل اللزج

المراجع

  1. Li, L., Xie, T. Stem cell niche: structure and function. Annu Rev Cell Dev Biol. 21, 605-631 (2005).
  2. Drummond-Barbosa, D. Local and physiological control of germline stem cell lineages in Drosophila melanogaster. Genetics. 213 (1), e234(2019).
  3. Eliazer, S., Buszczak, M. Finding a niche: studies from the Drosophila ovary. Stem Cell Res Ther. 2 (6), 45(2011).
  4. Rojas-Ríos, P., Guerrero, I., González-Reyes, A. Cytoneme-mediated delivery of Hedgehog regulates the expression of bone morphogenetic proteins to maintain germline stem cells in Drosophila. PLoS Biol. 10 (4), e1001298(2012).
  5. Rojas-Ríos, P., González-Reyes, A. Concise review: the plasticity of stem cell niches: a general property behind tissue homeostasis and repair. Stem Cells. 32 (4), 852-859 (2014).
  6. Deng, W., Lin, H. Spectrosomes and fusomes anchor mitotic spindles during asymmetric germ cell divisions and facilitate the formation of a polarized microtubule array for oocyte specification in Drosophila. Dev Biol. 189 (1), 79-94 (1997).
  7. Huynh, J. R., Shulman, J. M., Benton, R., St Johnston, D. PAR-1 is required for the maintenance of oocyte fate in Drosophila. Development. 128 (7), 1201-1210 (2001).
  8. Villa-Fombuena, G., Lobo-Pecellín, M., Marín-Menguiano, M., Rojas-Ríos, P., González-Reyes, A. Live imaging of the Drosophila ovarian niche shows spectrosome and centrosome dynamics during asymmetric germline stem cell division. Development (Cambridge). 148 (18), dev199716(2021).
  9. De Cuevas, M., Spradling, A. C. Morphogenesis of the Drosophila fusome and its implications for oocyte specification. Development. 125 (15), 2781-2789 (1998).
  10. Wong Li, C., Schedl, P. Dissection of Drosophila ovaries. J Vis Exp. (1), 52(2006).
  11. Merkle, J. A. Dissection, fixation, and standard staining of adult Drosophila ovaries. Methods Mol Biol. 2626, 49-68 (2023).
  12. Thévenaz, P., Ruttimann, U. E., Unser, M. A pyramid approach to subpixel registration based on intensity. IEEE Trans Image Process. 7 (1), 27-41 (1998).
  13. Miura, K. Bleach correction ImageJ plugin for compensating the photobleaching of time-lapse sequences. F1000Res. 9, 95(2020).
  14. Duan, T., Cupp, R., Geyer, P. K. Drosophila female germline stem cells undergo mitosis without nuclear breakdown. Curr Biol. 31 (7), 1602-1610 (2021).
  15. Aldaz, S., Escudero, L. M., Freeman, M. Live imaging of Drosophila imaginal disc development. Proc Natl Acad Sci U S A. 107 (32), 14217-14222 (2010).
  16. Dye, N. A. Cultivation and live imaging of Drosophila imaginal discs. Methods Mol Biol. 2540, 275-285 (2022).
  17. Sohr, A., Du, L., Roy, S. Ex vivo Drosophila wing imaginal disc culture and furin inhibitor assay. Bio Protoc. 9 (16), e3336(2019).
  18. Anllo, L., Plasschaert, L. W., Sui, J., DiNardo, S. Live imaging reveals hub cell assembly and compaction dynamics during morphogenesis of the Drosophila testis niche. Dev Biol. 446 (1), 25-34 (2019).
  19. Gärthner, S. M. K., Rathke, C., Renkawitz-Pohl, R., Awe, S. Ex vivo culture of Drosophila pupal testis and single male germ-line cysts: dissection, imaging, and pharmacological treatment. J Vis Exp. 91, e51868(2014).
  20. Wilcockson, S. G., Ashe, H. L. Drosophila ovarian germline stem cell cytocensor projections dynamically receive and attenuate BMP signaling. Dev Cell. 50 (3), 296-310 (2019).
  21. Jackson, J. A., Imran Alsous, J., Martin, A. C. Live imaging of nurse cell behavior in late stages of Drosophila oogenesis. Methods Mol Biol. 2626, 191-206 (2023).
  22. Díaz de la Loza, M. C., Díaz-Torres, A., Zurita, F., et al. Laminin levels regulate tissue migration and anterior-posterior polarity during egg morphogenesis in Drosophila. Cell Rep. 20 (1), 121-133 (2017).
  23. Christophorou, N., Rubin, T., Bonnet, I., Piolot, T., Arnaud, M., Huynh, J. R. Microtubule-driven nuclear rotations promote meiotic chromosome dynamics. Nat Cell Biol. 17 (11), 1388-1398 (2015).
  24. Bers, D. M. Cardiac excitation-contraction coupling. Nature. 415 (6868), 198-205 (2002).
  25. Morris, L. X., Spradling, A. C. Long-term live imaging provides new insight into stem cell regulation and germline-soma coordination in the Drosophila ovary. Development. 138 (11), 2207-2215 (2011).
  26. Zielke, N., Korzelius, J., van Straaten, M., et al. Fly-FUCCI: a versatile tool for studying cell proliferation in complex tissues. Cell Rep. 7 (2), 588-598 (2014).
  27. Hinnant, T. D., Alvarez, A. A., Ables, E. T. Temporal remodeling of the cell cycle accompanies differentiation in the Drosophila germline. Dev Biol. 429 (1), 118-131 (2017).
  28. Hsu, H. J., LaFever, L., Drummond-Barbosa, D. Diet controls normal and tumorous germline stem cells via insulin-dependent and -independent mechanisms in Drosophila. Dev Biol. 313 (2), 700-712 (2008).
  29. Andersen, D., Horne-Badovinac, S. Influence of ovarian muscle contraction and oocyte growth on egg chamber elongation in Drosophila. Development (Cambridge). 143 (8), 1375-1382 (2016).
  30. Hudson, A. M., Petrella, L. N., Tanaka, A. J., Cooley, L. Mononuclear muscle cells in Drosophila ovaries revealed by GFP protein traps. Dev Biol. 314 (2), 360-372 (2008).
  31. Ables, E. T., Drummond-Barbosa, D. Cyclin E controls Drosophila female germline stem cell maintenance independently of its role in proliferation by modulating responsiveness to niche signals. Development (Cambridge). 140, 4267-4276 (2013).
  32. Lin, H., Spradling, A. C. Germline stem cell division and egg chamber development in transplanted Drosophila germaria. Dev Biol. 159 (1), 140-152 (1993).

الوصول مقيد. يرجى تسجيل الدخول أو بدء فترة تجريبية لعرض هذا المحتوى.

إعادة الطباعة والأذونات

الوسوم

الخط الجرثومي لذبابة الفاكهةحيز الخلايا الجذعيةالمزرعة خارج الجسمالخلايا الجذعية الجرثوميةالانقسام غير المتماثلديناميكيات الجسيم الطيفيالمجهر البؤريوسم البروتين الفلوريتحليل الدورة الخلوية
التصوير الحي الممتد لمنافذ الخلايا الجذعية الجرثومية ذبابة الفاكهة السوداء
تواصل معنا
أوصِ به للمكتبة

الخصوصية

شروط الاستخدام

السياسات

حقوق الطبع والنشر © 2026 MyJoVE Corporation. جميع الحقوق محفوظة.