Method Article

تقنيات زراعة ومعالجة الأورام العضوية ثلاثية الأبعاد لتوليد الأورام الليفية العضلية والرحمية

DOI:

10.3791/67568

⸱

April 30th, 2026

 ,  ,  , 
1Department of Obstetrics and Gynecology, University of Chicago, 2Cancer Biology Department, National Cancer Institute, Cairo University, 3Clinical Pharmacy Department, Faculty of Pharmacy, Ain Shams University, 4Department of Medical Sciences, Khalifa University

In This Article

Summary

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,

يوضح هذا البروتوكول تقنية يدوية لإنشاء هيدروجيلات تحتوي على الكولاجين مدمجة مع مزارع عضوية ثلاثية الأبعاد لخلايا جذعية من نسيج الأورام الليفية العضلية والرحمية.

Abstract

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,

الأورام الليفية الرحمية هي أكثر الأورام الحميدة وأحادية النسيلة والنساء شيوعا في رحم المرأة. لتجاوز العقبات الشائعة المتعلقة بالأساليب المستخدمة في دراسة هذه الأمراض، هدفنا لوضع استراتيجية لإنشاء نماذج عضوية ثلاثية الأبعاد لخلايا الميومتريوم والأورام الجذعية الليفية الرحمية باستخدام الهيدروجيلز المحتوية على الكولاجين كهياكل تثبيت. على وجه التحديد، تم استغلال الهيدروجيلين المحتوي على الكولاجين في صفائح V-bottom منخفضة الارتباط ب 96 بئرا. سمحت هذه الطريقة بتطوير عضويات ثلاثية الأبعاد من نوعين من الخلايا الجذعية من الميوميتيوم الطبيعي ويحتوي على الأورام الليفية الرحمية عن طريق دمجها في هيدروجيلات تحتوي على الكولاجين وتكوين عضويات في وسط مناسب لتكاثر الخلايا الجذعية. نجحت العضويات في التمايز، والانتشار، والتنظيم الذاتي إلى هياكل معقدة، مطورة نظاما مستداما. تكمن أهمية هذا النموذج في فهم الفيزيولوجيا المرضية وسبب المرض، بالإضافة إلى اختبار أدوية جديدة للوقاية أو علاج الأورام الليفية الرحمية.

Introduction

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,

الأورام الليفية الرحمية، أو الأورام الليوميومية، هي أكثر الأورام الحميدة شيوعا في الرحم1. تؤثر هذه الأنواع على نسبة كبيرة من النساء خلال سنوات الإنجاب، حيث تشير الأبحاث إلى أن حوالي 77٪ من النساء يعانين منها في مرحلة ما. بينما يعاني العديد من النساء من الأورام الليفية بدون أعراض، فإن نسبة كبيرة من 25٪ منهن يعانين من أعراض مثل نزيف غير طبيعي في الرحم، ألم في الحوض، أو عقم. يتأثر تطور ونمو الأورام الليفية بعوامل متنوعة، منها هرمونات الجنس، وعوامل النمو، والتغيرات الجينية، وآليات بيولوجية أخرى3.

ولدراسة مسببات الأمراض واختبار فعالية الأدوية، تم تطوير نماذج في المختبر ونماذج حيوانية. تجبر الخلايا في الثقافات ثنائية الأبعاد على النمو على سطح مستو، مما يشوه شكلها ويغير سلوكها مقارنة بكيفية سلوكها في بيئة نسيج ثلاثية الأبعاد. العيب الرئيسي للزراعة ثنائية الأبعاد مقارنة بالزراعة ثلاثية الأبعاد هو أنه يمثل بشكل ضعيف البيئة الخلوية الطبيعية داخل النسيج، حيث يفشل في محاكاة التفاعلات المعقدة بين الخلايا والخلية ومصفوفة الخلايا بدقة التي تحدث في الكائن الحي، مما يؤدي إلى نتائج قد تكون غير دقيقة عند دراسة سلوك الخلية والاستجابة للمحفزات4. بالإضافة إلى ذلك، تفقد خلايا UF والمايومتر بسرعة استجابة هرمونية في الزراعة ثنائية الأبعاد5. بشكل عام، قدمت نماذج الحيوانات المختلفة معلومات ذات صلة بفيزيولوجيا الأمراض في UF6. مقارنة بالنماذج الحيوانية، تقدم العضوية ثلاثية الأبعاد عدة مزايا: فهي تبسط التجارب، وتتوافق مع التصوير اللحظي، وتمكن من دراسة الجوانب التطورية والأمراض الخاصة بالبشر التي لا تمثل بشكل جيد في نماذج الحيوانات7. من ناحية أخرى، فإن التجارب على الحيوانات الأكثر تطورا، مثل الرئيسيات، يصعب تبريرها أخلاقيا، بالإضافة إلى التكاليف العالية8. نموذج العضوية ثلاثية الأبعاد يتفوق عموما على زراعة الخلايا ثنائية الأبعاد من خلال تقليد هيكل الأنسجة في الجسم الحي ، مع كونه أكثر تحكما وكفاءة وفعالية من النماذج الحيوانية. لذلك، من الضروري تطوير نماذج بديلة أكثر فعالية تحاكي بدقة نمو الخلايا الطبيعي وتعقيدات الأنسجة المريضة.

هدفنا إلى إعداد إجراء لإجراء زراعة الأعضاء ثلاثية الأبعاد لخلايا الأورام الجذعية العضلية والليفية الرحمية باستخدام الهيدروجيلات المحتوية على الكولاجين مع إجراء يدوي، مع تسليط الضوء على المزايا والقيود الرئيسية.

Access restricted. Please log in or start a trial to view this content.

Protocol

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,

تمت الموافقة على البروتوكول من قبل لجنة الإثنيات بجامعة شيكاغو، برقم الموافقة IRB#20-1414. وفقا لبنك الأنسجة في جامعة شيكاغو، تم الحصول على موافقة مستنيرة من جميع الأشخاص الذين تم جمع الأنسجة منهم.

1. 3D ثقافة الأورجينويد

  1. زراعة وصيانة الخلايا الجذعية المعزولة والمنقاة للعضلات العضلية وUF (SC) كما تم وصفها سابقا9.
  2. احصل على الكهبوات النارية من النيتروجين السائل ودعها تذوب. يظهر مخطط تدفق لعملية الزراعة في الشكل 1.
  3. أضف 5 مل من بروتين عامل الالتصاق لتحضير القوارير المطلية مسبقا. حضن لمدة لا تقل عن 4 ساعات عند 37 درجة مئوية. ثم تخلص من بروتين عامل التعلق الزائد.
  4. زراعة القارورة في قوارير 75 سم2 المطلية مسبقا باستخدام 10 مل من الوسط الذي يتكون من وسط دولبيكو المعدل (DMEM) وF12 مع 12٪ مصل بقري جنيني (FBS). حضن القارورة في حاضنة نقص الأكسجين بدرجة حرارة 37 درجة مئوية بتركيز أكسجين 2٪ حتى تصل إلى 90٪ من التقاء القارب، كما هو موضح في الشكل 2A.
    ملاحظة: يمكن أن يلعب نقص الأكسجين دورا مهما في نمو الخلايا الجذعية، حيث يمكن أن يعزز تكاثر الخلايا الجذعية وبقائها.
  5. عند الوصول إلى التلاصق، قم بفصل الخلايا باستخدام محلول 25٪ تريبسين-0.1٪ EDTA في HBSS بدون كالسيوم أو مغنيسيوم.
    1. للقيام بذلك، قم بإزالة وسط زراعة الخلية. اغسل الخلايا ب 1x PBS. أضف 1 مل من التربسين إلى خلية واحدة بمساحة 25 سم² وحضن لمدة 2-3 دقائق.
    2. عندما تبدأ الخلايا في الانفصال، أضف وسط مع المصل لإيقاف تفاعل التربسين. استنشق محلول الخلية في أنبوب وطرد مركزي بسعة 15 مل لمدة 5 دقائق عند 500 × جرام في درجة حرارة الغرفة.
    3. بحذر، تخلص من السوبرناتان، تاركا الحبيبة سليمة.
  6. أعد تعليق الحبيبات الخلوية لاحقا في 1 مل من وسط الخلايا الجذعية الخالية من المصل الذي يتكاثر. اكسر أي تجمعات من خلال استخدام الماصات اللطيف.
  7. قم بقياس كمية الخلايا باستخدام جهاز قياس الدم الخلوي.
    1. اخلط 100 ميكرولتر من تعليق الخلية مع 10 ميكرولتر من محلول Trypan Blue بنسبة 0.4٪.
    2. قم بتدوير الخليط لفترة وجيزة وقم بعمل ماصة بسعة 10 ميكرولتر من تعليق خلية تريبان الزرقاء داخل غرفة مقياس الهيموسيتوميتر بين شق الحجرة وغطاء الزجاج ( الشكل 2B).
    3. عد الخلايا في المربعات 1-4، واستخدم المعادلات التالية لحساب عدد الزيوات:
      الخلايا/ململ = (إجمالي الخلايا العدود/إجمالي عدد الصناديق المعدودة) × عامل التخفيف × 10,000
      إجمالي الخلايا في العينة = خلايا/مل × حجم العينة الكلي
  8. امزج حوالي 10,000 خلية مع 2 ميكرولتر من الهيدروجيل المحتوي على الكولاجين و98 ميكرولتر من الخلايا الجذعية الخالية من المصل التكاثر، مما ينتج حجما نهائيا قدره 100 ميكرولتر لكل بئر5لصفيحة V-قاع ببئر 96 بئر.
  9. بيبت 100 ميكرولتر من خليط الخلية في كل بئر من صفيحة منخفضة التثبيت V-bottom ذات 96 بئر. الطرد المركزي في درجة حرارة الغرفة لمدة 5 دقائق عند 100 × جرام.
  10. ضع اللوحة في حاضنة بدرجة حرارة 37 درجة مئوية مع 5٪ ثاني أكسيد الكربونلمدة 30 دقيقة.
  11. أضف حجما إضافيا قدره 100 ميكرولتر من وسط تكاثر الخلايا الجذعية الخالية من المصل بدون هيدروجيلز تحتوي على الكولاجين إلى كل بئر لتوفير التغذية اللازمة لنمو الأعضاء العضوية.
  12. تعويض التبخر الوسط بإضافة 10-20 ميكرولتر من الخلايا الجذعية الخالية من المصل في كل بئر في حالة التبخر المفرط الذي نادرا ما يحدث.
  13. زراعة الخلايا لمدة 7 أيام لنمو العضوية بالكامل الشكل 2C-H. غير الوسط المتزايد للخلايا الجذعية الخالية من المصل مرتين أسبوعيا (استنشاق الوسط القديم بلطف ثم إضافة وسط جديد) للسماح بتمديد زراعة العضوية المشتقة من SCs حتى 21 يوما.

2. التقسيم المجمد

  1. اجمع الخلايا من صفيحة 96 بئر في أنبوب طرد مركزي دقيق بسعة 1.5 مل.
  2. للتقطيع بالتجميد، اغسل الأعضاء مرتين باستخدام محلول ملحي مخزن بالفوسفات (PBS؛ مرة واحدة). أضف 500 ميكرولتر من PBS إلى العضويات، ثم قم بالطرد المركزي وتخلص من السوبرناتانت.
  3. ثبت العضوية ب 500 ميكرولتر من 4٪ بارافورمالديهايد (PFA) لمدة 60 دقيقة عند 4 درجات مئوية ثم اغسلها مرة أخرى ب 1x PBS.
  4. أعد تعليق الأعضاء في 100 ميكرولتر من 2٪ ميثيلين أزرق لتلوينها لمدة 20 دقيقة. اغسل ب 1x PBS وحماية التجميد طوال الليل عن طريق التعليق في 500 ميكرولتر من السكروز 30٪.
  5. في اليوم التالي، أزل محلول السكروز عن طريق الطرد المركزي. قم بدمج الأعضاء في مركب بدرجة حرارة القطع المثلى (OCT) وتجميد الفوري عند −80 درجة مئوية.
  6. قم بتقسيم الأعضاء المدمجة في OCT باستخدام مبريد، وعمق المقطع الأمثل هو 10 ميكرومتر، ثم وضع الأقسام فورا على الشرائح، مقطع واحد لكل شريحة.
  7. حافظ على الشرائح عند 4 درجات مئوية حتى يتم إجراء تلوين الفلورة المناعية وفقا للطريقة التالية.
  8. اغسل السلايد 3 مرات باستخدام 100 ميكرولتر من 1x PBS. ثم أضف 100 ميكرولتر من 0.1٪ تريتون في PBS (1x) لمدة 15 دقيقة في درجة حرارة الغرفة.
  9. قم بحجب الأعضاء ب 5٪ من BSA في 1x PBS لمدة 60 دقيقة واحتضن النوم طوال الليل مع الأجسام المضادة الأولية ل Sox-2 مع تخفيف (1:500) وأكتين العضلات الملساء α (α-SMA) بتركيز نهائي 1 ميكروغرام/مل.
  10. اغسل الأعضاء العضوية ب 100 ميكرولتر من 1x PBS 3x ثم حضن لمدة ساعة واحدة في الظلام باستخدام الأجسام المضادة الثانوية لصبغة فلورسنت الموسومة بأليكسا فلوري (1:1000).
  11. اغسل ب 100 ميكرولتر من 1x PBS 2x ثم أثبت في وسط تركيب مضاد للتلاشي مع إضافة DAPI (1 ng/mL).
  12. التقاط الصور باستخدام مجهر فلوري بتكبير 20 مرة. انظر الشكل 3A وحلل الصور باستخدام برنامج لتحليل التصوير الحيوي.

3. صبغة الفلورية المناعية الكاملة العضوية

  1. قم بإزالة الأعضاء العضوية من الوسط (الخطوة 1.11) في أنبوب الطرد المركزي الدقيق وغسل مرتين ب 500 ميكرولتر من 1x PBS.
  2. ثبت العضوية ب 500 ميكرولتر من 4٪ PFA لمدة 60 دقيقة في درجة حرارة الغرفة. ثم تخلص من PFA واغسله ب 500 ميكرولتر من PBS 3x.
  3. قم بنفاذ الأعضاء الثابتة ب 0.5 مل من حاجز العزل طوال الليل عند 4 درجات مئوية.
  4. في اليوم التالي، أزل الحاجز العائلي، أضف الأجسام المضادة الأولية (300-500 ميكرولتر) من الكولاجين III (COL3A1) مع التخفيف (1:500) وAHR مع التخفيف (1:1000)، وحضن العينات عند 4 درجات مئوية طوال الليل.
  5. اغسل الأعضاء العضوية 3 مرات مع 500 ميكرولتر من 1x PBS ثم حضن الأجسام المضادة الثانوية (594 IgG مضاد للماعز والأرانب و488 IgG مضاد للفئران للماعز) طوال الليل عند 4 درجات مئوية في الظلام.
  6. اغسل الأعضاء العضوية 3x مع 500 ميكرولتر من 1x PBS، ثم حضن ب 5 ميكروغرام/مل من 4′,6-دياميدينو-2-فينيل إندول (DAPI) في 1x PBS (300-500 ميكرولتر لكل عينة) في درجة حرارة الغرفة لمدة 20 دقيقة.
  7. اغسل الأعضاء ثلاث مرات باستخدام 500 ميكرولتر من 1x PBS والصورة على مجهر كونفوكال (الشكل 3B).

4. تفكك العضويات

  1. إعادة تكوين 100 ملغ من الباباين في محلول تنشيط معقم بالفلتر إلى تركيز مخزن 250 U/mL، وحضن المحلول عند 37 درجة مئوية لمدة 30 دقيقة لتنشيط الإنزيم
    ملاحظة: يمكن تخزينه عند 2 - 8 درجات مئوية لمدة تصل إلى أسبوعين.
  2. حضر محلول تفكيك (قبل الاستخدام مباشرة) مع 30 U/mL من الببين و125 U/mL DNase I في محلول الملح المتوازن (HBSS) من هانكس.
  3. انقل الأعضاء العضوية (الخطوة 1.11) إلى صفائح ب 24 بئر وأضف 500 ميكرولتر من محلول التفكك.
  4. حضن العينات عند 37 درجة مئوية لمدة 30-60 دقيقة على جهاز هزاز مداري مضبوط على 90 دورة في الدقيقة.
  5. قم بالتثليح بشكل متقطع 5x-6x باستخدام ماصة بسعة 1 مل في درجة حرارة الغرفة للحصول على تعليق يتكون أساسا من خلايا مفردة.
  6. أضف تعليق الخلية إلى أنبوب طرد مركزي بسعة 15 مل يحتوي على محلول مثبط للبروتيز (1 مل من 10 ملغ/مل) وجهاز الطرد المركزي عند 300 x جرام لمدة 5 دقائق لإزالة الخلايا الكروية والتخلص من السوبرناتان.
  7. أعد تعليق الخلايا في المخزن المناسب، ويظهر تعليق الخلية المفردة الناتج في الشكل 2I.

Access restricted. Please log in or start a trial to view this content.

Results

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,

منذ اليوم الأول بعد البذر، بدأت المجموعات المختلطة تتجمع ذاتيا، مكونة أورغيونيدات كما هو موضح. حددنا أن كثافة البذور المثلى هي 10,000 SCs، والتي كانت تشكل باستمرار العضويات عند زراعتها في نظام زراعة محدد. استخدم هذا النظام الهيدروجيلات المحتوية على الكولاجين كهيكل ECM للخلايا الجذعية المدمجة ووسط تكاثر الخلايا الجذعية لمدة 7 أيام في صفيحة ذات 96 بئر ذات صلة منخفضة جدا (الشكل 2C-G). في هذا السياق، تنظم الخلايا...

Access restricted. Please log in or start a trial to view this content.

Discussion

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,

الأعضاء العضوية هي هياكل ثلاثية الأبعاد تشبه الأعضاء المصغرة وتتكون من خلايا ذاتية التنظيم مشتقة من الخلايا الجذعية أو عينات الأنسجة.11. تمتلك عضويات الخلايا الجذعية المشتقة من الأنسجة لدى المرضى القدرة على إحداث ثورة في البحث الطبي الحيوي والتطبيقات السريرية بفضل قدرتها المذهلة على تكرار فسيولوجيا UF والمرضبدقة. هنا، تحاول هذه الدراسة سد هذه الفجوة من خلال إدخال نظام زراعة عضوي مشتق من الخلايا العصبية البشرية من المرضى الطبيعيين والمصابين ...

Access restricted. Please log in or start a trial to view this content.

Disclosures

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,

يعلن المؤلفون أنهم لا يملكون مصالح متنافسة. قدمت المعاهد الوطنية للصحة تقارير للدكتور أيمن الهيندي. أبلغ أيمن الهندي عن علاقة مع شركة Myovant Sciences Ltd. وشركة فايزر، شملت علاقات استشارية أو استشارية. بالإضافة إلى ذلك، الدكتور أيمن الهندي هو مؤسس شركة INOFFA.

Acknowledgements

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,

يرغب المؤلفان في الشكر لكل من إيرين سوليفان وجوليان رومانو في جامعة شيكاغو على مساعدتهما في هذا الإنتاج الفيديوي. يرغب المؤلفون في الشكر على سمية وفايعي، تاو باي، وينستون إي. تومسون، وتشيوي يانغ لمساعدتهم في استقرار التقنيات. نواة المجهر الضوئي المتكامل بجامعة شيكاغو. وقد دعمت هذه الدراسة جزئيا من قبل منح المعاهد الوطنية للصحة (NIH) مثل RO1 ES028615، وRO1 HD094378، وU54 MD007602، وRO1 HD087417، وRO1 HD106285 (AAH)، ومنحة بحثية من جمعية بطانة الرحم واضطرابات الرحم (SUED).

Access restricted. Please log in or start a trial to view this content.

Materials

List of materials used in this article
NameCompanyCatalog NumberComments
كونفوكال 2-فوتون  المجهرلايكا، الولايات المتحدة الأمريكية
أغاروز الأولشركة VWR، الولايات المتحدة الأمريكية97062-248
الصفائح الدقيقة الكروية Akura 96  إنسفيروCS-09-004-03ألواح V-bottom منخفضة التثبيت
أليكسا فلور 488 ضد الفأر للماعز IgG لايف تكنولوجيز، كاليفورنيا، الولايات المتحدة الأمريكية(A11029)(1:1000)
أليكسا فلور 594 ضد الأرانب الماعز IgG لايف تكنولوجيز، كاليفورنيا، الولايات المتحدة الأمريكية(A11037)(1:1000)
ضد آهر [RPT] جينتكس، تايوان(GTX227700a)(1:1000)
أجسام مضادة للعضلات الملساء المضادة لألفا الأكتين  أبكام، ماساتشوستس، الولايات المتحدة الأمريكية(ab7817)1 & g/mL
الأجسام المضادة المضادة للكولاجين III  أبكام، ماساتشوستس، الولايات المتحدة الأمريكية(ab7778)(1:500)
الأجسام المضادة المضادة لمادة SOX1  أبكام، ماساتشوستس، الولايات المتحدة الأمريكيةAB242125(1:500)
عامل التعلق  جيبكو، الولايات المتحدة الأمريكيةS-006-100
مخزن حجب  داكوX09095٪  مصل الحصان + 0.5٪  ترايتون X-100  في 1X  PBS
كريوستاتفيشر ساينتفيك، والثام، ماساتشوستسميكروم HM 550
DAPI (4′,6-diamidino-2-phenylindole)ثيرمو ساينتيفيك، ألمانيا622481 ملغ/مل
DNase Iالعلم الحراري، ليتوانياEN0521
دولبيكو النسر المعدل' متوسط DMEM و  F12جيبكو، الولايات المتحدة الأمريكية21041-025
مصل البقر الجنيني  أوميغا ساينتيفك،   والتام، ماساتشوستسNC0471611
ماتريغيل (هيدروجيلات تحتوي على الكولاجين)كورنينغ، كورنينغ، نيويورك356237
MesenCult-ACF Plus Medium (وسط تكاثر الخلايا الجذعية الخالية من المصل&nb;)تقنيات الخلايا الجذعية، فانكوفر، كندا5446
مركب OCT (مركب درجة حرارة القطع المثلى)ساكورا، الولايات المتحدة الأمريكية4583
مجهر أوليمبوس BX41 أوليمبوس أمريكا، سنتر فالي، بنسلفانيا
محلول مثبط بروتياز أوفوموكويد&nb;شركة وورثينغتون للكيمياويات الحيوية، الولايات المتحدة الأمريكيةLK003182
باباين شركة وورثينغتون للكيمياويات الحيوية، الولايات المتحدة الأمريكيةLK003176محلول التنشيط (1.1 ملليموتر إيدتا، 0.067 ملليمولار ميركابتوإيثانول، 5.5 ملليمولار إل-سيستين HCl)
PBS (محلول ملحي مخزن بالفوسفات)جيبكو، الولايات المتحدة الأمريكية70011الرقم الهيدروجيني 7.4
PFA (بارافورمالديهيد) 4٪إنفيتروجين، الولايات المتحدة الأمريكيةFB002
كوباثبانكهيد، ب. وآخرون؛ QuPath: برنامج مفتوح المصدر لتحليل صور علم الأمراض الرقمي. التقارير العلمية   (2017).https://doi.org/10.1038/s41598-017-17204-5برامج لتحليل التصوير الحيوي
مجهر تايم لابس
قوارير زراعة الأنسجةفيشر ساينتفيك، والثام، ماساتشوستسFB012937
تريبسن جيبكو، الولايات المتحدة الأمريكيةA12859-010.25٪ تريبسين و0.1٪ EDTA في HBSS بدون كالسيوم أو مغنيسيوم؛
وسيط تركيب مضاد التدرج VECTASHIELD مدعوم ب DAPIمختبرات فيكتور، كاليفورنيا، الولايات المتحدة الأمريكية#  UX-93952-241  ng/mL

References

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,
  1. Walker, C. L., Stewart, E. A. Uterine fibroids: the elephant in the room. Science. 308, 1589-1592 (2005).
  2. Cramer, S. F., Patel, A. The frequency of uterine leiomyomas. Am J Clin Pathol. 94, 435-438 (1990).
  3. Islam, M. S., et al. Complex networks of multiple factors in the pathogenesis of uterine leiomyoma. Fertil Steril. 100, 178-193 (2013).
  4. Kapałczyńska, M., et al. 2D and 3D cell cultures - a comparison of different types of cancer cell cultures. Arch Med Sci. 14 (4), 910-919 (2018).
  5. Banerjee, S. Human Myometrial and Uterine Fibroid Stem Cell-Derived Organoids for Intervening the Pathophysiology of Uterine Fibroid. Reprod Sci. 29 (9), 2607-2619 (2022).
  6. Piccini, C. D., et al. Animal models of uterine leiomyomas: a review. F S Rev. 3 (2), 121-135 (2022).
  7. Chenchula, S., Kumar, S., Babu, S., et al. Comparative Efficacy of 3Dimensional (3D) Cell Culture Organoids Vs 2Dimensional (2D) Cell Cultures Vs Experimental Animal Models In Disease modeling, Drug development, And Drug Toxicity Testing. Int J Curr Res Rev. 11 (24), 11-17 (2019).
  8. Mather, J. A. Ethics and care: For animals, not just mammals. Animals. 9, 1018(2019).
  9. Mas, A. Stro-1/CD44 as putative human myometrial and fibroid stem cell markers. Fertil Steril. 104 (1), 225-234.e3 (2015).
  10. Omran, M. M., et al. Utilising Human Myometrial and Uterine Fibroid Stem Cell-Derived Three-Dimensional Organoids as a Robust Model System for Understanding the Pathophysiology of Uterine Fibroids. Cell Prolif. , e70025(2025).
  11. Kim, J., Koo, B. K., Knoblich, J. A. Human organoids: model systems for human biology and medicine. Nat Rev Mol Cell Biol. 21 (10), 571-584 (2020).
  12. Yang, S., et al. Organoids: The current status and biomedical applications. MedComm. 4 (3), e274(2023).
  13. Malik, M., Catherino, W. H. Development and validation of a three-dimensional in vitro model for uterine leiomyoma and patient-matched myometrium. Fertil Steril. 97 (6), 1287-1293 (2012).
  14. Malik, M., Britten, J., Segars, J., Catherino, W. H. Leiomyoma Cells in 3-Dimensional Cultures Demonstrate an Attenuated Response to Fasudil, a Rho-Kinase Inhibitor, When Compared to 2-Dimensional Cultures. Reprod Sci. 21, 1126-1138 (2014).

Access restricted. Please log in or start a trial to view this content.

Reprints and Permissions

Request permission to reuse the text or figures of this JoVE article

Request Permission

Tags

Uterine FibroidsMyometrial OrganoidsThree Dimensional OrganoidsOrganoid CultureCollagen HydrogelsStem Cell ProliferationUterine Fibroid ModelsOrganoid DifferentiationDrug Testing ModelsGynecological Tumors
Video Coming Soon

Related Articles