يتطلب اشتراك JoVE لعرض هذا المحتوى. تسجيل الدخول أو ابدأ نسخة تجريبية مجانية

مقالة منهجية

نموذج الفئران للتعديل المناعي الناجم عن طول الجلد

836 مشاهدة

⸱

DOI:

10.3791/67578

⸱

يونيو 24, 2025

 ,  ,  ,  ,  , 
1Department of Medical Physiology, Chair of Biomedical Sciences, Institute of Physiotherapy, Faculty of Health Sciences, Jagiellonian University Medical College, 2Department of Clinical Immunology, Wroclaw Medical University, 3Chair of Biomedical Sciences, Faculty of Health Sciences, Jagiellonian University Medical College

* These authors contributed equally

في هذه المقالة

ملخص

توضح الدراسة دور الجلد في تعديل الاستجابات المناعية في الفئران من خلال التحصين فوق الجلد (EC). يمكن أن يؤدي التحصين EC بمستضد بروتيني إلى تثبيط الاستجابات المناعية في فرط الحساسية التلامسية أو عكس التثبيط الناجم عن الجلد عند دمجه مع الأنماط الجزيئية المرتبطة بممرضات الأمراض. يظهر التحصين بالإي الأوروبي واعدا كنهج فعال وخالي من الإبر للعلاج المناعي.

الملخص

يلعب الجلد ، باعتباره أكبر عضو في جسم الإنسان يتفاعل مع البيئة الخارجية ، أدوارا فسيولوجية حاسمة ، بما في ذلك (1) حماية الكائن الحي من الكائنات الحية الغريبة والكائنات الحية الدقيقة ، (2) تسهيل التنظيم الحراري ، (3) الحفاظ على توازن الماء والكهارل ، (4) تصنيع فيتامين د ، و (5) المشاركة في المناعة. تسلط هذه الورقة الضوء على المشاركة المحورية للبشرة في الآليات المناعية ، وتظهر قدرتها على التعديل المناعي عن طريق قمع الاستجابة المناعية أو تقويتها. تكشف النتائج السابقة أنه في الفئران ، يمكن للتحصين فوق الجلد (EC) بمستضد ، إما بمفرده أو بالاقتران مع الأنماط الجزيئية المرتبطة بمسببات الأمراض (PAMPs) ، أن يثبط أو يقوي الاستجابات المناعية ، على التوالي. على وجه التحديد ، لوحظ أن تحصين EC بمستضد يمكن أن يثبط الاستجابات المناعية في نماذج الفئران المختلفة لأمراض المناعة الذاتية أو التهاب الجلد التماسي التحسسي. تشير النتائج إلى أن التحصين EC بمستضد جنبا إلى جنب مع PAMPs يمكن أن يكون بمثابة استراتيجية فعالة لتعزيز المناعة ضد مسببات الأمراض أو التخفيف من الحساسية المعتمدة على الخلايا الليمفاوية من النوع 2 (Th2). يحدد هذا البروتوكول طريقة للحث على تثبيط الجلد عن طريق التطبيق فوق الجلد لمستضد في نموذج الفئران لفرط الحساسية التلامسية البشرية (ACD) - فرط الحساسية الملامسة (CHS) بوساطة خلايا Th1. ومع ذلك ، يمكن أيضا تطبيقه على نماذج اضطراب الفئران المختلفة. يقدم المقال التعديل المناعي الناجم عن EC كنموذج فئران جذاب للعلاج المناعي الخالي من الإبر عبر الاضطرابات المختلفة.

المقدمة

تقدم هذه المقالة طريقة للحث على التسامح (يشار إليه باسم "القمع" في جميع أنحاء هذا النص) في نموذج فأر لفرط الحساسية التلامسية (CHS) ولعكس هذا التسامح (يشار إليه باسم "منع التثبيط" في جميع أنحاء هذا النص) عن طريق التطبيق فوق الجلد (EC) لمستضد بمفرده أو بالاشتراك مع الروابط لمستقبلات التعرف على مسببات الأمراض (PRRs) ، على التوالي1. في البروتوكول الموصوف (أ) تستخدم الغلوبولين المناعي للفأر الهابتيني (TNP-Ig) كمستضد لقمع فرط الحساسية التلامسية أو (ب) مستضد مع الأنماط الجزيئية المرتبطة بمسببات الأمراض (PAMPs) ، وروابط للمستقبلات الشبيهة بالحصيلة (TLR) والمستقبلات الشبيهة بالبروتين المحتوية على مجال قلة القلة المرتبطة بالنيوكليوتيدات (NOD) (NLRs) ، لعكس التثبيط الناجم عن الجلد2،3،4. تشير النتائج إلى أن التعديل المناعي الناجم عن EC يتم التوسط فيه بواسطة خلايا مثبطة T غير محددة للمستضد (Ts) وخلايا T المثبطة الخاصة بالمستضد (Tcs). يمكن فحص هذه الخلايا في نموذج فأر لنقل الخلايا بالتبني لتحديد آلية التفاعلات المختبرة. يصف البروتوكول الحالي نموذجين لنقل الخلايا ، "النقل بالتبني IN" و "النقل المعتمد OUT". يعد النقل بالتبني IN مفيدا لاختبار التعديل المناعي في المراحل الواردة والصادرة من CHS. من ناحية أخرى ، يعكس "النقل بالتبني OUT" تأثير التعديل المناعي فقط في المرحلة الصادرة من CHS.

تصف المقالة طريقة التثبيط الناجم عن الجلد عن طريق التطبيق فوق الجلد لمستضد في نموذج الفئران لالتهاب الجلد التماسي التحسسي البشري (ACD) - فرط الحساسية التلامسية (CHS) بوساطة الخلايا الليمفاوية من النوع T المساعدة 1 (Th1) 5. ومع ذلك ، تم اختبار هذا النهج أيضا لفعاليته في تنظيم (قمع ، تحمل) النماذج التجريبية للخلايا الليمفاوية التائية السامة للخلايا من النوع 1 (Tc1) بوساطة CHS6،7 ، وأمراض المناعة الذاتية مثل التهاب المفاصل الناجم عن الكولاجين (CIA) 8،9 ، والتهاب الدماغ والنخاع المناعي الذاتي التجريبي (EAE) 10،11 ، والتهاب القولون التقرحي12. علاوة على ذلك ، يصف البروتوكول طريقة منع التثبيط الناجم عن الجلد (القمع العكسي) عن طريق تطبيق EC لمستضد مع روابط PRR في نموذج الفئران من CHS13،14،15،16. تشير النتائج المقدمة إلى أنه يمكن عكس التثبيط غير النوعي للمستضد الناجم عن EC عن طريق تنقية روابط TLR2 و TLR3 و TLR4 و TLR9 و NOD2. تم استخدام طريقة منع التثبيط الناجم عن الجلد أيضا في نموذج حيواني لالتهاب الجلد التأتبي (AD) ، مما يدل على أن علاج EC بمستضد في وجود جزيئات DNA اصطناعية أحادية الشريطة تحتوي على قليل قليل الأكسجين نوكليوتيدات غير الميثيل (CpG) - يمكن أن تثبط الترابط ل TLR9 الاستجابات بوساطة Th2 بطريقة خاصة بالمستضد (يحول الاستجابة المناعية نحو النمط الظاهري Th1 / Th17) 17. تم اختبار الطريقة الموصوفة أيضا في الالتهاب الرئوي بالمكورات الرئوية ، مما يدل على أن التحصين EC مع عديد السكاريد المكورات الرئوية المترافق مع ألبومين مصل الأبقار (PC-BSA) ، جنبا إلى جنب مع CpG ، يمكن أن يعزز المناعة ضد المكورات العقدية الرئوية18.

يتمثل أحد الجوانب المحورية للتعديل المناعي الناجم عن EC في اختيار النموذج وطبيعة المستضد. تتضمن المقالة جدولا يوضح بالتفصيل المستضدات المستخدمة ، ومدة التعرض للمستضد ، وخصوصية الخلايا التائية للنماذج المختبرة (انظر الجدول 1). تستهدف الطريقة الموصوفة للتعديل المناعي الأمراض التي تنطوي على الخلايا الليمفاوية التائية الخاصة بالمستضد. تم تقييم فعالية هذه الطريقة من خلال استخدام مستضد متوافق مطبق من EC في العملية. يعد توافق المستضد أمرا بالغ الأهمية لضمان تفاعله بشكل فعال مع الخلايا الليمفاوية التائية المشاركة في عملية المرض. يسهل تطبيق رقعة البروتين أو الببتيد على الجلد السليم تغلغل المستضد عبر البشرة19،20. يعزى هذا التغلغل المتزايد للمستضد إلى زيادة العرق تحت الضمادة. تحدث التغيرات في نفاذية البشرة في غضون 4-10 ساعات من تطبيق الرقعة ، بينما قد يظل التعديل المناعي الناجم عن EC فعالا لمدة تصل إلى أسبوعين5،14.

على الرغم من استخدام العلاج بالإي كإم على نطاق واسع ، إلا أن وجود العديد من الاختلافات في هذه الطريقة يمكن أن يثير تساؤلات. يشير الفهم الحالي إلى أن مدى تلف البشرة قبل إعطاء المستضد قد يؤثر على طبيعة الاستجابة المناعية الناتجة21. يؤدي تلف البشرة السطحي إلى إطلاق السيتوكينات المضادة للالتهابات بواسطة خلايا لانجرهانز ، مما يفضل بدء استجابة Th222. في المقابل ، يعزز تلف البشرة الأكثر شمولا إطلاق السيتوكينات المؤيدة للالتهابات ويسهل توصيل المستضد إلى الخلايا المتغصنة الجلدية23. ويسلط البروتوكول المقدم الضوء على ما يلي: (أ) الاعتراف بالتحديات عند تطبيق هذه الطريقة على الصغيرة والنشطة، ولا سيما الفئران؛ (ب) والتعرف على التحديات التي تواجه هذه الطريقة في الصغيرة والنشطة، ولا سيما الفئران؛ (ب) والتحديات التي تواجه هذه الطريقة في مجال الصغيرة والنشطة، ولا سيما في (ب) النظر في عوامل مثل حالة الجلد بعد الحلاقة ، والتلامس السليم للمواد مع الجلد ، ووقت التعرض ، والظروف الصحية للجلد أثناء العلاج بالإي ك. من الأهمية بمكان مراعاة طريقة إزالة الشعر الجلدية ، سواء كانت فيزيائية أو كيميائية ، قبل تطبيق المستضد ، حيث يمكن أن تؤثر مستحضرات الجلد المختلفة على حالة الجلد بطرق مختلفة. من المسلم به أن كل هذه الإجراءات يمكن أن تنشط خلايا مناعة الجلد ، مما قد يؤدي إلى التهابات جلدية أو التأثير على تطور المرض. يجب أن تكون الآثار الجانبية المحتملة على الأمراض الجلدية بعد إزالة الشعر اعتبارا أساسيا عند اختيار طريقة إزالة الشعر. وصف الباحثون طريقة قمع المناعة بوساطة الخلايا التائية التي يتم إحداثها عن طريق تطبيق EC لمستضد على الجلد الظهري المحلوق بشفرة الحلاقة ، مما يدل على تأثيره على نماذج الفئران المختلفة للاستجابات المناعية. يحفز تطبيق EC للمستضد ، جنبا إلى جنب مع PAMPs ، خلايا المثبطة التائية الخاصة بالمستضد. علاوة على ذلك ، فإن الطريقة المقدمة لتطبيق EC ، خاصة مع التعرض المتكرر للمستضدات أو PAMPs ، لا تسبب آثارا جانبية مقلقة.

يؤكد البروتوكول الموصوف على أهمية العوامل المختلفة في تحقيق نتائج موثوقة وقابلة للتكرار بهذه الطريقة ، خاصة في الصغيرة مثل الفئران. عادة ما تؤدي الطبيعة غير الغازية لهذا النهج إلى انخفاض خطر التفاعلات السلبية (مثل الألم أو العدوى أو التندب) مقارنة بتقنيات التمنيع داخل الأدمة أو عن طريق الحقن. التمنيع فوق الجلد سهل الاستخدام ويسهل إعطاؤه في البيئات غير السريرية ، مما يحسن إمكانية الوصول والامتثال مقارنة بالطرق الأكثر توغلا.

الجدول 1: التعديل الناجم عن EC للاستجابة المناعية في نماذج مختلفة لأمراض الفئران. الاختصارات: ACD = التهاب الجلد التماسي التحسسي. AD = التهاب الجلد التأتبي. Ag = مستضد. وكالة المخابرات المركزية = التهاب المفاصل الناجم عن الكولاجين. CHS = فرط الحساسية التلامسية. CFA = مساعد فرويند كامل. COLL II = النوع الثاني من الكولاجين ؛ DNFB = 2،4-دينيتروفلوروبنزين ؛ DNP-BSA = ثنائي نيتروفينيل مترافق مع زلاليم مصل الأبقار. EAE = التهاب الدماغ والنخاع المناعي الذاتي التجريبي. EC = فوق الجلد. LPS = عديدات السكاريد الدهني. OVA = البيضاوalbumin. PAMP = النمط الجزيئي المرتبط بالعامل الممرض ؛ PC-BSA = عديد السكاريد المكورات الرئوية المترافق مع زلال مصل الأبقار ؛ Th1 = T مساعد نوع 1 الخلايا الليمفاوية; Tc1 = الخلايا الليمفاوية السامة للخلايا من النوع 1 ؛ TNCB = 2،4،6-ثلاثي نيتروكلورو بنزين; TNP-Ig = 2،4،6-ثلاثي نيتروفينيل الغلوبولين المناعي المترافق للفأر ؛ Ts = الخلايا المثبطة T ؛ Tcs = الخلايا المثبطة للتائية. الرجاء النقر هنا لتنزيل هذا الجدول.

الوصول مقيد. يرجى تسجيل الدخول أو بدء فترة تجريبية لعرض هذا المحتوى.

البروتوكول

تمت الموافقة على جميع التجارب المقدمة في هذه المقالة وإجراؤها وفقا لإرشادات اللجنة الأخلاقيةالمحلية 1 و 2 لاختبار في كراكوف ، بولندا. امتثلت الإجراءات للتوصيات المحلية ، لا سيما فيما يتعلق بإعطاء الكيتامين / الزيلازين أو الأيزوفلوران كمخدر ، وحلق جلد الفأر باستخدام شفرات الحلاقة ، ووضع المواد / الهابتن على الجلد المحلوق وجانبي الأذن ، وجمع أعضاء المناعة المحيطية. استخدمت الدراسة CBA / J (H-2k) من الذكور والإناث من الفئران ، تتراوح أعمارهم بين 6 و 12 أسبوعا ، وأوزان الجسم التي تتراوح من 20 إلى 25 جم. وترد تفاصيل الكواشف والمعدات المستخدمة في جدول المواد.

1. تحضير

  1. الفئران المنزلية معا. من المهم منع الآثار السلبية للعزلة على مزاجهم. للحصول على دلالة إحصائية ، استخدم 10-12 لكل مجموعة.

2. تجهيز منطقة التشغيل

  1. نظف طاولة العمليات بمحلول إيثانول بنسبة 70٪ قبل وبعد جميع الإجراءات. إذا كان استخدام الفئران يتطلب ظروفا معقمة ، فقم بإجراء جميع العمليات داخل خزانة السلامة الحيوية.

3. تحريض الخلايا المثبطة (Ts) لتفاعل CHS بوساطة Th1

ملاحظة: تم تصوير هذا الإجراء في الشكل 1 أ.

  1. في اليوم "0" تخدير الفئران بنسبة 30٪ من الأيزوفلوران في البروبيلين جلايكول. أمسك الماوس في اليد اليسرى ، وكشف الجانب الظهري من جسمه. باليد اليمنى ، رغوة الصابون الرمادي بالماء الغزير وتطبيقه على الجلد.
    1. باستخدام شفرة حلاقة معقمة ، احلق بلطف مساحة جلد 2 سم مربع. تجنب إصابة الجلد. ستؤدي أي آفات جلدية إلى استبعاد الفئران من الإجراءات الأخرى.
      ملاحظة: الصابون الرمادي منتج طبيعي ومضاد للحساسية مصنوع من قاعدة نباتية لطيفة. يجدد ويرطب البشرة الجافة والحساسة بشكل فعال. لا يحتوي هذا الصابون على أي ألوان صناعية أو عطور صناعية أو مكونات من أصل حيواني. تشمل المكونات بلمات الصوديوم ، نواة نخيل الصوديوم ، أكوا (ماء) ، الجلسرين ، مستخلص زهرة / أوراق / ساق المطرنعة (الهندباء) ، حمض النخيل ، حمض نواة النخيل ، كلوريد الصوديوم ، البروبيلين جلايكول ، رباعي الصوديوم EDTA ، حمض الإيتيدرونيك. تم تصميم الصابون الرمادي للبشرة الحساسة والحساسة المعرضة للتهيج والصدفية. ينظف البشرة التي تعاني من مشاكل بشكل فعال مع منع الجفاف المفرط والشعور بالضيق. يعمل هذا الصابون أيضا على تهدئة التهيج وترطيب البشرة ويعزز تجديد البشرة بشكل أسرع. الأهم من ذلك ، أنه لا يضر بالحاجز الواقي للبشرة.
  2. ضع الفئران في القفص. بعد الحلاقة ، انتظر ست ساعات على الأقل قبل تطبيق المستضد للسماح للجلد بالجفاف وتنظيفه من قبل.
  3. في اليوم "+1" ، قم بإعداد محلول 1 مجم / مل من مستضد 2،4،6-ثلاثي نيتروفينيل للجلوبولين المناعي المترافق للفأر (TNP-Ig) ، في محلول ملحي معقم مخزن بالفوسفات (DPBS). تحضير حجم مستضد 1200 ميكرولتر لعشرة فئران. امزج المحاليل قبل الاستخدام مباشرة في قارورة سعة 2 مل. قم بحماية TNP-Ig من الضوء عن طريق تغطية القارورة بورق الألمنيوم.
    ملاحظة: قم بتضمين مجموعة تحكم CHS من الفئران المعالجة بالمركبة فقط (DPBS) لتقييم التفاعلات الالتهابية غير المحددة الناتجة عن الحلاقة وتطبيق المذيب على البقعة المحلوقة. يجب استخدام نوع مختلف من المستضد لتحريض Ts لاختبار خصوصية المستضد. تم تحضير الغلوبولين المناعي للفأر (Ig) من مصل الفأر واقترانها مع TNP hapten (الملف التكميلي 1). تم استخدام مستحضر واحد بمستوى استبدال 40 TNP لكل جزيء Ig (TNP40-Ig) طوال24،25.
  4. في نفس اليوم ، قم بتخدير الفئران بنسبة 30٪ من الأيزوفلوران في البروبيلين جلايكول. ضع المستضد على البقعة المحلوقة مسبقا عن طريق وضع رقعة شاش مقاس 1 سم2 مبللة ب 100 ميكرولتر من المستضد (محضرة في الخطوة 3.3). قم بتغطيتها برقعة بلاستيكية رفيعة (2 سم مربع) وثبتها بشريط لاصق من القماش. في مجموعة تحكم CHS، قم بتطبيق DPBS فقط.
    ملاحظة: يمكن استخدام أكمام المستندات الشفافة 30 ميكرومتر للرقعة البلاستيكية. يجب أن يكون الشريط اللاصق للقماش قابلا للإزالة بسهولة ، ومرنا ، ويتوافق مع أشكال الجسم ، ويسمح بنفاذية الهواء وبخار الماء.
  5. في اليوم "+5" ، قم بتخدير الفئران بنسبة 30٪ من الأيزوفلوران في البروبيلين جلايكول. قم بقص الرقعة بعناية باستخدام مقص أمان بزوايا مستديرة ، ثم قم بإزالة الشريط اللاصق برفق. اسمح للفئران بالتحرك بحرية وتنظيف بشرتها بشكل طبيعي لمدة 4 ساعات على الأقل. إذا لزم الأمر ، احلق أي شعر متجدد في موقع تطبيق المستضد ، على الرغم من أن هذا غير مطلوب عادة.
    ملاحظة: قم بقص الشريط اللاصق فقط في منطقة إعطاء المستضد (الشاش والمنطقة البلاستيكية) ، حيث يلتصق بإحكام فقط عند حواف الضمادة. انتظر 4 ساعات على الأقل قبل تطبيق المستضد للسماح للجلد بالجفاف وتنظيفه من قبل.
  6. في اليوم "+5" ، كرر الخطوتين 3.3 والخطوة 3.4.
  7. في اليوم "+8" ، كرر الخطوة 3.5. يمثل هذا اكتمال تعرض الجلد للمستضد لمدة أسبوع. بعد هذه الفترة ، استخدم الفئران لاختبار قمع تفاعل CHS - في النماذج النشطة في الجسم الحي (الخطوة 6) أو القتل الرحيم لتكون بمثابة متبرعين بالخلايا Ts في "النقل بالتبني IN" (الخطوة 8) أو في "النقل بالتبني OUT" (الخطوة 9).

4. تحريض الخلايا التائية المثبطة (Tcs) لتفاعل CHS بوساطة Th1

ملاحظة: هذا الإجراء موضح في الشكل 1 ب.

  1. في اليوم "0" ، قم بتنفيذ الخطوات 3.1-3.2.
  2. في اليوم "+1" ، قم بإعداد خليط من 100 ميكروغرام من مستضد TNP-Ig و 100 ميكروغرام LPS (مثال على PAMP) في 100 ميكروغرام من DPBS. قم بإعداد المحلول مباشرة قبل الاستخدام في قارورة سعة 2 مل وحمايته من الضوء عن طريق لف القارورة بورق الألمنيوم إذا كان المستضد حساسا للضوء.
    ملاحظة: لتقييم موانع التثبيط (عكس التثبيط الناجم عن الجلد) ، يجب تضمين عنصر تحكم في التثبيط (مجموعة التحكم Ts) ، حيث يتم علاج الفئران فقط بمستضد TNP-Ig. علاوة على ذلك ، يجب تضمين الفئران التي عولجت فقط ب DPBS (تحكم CHS) و LPS وحدها (تحكم PAMP) لتحديد مدى التعديل غير المحدد للاستجابات المناعية. LPS هو مثال على الجسيمالمنبه للمناعة 26. تعتمد الخصائص المحددة لأي محفز مناعي على نموذج الفأر المستخدم ، وأنواع الخلايا المناعية المشاركة في الاستجابة المناعية التي تتم دراستها ، والحركية الدوائية للمواد قيد التحقيق.
  3. في نفس اليوم ، قم بتخدير الفئران بنسبة 30٪ من الأيزوفلوران في البروبيلين جلايكول. ضع رقعة شاش مقاس 1 سم2 على الجلد المحلوق السابق ، مشبعة بمحلول يحتوي على 100 ميكرولتر من الخليط (محضر في الخطوة 4.2). قم بتأمين الشاش برقعة بلاستيكية رقيقة (2 سم²) وقم بتثبيته في مكانه باستخدام جص لاصق من القماش. في مجموعات التحكم ، قم بتطبيق DPBS (تحكم CHS) أو LPS (تحكم PAMP) ، أو TNP-Ig وحده (مجموعة التحكم Ts).
    ملاحظة: يمكن استخدام أكمام المستندات الشفافة 30 ميكرومتر للرقعة البلاستيكية. يجب أن يكون الشريط اللاصق للقماش قابلا للإزالة بسهولة ، ومرنا ، ويتوافق مع أشكال الجسم ، ويسمح بنفاذية الهواء وبخار الماء.
  4. في اليوم "+5" ، قم بتنفيذ الخطوة 3.5.
  5. في اليوم "+5" ، كرر الخطوات 4.2-4.3.
  6. في اليوم "+8" ، كرر الخطوة 3.5. انتهى أسبوع من تعرض الجلد للمستضد الممزوج ب LPS. بعد هذه الفترة ، اختبر الفئران في تفاعل CHS - في النماذج النشطة في الجسم الحي (الخطوة 6) ، أو القتل الرحيم لتكون بمثابة متبرعين لخلايا Tcs في "نقل التبني OUT" (الخطوة 10).

5. تحريض الخلايا المستجيبة التائية (Teff) لتفاعل CHS بوساطة Th1 (مرحلة التحسس ل CHS)

  1. في اليوم "0" ، احلق صدر وبطن الفئران (مساحة 2 × 2 سم) باستخدام صابون رمادي بالماء متبوعا بشفرة حلاقة. اترك الجلد يرتاح لمدة 6 ساعات قبل وضع الهابتين لضمان عدم وجود تهيج.
  2. في نفس اليوم ، قبل الاستخدام مباشرة ، قم بإعداد محلول الهبتين (5٪) في قارورة زجاجية وقم بتغطيته بورق الألمنيوم لحمايته من الضوء: 2،4،6-ثلاثي نيتروكلورو بنزين (TNCB) في خليط الأسيتون والإيثانول (نسبة 1: 3).
  3. في نفس اليوم ، قم بتوعية الفئران عن طريق تطبيق 150 ميكرولتر من الهابتين على البقعة المحلوقة مسبقا. ضع السيارة بمفردها (خليط الأسيتون والإيثانول) في مجموعة التحكم السلبية لتقييم التفاعل الالتهابي غير المحدد. قبل إعادة إلى القفص ، انتظر 30 ثانية للسماح للجلد بالجفاف.
    تنبيه: استخدم القفازات. يسبب TNCB ردود فعل تحسسية شديدة لدى معظم الأشخاص.

6. النموذج النشط: اختبار خلايا Ts أو Tcs في CHS بوساطة Th1

ملاحظة: تم تصوير هذا الإجراء في الشكل 2.

  1. قم بتحفيز خلية Ts أو Tcs باتباع الخطوة 3 والخطوة 4. سيستمر هذا الإجراء من اليوم "0" حتى اليوم "+8".
  2. في اليوم "+8" ، ابدأ في تحفيز خلايا التيف باتباع الخطوة 5.
  3. بعد أربعة أيام ، قم بتقييم استجابة CHS من خلال إجراء مرحلة الاستنباط (التحدي). باختصار ، ضع TNCB على جانبي الأذنين. ثم حدد سمك الأذنين عن طريق قياسها بميكرومتر. تم الإبلاغ عن وصف مفصل لهذا الاختبار ونقاط النهاية المحتملة الأخرى في مكان آخر (Zemelka-Wiacek M. et al.27).

7. عزل خلايا Teff أو Ts أو Tcs من الفئران المانحة

  1. عقم طاولة العمليات بمحلول إيثانول بنسبة 70٪ قبل وبعد كل إجراء. قم بإجراء جميع الإجراءات داخل خزانة السلامة الحيوية للحفاظ على العقم واستخدام الأدوات المعقمة. لعزل خلايا T و Tcs و Teff في اليوم "+8" ، استخدم الفئران المحصنة بالإي كفوريتي الموصوفة في الخطوات 3 و 4 و 5 على التوالي.
    ملاحظة: الالتزام بنسبة المتبرع إلى المستلم 1: 1.
  2. تخدير المتبرعين بحقن داخل الصفاق (IP) لخليط من الكيتامين (90-120 مجم / كجم) والزيلازين (5-10 مجم / كجم). تأكد من تخدير الماوس بالكامل لمدة 5 دقائق على الأقل.
  3. تطهير منطقة البطن بالكامل من الفأر المخدر ب 70٪ إيثانول ، ثم شق طبقة البطن (3-4 سم) لكشف التجويف البريتوني. عزل الغدد الليمفاوية المساعدة والإربية (ALNs) والطحال (SPL) بالملقط المعقم في أنابيب مملوءة ب DPBS المعقم الذي يتم استكماله بمصل بقري الجنين بنسبة 1٪ (FBS). قم بتجميع ALNs من جميع المتبرعين في قارورة واحدة و SPLs في أخرى واحتفظ بالقوارير على الجليد. تحتوي كل إبط على عقدتين ليمفاوتين إبطيتين، بينما توجد عقدة ليمفاوية إربية واحدة في منطقة الورك المجاورة لثلاثة أوعية دموية. يتم وضع SPLs على الجانب الأيسر من الجسم ، خلف الأمعاء والمعدة.
    ملاحظة: اعمل باستخدام أدوات معقمة أسفل خزانة السلامة الحيوية للحفاظ على ظروف معقمة. بعد هذا الإجراء ، يجب القتل الرحيم للفئران باتباع البروتوكولات المعتمدة مؤسسيا.
    1. اهرسي الأنسجة بين الأطراف المتجمدة لشريحتين مجهريتين. صفي معلق الخلية من خلال مصفاة خلية بحجم مسام 70 ميكرومتر.
  4. اشطف الخلايا ب 30 مل من DPBS مكمل بنسبة 1٪ FBS. جهاز طرد مركزي عند 300 × جم لمدة 10 دقائق عند 4 درجات مئوية. قم بإزالة المادة الطافية وإعادة تعليق حبيبات الخلية في 1-5 مل من DPBS.
  5. احسب صلاحية الخلية باستخدام مقياس كثافة الدم و Trypan Blue. امزج 10 ميكرولتر من تعليق الخلية مع 90-990 ميكرولتر من Trypan Blue ، واضبط مستوى الصوت بناء على عدد الخلايا. قم بدمج عامل التخفيف هذا في حساب الجدوى.
  6. تحضير خليط من ALNs و SPLs (نسبة 1: 1). التزم بعدد الخلايا: استخدم 1 حتى 5 × 107 خلايا Ts أو Tcs لكل مستلم في 1 مل من DPBS مكملة ب 1٪ FBS و 7 × 107 خلايا Teff / مستلم في 1 مل من DPBS. حافظ على نسبة المتبرع إلى المتلقي لجميع مجموعات الخلايا 1: 1 وكذلك نسبة المتبرع إلى DPBS 1: 1. احتفظ بالقوارير مع الخلايا على الجليد.
    ملاحظة: يتطلب تنفيذ المزيد من التجارب في المختبر زيادة متناسبة في عدد المتبرعين بالخلايا.
    ملاحظة: بالإضافة إلى ذلك ، يمكن أن تخضع خلايا Teff و Ts و Tcs المعزولة لتنقية أو تحليلات إضافية باستخدام قياس التدفق الخلوي ، مثل التنميط الظاهري أو تقييم إفراز السيتوكين. من الممكن أيضا بدء مزارع الخلايا لاستكشاف قدرة تكاثر الخلايا أو تحديد مستويات السيتوكين في المواد الطافية المزروعة. يتطلب إجراء المزيد من التجارب زيادة متناسبة في عدد المتبرعين بالخلايا.

8. نقل التبني في: اختبار Ts في CHS بوساطة Th1

ملاحظة: تم تصوير هذا الإجراء في الشكل 3. اعمل معقما واستخدم محلول الإيثانول بنسبة 70٪ قبل وبعد كل إجراء. تأكد من إجراء جميع عمليات الخلايا داخل خزانة السلامة الحيوية للحفاظ على العقم واستخدام أدوات معقمة.

  1. تحفيز وعزل الخلايا التائية (المتبرعين) باتباع الخطوة 3 والخطوة 7. اشطف الخلايا ب 30 مل من DPBS. جهاز طرد مركزي عند 300 × جم لمدة 10 دقائق عند 4 درجات مئوية. قم بإزالة المادة الطافية وإعادة تعليق حبيبات الخلية في 200 ميكرولتر من DPBS لكل متلقي (نسبة المتبرع إلى المتلقي 1: 1).
  2. المتلقين (الفئران الزاكنة الساذجة): تخدير المتلقين بحقن داخل الصفاق (IP) من خليط من الكيتامين (90-120 مجم / كجم) والزيلازين (5-10 مجم / كجم). تأكد من تخدير الماوس بالكامل لمدة 5 دقائق على الأقل.
  3. إعطاء حقنة وريدية (IV) لخليط محضر من 1-5 × 107 خلايا Ts (الخطوة 8.2) في 200 ميكرولتر في المتلقي المخدر.
  4. في نفس اليوم ، قم بتحفيز تفاعل CHS بوساطة Th1. باختصار ، قم بتحفيز خلية تيف (مرحلة التحسس) الموضحة في الخطوات 5.1-5.3). بعد أربعة أيام ، قم بتقييم استجابة CHS من خلال إجراء مرحلة الاستنباط (التحدي) الموضحة في الخطوة 6.3.

9. نقل التبني OUT: اختبار Ts في CHS بوساطة Th1

  1. تحفيز وعزل الخلايا Ts و Teff (المتبرعون) باتباع الخطوات 3 و 5 و 7. احتفظ ب Ts و Teff المعزولين في قارورتين منفصلتين. قسم خلايا Teff إلى قارورتين: واحدة ل "مجموعة اختبار Ts" والأخرى ل "تحكم CHS".
    ملاحظة: اعمل معقما واستخدم محلول الإيثانول بنسبة 70٪ قبل وبعد كل إجراء. تأكد من إجراء جميع عمليات الخلايا داخل خزانة السلامة الحيوية للحفاظ على العقم واستخدام أدوات معقمة. قم بتضمين مجموعة تحكم من المتلقين الذين سيتم إعطاء خلايا Teff لهم فقط ("تحكم CHS"). وبالنسبة لهذه المجموعة، ينبغي استخدام متبرعين إضافيين للالتزام بنسبة المتبرعين إلى المتلقين البالغة 1:1. لتحسين جودة النتائج ، يجب إضافة المتلقين الذين يتلقون خلايا تحكم منقولة من المتبرعين المعالجين بالإي الأوروبي بمحلول مذيب. يجب التخطيط بعناية لقرار إضافة أي مجموعة إضافية من المستفيدين والمتبرعين ، لأن هذا النهج يتطلب العديد من الفئران ، والتي لا تتوافق مع مبدأ 3Rs (تقليل ، صقل ، استبدال).
  2. أضف خلايا Ts إلى خلايا Teff ل "مجموعة اختبار Ts". أضف DPBS كافيا إلى خلايا Teff في قارورة "تحكم CHS".
    ملاحظة: احتفظ بعدد خلايا Ts من 1 إلى 5 × 107 خلايا Ts و 7 × 107 خلايا Teff لكل مستلم.
  3. اخلطي جميع القوارير برفق. احتفظ بالقوارير في الحمام المائي (37 درجة مئوية) لمدة 30 دقيقة ، واخلطها برفق كل 5 دقائق.
  4. اشطف كل قارورة من الخلايا ب 30 مل من DPBS مكمل بنسبة 1٪ FBS. جهاز طرد مركزي عند 300 × جم لمدة 10 دقائق عند 4 درجات مئوية. صب المادة الطافية وإعادة تعليق حبيبات الخلايا في 200 ميكرولتر من DPBS / المتلقي.
  5. مرر كل معلق خلية من خلال مصفاة خلية مسام 70 ميكرومتر. إذا لزم الأمر ، اضبط مستوى صوت 200 ميكرولتر من DPBS / المستلم.
  6. المتلقين (الفئران الزاكنة الساذجة): تخدير المتلقين بحقن داخل الصفاق (IP) من خليط من الكيتامين (90-120 مجم / كجم) والزيلازين (5-10 مجم / كجم). تأكد من تخدير الماوس بالكامل لمدة 5 دقائق على الأقل.
  7. إعطاء حقنة وريدية (IV) للخلايا المحضرة.
  8. في نفس اليوم ، قم بتحفيز مرحلة استنباط CHS (التحدي) الموضحة في الخطوة 6.3. قم بتضمين "التحكم السلبي" ، حيث تحدى السلوك CHS فقط.

10. نقل التبني OUT: اختبار Tcs في CHS بوساطة Th1

  1. تحفيز وعزل خلايا Ts و Tcs و Teff (المتبرعون) باتباع الخطوات 3-5 والخطوة 7.
    ملاحظة: اعمل معقما واستخدم محلول الإيثانول بنسبة 70٪ قبل وبعد كل إجراء. تأكد من إجراء جميع عمليات الخلايا داخل خزانة السلامة الحيوية للحفاظ على العقم واستخدام أدوات معقمة. قم بتضمين مجموعتين تحكميتين من المتلقين: "تحكم CHS" حيث سيتم إعطاء خلايا Teff فقط و "تحكم Ts" حيث سيتم تحضين خلايا Teff فقط بخلايا Ts. بالنسبة لهذه المجموعات ، استخدم مانحين إضافيين للالتزام بنسبة المتبرع إلى المتلقي البالغة 1: 1.
  2. احتفظ بخلايا Ts و Tcs المعزولة في قوارير منفصلة. قسم خلايا Teff إلى ثلاث قوارير: واحدة ل "مجموعة اختبار Tcs" ، وواحدة ل "تحكم Ts" ، وواحدة ل "تحكم CHS".
  3. الحضانة الأولى: بالنسبة إلى (أ) "مجموعة اختبار Tcs" ، أضف خلايا Tcs إلى خلايا Teff. بالنسبة إلى (ب) "التحكم Ts" و (ج) "تحكم CHS" ، أضف كمية كافية من DPBS إلى خلايا Teff (انظر الجدول 2).
    ملاحظة: احتفظ بعدد خلايا 1-5 × 107 Tcs و 7 × 107 خلايا Teff لكل مستلم.
  4. اخلطي جميع القوارير برفق. يحفظ في الحمام المائي (37 درجة مئوية) لمدة 30 دقيقة ، ويخلط برفق كل 5 دقائق.
  5. اشطف كل قارورة من الخلايا ب 30 مل من DPBS مكمل بنسبة 1٪ FBS. جهاز طرد مركزي عند 300 × جم لمدة 10 دقائق عند 4 درجات مئوية. صب المادة الطافية وإعادة تعليق حبيبات الخلايا في 1 مل من DPBS مكملة بنسبة 1٪ FBS لكل متلقي. حافظ على نسبة خليط الخلية و DPBS 1: 1.
  6. الحضانة الثانية: بالنسبة ل (أ) "مجموعة اختبار Tcs" ، أضف خلايا Ts إلى خليط خلايا Teff و Tcs المحتضنة مسبقا. بالنسبة إلى (ب) "تحكم Ts" ، أضف خلايا Ts إلى خليط خلايا Teff المحتضنة مسبقا مع DPBS. بالنسبة ل (ج) "تحكم CHS" ، أضف DPBS كافيا إلى خلايا Teff المحتضنة مسبقا.
    ملاحظة: احتفظ بعدد خلايا 1-5 × 107 T لكل مستلم. إجراء حضانات عبر جميع المجموعات التجريبية (أ ، ب ، ج) لضمان التوحيد في فقدان الخلايا أثناء إجراءات الغسيل والطرد المركزي.
  7. اخلطي جميع القوارير برفق. يحفظ في الحمام المائي (37 درجة مئوية) لمدة 30 دقيقة ، ويخلط برفق كل 5 دقائق.
  8. اشطف كل قارورة من الخلايا ب 30 مل من DPBS. جهاز طرد مركزي عند 300 × جم لمدة 10 دقائق عند 4 درجات مئوية. صب المادة الطافية وإعادة تعليق حبيبات الخلايا في 200 ميكرولتر من DPBS / المتلقي.
  9. مرر كل معلق خلية من خلال مصفاة خلية مسام 70 ميكرومتر. إذا لزم الأمر ، اضبط مستوى صوت 200 ميكرولتر من DPBS / المستلم.
  10. المتلقين (الفئران الزاكنة الساذجة): تخدير المتلقين بحقن داخل الصفاق (IP) من خليط من الكيتامين (90-120 مجم / كجم) والزيلازين (5-10 مجم / كجم). تأكد من تخدير الماوس بالكامل لمدة 5 دقائق على الأقل.
  11. إعطاء حقنة وريدية (IV) للخلايا المحضرة.
  12. في نفس اليوم ، قم بتحفيز مرحلة استنباط CHS (التحدي) الموضحة في الخطوة 6.3. قم بتضمين "التحكم السلبي" ، حيث تحدى السلوك CHS فقط.

الجدول 2: الجدول الزمني لحضانات الخلايا أثناء "نقل الخارج" من Tcs. الرجاء النقر هنا لتنزيل هذا الجدول.

الوصول مقيد. يرجى تسجيل الدخول أو بدء فترة تجريبية لعرض هذا المحتوى.

النتائج

تبحث هذه الدراسة ما إذا كانت المستضدات المطبقة عبر الجلد وحده أو جنبا إلى جنب مع PAMP يمكن أن تحفز خلايا Ts أو Tcs ، على التوالي ، والتي تعدل تفاعل CHS. يؤدي تحصين الفئران CBA / J عبر EC باستخدام 100 ميكروغرام من TNP-Ig أو TNP-Ig بالإضافة إلى 100 ميكروغرام من LPS إلى تحفيز خلايا Ts أو Tcs ، على التوالي. ثم تم توعية الفئران بنسبة 5٪ من TNCB وتم تحديها بنفس الهابيتن بعد 4 أيام. تم تقييم التفاعل عن طريق قياس تورم الأذن قبل التحدي وبعده. كل تجربة لها تحكم سلبي ، والذي يستخد...

الوصول مقيد. يرجى تسجيل الدخول أو بدء فترة تجريبية لعرض هذا المحتوى.

المناقشة

أجريت التحقيقات على العديد من النماذج الحيوانية المختلفة وباستخدام العديد من سلالات الفئران مثل BALB / c و C57BL / 6 و HLADR4-Tg و DBA 1 و B10.PL و SJL تثبت أن تحصين EC بمستضد معين يمكن أن يكون بمثابة وسيلة متعددة الاستخدامات وربما غير محدودة لخلق التسامح والتحكم في الاستجابات المناعية غير المرغوب فيها. يحدد البروتوكول الحالي نموذجين لنقل الخلايا: (1) "النقل بالتبني" ، وهو أمر مفيد لتقييم التعديل المناعي خلال كل من المرحلتين الواردة والصادرة من CHS ، و (2) "النقل بالتبني OUT" ، والذي يقي...

الوصول مقيد. يرجى تسجيل الدخول أو بدء فترة تجريبية لعرض هذا المحتوى.

الإفصاحات

المؤلفون ليس لديهم ما يكشفون عنه.

شكر وتقدير

تم دعم هذه الدراسة من خلال منح من اللجنة البولندية لمنح البحث العلمي 3 PO5B 091 25 و 2PO5A 204 29 ومن المركز الوطني للعلوم N N401 3554 33 إلى MS. تم رسم الرسوم البيانية باستخدام برنامج GraphPad Prism 10.2.3 ، وتم إنشاء الأشكال 1-3 في BioRender. Zemelka-Wiacek، M. (2025): (1) https://BioRender.com/3ux2px ؛ (2) https://BioRender.com/s0y8zs7 ؛ (3) https://BioRender.com/0qziglw. يشكر المؤلفون دوروتا وزنياك على رعاية مستعمرات الفئران.

الوصول مقيد. يرجى تسجيل الدخول أو بدء فترة تجريبية لعرض هذا المحتوى.

المواد

قائمة المواد المستخدمة في هذه المقالة
الاسمالشركةرقم فهرسيالتعليقات
2,4,6-ترينيترو كلوروبينزين (TNCB)شركة طوكيو للصناعات الكيميائية المحدودة، اليابانC0307
2,4,6-ترينيتروفينيل-إيمنوغلوبولين الفئران (TNP-Ig)رئيس قسم العلوم الطبية الحيوية، كلية العلوم الصحية، كلية الطب بجامعة ياجيلونيان، كراكوف، بولندا
الأسيتون (كاشف ACS، &ge؛ 99.5%)ميرك KGaA، دارمشتات، ألمانيا179124
رقائق الألمنيومميرك KGaA، دارمشتات، ألمانياZ185140   
التوازن التحليلي  شركة سارتوريوس للوزن الفني ذ.م.ب، غوتينغن، ألمانياPRACTUM224-1، 29105177
مصل البقري الألبومين (BSA)ميرك KGaA، دارمشتات، ألمانياA9418
CBA/J (H-2k) وحدة التربية في كرسي العلوم الطبية الحيوية، كلية العلوم الصحية، كلية الطب بجامعة ياجيلونيان، كراكوف، بولندا
مصفاة خلية، حجم المسام 70 وحجم العضلة؛ mبيولوجيكس، الصين15-1070
سعة الماصات ذات الاستخدام الواحد: 5 مل، 10 مل، 25 ملميرك KGaA، دارمشتات، ألمانياZ740301، Z740302، Z740303
دولبيكو وبرايم؛ محلول ملحي مخزن بالفوسفات (DPBS)ثيرموفيشر ساينتفيك،  والثام، ماساتشوستس، الولايات المتحدة الأمريكية14190144
أنابيب القفل الآمن من إبندورف 1.5 ملإيبنفورف، ألمانيا30120086
أنابيب القفل الآمن من إبندورف، 2.0 ملإيبنفورف، ألمانيا30120094
الإيثانول 100٪ (الكحول المطلق)ميرك KGaA، دارمشتات، ألمانيا1.07017
الإيثانول 96٪ميرك KGaA، دارمشتات، ألمانيا1.59010
مصل الأبقار الجنيني (FBS)ثيرموفيشر ساينتفيك،  والثام، ماساتشوستس، الولايات المتحدة الأمريكيةA3160802
شرائح المجهر الزجاجي (مفردة مصنوعية بالرمل)ثيرمو ساينتيفيك، بورتسموث، نيو هامبشاير، الولايات المتحدة الأمريكية421-004T
منشور لوحة الرسم البيانيشركة جراف باد سوفتوير إنك.v. 10.2.3
صابون رمادي (صابون بيالي جيلين)Pollena Ostrzeszó و، إنتاج Chemii Gospodarczej Sp. Z.o.o. ، Sp. K.، بولندا163057
مقياس الدمVWR، أفانتور، الولايات المتحدة الأمريكية612-5719
الحاضنة هيراسيل 150iإلكترون الحراري  شركة LED GmbH، ألمانيا41071068
الإيزوفلوران (Aerrane)باكستر، ديرفيلد، إلينوي، الولايات المتحدة الأمريكية8AGG9623
كيتامين 100 ملغ/مل، محلول للحقنبيوويت بولاوي Sp. z o.o.، بولاوي، بولنداcat.# غير متاح
جهاز الطرد المركزي المختبري (Heraeus Fresco 21)ثيرمو ساينتيفيك، ألمانيا75002425
جهاز الطرد المركزي المختبري (Heraeus Megafuge 1.0R)  ثيرمو ساينتيفيك، ألمانياB00013899
عدادة السكريات الدهنية (LPS)ميرك KGaA، دارمشتات، ألمانياL-8274
القناع (FFP2)VWR، رادنور، بنسلفانيا، الولايات المتحدة111-0917
الميكرومترميتوتويو، طوكيو، اليابان193-111
مجهر مع أهدافشركة لايكا مايكروسسٹمز CMS GmbH، ألمانياDM1000، 294011-082007
البروبيلين غليكول  تشيمبور، بيكاري figure-materials-1 بولندا114489005
شفرة الحلاقةVWR، رادنور، بنسلفانيا، الولايات المتحدةPERS94-0462
أغلفة الوثائق الشفافة 30 وميكرو؛ mشيمات5906961126542
ترايبان بلوميرك KGaA، دارمشتات، ألمانياT8154
أنابيب 15 مل معقمةميرك KGaA، دارمشتات، ألمانياCLS430055 (كورنينيغ)
أنابيب 50 مل، معقمةميرك KGaA، دارمشتات، ألمانياCLS430290 (كورنينغ)
قوارير، غطاء لولبي، زجاج شفاف (قارورة فقط) 22 ملميرك KGaA، دارمشتات، ألمانيا27173
فيسكوبلاست بولوفيس، لاصق حرير، 5x0.0125م3M بولندا، نادارزين، بولندا7100231620
حمام الماء  AJL إلكترونيك، بولنداLW102
زيلازين (زيلابان 20 ملغ/مل) محلول للحقنفيتوكينول بيوويت Sp. z o.o.، غورزو فيلكوبولسكي، بولنداcat.# غير متاح

المراجع

  1. Szczepanik, M., Majewska-Szczepanik, M. Transdermal immunotherapy: Past, present and future. Pharmacol Rep. 68 (4), 773-781 (2016).
  2. Majewska-Szczepanik, M., et al. Epicutaneous immunization with hapten-conjugated protein antigen alleviates contact sensitivity mediated by three different types of effector cells. Pharmacol Rep. 64 (4), 919-926 (2012).
  3. Majewska, M., et al. Role of TLR ligands in epicutaneously induced contrasuppression. Pharmacol Rep. 61 (3), 539-549 (2009).
  4. Ptak, W., et al. Toll-like receptor ligands reverse suppression of contact hypersensitivity reactions induced by epicutaneous immunization with protein antigen. Int Arch Allergy Immunol. 139 (3), 188-200 (2006).
  5. Szczepanik, M., et al. Epicutaneous immunization induces alphabeta T-cell receptor CD4 CD8 double-positive non-specific suppressor T cells that inhibit contact sensitivity via transforming growth factor-beta. Immunology. 115 (1), 42-54 (2005).
  6. Majewska-Szczepanik, M., Zemelka-Wiącek, M., Ptak, W., Wen, L., Szczepanik, M. Epicutaneous immunization with DNP-BSA induces CD4+ CD25+ Treg cells that inhibit Tc1-mediated CS. Immunol Cell Biol. 90 (8), 784-795 (2012).
  7. Zemelka-Wiącek, M., Majewska-Szczepanik, M., Ptak, W., Szczepanik, M. Epicutaneous immunization with protein antigen induces antigen-non-specific suppression of CD8 T cell mediated contact sensitivity. Pharmacol Rep. 64 (6), 1485-1496 (2012).
  8. Marcińska, K., Majewska-Szczepanik, M., Maresz, K. Z., Szczepanik, M. Epicutaneous Immunization with Collagen Induces TCRαβ Suppressor T Cells That Inhibit Collagen-Induced Arthritis. Int Arch Allergy Immunol. 166 (2), 121-134 (2015).
  9. Marcińska, K., et al. Epicutaneous (EC) immunization with type II collagen (COLL II) induces CD4(+) CD8(+) T suppressor cells that protect from collagen-induced arthritis (CIA). Pharmacol Rep. 68 (2), 483-489 (2016).
  10. Majewska, M., et al. Epicutaneous immunization with myelin basic protein protects from the experimental autoimmune encephalomyelitis. Pharmacol Rep. 59 (1), 74-149 (2007).
  11. Tutaj, M., Szczepanik, M. Epicutaneous (EC) immunization with myelin basic protein (MBP) induces TCRalphabeta+ CD4+ CD8+ double positive suppressor cells that protect from experimental autoimmune encephalomyelitis (EAE). J Autoimmun. 28 (4), 208-215 (2007).
  12. Majewska-Szczepanik, M., et al. Epicutaneous immunization with protein antigen TNP-Ig alleviates TNBS-induced colitis in mice. Pharmacol Rep. 64 (6), 1497-1504 (2012).
  13. Majewska, M., et al. TCRalphabeta + CD8+ and TCRgammadelta+ lymphocytes inhibit the capability of peritoneal macrophages to induce contact hypersensitivity. Folia Biol (Krakow). 57 (1-2), 23-27 (2009).
  14. Ptak, W., et al. Epicutaneous immunization with protein antigen in the presence of TLR4 ligand induces TCR alpha beta+CD4+ T contrasuppressor cells that reverse skin-induced suppression of Th1-mediated contact sensitivity. J Immunol. 182 (2), 837-850 (2009).
  15. Majewska-Szczepanik, M., Strzepa, A., Marcińska, K., Wen, L., Szczepanik, M. Epicutaneous immunization with TNP-Ig and Zymosan induces TCRαβ+ CD4+ contrasuppressor cells that reverse skin-induced suppression via IL-17A. Int Arch Allergy Immunol. 164 (2), 122-136 (2014).
  16. Majewska-Szczepanik, M., Dorożyńska, I., Strzępa, A., Szczepanik, M. Epicutaneous immunization with protein antigen TNP-Ig and NOD2 ligand muramyl dipeptide (MDP) reverses skin-induced suppression of contact hypersensitivity. Pharm Rep. 66 (1), 137-142 (2014).
  17. Majewska-Szczepanik, M., Askenase, P. W., Lobo, F. M., Marcińska, K., Wen, L., Szczepanik, M. Epicutaneous immunization with ovalbumin and CpG induces TH1/TH17 cytokines, which regulate IgE and IgG2a production. J Allergy Clin Immunol. 138 (1), 262-273 (2016).
  18. Majewska-Szczepanik, M., Yamamoto, N., Askenase, P. W., Szczepanik, M. Epicutaneous immunization with phosphorylcholine conjugated to bovine serum albumin (PC-BSA) and TLR9 ligand CpG alleviates pneumococcal pneumonia in mice. Pharmacol Rep. 66 (4), 570-575 (2014).
  19. Tan, G., et al. Hydration effects on skin microstructure as probed by high-resolution cryo-scanning electron microscopy and mechanistic implications to enhanced transcutaneous delivery of biomacromolecules. J Pharm Sci. 99 (2), 730-740 (2010).
  20. Mondoulet, L., et al. Epicutaneous immunotherapy on intact skin using a new delivery system in a murine model of allergy. Clin Exp Allergy. 40 (4), 659-667 (2010).
  21. Strid, J., Hourihane, J., Kimber, I., Callard, R., Strobel, S. Disruption of the stratum corneum allows potent epicutaneous immunization with protein antigens resulting in a dominant systemic Th2 response. Eur J Immunol. 34 (8), 2100-2109 (2004).
  22. Callard, R. E., Harper, J. I. The skin barrier, atopic dermatitis and allergy: a role for Langerhans cells. TRENDS Immunol. 28 (7), 294-298 (2007).
  23. Eidsmo, L., Martini, E. Human Langerhans Cells with Pro-inflammatory Features Relocate within Psoriasis Lesions. Front Immunol. 22 (9), 300(2018).
  24. McKinney, M. M., Parkinson, A. A simple, non-chromatographic procedure to purify immunoglobulins from serum and ascites fluid. J Immunol Methods. 96 (2), 271-278 (1987).
  25. Methods in Immunology and Immunochemistry by: Curtis A Williams Merrill W. Chase vol. 2 Physical and chemical methods. , Academic Press. Now York. 359(1968).
  26. Wang, G., Wang, Y., Ma, F. Exploiting bacterial-origin immunostimulants for improved vaccination and immunotherapy: current insights and future directions. Cell Biosci. 14 (1), 24(2024).
  27. Zemelka-Wiacek, M., Majewska-Szczepanik, M., Gajdanowicz, P., Szczepanik, M. Contact Hypersensitivity as a murine model of allergic contact dermatitis. J Vis Exp. 26 (187), e64329(2022).
  28. Thomas, W. R., Watkins, M. C., Asherson, G. L. Differences in the ability of T cells to suppress the induction and expression of contact sensitivity. Immunology. 42 (1), 53-59 (1981).
  29. Walczak, A., Siger, M., Ciach, A., Szczepanik, M., Selmaj, K. Transdermal application of myelin peptides in multiple sclerosis treatment. JAMA Neurol. 70 (9), 1105-1109 (2013).
  30. Juryńczyk, M., et al. Immune regulation of multiple sclerosis by transdermally applied myelin peptides. Ann Neurol. 68 (5), 593-601 (2010).
  31. Beaujean, M., et al. The immunological effects of intradermal particle-based vaccine delivery using a novel microinjection needle studied in a human skin explant model. Vaccine. 41 (13), 2270-2279 (2023).
  32. Prins, M. L. M., Prins, C., de Vries, J. J. C., Visser, L. G., Roukens, A. H. E. Establishing immunogenicity and safety of needle-free intradermal delivery by nanoporous ceramic skin patch of mRNA SARS-CoV-2 vaccine as a revaccination strategy in healthy volunteers. Virus Res. 334, 199175(2023).
  33. Brough, H. A., et al. Epicutaneous sensitization in the development of food allergy: What is the evidence and how can this be prevented. Allergy. 75 (9), 2185-2205 (2020).
  34. Paris, J. L., Vora, L. K., Torres, M. J., Mayorga, C., Donnelly, R. F. Microneedle array patches for allergen-specific immunotherapy. Drug Discov Today. 28 (5), 103556(2023).
  35. Bartnikas, L. M., et al. Epicutaneous sensitization results in IgE-dependent intestinal mast cell expansion and food-induced anaphylaxis. J Allergy Clin Immunol. 131 (2), 451-460 (2013).
  36. Leyva-Castillo, J. M., et al. Mechanical skin injury promotes food anaphylaxis by driving intestinal mast cell expansion. Immunity. 50 (5), 1262-1275 (2019).
  37. Amberg, N., Holcman, M., Stulnig, G., Glitzner, E., Sibilia, M. Effects of depilation methods on imiquimod-induced skin inflammation in mice. J Invest Dermatol. 137 (2), 528-531 (2017).
  38. He, X., Jia, L., Zhang, X. The effect of different preoperative depilation ways on the healing of wounded skin in mice. MDPI Animals. 12 (5), 581(2022).
  39. Liu, I. -L., Wang, L. -F. Epicutaneous sensitization with protein antigen. Dermatol Sinica. 30, 154-159 (2012).
  40. Zemelka-Wiącek, M., Majewska-Szczepanik, M., Pyrczak, W., Szczepanik, M. Complementary methods for contact hypersensitivity (CHS) evaluation in mice. J Immunol Methods. 387 (1-2), 270-275 (2013).
  41. Majewska-Szczepanik, M., et al. Obesity aggravates contact hypersensitivity reaction in mice. Contact Dermatitis. 87 (1), 28-39 (2022).
  42. SanMiguel, A. J., Meisel, J. S., Horwinski, J., Zheng, Q., Grice, E. A. Topical antimicrobial treatments can elicit shifts to resident skin bacterial communities and reduce colonization by Staphylococcus aureus competitors. Antimicrob Agents Chemother. 61 (9), e00774-e00817 (2017).
  43. Strzępa, A., Majewska-Szczepanik, M., Lobo, F. M., Wen, L., Szczepanik, M. Broad spectrum antibiotic enrofloxacin modulates contact sensitivity through gut microbiota in a murine model. JACI. 140 (1), 121-133.e3 (2017).
  44. Meisel, J. S., et al. Commensal microbiota modulate gene expression in the skin. Microbiome. 6 (1), 20(2018).
  45. Arildsen, A. W., Zachariassen, L. F., Krych, L., Hansen, A. K., Hansen, C. H. F. Delayed gut colonization shapes future allergic responses in a murine model of atopic dermatitis. Front Immunol. 12, 650621(2021).
  46. Griffin, M. F., desJardins-Park, H. E., Mascharak, S., Borrelli, M. R., Longaker, M. T. Understanding the impact of fibroblast heterogeneity on skin fibrosis. Disease Models & Mechanisms. 13 (6), dmm044164(2020).
  47. Majewska-Szczepanik, M., Strzępa, A., Marcińska, K., Szczepanik, M. Epicutaneous immunization with TNP-Ig antigen induces CD11c+IL-10+ dendritic cells that promote suppression of Th1-mediated contact hypersensitivity in humanized HLA-DR4 transgenic mice. Int Immunopharmacol. 119, 110281(2023).

الوصول مقيد. يرجى تسجيل الدخول أو بدء فترة تجريبية لعرض هذا المحتوى.

إعادة الطباعة والأذونات

الوسوم

التمنيع عبر الجلدبروتوكول التعديل المناعيفرط الحساسية التلامسيةالخلايا التائية الكابتةالخلايا التائية المؤثرةالنقل التبنيمناعة الجلدالتهاب الجلد التماسي التحسسيالأنماط الجزيئية المرتبطة بمسببات الأمراض
نموذج الفئران للتعديل المناعي الناجم عن طول الجلد
تواصل معنا
أوصِ به للمكتبة

الخصوصية

شروط الاستخدام

السياسات

حقوق الطبع والنشر © 2026 MyJoVE Corporation. جميع الحقوق محفوظة.