مقالة منهجية

إجراء الزرع الجراحي وتكوين الأسلاك للمراقبة المستمرة لمخطط كهربية الدماغ / تخطيط القلب على المدى الطويل في الأرانب

1.4K مشاهدات

⸱

DOI:

10.3791/67620

⸱

يناير 24, 2025

 ,  ,  ,  ,  , 
1Norton College of Medicine, SUNY Upstate Medical University, 2Department of Pharmacology, SUNY Upstate Medical University, 3Department of Medicine-Cardiology, SUNY Upstate Medical University

* These authors contributed equally

في هذه المقالة

ملخص

تحدد الدراسة بروتوكولا لتصميم وتصنيع ووضع نظام تسجيل جديد مستمر لمخطط كهربية الدماغ / تخطيط القلب في الأرانب. يسمح هذا النظام السلكي بتسجيلات مستمرة لمخطط كهربية الدماغ / تخطيط القلب من تسعة أقطاب كهربائية متميزة على الرأس والصدر ، مما يسهل التقييمات الشاملة للنشاط الكهربائي في الدماغ والقلب.

الملخص

يسهل النهج متعدد الأنظمة الذي يتضمن الجمع المستمر لتسجيلات مخطط كهربية الدماغ (EEG) ومخطط كهربية القلب (ECG) تقييما شاملا للنشاط الكهربائي في الدماغ والقلب ، لا سيما قبل الأحداث العرضية المحيطة بها. بناء على بروتوكولنا السابق الذي يسهل جمع تسجيلات مخطط كهربية الدماغ / تخطيط القلب المتقطعة من الأرانب المقيدة الواعية ، قمنا بتطوير بروتوكول لجمع تسجيلات مخطط كهربية الدماغ / تخطيط القلب المستمرة من الأرانب غير المقيدة. تتيح هذه الطريقة الجديدة تسجيلات عالية الجودة 24/7 في قفص السكن ، والتي تلتقط النطاق الطبيعي للحالات الفسيولوجية وتمكن الأرانب من الحركة والأكل والشرب والنوم بحرية. يتيح إجراء تقييمات شاملة لانتشار وحدوث وقابلية تشوهات مخطط كهربية الدماغ / تخطيط القلب والنوبات وعدم انتظام ضربات القلب والموت المفاجئ. يتضمن هذا الإجراء التنسيب الجراحي للأقطاب الكهربائية تحت الجلد وتصميم وتصنيع نظام أسلاك قوي منيع للتلف الذي تسببه الأرانب. يتضمن الإجراء الجراحي شقين ونفق تحت الجلد لتسعة أقطاب كهربائية وأسلاك تخرج من منفذ مخصص. يتم توصيل الموصل الخارجي بحزام سلكي يتضمن دوار كهربائي ، مما يسمح بنطاق حر لحركة الأرانب في جميع أنحاء قفصه. بالإضافة إلى ذلك ، يتم وضع الأسلاك في غلاف معدني معلق بواسطة كابل ضام من سقف قفص الأرنب. ثم يتم توصيل الأسلاك بمكبر للصوت / محول رقمي للحصول على تسجيلات EEG / ECG المستمرة عالية الجودة.

المقدمة

لقد طورنا سابقا بروتوكولا لجمع تسجيلات الفيديو الحادة (< 5 ساعات) / EEG / ECG من الأرانب. يتضمن استخدام تسعة أقطاب كهربائية لدبوس مخطط كهربية الدماغ وتخطيط القلب تحت الجلد ، ووضع الأرنب في مقيدة ، ومراقبة المحقق عن كثب للأرنب طوال مدة التسجيل1. بينما يوفر هذا النظام تسجيلات فيديو / مخطط كهربية الدماغ / تخطيط القلب عالية الجودة ، إلا أن له العديد من القيود. قد يحدث عدم انتظام ضربات القلب ونوبات الصرع وغيرها من تشوهات مخطط كهربية الدماغ / تخطيط القلب بسبب ركائز فسيولوجية وبيئية مختلفة ، لذلك قد يتم تفويت هذه الأحداث عند إجراء تسجيلات متقطعة. وبالتالي ، فإن منصة التسجيل هذه لا تسهل التقييمات الشاملة والدقيقة للوظيفة الكهربائية العصبية القلبية على مدار اليوم ، أو أثناء الحالات الفسيولوجية المختلفة ، أو في بيئة السكن الطبيعية للأرانب.

تعد المراقبة المستمرة بالفيديو / مخطط كهربية الدماغ / تخطيط القلب مهمة لتقييم الوظيفة الكهربائية للقلب والخلايا العصبية خلال الحالات الفسيولوجية المختلفة. يسهل التقييم الدقيق لانتشار وحدوث نشاط الصرع وعدم انتظام ضربات القلب ، بالإضافة إلى توافق وتطور التغيرات متعددة الأنظمة المحيطة بالأحداث العرضية. على سبيل المثال ، تؤثر تقلبات الساعة البيولوجية في الوظيفة اللاإرادية ، بالإضافة إلى التغيرات اللاإرادية بوساطة الإجهاد والنشاط ، بشكل كبير على معدل ضربات القلب ومقاييس تخطيط القلب ويمكن أن توفر محفزا لعدم انتظام ضربات القلب2،3. في أنواع معينة من الصرع (على سبيل المثال ، الصرع الرمع العضلي الأحداثي) ، من المرجح أن تحدث النوبات أثناء النوم أو في غضون 1-2 ساعة من الاستيقاظ4. يمكن أن تؤثر التغيرات الديناميكية في النشاط الكهربائي في الدماغ أثناء النوم على قابلية النوبات وأصلهاوانتشارها 5.

يمكن أن يتسبب الإجهاد والنشاط والنوبات الحركية في حدوث قطع أثرية عضلية وإزاحة الأقطاب الكهربائية ، مما يؤثر على جودة التسجيلات واستقرارها. على وجه الخصوص ، خلال الدراسات المؤيدة للاختلاج ، تعاني الأرانب من نوبات عضلية ، ورمعية ، ومنشطة ، ومنشطة. تتضمن المرحلة المنشطة التمدد اللاإرادي للرقبة ، والتي يمكن أن تزيح أقطاب الدبوس وبالتالي مقاطعة الإشارة خلال مرحلة حرجة من التجربة. على هذا النحو ، فإن النظام المؤقت الذي يتضمن أقطاب كهربائية للدبوس له قيود حرجة يجب معالجتها. علاوة على ذلك ، نظرا لأن الأرانب في تقييد ، فمن الصعب توثيق المدى الكامل للمظاهر الحركية.

لذلك ، من المهم تطوير إجراء لزرع أقطاب كهربائية لتسجيلات متعددة الأنظمة مستمرة ومستقرة طويلة الأمد عندما يكون في بيئته الطبيعية غير المقيدة. سيسهل ذلك إجراء تقييمات مفصلة خلال مجموعة واسعة من الحالات الفسيولوجية واستجابة للمحفزات البيئية. سيكون أيضا ذا قيمة لالتقاط الأحداث العرضية النادرة. نظرا لأن الإعداد لا يتطلب وجود المحقق أثناء التسجيل ، فإنه يزيد من كفاءة وإنتاجية منصة البحث. كما أنه يقلل من تكرار إزعاج الأشخاص للأرانب. أخيرا ، نظرا لأن هذا الإجراء يسمح للحيوانات بالبقاء في بيئة سكنها الطبيعية طوال فترة التسجيل ، فإنه يحسن نوعية حياة الأرانب ويحسن رفاهية بشكل عام.

الوصول مقيد. يرجى تسجيل الدخول أو بدء فترة تجريبية لعرض هذا المحتوى.

البروتوكول

تحدد الدراسة بروتوكولا لتصميم وتصنيع ووضع نظام تسجيل جديد مستمر لمخطط كهربية الدماغ / تخطيط القلب في الأرانب. تمت الموافقة على البروتوكول من قبل اللجنة المؤسسية لرعاية واستخدامه (IACUC) في جامعة ولاية نيويورك الطبية بجامعة ولاية نيويورك الطبية. يتم اتباع جميع متطلبات IACUC لرعاية والإرشادات الجراحية ونقاط نهاية الدراسة. يقوم المحققون وأعضاء هيئة التدريس / الموظفون في قسم أبحاث المختبر في جامعة ولاية نيويورك بإجراء فحوصات رعاية منتظمة ورعاية عامة. يتم التعامل مع أي إصابات أو عدم راحة أو عدوى أو آثار ضارة على الفور.

1. بناء مجموعة قطب كهربائي قابل للزرع

  1. قم بإجراء التصنيع الداخلي لمجموعة القطب الكهربائي القابل للزرع في بيئة صحية ، والتي تتضمن مقعد مختبر نظيف وقفازات فحص النتريل وقناع إجراء.
  2. في حالة تكييف حزمة سلكية موجودة مع قابس توصيل سريع وموصلات DIN ، فقم بإزالة الأطراف الذكرية والإناث للمقابس (الشكل التكميلي 1 أ). احفظ المقابس والسلك الطويل باستخدام موصلات DIN للمراحل اللاحقة من تجميع الأسلاك (الشكل التكميلي 1 ب).
  3. قم بإضافة أو إزالة الأسلاك من كل من المقابس وحزمة الأسلاك المغلفة بموصلات DIN للتأكد من أنها تحتوي على عدد الأقطاب الكهربائية المطلوبة (9 لإعداد هذا المثال ؛ الشكل التكميلي 1 أ).
  4. اجمع 5 أقطاب كهربائية لمخطط كهربية الدماغ (ألوان الأحمر والبرتقالي والأصفر والأخضر والأزرق) و 4 أقطاب كهربائية لتخطيط القلب (ألوان الأسود والوردي والأبيض والرمادي). باستخدام أنابيب الانكماش الحراري ومسدس حراري ، قم بتجميع الأسلاك بأطوال الصحيحة للنموذج الحيواني من رأس كل قطب كهربائي (الشكل التكميلي 2 أ).
    ملاحظة: بالنسبة للأرنب الأبيض النيوزيلندي (من 1.25 إلى 13 شهرا من العمر و 0.8 إلى 4.17 كجم): أسلاك مخطط كهربية الدماغ على بعد 25 سم من رأس القطب ، وأسلاك تخطيط القلب باللونين الأسود والوردي 40 سم (الذراع اليسرى والساق اليسرى) ، وسلك تخطيط القلب الأبيض 35 سم (الذراع اليمنى) ، وسلك تخطيط القلب الرمادي 30 سم (الساق اليسرى). يوفر هذا طولا واسعا لنفق الأسلاك والأقطاب الكهربائية إلى الموقع المطلوب ، بالإضافة إلى توفير طول إضافي لنمو الأرانب وحركتها.
  5. قم بتمرير حزمة الأسلاك عبر جلبة مرور الكابل (الشكل التكميلي 2 ب).
    ملاحظة: يتم إجراء تعقيم البلازما على الغرسات المجمعة قبل الجراحة.
  6. قم بقص جانب الأسلاك بعيدا عن القطب الكهربائي ، على بعد حوالي 1-1.5 سم من نهاية جلبة مرور الكابل وقم بتجريد جزء قصير ~ 5 مم من الطلاء من نهايات كل سلك (الشكل التكميلي 2 ب).
  7. قم بتوصيل أحد طرفي موصل التناكب بكل سلك يخرج من جلبة المرور ، مع العقص لأسفل للحصول على مرفق آمن. ضع قطعة من أنابيب الانكماش الحراري على كل سلك قابس. أدخل الطرف المجرد من السلك من القابس في الجانب غير المجعد من موصل المؤخرة وقم بتوصيله بسلك نفس اللون المقابل (الشكل التكميلي 2C).
    ملاحظة: لا تقم بتجعيد أنبوب الانكماش الحراري ، حيث يمكن أن يتمزق ويترك المعدن الموصل لموصلات التعقب مكشوفا. يمكن إجراء اللحام بدلا من موصلات التناكب إذا كان السلك المحدد متوافقا.
  8. قم بتغطية كل موصل / وصلة بعقب (بدون معدن مكشوف) وتقليص الحرارة باستخدام أنابيب انكماش حراري صغيرة لعزل كل قناة.
  9. حرك قطعة من أنبوب الانكماش الحراري الكبير فوق القابس إلى قاعدة جلبة مرور الكابل ، وقم بتغطية جميع الأسلاك وترك الحد الأدنى من السلك مكشوفا عند قاعدة القابس (الشكل التكميلي 2 د). استخدم المسدس الحراري والقفازات الواقية لتقليص الأنبوب بالحرارة.
    ملاحظة: تأكد من عدم تقليص الأنبوب فوق آلية القفل اللازمة للقابس.
  10. قم بإنشاء قالب يعمل على تشكيل قاعدة الأكريليك على جانب المنفذ باستخدام الأقطاب الكهربائية (الشكل التكميلي 3).
    ملاحظة: استخدم غطاء أنبوب مخروطي الشكل سعة 50 مل ، وقم بإزالة الخيوط باستخدام آلة صنفرة ، وقم بعمل أربعة شقوق في مجموعة ثم خمس شقوق أخرى 110 درجة -120 درجة من المجموعة الأولى من الشقوق (الشكل التكميلي 3 أ). حفر ثقب 0.5 بوصة في قاعدة القالب (غطاء الأنبوب). ضع شريطا لاصقا على داخل القالب. قطع الشريط من الشقوق.
  11. قم بخفض المنفذ المجمع مع جلبة المرور في القالب مع مرور القابس (الأحمر) عبر الفتحة الموجودة في الجزء السفلي من القالب. تكون الوحدة في مكانها عندما تجلس جلبة مرور الكابل متدفقة مع قاع القالب (الشكل التكميلي 3 ب).
  12. رتب الأسلاك بحيث تقع أقطاب مخطط كهربية الدماغ الخمسة داخل الشقوق الخمسة على الجانب الأيسر من القالب وتوضع أسلاك تخطيط القلب الأربعة داخل الشقوق الأربعة على الجانب الأيمن من القالب. قم بتغطية الشقوق الموجودة داخل القالب بشريط لاصق.
  13. في منطقة جيدة التهوية ، اخلطي أكريليك الأسنان في قارورة زجاجية باستخدام جزأين من مسحوق الراتنج وجزء واحد من سائل الراتنج. باستخدام ماصة النقل، اخلطي المسحوق والسائل حتى يصبح الخليط لزجا ولكن لا يزال يتدفق عبر ماصة النقل.
  14. استخدم ماصة النقل لتوزيع خليط الأكريليك في القالب ، مع التأكد من تغطية جميع الأسلاك. اترك الأكريليك يبدأ في التصلب ، لكن قم بإزالة قاعدة الأكريليك من غطاء الأنبوب قبل أن يتماسك الأكريليك بالكامل.
  15. قم بحفظ أي حواف خشنة من قاعدة منفذ الأكريليك. يوضح الشكل التكميلي 3C المنتج النهائي للأسلاك المضمنة في الأكريليك ، والتي تمر عبر جلبة المرور ، وتتصل بالقابس ، وكلها محكمة الغلق بأنابيب الانكماش الحراري.

2. تجميع تسخير الأسلاك

  1. احصل على القابس المكمل للقابس الموجود على المنفذ. احصل على الدوران واحتفظ بتسعة أسلاك متصلة مسبقا على كل جانب (الشكل التكميلي 4).
  2. على الجانب الدوار الصغير ، قم بقص الأسلاك بطول 5 سم وقم بإزالة 5 مم من طلاء السلك من نهاية كل منها (الشكل التكميلي 5 أ).
  3. قم بقص قطعة 2 سم من أنبوب الانكماش الحراري الصغير وضعه فوق كل سلك من القابس التكميلي (الشكل التكميلي 5 أ).
  4. قم بلحام الأسلاك من القابس إلى سلك اللون المطابق على الجانب الصغير من الدوران (الشكل التكميلي 5 أ).
  5. لكل سلك ، حرك أنبوب الانكماش الحراري فوق وصلات اللحام. استخدم مسدس حراري لتثبيته.
  6. مرر قطعة طويلة من أنبوب الانكماش الحراري الكبير فوق القابس وانزلق لتغطية طول الحزمة بالكامل. يجب أن يكون أنبوب الانكماش الحراري طويلا بما يكفي لتغطية 2.5 مم من القابس وأكبر قدر ممكن من الجانب الصغير من الدوران دون إعاقة قدرته على الدوران. استخدم مسدسا حراريا لتثبيته (الشكل التكميلي 5 ب).
  7. على الجانب الكبير من الدوران ، قم بإزالة 5 مم من الطلاء من نهاية كل سلك. حرك قطعة معدنية مقاس 45 سم > فوق حزمة الأسلاك (يكون هذا أسهل إذا بدأ من الطرف المقطوع ، وليس من النهاية بموصلات DIN) ، وقم بتمريره حتى تنكشف الأسلاك المقطوعة.
    ملاحظة: قم بقص قطع بطول 2 سم من أنابيب الانكماش الحراري الصغيرة وضعها فوق كل من الأسلاك على الجانب الكبير من الدوران (الشكل التكميلي 5 ب). قم بقص قطعة أكبر من غلاف الانكماش (بطول 5 سم) وحركها فوق حزمة الأسلاك بأكملها. في الخطوات التالية ، احتفظ بجميع أنابيب الانكماش الحراري بعيدا عن الحرارة / اللحام.
  8. قم بتوصيل الأسلاك من الطرف الأكبر للدوران بأسلاك القطب الكهربائي المقطوعة (تنتهي بموصلات DIN) من خلال التواء الأسلاك ولحامها (الشكل التكميلي 5 ب).
  9. قم بتثبيت أنبوب الانكماش الحراري الصغير بمسدس حراري فوق كل وصلة. لمنع الضغط أو الضغط على الأسلاك على الجانب الكبير من الدوران ، أضف قطعة كبيرة جدا من أنابيب الانكماش الحراري اللاصقة مباشرة فوق الطرف الكبير للدوران (تغطي 8 مم من الدوران) وعلى الأسلاك (تغطي 2 سم من السلك). استخدم مسدسا حراريا لتثبيته (الشكل التكميلي 5 ج).
  10. حرك الغلاف المعدني فوق الأسلاك المتصلة حديثا وقم بتدويرها (الشكل التكميلي 6 أ). إذا لم ينزلق الغلاف المعدني فوق الدوران ، فاستخدم كماشة أو مطحنة لإزالة وتنعيم طوق الدوران بحيث يتناسب بإحكام مع الغلاف المعدني. يجب أن يتطلب ذلك من المستخدم لف الغلاف فوق الدوران.
  11. استمر في لفه حتى يصل الغلاف إلى قاعدة القابس ولكنه لا يمنع الدوران من الدوران. هذا مهم حتى يظل الغلاف مثبتا على الدوران (الشكل التكميلي 6 ب).
  12. قم بتمديد الغلاف المعدني إلى أقصى طول ولاحظ هذا الموقع على حزمة غلاف / سلك النايلون.
  13. قم بقص قطعة بطول 1 سم من الأنابيب المطاطية بطول 15 مم (القطر الخارجي ، OD) وحركها فوق صفائح النايلون وحزمة الأسلاك (بدءا من جانب موصل DIN ، الشكل التكميلي 6C).
  14. ضع قطعة 3 سم من الأنابيب الكبيرة المتقلصة فوق الأنبوب المطاطي. باستخدام مسدس حراري ، قم بلصق المطاط وتقليص الأنابيب في هذا الموقع المحدد. سيعمل هذا كسدادة لمنع الأسلاك من السحب عبر الغلاف المعدني.
  15. أضف قطعتين من أنابيب الانكماش الحراري (بطول 1 سم) فوق الغلاف المعدني غير الممتد عند 20 سم و 24 سم من نهاية القابس. استخدم مسدسا حراريا لتثبيته (الشكل التكميلي 6C). يتم استخدام هذه المواقع لاحقا لتأمين حامل كبل الضام. يوضح الشكل التكميلي 7 تسخير الأسلاك المكتمل ، والذي يتضمن القابس ، والأسلاك ، والقطب ، والغلاف المعدني ، والسدادة ، ونقاط ربط كابل الضام.

3. الإجراء الجراحي

  1. يجب تطبيق المضادات الحيوية عن طريق الفم (على سبيل المثال، الدوكسيسيكلين بمعدل 5 ملغ/كغ) قبل 24 ساعة و48 ساعة من إجراء الجراحة، وكذلك يوميا لمدة 5 أيام بعد العملية.
  2. احسب جرعة الكيتامين (40 مجم / كجم) والزيلازين (6 مجم / كجم) بناء على الوزن (لا توجد قيود على الوزن أو الجنس ، ولكن يوصى بفطام الأرانب على الأقل لتقليل فرصة إزعاج الأم أو زملائها لزرع القطب). توصيل هذه الأدوية عن طريق الحقن العضلي (IM).
  3. بمجرد تخدير الأرنب بالكامل (لا يستجيب للمنبهات الجسدية) ، ضع جل ترطيب واقي على عيون الأرنب. أغلق الجفون فوق الجل لتوزيعه بالتساوي.
  4. استخدم ماكينة حلاقة كهربائية (خشنة ، ثم مرفقة ناعمة) لإزالة الفراء من بين عيون الأرنب إلى 5 سم الذيلية إلى الزاوية السفلية لوح الكتف. قم بإزالة الفراء حول الجناح الأيمن للأرنب. استمر في حلق الفراء البطني للأرنب من بين الأطراف الأمامية وصولا إلى الحد السفلي للأضلاع.
  5. بدء التخدير المداومة المستنشقة (2٪ -3٪ إيزوفلوران). ابدأ بمعدل 1.5-2 لتر / دقيقة (LPM) مع إعطاء الأكسجين المتزامن عند 1.5 لتر في الدقيقة. ضع قناع تخدير بيطري يجعله مقاوما بإحكام على أنف وفم الأرنب. تأكد من أن الحشية المطاطية تغلق بشكل مناسب حول وجه دون أن يدفع أنف الأرنب لأعلى على الجزء الخلفي من القناع.
  6. ضع مسبارا SpO2 على مخلب الأرنب وتأكد من القيم الفسيولوجية والأشكال الموجية. ضع على جانبه الأيسر بحيث يمكن الوصول إلى الجناح الأيمن. قم بإجراء باقي العملية الجراحية بتقنية التعقيم ، والتي تشمل ارتداء الجراحين ثوبا معقما ، وشبكة شعر ، وأغطية أحذية ، وقناع إجراء ، وفرك ، واستخدام قفازات معقمة. تعقيم جميع الأدوات والمحاليل والغرسات.
    ملاحظة: يجب على المحقق التحقق من بقاء الأرنب دافئا أثناء التخدير. يوصى باستخدام طاولة إجراءات ساخنة أو وسادات تدفئة ، جنبا إلى جنب مع الستائر الجراحية.
  7. يوزع المساعد الجراحي غير المعقم البيتادين وكحول الأيزوبروبيل على الأحواض المعقمة. قم بتغطية المنطقة بالبيتادين متبوعا بكحول الأيزوبروبيل وكرر هذا 3x ، بدءا من موقع الجراحة المقصود ويشع للخارج بنمط دائري. ضع ستائر معقمة فوق الأرنب بحيث لا يزال الموقع الجراحي المقصود مكشوفا.
  8. قم بإجراء وضع الرصاص في تخطيط القلب كما هو موضح أدناه.
    1. قم بعمل 4 علامات صغيرة باستخدام علامة طرف معقمة في المواقع المخصصة لوضع قطب تخطيط القلب. تشمل المواقع المقصودة جدار الصدر العلوي الإنسي إلى (1) اليمين (RA) و (2) الإبط الأيسر (LA) ، وفي (3) اليمين (RL) و (4) الجانب الأمامي الأيسر (LL) من الحدود السفلية للأضلاع السفلية (على طول خط الترقوة الوسطى ؛ الشكل التكميلي 8 أ). سيؤدي ذلك إلى إنشاء تكوين مثلث أينتهوفن الرئيسي مع أرضية في الموقع السفلي الصحيح.
    2. قم بعمل شق طولي 2.5-3.5 سم على الجانب الأيمن للحيوان ، حوالي 1 سم ظهري للطرف الأمامي الأيمن للأرنب (الشكل التكميلي 8 ب).
    3. باستخدام مرقئ الدم ، قم بتشريح بطني بصراحة بحيث يتم عمل جيب تحت الجلد عبر الصدر بالكامل. تأكد من أن هذا الجيب يمتد إلى المواقع الأربعة المحددة لكل من أقطاب تخطيط القلب الأربعة.
    4. باستخدام الطرف غير الإبرة لخياطة الشعيرات الأحادية 3-0 ، اربط 3 مجموعات من العقد الجراحية حول قاعدة القطب الكهربائي (الشكل التكميلي 9 أ). يوضح الشكل التكميلي 9 ب الطريقة المثالية لتحميل الإبرة في مرقئ: عن طريق الإمساك بها في قاعدة الخيط بحيث تكون الإبرة موازية لطول المرقئ. هذا للمساعدة في تمرير الإبرة عبر الجيب تحت الجلد دون أن تعلق بالأنسجة القريبة.
    5. مرر الإبرة المرفقة الآن بقطب كهربائي عبر الجيب تحت الجلد واخرج من الجلد في الموقع المحدد (الشكل التكميلي 10 أ). يؤدي وتر الجلد باستخدام ملقط أو خياطة وشد لطيف لأعلى على الجلد إلى زيادة المساحة داخل الجيب تحت الجلد ويقلل من فرصة تعلق الإبرة على النسيج الضام.
    6. ضع الجر اللطيف حتى يظل القطب في الموقع المحدد (الشكل التكميلي 10 ب). حرر الجر والجس للتحقق من بقاء القطب في مكانه. إذا كان النسيج الضام يمنع القطب الكهربائي من الجلوس في الموقع المحدد ، فقم بتشريح مسار السلك والقطب الكهربائي بشكل حاد.
      ملاحظة: لن ينجح تطبيق القوة / الجر الزائد على الخيط لتشجيع القطب على الجلوس في المكان المطلوب وقد يتسبب في تلف إضافي لموقع الخياطة أو كسر الخياطة.
    7. لتأمين القطب الكهربائي في الموقع المحدد ، قم بتمرير خياطة الشعيرات الأحادية 3-0 والإبرة عبر جلد الأرنب المجاور مباشرة لموقع خروج الخيط (الشكل التكميلي 11 أ).
    8. اسحب الخيط جزئيا عبر الجلد ، بحيث تبقى حلقة صغيرة (الشكل التكميلي 11 ب).
    9. اربط عقدة جراحية قياسية باستخدام الخيط المفرد (مع توصيل الإبرة) على جانب واحد والحلقة (كما لو كانت خيطا مفردا) على الجانب الآخر (الشكل التكميلي 11C). يجب أن تشبه ربطة العنق الناتجة الشكل التكميلي 11 د. تقليم الخيط الزائد المتبقي.
      ملاحظة: تجنب ربط الخيط الخارجي بإحكام شديد أو إحداث غمازة في الجلد. إذا لزم الأمر ، ضع طرف مقص صغير داخل العقدة أثناء شدها. سيؤدي ذلك إلى ترك مرفق فضفاض ، مما يقلل من خطر نمو القطب الكهربائي لاحقا عبر الجلد.
    10. كرر هذه العملية لأقطاب تخطيط القلب المتبقية. ضع الغراء الجراحي على كل عقد خارجية.
  9. قم بإجراء وضع عميل محتمل في مخطط كهربية الدماغ كما هو موضح أدناه.
    1. قم بتدوير في وضع الانبطاح وتأكد من تأمين قناع وجه التخدير ووضع أجهزة المراقبة الفسيولوجية بشكل صحيح. قم بتغطية المنطقة بالبيتادين متبوعا بكحول الأيزوبروبيل وكرر هذا 3x ، بدءا من موقع الجراحة المقصود ويشع للخارج بنمط دائري. ضع ستائر معقمة فوق الأرنب بحيث لا يزال الموقع الجراحي المقصود مكشوفا.
    2. باستخدام علامة طرف معقمة ، ضع خمس نقاط صغيرة في الموقع المقصود لوضع قطب مخطط كهربية الدماغ في المواقع المرجعية الأمامية اليمنى (RF) ، والجبهة اليسرى (LF) ، والقذالي الأيمن (RO) ، والقذالي الأيسر (LO) ، والمركز (Cz) (الشكل التكميلي 12). من الشق الموجود على جناح الأرنب ، قم بتشريح حاد باتجاه الزاوية السفلية للكتف ثم إلى قاعدة الرأس.
    3. قم بعمل شق عرضي صغير على الرأس ، بطول 1.5 سم ، يمتد بين الجانب الأمامي لقاعدة الأذنين (الشكل التكميلي 12). شق بحذر لتجنب إتلاف أي عضلات كامنة.
    4. تشريح حاد ذيليا من هذا الشق حتى يتم عمل جيب تحت الجلد يتصل بالشق الموجود على الجانب. قم بتشريح حاد في الجمجمة حتى يكون هناك جيب تحت الجلد على رأس يمتد إلى مواقع وضع كل من أقطاب مخطط كهربية الدماغ. احرص على عدم استخدام القوة الزائدة هنا ، حيث يمكن أن تتلف المدارات والعديد من العضلات.
    5. مرر المرقئ المطاطي من خلال الشق الموجود على الرأس إلى الشق الموجود على الجانب. أمسك بأقطاب مخطط كهربية الدماغ (1-2 قطب كهربائي في المرة الواحدة) ، واسحب الجيب تحت الجلد ، واخرج عند الشق الموجود على الرأس. كرر عملية ربط خياطة حول قاعدة كل قطب كهربائي ، كما هو موضح سابقا في الخطوة 3.8.4 والموضحة في الشكل التكميلي 9 أ.
    6. ضع أقطاب مخطط كهربية الدماغ وقم بتثبيتها. مرر الإبرة عبر الجيب تحت الجلد على الرأس واثقب الجلد في المواقع المحددة. اسحب الخيط في مكانه وقم بتثبيته بالطرق الموضحة في خطوات البروتوكول 3.8.7-3.8.9 والموضحة في الشكل التكميلي 11.
    7. كرر لجميع الأقطاب الكهربائية الخمسة. يوصى بوضع الأقطاب الكهربائية الأمامية أولا ، تليها تشيكوسلوفاكيا ، تليها الأقطاب الكهربائية القذالية. ضع الغراء الجراحي على جميع عقدة الخياطة الخارجية.
    8. أدخل ملقطا كبيرا في الشق الموجود على الجناح ، وانشر الملقط مفتوحا ، وارفع الجلد في الموقع المحدد للمنفذ ، وهو ذيلية إلى الزاوية السفلية للكتف.
    9. استخدم خزعة مثقبة 6 مم لإنشاء ثقب دائري. قم بتدوير شفرة الخزعة برفق في أي من الاتجاهين حتى يكتمل الفتح. قم بإزالة الجلد المقطوع داخل خزعة الثقب (الشكل التكميلي 13 أ).
    10. قم بتغطية سدادة السلك بالبلاستيك / المطاط لمنع الدم / الأنسجة من الدخول إلى القابس. مرر المنفذ عبر الشق الموجود على الجناح وادفع جانب القابس من المنفذ من خلال الفتحة التي تم إجراؤها بواسطة خزعة الثقب. يوضح الشكل التكميلي 13 ب المنفذ الخارج من الجلد وتشير الألوان إلى الأسلاك التي يتم حفرها تحت الجلد وتنتقل إلى الرأس (EEG) والصدر (ECG).
    11. اضغط على الجلد لأسفل إلى قاعدة المنفذ بحيث يكون كل شيء مشدودا. ضع حشية مطاطية فوق المنفذ وادفعها لأسفل حتى تستقر على الجلد. دس السلك الزائد في الجيب تحت الجلد على الظهر والجناح ، مع الحرص على تشريح جيب كبير بما يكفي لاستيعاب الأسلاك الزائدة وتوزيعها بالتساوي. تأكد من عدم تجمع الأسلاك في أي منطقة أو المرور مباشرة أسفل المنفذ ، فقد يتسبب ذلك في حدوث تهيج.
    12. اجمع الجلد معا برفق وأغلق جميع مواقع الشق باستخدام خيوط بسيطة متقطعة. ضع الغراء الجراحي على جميع خيوط الغرز الأحادية المغلقة 3-0 وعلى طول الشقوق. اترك وقتا حتى يجف الغراء الجراحي.
      ملاحظة: ابدأ في معايرة التخدير المستنشق ثم أطفئه لاحقا بعد تصلب الأكريليك (3.9.14). احتفظ بمسبار SpO2 في مكانه لمدة 15 دقيقة على الأقل لمراقبة ما بعد الجراحة.
    13. امزج نسبة 2: 1 من حيث حجم مسحوق الأكريليك والسائل باستخدام ماصة النقل. امزج حتى تبدو رقيقة بما يكفي لتمريرها عبر ماصة النقل ولكنها سميكة بما يكفي للبقاء في موقع الميناء.
    14. ضع خليط الأكريليك على الجزء الخارجي من المنفذ ، مما يخلق قبة صغيرة من الأكريليك تغلق موقع المنفذ على الجلد. امنح الوقت حتى يتجمد الأكريليك. ضع شاشا معقما فوق موقع الشق على جانب الأرنب ولف الأرنب بشكل غير محكم بغلاف بيطري (أي فضفاض بما يكفي لوضع 2-3 أصابع بسهولة تحت الغلاف). قد يترك شق الرأس مكشوفا.
    15. اسمح للأرنب بالتعافي في قفص به حشوة وبطانية ومصدر حرارة. يجب الإشراف على الأرنب طوال هذه العملية. عندما يبدأ الأرنب في الاستيقاظ (ارتعاش الأنف ، بعض الحركة) ، قم بإعطاء جرعة تحت الجلد من البوبرينورفين المستمر (0.1 مجم / كجم). استمر في الإشراف المباشر حتى يستعيد الأرنب وعيه (يقف ويتنقل بشكل مستقل في القفص).
    16. اترك الأرنب وقتا للشفاء (72 ساعة على الأقل) قبل توصيل المنفذ الموجود على الأرنب بحزام الأسلاك لجمع البيانات.
      ملاحظة: اتبع جميع خطوات الرعاية المناسبة بعد الجراحة لضمان الشفاء والراحة المناسبة خلال هذا الوقت ، بما في ذلك ، على الأقل ، الملاحظات اليومية لتناول الطعام والماء ، وحركة الأمعاء ، والتبول ، والتئام موقع الشق ، ومستويات الطاقة ، وظهور الألم أو الانزعاج. قم بإزالة جميع الغرز في مواقع الشق بعد 10 أيام من العملية.

4. قياس EEG / ECG

  1. مرر حزام الأسلاك عبر المركز العلوي لقفص الأرنب (قطر 3/4 بوصة ؛ الشكل التكميلي 14).
  2. قم بتوصيل موصلات DIN بجهاز مراقبة مناسب. قم بتثبيت كابل ضام في الجزء العلوي من القفص بالقرب من فتحة تسخير الأسلاك.
  3. قم بتمديد سلك كابل الضام بمشبك في النهاية وقم بتوصيله بحزام الأسلاك في الموقع بين قطعتين من أنابيب الانكماش (الشكل التكميلي 15).
  4. قم بتثبيت الأسلاك في الأعلى خارج القفص حتى لا تنزلق فيه (الشكل التكميلي 14 ، على سبيل المثال ، الشريط).
  5. قم بتوصيل القابس الموجود على حزام الأسلاك بالقابس الموجود على ظهر الأرنب (الشكل التكميلي 16). تسجيل الإشارة (الشكل 1).

الوصول مقيد. يرجى تسجيل الدخول أو بدء فترة تجريبية لعرض هذا المحتوى.

النتائج

باستخدام هذه التقنية الجراحية ، لم تكن هناك أي حالات وفاة أثناء الجراحة أو بعدها. هناك خطر الإصابة بالعدوى والتئام الجروح غير الكامل ، خاصة إذا خدش الأرنب أو عض في موقع الشق. تساعد المضادات الحيوية قبل / بعد الجراحة ، التي تغطي الشق بقطعة جافة معقمة من الشاش ، وتركيب الأرنب بسترة على حماية موقع الجراحة وتسمح بالشفاء بشكل أفضل. يتم إجراء جميع التسجيلات في قفص السكن القياسي للأرنب ، وهو ما يستخدم للسكن المستمر لجميع الأرانب في منشأة. ليست هناك حاجة إلى تعديلات على القفص أو ليكسيت الماء أو ح...

الوصول مقيد. يرجى تسجيل الدخول أو بدء فترة تجريبية لعرض هذا المحتوى.

المناقشة

نقدم بروتوكولا مفصلا لإنشاء تسخير الأسلاك المخصص ، والتصنيع الداخلي للغرسة ، وإجراء الزرع المعقم لأقطاب كهربية الدماغ / تخطيط القلب والأسلاك والمنفذ. يسهل هذا الإعداد جمع تسجيلات مخطط كهربية الدماغ / تخطيط القلب المستمرة وعالية الجودة بطريقة فعالة وآمنة ومجدية من الناحية المالية. يولد هذا البروتوكول نظاما يمكن من خلاله جمع بيانات مخطط كهربية الدماغ وتخطيط القلب في الأرانب دون الحاجة إلى قيود أو إشراف مستمر. تسهل التسجيلات المستمرة لمخطط كهربية الدماغ وتخطيط القلب على المدى الطويل رؤى متع...

الوصول مقيد. يرجى تسجيل الدخول أو بدء فترة تجريبية لعرض هذا المحتوى.

الإفصاحات

المؤلفون ليس لديهم ما يكشفون عنه. جزء من المعلومات الواردة في هذه المخطوطة موجود أيضا في أطروحة الماجستير للمؤلف الأول (لورا ويليامز) بإذن مناسب.

شكر وتقدير

نود أن نشكر براديب دومبالا ، دكتوراه في DVM ، سارة بلير ، ماجستير ، وطاقم التربية في جامعة ولاية نيويورك الطبية على تفانيهم واهتمامهم برعاية الأرانب. المعاهد الوطنية للصحة - NINDS (1R61NS133273) ، قسم علم الأدوية ، جامعة ولاية نيويورك الطبية

الوصول مقيد. يرجى تسجيل الدخول أو بدء فترة تجريبية لعرض هذا المحتوى.

المواد

قائمة المواد المستخدمة في هذه المقالة
الاسمالشركةرقم فهرسيالتعليقات
3: 1 التفاف الانكماش الحراري مع أنابيبلاصقة N / AWireflyمصممة لتقليص قطر 1/3 عند تسخينها. عزل الأقطاب الكهربائية عند توصيل الأسلاك والمقابس ، وتوصيل قطع من تسخير الأسلاك معا
وسادات ماصة-أيوسادات ماصة لجمع السوائل مقشر
BD EZ مقشر 116 فرشاة فرك جراحية / إسفنج371163BD EZ مقشر3٪ PCMX فرشاة فرك جراحية / إسفنجة للفرك قبل التشغيل لتقنية التعقيم
لكمات1315أرجنت ، ماكيسونشفرة قطع دائرية 6 مم للشق الدائري لمنفذ
بوبرينورفين-0.3 مجم / مل بوبرينورفين للتحكم في الألم بعد الجراحة
موصلات المؤخرةX003C7S38PSVAARلصق مؤخرة نحاسية معلبة 26-22 AWG موصلات بعقب غير معزولة توصيل أسلاك ألياف الكربون من الأقطاب الكهربائية إلى القابس
https://jorvet.com/product/cautery-kit-accessories/قلم الغواءمختبرات Jorgensen، Inc.قلم Bovie Cautery محمول باليد للسيطرة على النزيف
جلبة الكابلات المحورية عبر الجدارCOAX BUSH WHجلبة بلاستيكية كهربائية تجاريةبفتحة قطرها داخلي 6.9 مم و 1 سم + غلاف متماسك لمنفذ السلك
https://healthypets.com/vetone-cohesiant-wrap-blue-2x5yd/AmerisourceBergen4 بوصة × 5 ياردة غلاف ذاتي الالتصاق لحماية الجروح بعد الجراحة
مشرط يمكن التخلص منه بمقبضhttps://www.securos.com/Securos Surgical AmerisourceBergenمشارط معقمة يمكن التخلص منها لعمل شقوق
حلقة الانزلاقTaidacentحلقة الانزلاق الموصلة للكرة عالية السرعة 12 طريقة 2A حلقة التجميع موصل دوار مشترك دوار ، حلقة الانزلاق الكهربائية للسماح بحرية الحركة للحيوان دون ربط تسخير الأسلاك
زيوت العين prohttps://domespharma.us/eye-lube-pro-detailer-final-v6/Sentrxجل التشحيم يمنع جفاف العين / تلفها أثناء التخدير
GLUture503763World Precision Instrumentلاصق الأنسجة الموضعية لإغلاق مواقع الشق   ؛
IsofluraneANADA # 200-129IsospireIsoflurane للتخدير
كحول الأيزوبروبيل500205VETone70٪ كحول الأيزوبروبيل المطهر الموضعي
السائل النفاثالمطهر 1403Lang Dental Mfg. Co.، Inc.سائل راتنج الأكريليك سريع المعالجة سائل راتنج الأكريليك للأسنان لإغلاق البطانة والأسلاك لمنفذ خروج الأسلاك. تستخدم أيضا لإغلاق المنفذ على الجلد.
الظل النفاث للأسنان1420لانغ الأسنان Mfg. المحدودةسريع المعالجة التاج المؤقت ومسحوق راتنج الأكريليك الجسر. مسحوق أكريليك الأسنان لإغلاق البطانة والأسلاك لمنفذ خروج الأسلاك. تستخدم أيضا لإغلاق المنفذ على الجلد.
الكيتامين-100 مجم / مل كيتامين للتخدير
دش معدنيHOS-960MWaterpikخرطوم دش معدني بديل فائق المرونة ، طويل جدا لرؤوس الدش المحمولة ، 96 بوصة ، غلاف معدني من الكروم لتسخير الأسلاك
مصفوفة أقطاب كهربائية مشروطة / CT MR ومجموعة التمديدMRQW32415RhythmLinkنظام توصيل سريع مع مقابس من الذكور والإناث و 8 خيوط. المقابس المستخدمة لتوصيل تسخير سلك المنفذ.  الأسلاك وموصلات DIN المستخدمة في تسخير الأسلاك
خيوط البولي بروبيلين الأزرق أحادية الشعيراتP8665SECUROPRO3-0 ، FS-2 ، خياطة القطع العكسي مقاس 18 بوصة. أغلق أي شقوق جراحية
كابل الضام&lrm ؛ 0487-013شركة الساحل الغربي لتصنيعبكرة صناعية قابلة للسحب مع كابل من الفولاذ المقاوم للصدأ مقاس 48 بوصة ، ظهر قوس فولاذي ، أمامي من الكروم ، 8 أونصة سحب ، مشبك خرطوم بلاستيكي. يسحب حزام الأسلاك الزائد لأعلى وبعيدا عن
حشية مطاطيةE-3603 NSF-51Saint Gobainمطاطية شفافة مقطوعة بعرض 1.5 سم. طوقا للحماية / الحفاظ على الختم.
أقطاب ويب صغيرةSWEBB1215RhythmLink6 مم ، قرص مسطح [WEBB *] قطب كهربائي ، كلوريد الفضة ، سلك ، أقطاب كهربائية تحت الجلد
قفازات جراحية معقمة من اللاتكس10122قفازات مطاطية معقمة من اللاتكس AmerisourceBergen، خالية من البودرة ، مرتدية للتقنية الجراحية المعقمة
علامة معقمةDYNJSM01علامة معقمة Medline، مواقع شق / قطب كهربائي Mark   ؛
ستائر جراحية معقمة مع لاصق-أيستائر جراحية معقمة مع شريط لاصق على جانب واحد ، إنشاء مجال معقم ثابت   ؛
أقنعة التخدير البيطري-أيمخاريط بلاستيكية مع حشوات مطاطية لإغلاقها على الأرانب وجه ق. أحجام مختلفة. توصيل التخدير المستنشق
مقشر بيطري بيتادين جراحيNDC 67618-154-16بيتادينبوفيدون اليود ، 7.5٪ ، منظف بشرة مطهر
زيلازين-100 مجم / مل زيلازين ، للتخدير
البولي أوليفين المبطنة بمادة خزعة الكهربائية مسحوق غلاف أنابيب

المراجع

  1. Bosinski, C., Wagner, K., Zhou, X., Liu, L., Auerbach, D. S. Multi-system monitoring for identification of seizures, arrhythmias and apnea in conscious restrained rabbits. J Vis Exp. (169), e62256(2021).
  2. Finlay, M. C., Lambiase, P. D., Ben-Simon, R., Taggart, P. Effect of mental stress on dynamic electrophysiological properties of the endocardium and epicardium in humans. Heart Rhythm. 13 (1), 175-182 (2016).
  3. Shen, M. J., Zipes, D. P. Role of the autonomic nervous system in modulating cardiac arrhythmias. Circulation Res. 114 (6), 1004-1021 (2014).
  4. Xu, L., et al. Juvenile myoclonic epilepsy and sleep. Epilepsy Behav. 80, 326-330 (2018).
  5. Bazil, C. W. Seizure modulation by sleep and sleep state. Brain Res. 1703, 13-17 (2019).
  6. Ryan, J. M., et al. Heart rate and autonomic biomarkers distinguish convulsive epileptic vs. Functional or dissociative seizures. Seizure. 111, 178-186 (2023).
  7. Brunner, M., et al. Mechanisms of cardiac arrhythmias and sudden death in transgenic rabbits with long QT syndrome. J Clin Invest. 118, 2246-2259 (2008).
  8. Edwards, A. G., Louch, W. E. Species-dependent mechanisms of cardiac arrhythmia: A cellular focus. Clin Med Insights Cardiol. 11, 1179546816686061(2017).
  9. Kaha Sciences. , Ad instruments. http://https://www.adinstruments.com/kaha?creative=524197312959&keyword=kaha%20telemetry&matchtype=e&network=g&device=c&gad_source=1&gclid=CjwKCAjw8fu1BhBsEiwAwDrsjJLJeUjMCwMe-kCxFg2QdpP94gaAOd8qS6UBE6iU-IdP2XGxMvbT7hoCDZAQAvD_BwE (2024).
  10. Stellar telemetry. , TSE Systems. https://www.tse-systems.com/products/stellar-implantable-telemetry/ (2024).
  11. Dsi implantable telemetry. , DSI. https://www.datasci.com/products/implantable-telemetry (2024).
  12. Stellar telemetry. , Kruuse televet ii, telemetric ecg & holter. https://kruuse.com/products/consultation/examination/ekg/kruuse-televet-ii-telemetric-ecg-holter (2024).
  13. Mishra, V., Gautier, N. M., Glasscock, E. Simultaneous Video-EEG-ECG monitoring to identify neurocardiac dysfunction in mouse models of epilepsy. J Vis Exp. (131), e57300(2018).
  14. eeg/emg systems. , Pinnacle technology. https://www.pinnaclet.com/eeg-emg-systems.html (2024).

الوصول مقيد. يرجى تسجيل الدخول أو بدء فترة تجريبية لعرض هذا المحتوى.

إعادة الطباعة والأذونات

طلب إذن لإعادة استخدام النص أو الأشكال في مقالة JoVE هذه

طلب إذن

الوسوم

مقالات ذات صلة