يتطلب اشتراك JoVE لعرض هذا المحتوى. تسجيل الدخول أو ابدأ نسخة تجريبية مجانية

مقالة منهجية

نموذج ارتجاج الأطفال في الفئران: إصابة الرأس المغلقة مع الاضطرابات طويلة الأمد (CHILD)

1.1K مشاهدة

⸱

DOI:

10.3791/67667

⸱

فبراير 7, 2025

 ,  ,  , 
1Centre d'Études Biologiques de Chizé-Centre National de la Recherche Scientifique (CEBC-CNRS), UMR 7372 CNRS/Université de La Rochelle, 2Univ. Bordeaux, CNRS, CRMSB, UMR 5536, 3Division of Biomedical Sciences, School of Medicine, University of California Riverside, 4Department of Basic Sciences, Loma Linda University School of Medicine

* These authors contributed equally

في هذه المقالة

ملخص

يمكن أن يؤدي ارتجاج الأطفال إلى عقابيل طويلة الأمد مع اضطرابات فسيولوجية ونفسية. ينتج عن نموذج فأر ارتجاج الأطفال هذا التهاب عصبي طويل الأمد ، وتغيرات في المادة البيضاء ، وتعديلات في الخلايا العصبية مع خلل وظيفي سلوكي. يمكن تكييف النموذج مع مواقع التأثير التفاضلي أو الارتجاجات المتكررة لتقييم التغيرات مدى الحياة.

الملخص

تمثل الارتجاجات وإصابات الدماغ الرضحية الخفيفة (mTBI) أثناء الطفولة خطرا صحيا كبيرا ، حيث يظهر العديد من المرضى في وقت لاحق من حياتهم نتائج فسيولوجية وعصبية ونفسية واجتماعية منهكة. الآليات الفيزيولوجية المرضية الخلوية والجزيئية غير معروفة نسبيا ، وهذه الفجوة الكبيرة تمنع بشكل فعال التحقيقات في استراتيجيات علاجية محددة للتخفيف من العواقب المزمنة. لا يوجد نموذج واحد لارتجاج حيواني يلخص جميع الميزات التي تم الإبلاغ عنها في البشر ، وقد تم تصميم النماذج الحالية للإجابة على أسئلة بحثية محددة. شرعنا في تطوير ارتجاج في المخ عند الأطفال يلخص الأعراض السريرية المبكرة والطويلة الأمد التي واجهناها ، والتي تسمى إصابة الرأس المغلقة مع الاضطراب طويل الأمد (CHILD). في هذا النموذج ، يتم توصيل قوة ارتجاجية عبر مصطدم كهرومغناطيسي إلى رأس فأر ما بعد الولادة المخدر قليلا في اليوم 17 (P17) ، مما يسمح بالدوران الحر للرأس. يتم وضع الفئران على رقائق قصدير مشدودة بإحكام عبر جهاز تجسيمي ، ويتم محاذاة الاصطدام بعناية مع المنطقة القشرية المستهدفة. يسهل الاصطدام الكهرومغناطيسي اختيار عمق التأثير والمسكون والمدة لتحديد شدة الإصابة. تكمن قوة هذا النموذج في أنه يسمح بدوران الرأس ، وهي ميزة سريرية مهمة. بعد الاصطدام ، تتم مراقبة الفئران على الفور لتصحيح الوقت والوقت لاستكشاف بيئتها ، متبوعة بعودتها إلى سدها. تؤدي زيادة شدة الارتجاج إلى نزيف داخل الجمجمة في مجموعة فرعية من الفئران. يمكن مراقبة الفئران بشكل روتيني بحثا عن السلوك والتصوير العصبي على مدى عمرها الافتراضي ، حسب الرغبة. تحاكي شدة الإصابات المختلفة الطبيعة غير المتجانسة لارتجاج الأحداث. لا يظهر نموذج CHILD القياسي الحالي أي كسر في الجمجمة ، ولا يوجد تغيير في التصوير العصبي التقليدي يمكن ملاحظته (على غرار السريري) ، ولكنه يؤدي إلى موت الخلايا العصبية التدريجي والمستمر ، والتصوير بالرنين المغناطيسي للانتشار المتغير ، والنشاط العصبي المعدل واللدونة ، وزيادة الدبقي ، والاضطرابات السلوكية التدريجية مع تقدم العمر. باختصار ، يحاكي نموذج CHILD هذا السمات المبكرة وطويلة المدى التي لوحظت في العديد من مرضى الارتجاج السريري.

المقدمة

تعد إصابات الدماغ الرضحية لدى الأطفال (TBI) مصدر قلق صحي كبير لأنها تمثل السبب الرئيسي لزيارات الرعاية الطبية الطارئة للأطفال وترتبط بنتائج صحية منهكة في وقت لاحق من الحياة. حتى إصابات الدماغ الرضية الخفيفة (mTBI) ، التي تشكل 75٪ من جميع حالات إصابات الدماغالرضية 1 ، تؤدي إلى تشوهات طويلة الأمد ، بما في ذلك الاختلالات الفسيولوجية والنفسية والعصبية والمعرفية2. على الرغم من ارتفاع معدل الإصابة ب mTBI لدى الأطفال والمخاطر الصحية الكبيرة المرتبطة به ، إلا أن الآليات المرضية والخلوية والجزيئية التي تسبق العجز المزمن لا تزال غير مستكشفة. تعيق هذه الفجوة في المعرفة تطوير العلاجات الفعالة وطرق التشخيص ل mTBI للأطفال.

تشمل نماذج إصابات الدماغ الرضية للقوارض البالغة انخفاض الوزن ، والتأثير القشري المتحكم فيه ، وإصابة الإيقاع السائل ويمكن معايرتها لإحداث إصابات متوسطة إلى شديدة (تعتمد على مقاييس النتائج) 3،4. تم تكييف العديد من هذه النماذج للبالغين مع TBIللأطفال 5،6. خلال العقد الماضي ، تم تطوير نماذج mTBI في القوارض المصابة بإصابة مغلقة في الرأس وكذلك مع النماذج الدورانية7. ومع ذلك ، فإن تنفيذ هذه النماذج في تطوير القوارض متناثر مقارنة بأدبيات TBI للبالغين8. لمعالجة الأهمية السريرية ، التي تشمل مجموعة واسعة من الشدة التي تمثل عدم التجانس السريري للأطفال ، طورت هذه الدراسة نموذج إصابات الرأس المغلقة مع الاضطراب طويل الأمد (CHILD). CHILD هو نموذج ارتجاج غير جراحي وغير مقيد باستخدام الفئران P17 ، وهو عمر تنموي يتوافق مع ذروة تكوين النخاع التي لوحظت في الأطفال الذين تتراوح أعمارهم بين 2-3سنوات 9. يتم توصيل قوة ارتجاجية باستخدام تأثير كهرومغناطيسي فوق القشرة الحسية الجسدية لفأر مخدر خفيف بالأيزوفلوران. يؤدي التأثير على الرأس غير المقيد إلى قوى دورانية على الدماغ10 ، كما ورد في العديد من تقارير الارتجاج السريري. تمشيا مع mTBI السريري ، لا يؤدي نموذج CHILD إلى كسر في الجمجمة أو شذوذ مرئي في التصوير العصبي التقليدي.

نموذج CHILD له العديد من المزايا. أولا ، لوحظت السمات المرضية المبكرة والطويلة المدى في CHILD ، تحاكي السمات السريرية المرضية التي لوحظت في مرضى الارتجاج الأحداث. وقد لوحظ في النقاط الزمنية المتأخرة الدبقة ، والتصوير بالرنين المغناطيسي لموتر الانتشار المتغير ، والاضطرابات السلوكية التدريجية مع سن10،11 ، والنشاط العصبي المعدل ، واللدونة11،12. ومن المثير للاهتمام ، أنه تم العثور أيضا على عواقب محيطية غير متوقعة مع تشوهات القلب على المدى الطويل بعد إصابة واحدة للأطفال13. ثانيا ، هذا النموذج قابل للتكرار وأظهر نتائج قابلة للمقارنة بين الباحثين وبين المختبرات13. ثالثا ، نموذج CHILD مرن ويمكن توسيعه لتغليف الطبيعة غير المتجانسة لإصابات الدماغ الرضية. على سبيل المثال ، أظهرت الدراسات السابقة أن السرعات والأعماق المختلفة للتأثير تؤدي إلى شدة مختلفة10،11. أخيرا ، تتمثل إحدى نقاط القوة الإضافية لهذا النموذج في أنه يمكن إعطاء CHILD بشكل متكرر ويمكن تطبيقه بسهولة على المواقع التفاضلية لاستكشاف الاستجابات للإصابات المتكررة وتحديد مناطق الدماغ المعرضة للخطر.

بشكل عام ، يكرر نموذج CHILD mTBI السريري للأطفال والارتجاج ويعمل كأداة بحث لتسهيل فهم الخصائص الفيزيولوجية المرضية ل mTBI للأطفال. على الرغم من عدم وجود نموذج يلخص كل جانب من جوانب الميزات الموصوفة في حالات إصابات الدماغ الرضية الواقعية ، يمكن لهذا النموذج معالجة العديد من الأسئلة البحثية المعلقة التي لا تزال دون إجابة.

الوصول مقيد. يرجى تسجيل الدخول أو بدء فترة تجريبية لعرض هذا المحتوى.

البروتوكول

تم استنساخ التجارب في موقعين ، جامعة بوردو (فرنسا) وجامعة كاليفورنيا ريفرسايد (كاليفورنيا ، الولايات المتحدة الأمريكية).

في بوردو ، أجريت جميع التجارب على ذكور وإناث الفئران P17 C57Bl6J التي تم تربيتها في منشأة بالجامعة. تم الحصول على المربين الأوليين من مصدر تجاري وتربيتهم في ظل ظروف قياسية مع دورة مظلمة / فاتحة لمدة 12/12 ساعة ، ودرجة حرارة 21 درجة مئوية ± 1 درجة مئوية ، ورطوبة 55٪ ± 10٪ ، وتوفير الغذاء والماء بشكل خاص. تتوافق الإجراءات التجريبية مع لوائح لجنة رعاية بجامعة بوردو ، والقوانين الفرنسية التي تحكم استخدام المختبر (التفويض # 29324-2021012118549817 v3) ، وتوجيهات المجلس الأوروبي (86/609 / EEC) ، وإرشادات ARRIVE. هذا البروتوكول ، كونه نموذجا خفيفا لإصابات الدماغ الرضحية ، لا ينتج عنه الألم أو الضيق. على هذا النحو ، فإنه لا يتطلب أي إدارة محددة للألم خارج إدارة الألم المنتظمة. كان فطام الجراء (TBI ، شمس) فعالا في P25.

في ريفرسايد ، تم الحصول على إناث الفئران E13 الحامل C57Bl6J تجاريا ، وتم إجراء جميع التجارب على الفضلات الناتجة في كل من الجراء الذكور والإناث الذين تتراوح أعمارهم بين P17. تم تربية بدورة مظلمة / ضوئية آلية 12/12 ساعة ودرجة حرارة 21 درجة مئوية. كان للسدود والجراء إمكانية الوصول إلى الغذاء والماء. تمت الموافقة على جميع الإجراءات التجريبية من قبل لجنة رعاية واستخدام المؤسسي بجامعة كاليفورنيا في ريفرسايد وامتثلت لقانون رعاية وسياسة خدمة الصحة العامة. تم فطام جميع الجراء (TBI ، Sham) في تلك المنشأة على P21.

تفاصيل والكواشف والمعدات المستخدمة في هذه الدراسة مدرجة في جدول المواد.

1. الخطوات الأولية

  1. لمنع انخفاض حرارة الجسم ، قم بتسخين الغرفة لتحريض التخدير وأقفاص التعافي مسبقا باستخدام وسادات التدفئة.
  2. اضبط الجهاز التجسيمي مع تركيب المصطادم بزاوية 90 درجة.
  3. تحقق من شد جميع الأجزاء وتثبيتها بشكل صحيح وأن المكبس مثبت بإحكام على الاصطدام.
  4. قم بقص صفائح الألمنيوم التي تناسب الجهاز التجسيمي (في هذه الحالة ، 18 سم × 30 سم). الألمنيوم المستخدم هنا ذو جودة الألومنيوم القياسية. لف الإطار التجسيمي بالرقائق لتشكيل وسادة يوضع عليها. قم بتأمين موضع وتوتر الرقاقة بشريط مختبر منتظم من أجل الحفاظ على وزن.
  5. قم بتشغيل وحدة التحكم في الاصطدام، ووفقا لوظيفة شدة الإصابة، اضبط سرعة التأثير على 2 m.s-1 للدرجة 1 (G1) أو 3 m.s-1 للدرجة 2 (G2) لتأثير أكثر حدة (سيؤثر تعديل هذه المعلمة على شدة الارتجاج).
  6. وزن. عند P17 ، يجب أن يكون وزن أكثر من 5.9 جرام للفئران C57Bl6. يتم استبعاد التي تقع تحت هذا الوزن.
    ملاحظة: بالنسبة لبعض الدراسات ، تم استخدام الفئران CD1 ، وبالنسبة ل P17 ، تم تحديد العتبة لتكون أكثر من 6.5 جم (البيانات الشخصية).

2. إجراء إصابات الدماغ الرضحية الخفيفة للأحداث

  1. تخدير الفأر مع التعرض لمدة 5 دقائق للأيزوفلوران. اضبط تركيبة الغاز على خليط 2.5٪ (في هذه الحالة ، يكون الناقل عبارة عن خليط هواء اصطناعي يحتوي على 21٪ أكسجين) بمعدل تدفق 1.5 لتر / دقيقة.
    ملاحظة: من هذه الخطوة ، يجب القيام بجميع الإجراءات بسرعة ، حيث ستستيقظ غير المتأثرة في غضون 5 دقائق.
  2. ضع رأس الماوس أسفل الاصطدام. يجب أن ينتشر الجرو من جميع الأطوال. يبلغ قطر الطرف 3 مم ومغطى بالمطاط لتقليل تأثير المعدن على الجمجمة.
  3. اخفض المصادم عن طريق تبديل المقبض إلى وضع التمديد .
  4. اخفض المصادب تقريبا وضع الماوس بحيث يكون الاصطدام بين الأذنين مباشرة. بعد ذلك ، حرك الماوس بحيث يتم تحريك طرف المكبس للأمام إلى ما يعادل طرف مكبس واحد ، وطرف مكبس واحد على يسار (انظر الشكل 1).
    ملاحظة: يتم وضع الوهم بعيدا قليلا عن المكبس (يجب ألا يتأثر أي جزء من).
  5. اخفض الاصطدام بحيث يلامس رأس (الشكل 1E2).
  6. اضبط الاصطدام على تراجع (الشكل 1E3).
  7. لتحديد شدة الإصابة ، حرك المكبس 1 مم لأسفل للدرجة 1 (G1). للحصول على درجة تأثير أكثر شدة (G2) ، حرك المكبس 3 مم لأسفل (الشكل 1E4).
  8. اضبط وقت المكوث على 0.1 ثانية بغض النظر عن شدته (لن يؤثر تعديل هذه المعلمة على شدة الارتجاج).
  9. اضغط على التأثير على المقبض الأيمن (الشكل 1E5).
  10. اضبط المقبض الأيسر بسرعة على وضع إيقاف التشغيل حتى لا يسخن النظام. انظر المخطط الانسيابي لمزيد من المعلومات (الشكل 2).

figure-protocol-1
الشكل 1: وضع طرف الاصطدام. (أ) يتم وضع طرف الاصطدام أولا على خط الوسط بين الأذنين. (ب) ثم يتم تحريك الطرف بمقدار 3 مم للأمام (أي ما يعادل قطر الطرف). (ج) أخيرا ، يتم تحريك طرف المكبس بمقدار 3 مم على الجانب الأيسر من الماوس. (د ، ه) المواضع المحتملة لطرف الاصطدام فيما يتعلق بالبرميل المغناطيسي. (د) يكون للمصدم 3 مواضع فيما يتعلق بجسم المكبس (محايد أو متراجع أو ممتد / تأثير) مع نطاق 5 مم بينهما. (ه) مواضع طرف الاصطدام فيما يتعلق بسطح الجمجمة في المراحل المختلفة للإجراء. (1) وضع الاصطدام في الوضع المحايد ؛ (2) يتم تحريك المكبس ليلمس جمجمة برفق (الخطوة 2.5) ؛ (3) ثم يتم ضبط الارتطام على التراجع (الخطوة 3.6) ؛ (4) يتم تحريك جسم المصادم بالكامل بمقدار X مم لأسفل (الخطوة 2.7). بالنسبة للدرجة G1 ، تبلغ سرعة التأثير (y) 2 m.s-1 مع عمق 1 مم (x) ل G1 أو سرعة التأثير (y) 3 m.s-1 بعمق 3 مم (x) ل G2. (5) بمجرد الضغط على تأثير الرافعة ، يتحرك طرف الاصطدام × مم تحت سطح الجمجمة بسرعة y أثناء وقت السكون عند العودة إلى الوضع المحايد. الرجاء النقر هنا لعرض نسخة أكبر من هذا الرقم.

figure-protocol-2
الشكل 2: مخطط انسيابي CHILD. مخطط انسيابي يوضح بالتفصيل خطوات تحفيز CHILD في فئران PND17 مرمزة بالألوان للدلالة على مراحل مختلفة من تحريض الارتجاج. تتضمن صور الإعداد (أ) إعداد تحريض الطفل بالكامل (جهاز التخدير غير مرئي) ، بما في ذلك وحدة التحكم في الصدمات ، والجهاز التجسيمي مع وضع المصدم والطرف فوق رقائق القصدير المشدودة ، وصندوق الاسترداد الموجود أعلى وسادة التدفئة. (ب) طرف تأثير مطاطي (3 مم) مع مقياس. (ج) الجهاز التجسيمي المزود برقائق من الصفيح ممتد عبر الإطار التجسيمي والملف اللولبي للاصطدام مع وضع طرف الصدمات فوق الرقاقة. (د) غرفة الاسترداد الموجودة على وسادة الحرارة. (ه) وحدة التحكم في التأثير مع مفتاحي تحكم ، مظللة كما في مخطط التدفق (المربع الأحمر = تمديد / سحب / إيقاف ؛ صندوق أرجواني = تبديل التأثير). الرجاء النقر هنا لعرض نسخة أكبر من هذا الرقم.

3. متابعة ما بعد الصدمة

ملاحظة: يمكن تسجيل الخطوات التالية بالفيديو للتحليل دون اتصال بالإنترنت ، مما يسمح للمجرب بإجراء CHILD على متعددة على التوالي. ومع ذلك ، يجب إجراء تقييمات منتظمة ومتكررة لرفاهية.

  1. لاحظ مدة انقطاع النفس ، إذا كان موجودا (مباشرة بعد الاصطدام) ، وما إذا كان هناك دوران للرأس أثناء الاصطدام.
  2. ضع الماوس على جانبه الأيمن في قفص الاسترداد.
  3. لاحظ وقت تصحيح الماوس (التربية على 4 أرجل) ووقت استئناف السلوك الاستكشافي. عادة ما تستيقظ الفئران الزائفة في غضون 3-4 دقائق وتستأنف السلوك الاستكشافي بعد 3-4 دقائق (الشكل 3). تستيقظ الفئران الصغيرة في غضون 7-12 دقيقة بعد الاصطدام (الشكل 3 أ) وتستأنف الاستكشاف في غضون 12-18 دقيقة بعد الاصطدام (الشكل 3 ب) ، وفقا للجنس وشدة التأثير (الشكل 3 أ ، ب).
    ملاحظة: إذا لم يستأنف المصاب سلوكه الاستكشافي في غضون 30 دقيقة ، استبعاد.
  4. بمجرد التعافي تماما ، أعد إلى قفص منزلها. في هذه المرحلة ، يجب أن يكون سلوك الفئران الزائفة والأطفال (شدة G1 أو G2) متشابها تماما ، ولا ينبغي تمييز مجموعات داخل القمامة.
    ملاحظة: يمكن الحفاظ على حتى 18 شهرا بعد الإصابة14 في الظروف الموضحة في بداية الطرق. يمكن إجراء تقييمات النتائج السلوكية باستخدام مجموعة من الاختبارات بالاقتران مع قياسات التصوير بالرنين المغناطيسي والتصوير المصغر وعلم الأنسجة والكيمياء المناعية12. يمكن استخدام الكيمياء المناعية ل GFAP و NeuN في نقاط زمنية مبكرة للتحقق من صحة النموذج ووجود تغيرات في الأنسجة.

4. الكيمياء المناعية

ملاحظة: بعد يوم واحد من الإصابة ، تم تخدير من G2 والمجموعات الوهمية (ن = 4 فئران ل G2 و n = 4 ل Sham) وتحريرها عبر القلب باستخدام 4٪ بارافورمالدهيد (PFA) المحضر في محلول ملحي مخزن بالفوسفات (PBS) 0.1 متر ، درجة الحموضة 7.4 عند 4 درجات مئوية. تم استخراج الأدمغة10 من الجمجمة وغمرها في نفس محلول PFA طوال الليل ، ثم نقلها إلى PBS مع أزيد الصوديوم (0.1٪) قبل القطع. ثم تم تحضير المقاطع الإكليلية بسمك 50 ميكرومتر باستخدام اهتزاز. للتخزين الطويل ، تم وضع الأقسام في وسط واقي من التبريد (30٪ إيثيلين جلايكول و 20٪ جلسرين في PBS) عند -20 درجة مئوية حتى الاستخدام. لتوصيف تأثير الارتجاج على الدبقي في الدماغ وفقدان الخلايا العصبية ، تم إجراء الكيمياء الهيستوبية المناعية التي تستهدف GFAP و NeuN كما هو موضح هنا أدناه.

  1. اغسل أقسام الدماغ 4 مرات لمدة 10 دقائق في PBS.
  2. انقل الأقسام في محلول الحجب (1٪ BSA ، 0.3٪ Triton X-100 في PBS) لمدة 10 دقائق في درجة حرارة الغرفة (RT).
  3. احتضان الأقسام طوال الليل عند 4 درجات مئوية مع الأجسام المضادة الأولية التالية المخففة في محلول الحظر: الدجاج المضاد ل GFAP (1: 3000) والأرانب المضادة للنيو (1: 500).
  4. اغسل الشرائح 4 مرات لمدة 10 دقائق في PBS تحت التحريض.
  5. بعد ذلك ، قم بنقل الأقسام الموجودة في محلول الحجب الذي يحتوي على الأجسام المضادة الفلورية الثانوية المخففة 1: 1000 لمدة 1 ساعة في RT ، و Alexa-Fluor-488-nm مضاد للأرانب ، و Alexa-Fluor-568-nm مضاد للدجاج.
  6. اغسل الأقسام بعد ذلك 4 مرات لمدة 10 دقائق في PBS تحت التحريض.
  7. قم بتركيب الأقسام على الشرائح باستخدام وسيط التثبيت وأضف زلة غطاء. احتفظ بالشرائح عند 4 درجات مئوية حتى الحصول على الصورة.
  8. Aquire التألق المناعي باستخدام مجهر epifluorescence وبرنامج micromanager. استخدم مكونا إضافيا للخياطة بعدسة 10x للحصول على صور مبلطة لنصفي الكرة الأرضية المماثلين والمقابلين.
    ملاحظة: لم يظهر تلطيخ التحكم السلبي حيث تم حذف الجسم المضاد الأساسي أو الجسم المضاد الثانوي أي وضع علامات يمكن اكتشافها. لمزيد من تحليل الصور التفصيلي ، يمكن استخدام برنامج فيجي15 لتحديد معلمات التلوين المناعي في مختلف مناطق الاهتمام16.

الوصول مقيد. يرجى تسجيل الدخول أو بدء فترة تجريبية لعرض هذا المحتوى.

النتائج

نموذج CHILD هو نموذج سريع نسبيا وقابل للتكرار ل mTBI في الفئران الصغيرة ، مما يسمح أيضا بالاختلافات في الشدة والموقع. أظهرت الفئران CHILD ، كما هو متوقع ، أوقات تعافي أطول بكثير من إصابة الرأس المغلقة (الشكل 3). عندما تم تجميع الأفواج (ن = 36 أنثى زائفة ، ن = 140 ذكر زائف ، ن = 30 أنثى G1 ، ن = 55 ذكر G1 ، ن = 32 أنثى G2 ، ن = 141 ذكر G2) ، لوحظ تأخير في وقت التصحيح (الشكل 3 أ ، 3 اتجاهات ANOVA ص < 0.001) وفي الوقت المناسب لاستئناف السلوكيات الاستكشا...

الوصول مقيد. يرجى تسجيل الدخول أو بدء فترة تجريبية لعرض هذا المحتوى.

المناقشة

الخطوات الحاسمة في البروتوكول
يتطلب بروتوكول CHILD الموصوف هنا استخدام تأثير كهرومغناطيسي (الشكل 2 أ) الذي (1) يوحد معلمات التأثير (السرعة والعمق والمدة) ، (2) يضمن قابلية التكرار داخل المختبرات وعبرها ، و (3) متاح تجاريا بسهولة. عنصر مهم آخر هو طرف الاصطدام الذي يضرب رأس القوارض. يمكن استخدام مجموعة متنوعة من الاحتمالات ، بدءا من السيليكون إلى الأطراف المعدنية ، ولكن هذا البروتوكول يستخدم طرفا مطاطيا تم الحصول عليه من مكبس حقنة سعة 2 مل ...

الوصول مقيد. يرجى تسجيل الدخول أو بدء فترة تجريبية لعرض هذا المحتوى.

الإفصاحات

المؤلفون ليس لديهم ما يكشفون عنه.

شكر وتقدير

تم تمويل ورقة الطريقة هذه من قبل Eranet Neuron Neuvasc (Badaut) ، والوكالة الوطنية للبحث النانوي (Badaut) ، و CNRS IRP IINOVAtion (Badaut) و NIH NINDS Grant No. 1R01NS119605 (Obenaus ، Badaut) و 1RF1NS138032 (Obenaus ، Territo). تم إنشاء الشكل 1 باستخدام BioRender.com.

الوصول مقيد. يرجى تسجيل الدخول أو بدء فترة تجريبية لعرض هذا المحتوى.

المواد

قائمة المواد المستخدمة في هذه المقالة
الاسمالشركةرقم فهرسيالتعليقات
BSASigma Aldrich Chimie S.a.r.l
80 Rue de Luzais
L'lsle-d'Abeau Chesnes - BP701
38297 Saint-Quentin-Fallavier Cedex
France		A7030
C57Bl6J فئران مختبر نهر تشارلز فرنسا CRLF 9 الكل. مولان بيرغر ، 69130 É. كولي ، فرنسابوردو
الاصطدام الكهرومغناطيسيLeica Biosystems ، ريتشموند ، إلينوي الولايات المتحدة الأمريكيةتأثير واحد الاصطدام
المجهر EpifluorescenceOlympus ، BX41 ، سنتر فالي ، بنسلفانيا
إيثيلين جلايكولسيجما ألدريتش تشيمي S.a.r.l
80 Rue de Luzais
L'lsle-d'Abeau Chesnes - BP701
38297 Saint-Quentin-Fallavier Cedex
فرنسا		102466
GFAP الجسم المضاد الأساسيMillipore ، Billerica ، MAAB5541الدجاج المضاد ل GFAP
GFAP المجسات الجزيئية للأجسام المضادةالثانوية ، InvitrogenA11034الماعز المضاد للأرانب AlexaFluor & nbsp ؛ 488
GlycerolSigma Aldrich Chimie S.a.r.l
80 Rue de Luzais
L'lsle-d'Abeau Chesnes - BP701
38297 Saint-Quentin-Fallavier Cedex
France		G5516
رقائق الألومنيوم الثقيلةKirklandRK611التي تم الحصول عليها في
Cosco Micromanager software (المعاهد الوطنية للصحة ، الولايات المتحدة الأمريكية
الجسم المضاد الأساسي NeuNAbCam ، ديسكفري درايف ، كامبريدج
الحرم الجامعي الطبي الحيوي ،
كامبريدج ، CB2 0AX ، المملكة المتحدة AB128886		أرنب مضاد
للأجسام المضادة الثانوية NeuNمجسات جزيئية ، InvitrogenA11041الماعز المضاد للدجاج AlexaFluor 568
PBSSigma Aldrich Chimie S.a.r.l
80 Rue de Luzais
L'lsle-d'Abeau Chesnes - BP701
38297 Saint-Quentin-Fallavier Cedex
France		P5493
PFASigma Aldrich Chimie S.a.r.l
80 Rue de Luzais
L'lsle-d'Abeau Chesnes - BP701
38297 Saint-Quentin-Fallavier Cedex
France		1.04003
أزيدالصوديومSigma Aldrich Chimie S.a.r.l
80 Rue de Luzais
L'lsle-d'Abeau Chesnes - BP701
38297 Saint-Quentin-Fallavier Cedex
France		26628-22-8
Stereotaxic Frame - قاعدةKOPF الأدوات 7324 Elmo St, Tujunga, CA 91042, É tats-Unis900-C
إطار تجسيمي - مناور القطب الكهربائيKOPF الأدوات 7324 Elmo St ، Tujunga ، CA 91042 ، & Eacute ؛ tats-Unis960
الإطار التجسيمي - أدوات KOPF على شكل حرف U7324 شارع إلمو ، توجونجا ، كاليفورنيا 91042 ، É ؛ tats-Unis900-U
Triton x-100Sigma Aldrich Chimie S.a.r.l
80 Rue de Luzais
L'lsle-d'Abeau Chesnes - BP701
38297 Saint-Quentin-Fallavier Cedex
France		X100
مختبرات VectashieldVectorH-1000-10تصاعد متوسط
VibratomeLeica Biosystems ، ريتشموند ، إلينوي ، الولايات المتحدة الأمريكيةVTS1000
مختبر جاكسون مختبر جاكسون 600 مين ستريت بار هاربور ، الشرق الأوسط الولايات المتحدة الأمريكية 04609UCR
التجسيمي

المراجع

  1. Dewan, M. C., et al. Estimating the global incidence of traumatic brain injury. J Neurosurg. 130 (4), 1080-1097 (2018).
  2. Rivara, F. P., et al. Persistence of disability 24 to 36 months after pediatric traumatic brain injury: a cohort study. J Neurotrauma. 29 (15), 2499-2504 (2012).
  3. Fesharaki-Zadeh, A., Datta, D. An overview of preclinical models of traumatic brain injury (TBI): Relevance to pathophysiological mechanisms. Front Cell Neurosci. 18, (2024).
  4. Panchenko, P. E., Hippauf, L., Konsman, J. P., Badaut, J. Do astrocytes act as immune cells after pediatric TBI. Neurobiol Dis. 185, 106231(2023).
  5. Kochanek, P. M., Wallisch, J. S., Bayır, H., Clark, R. S. B. Pre-clinical models in pediatric traumatic brain injury-challenges and lessons learned. Childs Nerv Syst. 33 (10), 1693-1701 (2017).
  6. Smith, A. M., Grayson, B. E. A strike to the head: Parallels between the pediatric and adult human and the rodent in traumatic brain injury. J Neurosci Res. 102 (7), e25364(2024).
  7. McNamara, E. H., Grillakis, A. A., Tucker, L. B., McCabe, J. T. The closed-head impact model of engineered rotational acceleration (CHIMERA) as an application for traumatic brain injury pre-clinical research: A status report. Exp Neurol. 333, 113409(2020).
  8. Bodnar, C. N., Roberts, K. N., Higgins, E. K., Bachstetter, A. D. A systematic review of closed-head injury models of mild traumatic brain injury in mice and rats. J Neurotrauma. 36 (11), 1683-1706 (2019).
  9. Semple, B. D., Blomgren, K., Gimlin, K., Ferriero, D. M., Noble-Haeusslein, L. J. Brain development in rodents and humans: Identifying benchmarks of maturation and vulnerability to injury across species. Prog Neurobiol. 106-107, 1-16 (2013).
  10. Rodriguez-Grande, B., et al. Gliovascular changes precede white matter damage and long-term disorders in juvenile mild closed head injury. Glia. 66 (8), 1663-1677 (2018).
  11. Ichkova, A., et al. Early cerebrovascular and long-term neurological modifications ensue following juvenile mild traumatic brain injury in male mice. Neurobiol Dis. 141, 104952(2020).
  12. Badaut, J., et al. Endocannabinoid-mediated rescue of somatosensory cortex activity, plasticity and related behaviors following an early in life concussion. bioRxiv. , (2024).
  13. Leyba, K., et al. Neurovascular hypoxia after mild traumatic brain injury in juvenile mice correlates with heart-brain dysfunctions in adulthood. Acta Physiol. 238 (2), e13933(2023).
  14. Obenaus, A., et al. Progressive lifespan modifications in the corpus callosum following a single juvenile concussion in male mice monitored by diffusion MRI. bioRxiv. , (2023).
  15. Schindelin, J., et al. Fiji: An open-source platform for biological-image analysis. Nat Methods. 9 (7), 676-682 (2012).
  16. Clément, T., et al. Juvenile mild traumatic brain injury elicits distinct spatiotemporal astrocyte responses. Glia. 68 (3), 528-542 (2020).
  17. Drieu, A., et al. Persistent neuroinflammation and behavioural deficits after single mild traumatic brain injury. J Cereb Blood Flow Metab. 42 (12), 2216-2229 (2022).
  18. Obenaus, A., et al. A single mild juvenile TBI in male mice leads to regional brain tissue abnormalities at 12 months of age that correlate with cognitive impairment at the middle age. Acta Neuropathol Commun. 11 (1), 32(2023).
  19. Ryan, E., et al. Traumatic brain injury in children: Glial fibrillary acidic protein and clinical outcomes. Pediatr Emerg Care. 38 (3), e1139-e1142 (2022).
  20. Czeiter, E., et al. Blood biomarkers on admission in acute traumatic brain injury: Relations to severity, CT findings and care path in the CENTER-TBI study. EBioMedicine. 56, 102785(2020).
  21. Edwards, K. A., et al. Serum GFAP, NfL, and tau concentrations are associated with worse neurobehavioral functioning following mild, moderate, and severe TBI: A cross-sectional multiple-cohort study. Front Neurol. 14, 1223960(2023).
  22. Smith, A. M., et al. High-fat diet consumption negatively influences closed-head traumatic brain injury in a pediatric rodent model. Exp Neurol. 379, 114888(2024).
  23. Hunniford, V. T., et al. A systematic assessment of preclinical multilaboratory studies and a comparison to single laboratory studies. eLife. 12, e76300(2023).

الوصول مقيد. يرجى تسجيل الدخول أو بدء فترة تجريبية لعرض هذا المحتوى.

إعادة الطباعة والأذونات

الوسوم

CHILD
نموذج ارتجاج الأطفال في الفئران: إصابة الرأس المغلقة مع الاضطرابات طويلة الأمد (CHILD)
تواصل معنا
أوصِ به للمكتبة

الخصوصية

شروط الاستخدام

السياسات

حقوق الطبع والنشر © 2026 MyJoVE Corporation. جميع الحقوق محفوظة.