يتطلب اشتراك JoVE لعرض هذا المحتوى. تسجيل الدخول أو ابدأ نسخة تجريبية مجانية

مقالة منهجية

الكشف عن القابلية للأدوية والتفاعلات الدوائية في المتفطرة السلية باستخدام ريزازورين ميكروتيتر ومقايسة رقعة الشطرنج

923 مشاهدات

⸱

DOI:

10.3791/67672

⸱

أكتوبر 24, 2025

 ,  , 
1Department of Immunology, National Institute for Research in Tuberculosis, 2University of Madras, 3Faculty of Medical Research, Academy of Scientific and Innovative Research (AcSIR)

في هذه المقالة

ملخص

هنا ، نقدم بروتوكولا لتصور وتوحيد مقايسة ريسازورين ميكروتيتر (REMA) وتباين رقعة الشطرنج الخاصة به لتقييم قابلية الأدوية وملامح تفاعل المتفطرة السلية. توفر هذه الطريقة رؤى ، في المختبر ، لتحسين تركيبات الأدوية لاستخدامها في أنظمة العلاج ومكافحة السل المقاوم للأدوية المتعددة.

الملخص

يتطلب ظهور السل المقاوم للأدوية المتعددة طرقا سريعة ودقيقة لاختبار الحساسية للأدوية لتوجيه العلاج الفعال. تقدم هذه الدراسة منهجية تجمع بين مقايسة ريزازورين ميكروتيتر (REMA) ومقايسة رقعة الشطرنج لتحديد الحد الأدنى من التركيز المثبط (MIC) وتقييم التفاعلات الدوائية للأدوية المضادة للسل ضد المتفطرة السلية. تستفيد REMA ، التي تم تكييفها مع تنسيق 96 بئرا ، من الحد من صبغة ريزازورين عن طريق النشط الأيضي M. tuberculosis كمؤشر مرئي للحساسية للأدوية. يتم اختبار تركيزات متفاوتة من الأدوية المضادة للسل ضد عزلات المتفطرة السلية ، ويلاحظ تغيرات اللون لتحديد MIC. بعد ذلك ، يتم استخدام مقايسة رقعة الشطرنج لتقييم التأثيرات التآزرية أو المضافة أو العدائية المحتملة بين مجموعات الأدوية. هذه الطريقة البسيطة وغير المكلفة تحقق نتائج في غضون سبعة أيام ، مما يوفر ميزة كبيرة على طرق التوقيت الصيفي التقليدية. توفر هذه الطريقة رؤى قيمة حول التوقيت الصيفي لمتامة السل تعزل وتسهل تحديد التركيبات الدوائية الواعدة لتحسين نتائج العلاج ضد السل المقاوم للأدوية المتعددة.

المقدمة

ولا يزال مرض السل، الناجم عن المتفطرة السلية، يشكل تحديا صحيا عالميا هائلا، يتفاقم بسبب ظهور سلالات مقاومة للأدوية. وفقا لمنظمة الصحة العالمية (WHO) ، في عام 2023 ، كان هناك ما يقدر بنحو 10.6 مليون حالة إصابة جديدة بالسل و 1.3 مليون حالة وفاة ، مما يسلط الضوء على الحاجة الملحة لاستراتيجيات تشخيصية وعلاجية أكثر فعالية1. يشكل السل المقاوم للأدوية المتعددة (MDR-TB) والسل المقاوم للأدوية على نطاق واسع (XDR-TB) تحديات كبيرة لمكافحة المرض بسبب التعقيد والسمية والمدة الطويلة لأنظمة العلاج الحالية2،3.

ويمثل الإدخال الأخير لعوامل جديدة مضادة للسل، مثل البيداكويلين والديلامانيد، التي تستهدف مسارات كيميائية حيوية فريدة في السل المتفطر، طفرة في إدارة السل4،5. وقد تمت الموافقة على استخدام هذه الأدوية في المقام الأول في حالات السل المقاوم للفلوروكينولون والريفامبيسين كجزء من نظم السل المقاوم للأدوية المتعددة الأطول والأقصر التي أقرتها منظمة الصحة العالمية6، 7. ومع ذلك ، فإن تحديد تركيبات الأدوية المثلى وأنظمة الجرعات ، خاصة عند استخدام هذه العوامل جنبا إلى جنب مع العلاجات المعمول بها ، يظل مجالا حاسما في التحقيق8،9. الطرق الحالية لاختبار الحساسية للأدوية (DST) ، على الرغم من موثوقيتها ، غالبا ما تكون كثيفة الوقت ، وكثيفة الاستخدام للموارد ، وغير عملية لتقييم مجموعات الأدوية المعقدة في بيئة سريرية أو بحثية10. وهذا يؤكد الحاجة إلى فحوصات نمط ظاهري بسيطة وقابلة للتطوير يمكنها تقييم كل من فعالية الدواء وملامح التفاعل في السل.

من بين هذه الأساليب المظهرية ، ظهر اختبار ريزازورين ميكروتيتر (REMA) كطريقة تقليدية ومقبولة على نطاق واسع لتقييم قابلية الدواء. يعتمد الفحص على تقليل صبغة الريزاورين الزرقاء إلى ريسوروفين الوردي بواسطة البكتيريا النشطة استقلابا ، والتي تعمل كمؤشر مرئي لبقاء الخلية. على الرغم من تعميمه من قبل Palomino et al. في عام 200211 ، يعود مبدأ استخدام الريزازورين لتقييم نمو البكتيريا إلى عمل Pital et al.12. على مدى العقدين الماضيين ، تم التحقق من صحة طريقة REMA على نطاق واسع ودمجها في إجراءات التشغيل القياسية لأبحاث البكتيريا الفطرية والاختبارات التشخيصية13،14،15.

استكمالا ل REMA ، فإن مقايسة رقعة الشطرنج ، كما قدمها Caleffi-Ferracioli et al. ، يوسع فائدة REMA من خلال تمكين دراسات التفاعل بين دوائيين بتنسيق التخفيف الدقيق باستخدام نفس القراءة المستندة إلى الريزارين16. على الرغم من أن هذه الطريقة واعدة من حيث المبدأ ، إلا أنها تظل في المقام الأول أداة بحثية مفيدة لفحص تركيبات الأدوية التآزرية أو العدائية المحتملة أثناء التقييم قبل السريري المبكر بدلا من اختبار التشخيص الروتيني.

لا تقدم هذه المخطوطة REMA أو متغير رقعة الشطرنج الخاصة بها كطرق جديدة. بدلا من ذلك ، فإن الهدف من هذه الدراسة هو توفير تمثيل مرئي لمنهجية مفيدة ومعتمدة لتحديد MIC واختبار التفاعل الدوائي ، والتي تم وصفها وتطبيقها بنجاح في الدراسات السابقة. نحن نقدم بروتوكولا خطوة بخطوة مع إرشادات مفصلة حول تحضير اللقاح ، ومعايرة الدواء ، وتخطيط اللوحة ، وتفسير MIC ، وتحليل تفاعل رقعة الشطرنج. تهدف هذه المخطوطة إلى دعم الاستخدام الأوسع والأكثر اتساقا لمقايسات REMA ومقايسات رقعة الشطرنج في تطوير أدوية السل وعلم الأدوية التجريبي.

الوصول مقيد. يرجى تسجيل الدخول أو بدء فترة تجريبية لعرض هذا المحتوى.

البروتوكول

ملاحظة: المواد الكيميائية والمواد المستخدمة في أمثلة التجارب متوفرة في ملف جدول المواد.

1. إعداد وسائط 7H9-S

  1. بالنسبة إلى 100 مل من وسائط 7H9-S ، تزن 0.47 جم من مسحوق 7H9 و 0.1 جم من الكاسيتون ، ثم تذوب في 90 مل من الماء المقطر ؛ يقلب حتى يذوب تماما.
  2. عقم المرق في قارورة سعة 250 مل باستخدام الأوتوكلاف عند 121 درجة مئوية لمدة 15 دقيقة.
  3. بمجرد تعميمها وتبريدها ، أضف 10 مل من مكمل سكر العنب الكاتلاز الأوليك (OADC) و 0.5 مل من الجلسرين.
  4. احتضن طوال الليل عند 37 درجة مئوية للتحقق من العقم.
    ملاحظة: يتم التحقق من عقم الوسط 7H9-S المحضر عن طريق احتضانه طوال الليل عند 37 درجة مئوية. يجب أن يظل الوسيط واضحا في اليوم التالي ، دون ملاحظة تعكر.
  5. قم بتخزين الوسط 7H9-S عند 4 درجات مئوية ، بعيدا عن الضوء المباشر.

2. M.tuberculum التحضير لقاح

  1. تحضير اللقاح من مزرعة M.tuberculosis المزروعة في وسط صلب Lowenstein Jensen (LJ)
    1. باستخدام حلقة تلقيح معقمة ، اجمع حلقة كاملة من مزرعة السل من وسط LJ مزروع حديثا (عمره 21-28 يوما).
      ملاحظة: تجنب بعناية الكشط بعمق في الوسط ، مما قد يزعج المستعمرات القديمة.
    2. ضع البكتيريا التي تم جمعها في زجاجة بيجو معقمة تحتوي على حبات زجاجية معقمة و 2.5 مل من مرق 7H9-S. تأكد من أن الخرز الزجاجي يساعد في التعطيل الميكانيكي للكتل أثناء الدوامة.
      ملاحظة: تعتبر المزارع الطازجة بين 21-28 يوما ضرورية لضمان نتائج اختبار حساسية موثوقة. تجنب استخدام الثقافات القديمة ، لأنها قد تؤدي إلى نتائج غير متسقة.
    3. قم بتأمين زجاجة البيجو والدوامة بقوة لمدة 1 دقيقة على الأقل. تأكد من الخلط المستمر لتفتيت الكتل البكتيرية ، مما ينتج عنه تعليق عكر نسبيا. الهدف هو توزيع متجانس للبكتيريا داخل الوسط.
    4. انقل معلق المزرعة إلى زجاجة بيجو طازجة واتركه دون إزعاج لمدة 15 دقيقة. تسمح هذه الخطوة للكتل البكتيرية الأكبر بالاستقرار في الأسفل.
    5. باستخدام معيار McFarland 1.0 كمرجع ، تحقق من تعكر تعليق الثقافة واضبطه باستخدام مرق 7H9-S حتى يتم تحقيق التعكر المطلوب.
      ملاحظة: يستخدم معيار ماكفارلاند ، عادة 1.0 ، كمرجع للتعكر المكافئ لحوالي 1.97 × 106 CFU / مل17. يتم تحضير المعيار من خلال الجمع بين 0.1 مل من 1٪ كلوريد الباريوم و 9.9 1 مل من 1٪ حمض الكبريتيك ، مما ينتج عنه راسب ناعم من كبريتات الباريوم ، مما يوفر العكارة. تتم مقارنة التعليق البكتيري بصريا بمعيار ماكفارلاند من خلال تثبيت كلا الأنبوبين على خلفية بيضاء بخطوط سوداء. يتم ضبط تعكر التعليق البكتيري لتتناسب مع المعيار.
  2. تحضير اللقاح من مزرعة M.tuberculosis المزروعة في وسط سائل 7H9
    1. باستخدام ماصة معقمة ، انقل 2.5 مل من مزرعة السل المتدني (عمر 2-3 أسابيع) إلى زجاجة بيجو طازجة مع خرز زجاجي.
    2. دوامة الخليط لمدة 1 دقيقة على الأقل لضمان تعليق متجانس. يساعد عمل الدوامة على كسر أي كتل.
    3. انقل 2.5 مل من معلق المزرعة إلى زجاجة بيجو طازجة واتركه لمدة 15 دقيقة للسماح للكتل بالاستقرار في الأسفل.
    4. قارن التعكر بمعيار McFarland 1.0 واضبط باستخدام مرق 7H9-S لتحقيق التركيز المطلوب.
  3. تخفيف اللقاح
    1. قم بإعداد تخفيف 1:10: لتخفيف اللقاح ، أضف 1 مل من المعلق البكتيري إلى 9 مل من مرق 7H9-S في وعاء معقم (سيعطي هذا ما يقرب من 1.97 × 105 CFU / مل).

3. تحضير المضادات الحيوية وتخزينها

  1. تحضير المخزون وحلول العمل: تحضير الأدوية المستخدمة في التجربة النموذجية ، جنبا إلى جنب مع مخزونها وطرق تحضير محلول العمل ، كما هو موضح في الجدول 1.
    1. إيزونيازيد (INH أو I): لتحضير محلول مخزون 1 مجم / مل من الأيزونيازيد ، قم بإذابة 2 مجم من مسحوق الأيزونيازيد في 2.0 مل من الماء المقطر. تعقيم المحلول باستخدام مرشح حقنة 0.22 ميكرومتر.
    2. موكسيفلوكساسين (موكس أو إم): لتحضير محلول مخزون 1 مجم / مل من موكسيفلوكساسين ، قم بإذابة 2 مجم من مسحوق موكسيفلوكساسين في 2.0 مل من الماء المقطر. تعقيم المحلول باستخدام مرشح حقنة 0.22 ميكرومتر.
    3. بيداكويلين (BDQ أو J): البيداكويلين ضعيف الذوبان في الماء. لتحضير محلول مخزون 1 مجم / مل ، قم بإذابة 2 مجم من مسحوق البيداكويلين في 2.0 مل من DMSO. تعقيم المحلول باستخدام مرشح حقنة 0.22 ميكرومتر.
    4. ديلامانيد (DEL أو D): على غرار البيداكويلين ، فإن ديلامانيد لديه قابلية ضعيفة للذوبان في الماء. لتحضير محلول مخزون 1 مجم / مل ، قم بإذابة 2 مجم من مسحوق الديلامانيد في 2.0 مل من DMSO. تعقيم المحلول باستخدام مرشح حقنة 0.22 ميكرومتر.
  2. التخزين: اقتباس 100 ميكرولتر من كل محلول مخزون دوائي في مبردات معقمة وتخزينها في درجة حرارة -20 درجة مئوية لمدة تصل إلى 3 أشهر. بمجرد إذابة الجليد ، تخلص من أي محلول متبقي. لا تقم بإعادة التجميد.

4. تحضير محلول Resazurin والتخزين

  1. قم بإذابة الريزيزورين إلى تركيز نهائي قدره 0.01٪ أو 0.02٪ في الماء المقطر. قم بتصفية المحلول من خلال مرشح 0.2 ميكرومتر للتعقيم.
  2. قم بتخزين محلول الريزازورين المعقم عند 4 درجات مئوية لمدة تصل إلى 1-2 أسابيع ، محميا من الضوء لمنع التدهور.

5. تحضير لوحة REMA

ملاحظة: ارجع إلى الشكل 1 للحصول على دليل مرئي حول إعداد لوحة ميكروتيتر REMA 96 بئر. توفر اللوحة المكونة من 96 بئرا مساحة كافية لتشغيل فحوصات الأدوية بشكل مكرر لكل دواء في ستة تخفيفات ذات شقين.

  1. أضف مرق 7H9-S: باستخدام ماصة متعددة القنوات ، أضف 100 ميكرولتر من مرق 7H9-S إلى الأعمدة 2-11 ، الصفوف B-G. تأكد من أن التوزيع متساو عبر جميع الآبار.
  2. أضف محاليل دوائية: أضف 100 ميكرولتر من محلول INH العامل إلى الآبار B2 و B6. وبالمثل ، أضف حلول العمل MOX و DEL و BDQ إلى الآبار الخاصة بها (B3 و B7 و B4 و B8 و B5 و B9).
  3. تمييع تركيزات الدواء: باستخدام ماصة متعددة القنوات ، قم بإجراء تخفيفات تسلسلية ذات شقين من الصفوف B إلى G (الأعمدة 2-9) ، مع ضمان التخلص من 100 ميكرولتر النهائية بعد الخلط في الصف G.
  4. آبار التحكم في النمو: أضف 100 ميكرولتر من مرق 7H9-S إلى الآبار B10 و C10 للتحكم في النمو.
  5. ضوابط السلبية والعقم: أضف 200 ميكرولتر من مرق 7H9-S إلى الآبار B11 و C11 لتكون بمثابة ضوابط سلبية وعقم.
  6. منع التبخر: أضف 200 ميكرولتر من الماء المقطر المعقم إلى جميع الآبار الخارجية لتقليل التبخر أثناء الحضانة.
  7. ألواح التلقيح: قم بتلقيح كل بئر ب 100 ميكرولتر من تعليق الثقافة المخفف 1:10 ، باستثناء بئر التحكم السلبي. ضمان تلقيح موحد في جميع الآبار.
  8. الختم والحضانة: أغلق الألواح في أكياس بلاستيكية للحفاظ على العقم واحتضان عند 37 درجة مئوية لمدة 7 أيام.

6. مقايسة المعايرة بالتحليل الحجمي REMA

ملاحظة: ارجع إلى الشكل 2 أ ، ب للحصول على دليل مرئي حول قالب مقايسة المعايرة برقعة الشطرنج REMA لتركيبات الأدوية (على سبيل المثال ، BDQ و DEL).

  1. تمييع الأدوية عموديا وأفقيا: قم بتخفيف الدواء الأول (BDQ) عموديا (الصفوف B-H) والدواء الثاني (DEL) أفقيا (الأعمدة 2-8) لتوليد مجموعات مختلفة من دواءين.
    ملاحظة: قم بإعداد محلول العمل المخفف بشكل متسلسل في قارورة معقمة (من 4 ميكروغرام / مل - 0.06 ميكروغرام / مل) لدواء مخفف أفقيا.
  2. أضف حل عمل BDQ للتخفيف الرأسي: أضف 100 ميكرولتر من محلول BDQ العامل إلى البئر B2 و B8.
  3. أضف مرق 7H9-S: باستخدام ماصة متعددة القنوات ، أضف 50 ميكرولتر من مرق 7H9-S إلى الأعمدة C2-H8. تأكد من أن التوزيع متساو عبر جميع الآبار.
  4. تخفيف تركيزات الدواء: باستخدام ماصة متعددة القنوات ، قم بإجراء تخفيفات مزدوجة من الصفوف B-H (الأعمدة 2-8) ، مما يضمن التخلص من 50 ميكرولتر النهائية بعد الخلط في الصف H.
  5. أضف محلول عمل DEL للتخفيف الأفقي: أضف محاليل العمل المخففة بشكل تسلسلي للأدوية من 4 ميكروغرام / مل إلى 0.06 ميكروغرام / مل إلى الآبار المقابلة.
  6. آبار التحكم في النمو: أضف 100 ميكرولتر من مرق 7H9-S إلى الآبار B9 و C9 للتحكم في النمو.
  7. ضوابط السلبية والعقم: أضف 200 ميكرولتر من مرق 7H9-S إلى الآبار B10 و C10 لتكون بمثابة ضوابط سلبية وعقمية.
  8. ألواح التلقيح: قم بتلقيح كل بئر ب 100 ميكرولتر من تعليق الثقافة المخفف 1:10 ، باستثناء بئر التحكم السلبي. ضمان تلقيح موحد في جميع الآبار.
  9. الختم والحضانة: أغلق الألواح في أكياس بلاستيكية للحفاظ على العقم واحتضان عند 37 درجة مئوية لمدة 7 أيام.

7. حضانة وتفسير النتائج

  1. تلطيخ ريزازورين: بعد 7 أيام من الحضانة ، أضف 30 ميكرولتر من الريازورين (0.01٪ -0.02٪) لكل بئر. أغلق اللوحة واحتضنها طوال الليل لتطوير اللون.
  2. تفسير تغير اللون.
    1. افحص الآبار بصريا تحت ضوء أبيض ثابت أو إضاءة متوازنة مع ضوء النهار.
      ملاحظة: يجب أن يتحول التحكم في النمو (بدون دواء) إلى اللون الأزرق إلى الوردي ، مما يشير إلى التمثيل الغذائي البكتيري النشط. يشير اللون الأزرق إلى تثبيط النمو الكامل. يشير اللون الوردي إلى النمو النشط ، بينما يمثل اللون الأرجواني (لون مختلط) تثبيطا جزئيا.
    2. قارن شدة اللون بكل من التحكم السلبي (الوسائط فقط) والتحكم الإيجابي (نمو البكتيريا بدون دواء) للحصول على تفسير دقيق. لتقليل تحيز المراقب ، استخدم قراءات مستقلة مزدوجة أو تصوير لوحات.
      ملاحظة: يمكن أن يختلف الحكم المرئي باختلاف ظروف الإضاءة المحيطة، لذا فإن الإضاءة المتسقة ضرورية.
  3. الحد الأدنى من التركيز المثبط (MIC)
    1. تعريف MIC على أنه أقل تركيز للدواء الذي يظل فيه البئر أزرق تماما ، مما يشير إلى تثبيط نشاط التمثيل الغذائي بنسبة ≥99٪. ضع في اعتبارك الآبار التي تظهر اللون الأرجواني أو الوردي مما يدل على النمو الجزئي أو الكامل.
      ملاحظة: يقترب تحديد الميكروفون الميكروفون بواسطة REMA من مبادئ طريقة النسبة الكلاسيكية ، حيث يعتبر MIC أقل تركيز يثبط ≥99٪ من اللقاح بالنسبة للتحكم الخالي من المخدرات. على الرغم من أن REMA لا يستخدم عدد CFU ، فإن نقطة النهاية المرئية تمثل ارتباطا مظهريا لهذه العتبة المستندة إلى النسبة. يتماشى هذا التفسير مع بروتوكولات قياس الألوان التي تم إنشاؤهامسبقا 11،14.

8. حساب مؤشر التركيز المثبط الجزئي (FIC)

ملاحظة: يساعد مؤشر التركيز المثبط الجزئي (FIC) في تحديد التفاعل بين دواءين (التآزر أو العداء أو اللامبالاة). يتم حسابه بناء على قيم MIC التي تم الحصول عليها من فحص رقعة الشطرنج.

  1. تحديد MIC لكل دواء وحده: من مقايسة REMA ، حدد MIC لكل دواء عند استخدامه بشكل فردي.
  2. تحديد MIC لكل دواء بالاشتراك: من مقايسة المعايرة بالتحليل الحجمي لرقعة الشطرنج، حدد MIC لكل دواء عند استخدامه مع الدواء الثاني.
  3. احسب FIC لكل دواء.
    ملاحظة: ارجع إلى الجدول 2 للاطلاع على الصيغ المستخدمة لحساب فهرس FIC و FIC. يوضح الجدول 3 MIC الموحدة بناء على مقايسة REMA. يتم عرض قيم مؤشر MIC و FIC التمثيلية في الجدول 4.
    1. تفسير مؤشر FIC على النحو التالي:
      FIC ≤ 0.5: تشير إلى التآزر - تعمل الأدوية معا لتثبيط النمو بشكل أكثر فعالية من أي من الدواءين وحدهما.
      FIC > 0.5 إلى < 4.0: أشر إلى الإضافة - التأثير المشترك يساوي مجموع التأثيرات الفردية.
      FIC ≥ 4.0: تشير إلى العداء - تتداخل الأدوية مع نشاط بعضها البعض.
  4. مثال: احسب مؤشر FIC ل BDQ و DEL في H37Rv
    1. حدد MIC ل BDQ ل H37Rv (على سبيل المثال ، 0.125 ميكروغرام / مل). بالاشتراك مع DEL ، سجل MIC ل BDQ على أنه 0.03 ميكروغرام / مل.
    2. حدد ميكروفون DEL ل H37Rv (على سبيل المثال ، 0.063 ميكروغرام / مل). بالاشتراك مع BDQ ، سجل ميكروفون DEL على أنه 0.125 ميكروغرام / مل.
    3. احسب FIC ل BDQ:
      FIC (BDQ) = MIC ل BDQ في تركيبة / MIC ل BDQ وحده = 0.03 / 0.125 = 0.24
    4. احسب FIC ل DEL: FIC (DEL) = ميكروفون DEL في تركيبة / MIC ل DEL وحده = 0.125 / 0.063 = 1.98
    5. أضف كلا FICs للحصول على مؤشر FIC: مؤشر FIC = FIC (BDQ) + FIC (DEL) = 0.24 + 1.98 = 2.26
    6. تفسير النتيجة.
      ملاحظة: يقع مؤشر FIC البالغ 2.26 ضمن نطاق التفاعل الإضافي (>0.5 إلى <4.0) ، مما يشير إلى أن الجمع بين BDQ و DEL له تأثير مضاف على تثبيط نمو السل.

الوصول مقيد. يرجى تسجيل الدخول أو بدء فترة تجريبية لعرض هذا المحتوى.

النتائج

تحديد الميكروفون للأدوية المضادة للسل بواسطة مقايسة REMA
تم تقييم أنشطة بيداكويلين وديلامانيد وموكسيفلوكساسين وإيزونيازيد باستخدام ريما ضد فيروس H37RV الحساس للأدوية والعزل السريري المقاوم للأدوية من المتفطرة السلية. تم استخدام بيداكويلين وديلامانيد وإيزونيازيد في نطاق تركيز (1 ميكروغرام/مل إلى 0.03 ميكروغرام/مل) وكان موكسيفلوكساسين في حدود (2 ميكروغرام/مل إلى 0.06 ميكروغرام/مل). ثم تم تلقيح المعلقات البكتيرية للعزلات السريرية المقاومة للأدوية من M. tuberculosis و H37Rv واحتضانها لمد...

الوصول مقيد. يرجى تسجيل الدخول أو بدء فترة تجريبية لعرض هذا المحتوى.

المناقشة

أصبح التهديد العالمي الذي يشكله السل المقاوم للأدوية قضية ملحة1،19. وقد أدى ذلك إلى حاجة ملحة لتطوير طرق محسنة وسريعة لاختبار الحساسية للأدوية، لا سيما بالنسبة لأدوية الخط الثاني والأحدث المضادة للسل. وهذه الأساليب ضرورية لتعزيز استراتيجيات العلاج، وإدارة الأدوية المضادة للسل بفعالية، والحد من مخاطر تطور المرض وزيادةالمقاومة20. ومن شأن الطريقة التي تقيم كلا من الحساسية للأدوية وملامح التفاعل أن توفر فوائد ...

الوصول مقيد. يرجى تسجيل الدخول أو بدء فترة تجريبية لعرض هذا المحتوى.

الإفصاحات

ليس لدى المؤلفين ما يكشفون عنه.

المواد

قائمة المواد المستخدمة في هذه المقالة
الاسمالشركةرقم فهرسيالتعليقات
زجاجة مربعة سعة 250 مل مع غطاءشوت دوران218203655إعداد وسائل الإعلام
مرق 7H9بيكتون ديكنسون271310وسائط نمو المتفطرة السلية (درجة حرارة الغرفة)
صفيحة 96 بئر مع غطاءكورنينج359696 بئر صفائح دقيقة معالجة بالبوليسترين TC ذات قاع شفاف ، ملفوفة بشكل فردي ، مع غطاء ، معقمة (درجة حرارة الغرفة)
نصائح الفن (1000 μ L)تارسونز528106مرشحات البولي إيثيلين الكارهة للماء مع   ؛ البولي بروبلين رفوف مرشح طرف معقم (درجة حرارة الغرفة)
نصائح الفن (200 μ L)تارسونز528104مرشحات البولي إيثيلين الكارهة للماء مع   ؛ البولي بروبلين رفوف مرشح طرف معقم (درجة حرارة الغرفة)
كلوريد الباريوم ثنائي هيدراتميرك217565إعداد ماكفارلاند القياسي (درجة حرارة الغرفة)
بيداكويلين (BDQ)يانسن ويانسنهدية من يانسن ويانسنالأدوية المضادة للسل (4 درجات; C)
كاسيتونبيكتون ديكنسون225930مكمل للاستزراع البكتيري (درجة حرارة الغرفة)
ديلامانيد (DEL)أوتسوكا للأدويةهدية من أوتسوكا للأدويةالأدوية المضادة للسل (4 درجات; C)
ثنائي ميثيل سلفوكسيدسيجما ألدريتش67-68-5تحضير مخزون الأدوية (درجة حرارة الغرفة)
مرشح 0.2 μ mميليبورSLGVR33RS0.22  μ م PVDF ، مرشح حقنة معقمة يمكن التخلص منه (درجة حرارة الغرفة)
الجلسرينميرك356350تمت إضافته إلى وسائط الثقافة (درجة حرارة الغرفة)
حلقة التلقيحسيجما ألدريتشI8263لتحضير تعليق الثقافة (درجة حرارة الغرفة)
إيزونيازيد (INH)سيجما ألدريتشI3377-5Gالأدوية المضادة للسل (4 درجات; C)
LJ ميل متوسطدينار بحريني ميكوباكتوسيل221414وسائط النمو ل M. السل (4 ° C)
مكارتني بيجو زجاجة ضيقة الفم، 14 ملسوبرتيك12.124.0014لتحضير تعليق الثقافة (درجة حرارة الغرفة)
مكارتني بيجو زجاجة ضيقة الفم، 7 ملسوبرتيك12.124.0007لتحضير تعليق الثقافة (درجة حرارة الغرفة)
الماصات الدقيقة (1000 μ L)جيلسونF144059Mللتعامل الدقيق مع السوائل (درجة حرارة الغرفة)
الماصات الدقيقة (200 μ L)جيلسونFA10005Mللتعامل الدقيق مع السوائل (درجة حرارة الغرفة)
موكسيفلوكساسين (موكس)سيجما ألدريتشSML1581-50 مجمالأدوية المضادة للسل (4 درجات; C)
ماصة متعددة القنوات (20 – 200 μ L)VWR849070024لسحب الآبار في وقت واحد عبر الآبار
OADCبيكتون ديكنسون211886مكمل للثقافة البكتيرية (4 ° C)
حشوات الماصةميركZ333980للتعامل الدقيق مع السوائل (درجة حرارة الغرفة)
ملح الصوديوم ريزازورينسيجما ألدريتش62758-13-8مؤشر الأكسدة والاختزال لمقايسات REMA (درجة حرارة الغرفة)
ماصات مصلية ، 10 ملكورنينجCLS4100تم استخدام ماصات معقمة من البوليسترين يمكن التخلص منها (درجة حرارة الغرفة)
حبات زجاجية صلبة بقطر 6 ممسيجما ألدريتشZ265950لتحضير تعليق الثقافة (درجة حرارة الغرفة)
حامض الكبريتيك 95 &ndash ؛ 97%ميرك100731إعداد ماكفارلاند القياسي (درجة حرارة الغرفة)
محاقن للفلترديسبو فان100032للاستخدام مع مرشحات الحقنة
خلاط دوامةريميCM-101 بلسلإعداد تعليق الثقافة
كيس بولي بسحاب علويسيجما ألدريتشZ162949

المراجع

  1. Global tuberculosis report 2023. , World Health Organization. https://www.who.int/publications/i/item/9789240083851 (2023).
  2. Khawbung, J. L., Nath, D., Chakraborty, S. Drug-resistant tuberculosis: A review. Comp Immunol Microbiol Infect Dis. 74, 101574(2021).
  3. Alame Emane, A. K., Guo, X., Takiff, H. E., Liu, S. Highly transmitted M. tuberculosis strains are more likely to evolve MDR/XDR and cause outbreaks, but what makes them highly transmitted. Tuberculosis. 129, 102092(2021).
  4. Koul, A., et al. Delayed bactericidal response of Mycobacterium tuberculosis to bedaquiline involves remodelling of bacterial metabolism. Nat Commun. 5, 3369(2014).
  5. Matsumoto, M., et al. OPC-67683, a nitro-dihydro-imidazooxazole derivative with promising action against tuberculosis in vitro and in mice. PLoS Med. 3 (11), e466(2006).
  6. WHO consolidated guidelines on tuberculosis: Module 4. treatment drug-resistant tuberculosis treatment. , World Health Organization. At https://www.who.int/publications/i/item/9789240063129 (2020).
  7. Conradie, F., et al. Treatment of highly drug-resistant pulmonary tuberculosis. N Engl J Med. 382 (10), 893-902 (2020).
  8. Lechartier, B., Hartkoorn, R. C., Cole, S. T. In vitro combination studies of benzothiazinone lead compound BTZ043 against Mycobacterium tuberculosis. Antimicrob Agents Chemother. 56 (11), 5790-5793 (2012).
  9. Mallikaarjun, S., et al. Delamanid coadministered with antiretroviral drugs or anti-tuberculosis drugs shows no clinically relevant drug-drug interactions in healthy subjects. Antimicrob Agents Chemother. 60 (10), 5976-5985 (2016).
  10. Pai, M., Nicol, M. P., Boehme, C. C. Tuberculosis diagnostics: State of the art and future directions. Microbiol Spectr. 4 (5), (2016).
  11. Palomino, J. -C., et al. Resazurin microtiter assay plate: Simple and inexpensive method for detection of drug resistance in Mycobacterium tuberculosis. Antimicrob Agents Chemother. 46 (8), 2720-2722 (2002).
  12. Pital, A., Pital, R. C., Leise, J. M. A rapid method for determining the drug susceptibility of Mycobacterium tuberculosis. Am Rev Tuberc. 78 (1), 111-116 (1958).
  13. Präbst, K., Engelhardt, H., Ringgeler, S., Hübner, H. Basic colorimetric proliferation assays: MTT, WST, and Resazurin. Methods Mol Biol. 1601, 1-17 (2017).
  14. Schön, T., et al. Antimicrobial susceptibility testing of Mycobacterium tuberculosis complex isolates - the EUCAST broth microdilution reference method for MIC determination. Clin. Microbiol. Infect. 26 (11), 1488-1492 (2020).
  15. Singh, S., et al. Rapid identification and drug susceptibility Testing of Mycobacterium tuberculosis: Standard operating procedure for non-commercial assays: Part 3: Colorimetric Redox Indicator Assay v1.3.12. J Lab Physicians. 4 (2), 120-126 (2012).
  16. Caleffi-Ferracioli, K. R., Maltempe, F. G., Siqueira, V. L. D., Cardoso, R. F. Fast detection of drug interaction in Mycobacterium tuberculosis by a checkerboard resazurin method. Tuberculosis. 93 (6), 660-663 (2013).
  17. Peñuelas-Urquides, K., et al. Measuring of Mycobacterium tuberculosis growth: a correlation of the optical measurements with colony forming units. Braz J Microbiol. 44 (1), 287-290 (2013).
  18. Chandramohan, Y., et al. In vitro interaction profiles of the new antitubercular drugs bedaquiline and delamanid with Moxifloxacin against clinical Mycobacterium tuberculosis isolates. J Glob Antimicrob Resist. 19, 348-353 (2019).
  19. Hameed, H. A., et al. Characterization of genetic variants associated with rifampicin resistance level in Mycobacterium tuberculosis clinical isolates collected in Guangzhou Chest Hospital, China. Infect Drug Resist. 15, 5655-5666 (2022).
  20. Lienhardt, C., et al. New drugs for the treatment of tuberculosis: Needs, challenges, promise, and prospects for the future. J Infect Dis. 205, S241-S249 (2012).
  21. Anoopkumar-Dukie, S., et al. Resazurin assay of radiation response in cultured cells. Br J Radiol. 78 (934), 945-947 (2005).
  22. Baker, C. N., Thornsberry, C., Hawkinson, R. W. Inoculum standardization in antimicrobial susceptibility testing: evaluation of overnight agar cultures and the rapid inoculum standardization system. J Clin Microbiol. 17 (3), 450-457 (1983).
  23. McFarland, J. The nephelometer: an instrument for estimating the number of bacteria in suspensions used for calculating the opsonic index and for vaccines. J Am Med Assoc. XLIX (14), 1176(1907).
  24. Bellio, P., Fagnani, L., Nazzicone, L., Celenza, G. New and simplified method for drug combination studies by checkerboard assay. MethodsX. 8, 101543(2021).
  25. Martin, A., Camacho, M., Portaels, F., Palomino, J. C. Resazurin microtiter assay plate testing of Mycobacterium tuberculosis susceptibilities to second-line drugs: Rapid, simple, and inexpensive method. Antimicrob Agents Chemother. 47 (11), 3616-3619 (2003).
  26. Zhao, L., et al. Evaluation of BACTEC MGIT 960 system for the second-line drugs susceptibility testing of Mycobacterium tuberculosis in China. J Microbiol Methods. 91, 212-214 (2012).
  27. Said, H. M., et al. Comparison between the BACTEC MGIT 960 system and the agar proportion method for susceptibility testing of multidrug resistant tuberculosis strains in a high burden setting of South Africa. BMC Infect Dis. 12, 369(2012).
  28. Caviedes, L., Delgado, J., Gilman, R. H. Tetrazolium microplate assay as a rapid and inexpensive colorimetric method for determination of antibiotic susceptibility of Mycobacterium tuberculosis. J Clin Microbiol. 40 (5), 1873-1874 (2002).
  29. Mouton, J. W., Vinks, A. A. Pharmacokinetic/pharmacodynamic modelling of antibacterials in vitro and in vivo using bacterial growth and kill kinetics. Clin Pharmacokinet. 44 (2), 201-210 (2005).
  30. Sychev, A. V., Lavrova, A. I., Dogonadze, M. Z., Postnikov, E. B. Establishing compliance between spectral, colourimetric and photometric indicators in resazurin reduction test. Bioengineering. 10 (8), 962(2023).
  31. Postnikov, E. B., Sychev, A. V., Lavrova, A. I. Dose-response curve in REMA test: Determination from smartphone-based pictures. Analytica. 5 (4), 619-631 (2024).
  32. Mehlawat, N., Chakkumpulakkal Puthan Veettil, T., Sharpin, R., Wood, B. R., Alan, T. Ultrafast and ultrasensitive bacterial detection in biofluids: Leveraging resazurin as a visible and fluorescent spectroscopic marker. Anal Chem. 96 (45), 18002-18010 (2024).
  33. Grosset, J., Truffot-Pernot, C., Lacroix, C., Ji, B. Antagonism between isoniazid and the combination pyrazinamide-rifampin against tuberculosis infection in mice. Antimicrob Agents Chemother. 36 (3), 548-551 (1992).

الوصول مقيد. يرجى تسجيل الدخول أو بدء فترة تجريبية لعرض هذا المحتوى.

إعادة الطباعة والأذونات

الوسوم

الفيديو قريباً
اتصل بنا
أوصِ بها للمكتبة

الخصوصية

شروط الاستخدام

السياسات

2026 © حقوق الطبع والنشر MyJoVE Corporation. جميع الحقوق محفوظة.