مقالة منهجية

فصل وتجزئة بروتينات جدار الخلية وغشاء الخلية من المتفطرة السلية لتحليل البروتين النهائي

DOI:

10.3791/67680

⸱

سبتمبر 26, 2025

 ,  ,  , 
1Department of Immunology, National Institute for Research in Tuberculosis, 2Faculty of Medical Research, Academy of Scientific and Innovative Research (AcSIR)

في هذه المقالة

ملخص

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,

يفصل هذا البروتوكول بروتينات جدار الخلية والغشاء غير القابلة للذوبان إلى كسور بسيطة (1-5 بروتينات) باستخدام التركيز المتساوي الكهربائي التحضيري (IEF) على أساس النقطة المتساوية الكهروحية ، متبوعا بالفصل بالوزن الجزيئي. يمكن استخدام الكسور الناتجة مباشرة للتحليل المناعي والبروتيني دون مزيد من التنقية.

الملخص

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,

تم فصل بروتينات جدار خلية المتفطرة والغشاء ، والتي تلعب دورا مركزيا في التسبب في مرض السل ، بنجاح باستخدام التركيز الكهربائي التحضيري (IEF) والرحلان الكهربائي التحضيري لهلام دوديسيل الصوديوم - بولي أكريلاميد (SDS-PAGE). يليه شطف الهلام ، والتغلب على القيود في الطرق التقليدية لفصل البروتينات الكارهة للماء. في هذا الإجراء ، تم نقل مستعمرات السل من مائلات Lowenstein-Jensen إلى 2 مل من مرق 7H9 ، ومشتتها بالخرز الزجاجي ، واحتضانها عند 37 درجة مئوية لمدة أسبوعين. بعد ذلك ، تم توسيع نطاق الثقافة حتى 200 مل ونمت في شاكر لمدة 4 أسابيع. تمت ترقيته إلى 1 لتر مع 500 مل من مرق 7H9 ونمت لمدة 4 أسابيع إضافية. تم تكوير البكتيريا الفطرية المزروعة عن طريق الطرد المركزي عند 1741 × جم لمدة 30 دقيقة. لكل 2 غرام بيليه ، تمت إضافة 1 مل من المخزن المؤقت للكسر ، وتم صوتنة العينة. تم طرد المحلل عند 3436 × جم لمدة 15 دقيقة لإزالة الخلايا غير المنقطعة ، وتم تركيز المادة الطافية. تم طرد هذا المادة الطافية (محللة الخلية الكاملة) عند 13751 × جم لمدة 30 دقيقة لبروتينات جدار الخلية. تم طرد الطراز المتبقي فائق الطرد المركزي عند 100,000 × جم لمدة 4 ساعات لفصل غشاء الخلية والعصارة الخلوية. تم تحميل بروتينات جدار الخلية والغشاء المعزولة على نظام IEF التحضيري السائل عند 4 درجات مئوية وفصلها عند 12 واط حتى استقر الجهد عند 1400 فولت ، والذي يفصل 20 جزأ. تم فصل كسور IEF هذه بشكل أكبر بواسطة SDS-PAGE التحضيري ، وتم مسح البروتينات باستخدام هلام كامل عند 250 مللي أمبير ، مما أدى إلى 30 جزءا. من خلال هذا البروتوكول ، تمكنا من تحديد جدران خلايا السل الجديدة والمؤشرات الحيوية الخاصة بالغشاء ، كما أنه يظهر إمكانية توصيف بروتينات مماثلة في مسببات الأمراض الأخرى.

المقدمة

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,

أظهرت الدراسات المناعية أنه بالإضافة إلى البروتينات القابلة للذوبان ، والتي يسهل تنقيتها ، فإن الاستجابة المناعية البشرية لمسببات الأمراض مثل M. السل يتم توجيهها أيضا البروتين الكاره للماء الموجود في جدار الخلية1 وبروتينات غشاء الخلية2 من المتفطرة السلية. تلعب بروتينات جدار الخلية والغشاء دورا مهما في التحكم المناعي ضد العديد من مسببات الأمراض ، بما في ذلك مرض السل. تم الإبلاغ عن بعض هذه البروتينات على أنها مستضدات سائدة مناعية تتراكب استجابة الخلايا التائية والبائية. في المقابل ، يتم تحديد البروتينات الأخرى على أنها توقيعات جزيئية لمسببات الأمراض التي يتم التعرف عليها لبدء استجابة مناعية فطرية ، مثل الأنماط الجزيئية المرتبطة بمسببات الأمراض (PAMPs) بواسطة الخلايا المناعية ، وبالتالي بدء استجابة مناعية. على سبيل المثال ، يتم التعرف على البروتينات الدهنية الفطرية مثل LprG و LpqH و LprA و PhoS1 بواسطة مستقبلات شبيهة بالحصيلة 23.

تمثل الطبيعة الكارهة للماء لبروتينات جدار الخلية والغشاء تحديات تقنية كبيرة من حيث ذوبانها وفصلها. أظهرت الدراسات أن بروتينات الغشاء تشكل ما يقرب من 20٪ إلى 30٪ من مناطق الترميز لجميع الكائنات الحية ، بما في ذلك البكتيريا الفطرية4،5. نظرا لطبيعتها الجوهرية والتحديات التقنية ، يصعب إذابة بروتينات جدار الخلية والغشاء وعزلها مقارنة بالبروتينات القابلة للذوبان. نتيجة لذلك ، تم الإبلاغ عن 2٪ فقط من هياكل البروتين الغشائي6. تساهم عدة عوامل في صعوبة عزل هذه البروتينات. التحدي الأساسي هو وفرة منخفضة داخل الخلية ، مما يعقد عزل البروتينات الفردية لمزيد من التوصيف7. بالإضافة إلى ذلك ، تميل هذه البروتينات إلى التراكم ، مما يزيد من تعقيد قابليتها للذوبان. يمكن معالجة هذه المشكلة عن طريق إضافة المنظفات للمساعدة في الذوبان. ومع ذلك ، قد لا تزال بعض البروتينات تشكل مجاميعا حتى في وجود المنظفات ، وفي هذه الحالة يمكن استخدام العوامل الفوضوية وعوامل الاختزال لتحسين الذوبان.

يمكن أن يتداخل استخدام المنظفات للذوبان مع طرق الفصل اللاحقة. على سبيل المثال ، لا يمكن استخدام المنظفات المشحونة مع كروماتوغرافيا التبادل الأيوني ، ويمكن لجميع المنظفات أن تعطل كروماتوغرافيا التفاعل الكارهة للماء8. لذلك ، يعد اختيار منظف متوافق مع طريقة الفصل المختارة أمرا بالغ الأهمية. خطوة أخرى مهمة في عزل بروتين جدار الخلية والغشاء هي إزالة المنظفات المستخدمة في الذوبان ، حيث يمكن أن تتداخل مع التحليلات الوظيفية اللاحقة للبروتينات.

لقد طورنا منهجية قوية تتغلب على العديد من التحديات المرتبطة بتحليل بروتينات الغشاء ، وخاصة البروتينات الكارهة للماء من جدار الخلية وغشاء الخلية. يتمثل التحدي الرئيسي في دراسة هذه البروتينات في إذابتها ، حيث أن طبيعتها الكارهة للماء تجعل من الصعب استخراجها وتحليلها. تستخدم المنهجية الموضحة هنا مخزلا متساويا للتركيز الكهربائي (IEF) مصمما خصيصا ، والذي يعمل على إذابة بروتينات جدار الخلية وغشاء الخلية بكفاءة. تعد خطوة الذوبان هذه أمرا بالغ الأهمية لأنها تمكن من التحليل اللاحق لهذه البروتينات الكارهة للماء.

ميزة إضافية لهذه الطريقة هي قدرتها على تقليل تعقيد خليط البروتين. من خلال استخدام تقنيتين تكميليتين للفصل - بناء على النقطة المتساوية الكهربية (pI) والوزن الجزيئي للبروتينات - تفصل هذه المنهجية بكفاءة بروتينات جدار الخلية وغشاء الخلية إلى كسور مبسطة. يحتوي كل جزء عادة على واحد إلى ثلاثة بروتينات فقط ، مما يعزز الدقة بشكل كبير ويسهل التوصيف النهائي.

هذه المنهجية ، التي تم تطويرها باستخدام جدار خلية المتفطرة السلية وبروتينات غشاء الخلية كنظام نموذجي ، تعالج بشكل فعال التحديات المرتبطة بعزل وتحليل البروتينات الكارهة للماء. يوفر نهجا موثوقا به لعزل وفصل وتوصيف هذه الكسور البروتينية المعقدة ، مما يعزز القدرة على دراستها بالتفصيل.

الوصول مقيد. يرجى تسجيل الدخول أو بدء فترة تجريبية لعرض هذا المحتوى.

البروتوكول

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,

امتثلت هذه الدراسة للمبادئ التوجيهية الحكومية ذات الصلة وتمت الموافقة عليها من قبل اللجنة الاستشارية العلمية المؤسسية واللجنة الأخلاقية. تم الحصول على الموافقة المستنيرة من مجتمع الدراسة قبل سحب العينات.

1. زراعة مرض السل

  1. انقل ما يقرب من 10 M. مستعمرات السل من مائل Lowenstein-Jensen إلى 2 مل من وسط مرق 7H9 (2.35 جم من قاعدة مرق Middlebrook 7H9 في 400 مل من الماء المقطر ، و 50 مل من مكمل سكر العنب كاتالاز الأليك [OADC] ، و 0.5 جم من Tween 80 ، وقم بتكوين ما يصل إلى 500 مل)
    ملاحظة: مرض السل هو أحد مسببات الأمراض في مجموعة الخطر 3. يجب التعامل معها في خزانة السلامة البيولوجية (BSC) في منشأة BSL3. يجب استخدام معدات الحماية الشخصية المناسبة (PPE).
  2. قم بتفريق الخلايا باستخدام حبات زجاجية في ظروف معقمة في شاكر زجاجة عند 15 دورة في الدقيقة لمدة 1 دقيقة.
  3. انقل المعلق البكتيري إلى 10 مل من وسط مرق 7H9 في زجاجة مكارتني واحتضنه عند 37 درجة مئوية لمدة أسبوعين في حاضنة شاكر عند 30 دورة في الدقيقة.
  4. قم بتوسيع نطاق ثقافة المرحلة اللوغاريتمية إلى 200 مل من وسط المرق 7H9 وتنمو في ثقافة شاكر لمدة 4 أسابيع عند 30 دورة في الدقيقة.
  5. علاوة على ذلك ، قم بتوسيع نطاق المزرعة في قارورة سعة 1 لتر تحتوي على 500 مل من وسط مرق 7H9 وتنمو كمزرعة شاكر عند 30 دورة في الدقيقة لمدة 4 أسابيع عند 37 درجة مئوية.
  6. احصد البكتيريا الفطرية عن طريق الطرد المركزي عند 1741 جم لمدة 30 دقيقة.

2. تحضير بروتينات محللة الخلايا الكاملة

  1. إخضاع الحبيبات البكتيرية المعزولة للصوتنة باتباع بروتوكول قياسي.
  2. قم بإعداد المخزن المؤقت للكسر بالتركيبة التالية: 20 ملي تريس مع 8.5٪ (8.5 جم لكل 100 مل) كلوريد الصوديوم.
  3. اضبط الرقم الهيدروجيني النهائي إلى 7.4 باستخدام حمض الهيدروكلوريك المركز.
  4. أضف مثبطات البروتياز المحضرة حديثا إلى المخزن المؤقت للكسر بالتركيزات التالية (تفاصيل مثبطات البروتياز المراد إضافتها مدرجة في الجدول التكميلي 1)
  5. عالج عصيات السل (حجم معبأ 100 مل ووزنها) لكل 2 جم من حبيبات الخلية البكتيرية ، أضف 1 مل من المخزن المؤقت مع الليزوزيم (1 مجم / 5 مل من تعليق الخلية) واحتضان لمدة 15 دقيقة عند 37 درجة مئوية مع التحريك اللطيف.
  6. العصيات في ضعف حجمها من المخزن المؤقت للكسر.
  7. أضف 0.04٪ (بالوزن / الحجم) أزيد الصوديوم و 0.05٪ توين 80 إلى المخزن المؤقت.
  8. قم بتعطيل الخلايا البكتيرية في المخزن المؤقت للكسر باستخدام جهاز الصوتات بدورة 9 ثوان و 9 ثوان لمدة 30 دقيقة بسعة 40٪ ، مع الحفاظ على المعلق على الجليد لمنع تمسخ البروتين.
  9. قم بالطرد المركزي لليزيات المحضرة عند 3438 جم لمدة 15 دقيقة عند 4 درجات مئوية لإزالة الخلايا غير المكسورة.
  10. تركيز المادة الطافية باستخدام مكثفات الطرد المركزي (قطع 3 كيلو دالتون - 5 مل).
  11. تحديد تركيز البروتين في المادة الطافية باستخدام مقايسة القياس الكمي لبروتين حمض البيسينشونيك (BCA) باستخدام بروتين BSA كمعيار.
    ملاحظة: في تحليل SDS-PAGE ، قم بتحميل 50 ميكروغرام من البروتين للتحليل.

3. عزل جدار الخلية وبروتينات غشاء الخلية عن طريق الطرد المركزي الفائق

  1. عزل جدار الخلية وغشاء الخلية وبروتينات العصارة الخلوية من محللة الخلية بأكملها باتباع البروتوكول الذي وضعه رجا وآخرون 9. كما هو موضح أدناه.
  2. قم بالطرد المركزي للخلية بأكملها عند 13751 × جم عند 4 درجات مئوية لمدة 30 دقيقة ، وفصل بروتينات جدار الخلية على شكل حبيبات.
  3. إخضاع المادة الطافية للطرد المركزي الفائق عند 100,000 × جم عند 4 درجات مئوية لمدة 4 ساعات باستخدام جهاز طرد مركزي فائق ، وفصل بروتينات غشاء الخلية كحبيبات وترك البروتينات العصارة الخلوية في المادة الطافية.
  4. تقدير تركيزات البروتين في جدار الخلية وكسور غشاء الخلية باستخدام مقايسة بروتين BCA.
    ملاحظة: في تحليل SDS-PAGE ، قم بتحميل 50 ميكروغرام من البروتين للتحليل. يتم تخزين جدار الخلية المنفصل وغشاء الخلية في فريزر -80 درجة مئوية حتى مزيد من التحليل.

4. التركيز المتساوي الكهربائي للطور السائل التحضيري (Rotofor [جهاز IEF])

  1. إذابة جدار الخلية وبروتينات غشاء الخلية المعزولة عن طريق الطرد المركزي الفائق في مخزن مؤقت IEF يحتوي على 8 M اليوريا ، 1 ملي مولار DTT ، 5٪ جلسرين ، 2٪ ديجيتونين.
  2. أضف 2٪ أمفوليت (الرقم الهيدروجيني 3.0 إلى 10.0 ودرجة الحموضة 4.0 إلى 6.0 بنسبة 1: 4)
  3. تجزئة البروتينات القابلة للذوبان باستخدام نظام IEF سائل يتم الحفاظ عليه عند 4 درجات مئوية مع حمام مائي مبرد.
  4. قم بإجراء فصل IEF وفقا لتعليمات الشركة المصنعة ، مع تطبيق طاقة ثابتة تبلغ 12 واط حتى يستقر الجهد (بين 1300 فولت و 1600 فولت).
  5. استمر في تشغيل IEF لمدة 30 دقيقة إضافية بعد تثبيت الجهد، مع وقت تشغيل إجمالي يبلغ حوالي 5-6 ساعات.
  6. اجمع كسور IEF الفردية باستخدام مضخة تفريغ وحدد قيم الأس الهيدروجيني الخاصة بها.
  7. قم بإخضاع الكسور المنفصلة (50 ميكروغرام) ل SDS-PAGE وتصور البروتينات باستخدام Coomassie Brilliant Blue (CBB) أو تلطيخ الفضة. قم بتخزين كسور IEF المنفصلة في فريزر -80 درجة مئوية حتى إجراء مزيد من التحليل.

5. SDS-PAGE التحضيرية وشطف هلام كامل

  1. امزج جدار الخلية المنفصل عن IEF وكسور غشاء الخلية مع مخزن مؤقت للعينة 6x SDS-PAGE وقم بالتسخين عند 95 درجة مئوية لمدة 5 دقائق قبل تحليل SDS-PAGE.
  2. افصل كسور البروتين في البعد الثاني باستخدام جل بولي أكريلاميد مقاس 16 سم 20 سم يتكون من جل حل 12.5٪ وهلام تكديس 4٪.
  3. استخدم عينة واحدة بطول 13 سم جيدا لتحميل العينة.
  4. قم بإجراء الرحلان الكهربائي بتيار ثابت يبلغ 50 مللي أمبير / هلام حتى تصل مقدمة الصبغة إلى قاع الجل.
  5. قم بموازنة الجل في محلول الشطف (60 ملي مولار تريس ، درجة الحموضة 9.4 ؛ 40 ملي مولار 3- (سيكلوهيكسيلامينو) -1-حمض بروبان سلفونيك [CAPS]) لمدة 10 دقائق بعد تشغيل الرحلان الكهربائي.
  6. انقل الجل إلى جهاز هلام كامل كما هو موضح من قبل الشركة المصنعة للأداة.
  7. قم بإخراج البروتينات من الهلام عن طريق تشغيل eluter بتيار مستمر مقداره 250 mA لمدة 1 ساعة.
  8. اجمع ما يقرب من 30 جزءا من البروتين ، يبلغ حجم كل منها 3 مل ، من كل هلام باستخدام مضخة تفريغ.
  9. حدد تركيز البروتين في الكسور المشوهة باستخدام مقايسة بروتين BCA.
  10. موضوع 10 ميكروغرام من الكسور الممسوحة لتحليل SDS-PAGE وتصورها بواسطة تلطيخ Coomassie الأزرق اللامع (CBB).
    ملاحظة: تم تخزين الكسور الممسولة بالهلام الكامل المنفصلة في الفريزر -80 درجة مئوية حتى إجراء مزيد من التحليل.

الوصول مقيد. يرجى تسجيل الدخول أو بدء فترة تجريبية لعرض هذا المحتوى.

النتائج

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,

عزل جدار الخلية وبروتينات غشاء الخلية عن طريق الطرد المركزي عالي السرعة
تم عزل بروتينات جدار الخلية والغشاء من محللات الخلايا الكاملة عن طريق الطرد المركزي الفائق كما هو موضح في البروتوكول. تحليل SDS-PAGE للأجزاء تحت الخلوية المنفصلة - جدار الخلية ، وغشاء الخلية ، وملامح بروتين العصارة الخلوية ل M. السل موضح في الشكل 1.

فصل بروتينات جدار الخلية عن طريق التركيز المتساوي الكهربائي للطور السائل
تم إذابة بروتينات جدار ...

الوصول مقيد. يرجى تسجيل الدخول أو بدء فترة تجريبية لعرض هذا المحتوى.

المناقشة

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,

تمثل الطبيعة الكارهة للماء لبروتينات جدار الخلية والغشاء تحديات تجريبية كبيرة في ذوبانها وفصلها. في البروتوكول المذكور أعلاه ، وصفنا طريقة فصل جديدة ثنائية الأبعاد قائمة على الرحلان الكهربائي لعزل هذه البروتينات الكارهة للماء بشكل فعال. في هذا البروتوكول ، قمنا في البداية بفصل بروتينات الغشاء وجدار الخلية بناء على نقاطها المتساوية باستخدام نظام IEF السائل. لحل مشكلة الذوبان ، استخدمنا تركيزا عاليا من العامل الفوضوي (اليوريا) والمنظفات (Digitonin) ، مما سهل إذابة هذه البروتينات ومكن تحميل...

الوصول مقيد. يرجى تسجيل الدخول أو بدء فترة تجريبية لعرض هذا المحتوى.

الإفصاحات

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,

ليس لدى المؤلفين ما يكشفون عنه.

شكر وتقدير

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,

هذا العمل مدعوم بالكامل بمنحة DST SERB للدكتور KR Uma Devi. تم تمويل الدكتور ب. رامالينغام من زمالة DBT-Ramalingaswamy.

الوصول مقيد. يرجى تسجيل الدخول أو بدء فترة تجريبية لعرض هذا المحتوى.

المواد

قائمة المواد المستخدمة في هذه المقالة
الاسمالشركةرقم فهرسيالتعليقات
مرق 7H9   ؛Himedia م 198
40٪ بيو لايت 3/10 أمفوليت   ؛بيو راد1631113
مقايسة بروتين BCA   ؛ميركBCA1
بيو لايت 5/7 أمفوليت   ؛بيو راد1631152
مكثفات الطرد المركزي 3 كيلو دالتونميركZ629456
ديجيتونين.ميركد141
دنيسميرك11284932001
DTTميركD9779
إيدتاميركإ9884
إيجا تي إي تي إيميرك[إ3889]
الجلسرينميركجي 5516
ليوببتينميركه 18
بيبستاتين أميركص 5318
PMSFميرك78830
رناسميرك10109134001
روتوفور   ؛بيو راد170-2986  جهاز التركيز المتساوي الكهرباء (IEF)
سونيكاتورالخلية الاهتزازية ، سونيكسVC 750
TLCKميركتي 7254
تي بي كي كيميرك4376
يورياميركيو 5378
جهاز جل Eluter الكامل   ؛بيو راد1651250

المراجع

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,
  1. Seshadri, C., Turner, M. T., Lewinsohn, D. M., Moody, D. B., Van Rhijn, I. Lipoproteins are major targets of the polyclonal human T cell response to Mycobacterium tuberculosis. J Immunol. 190 (1), 278-284 (2013).
  2. Kunnath-Velayudhan, S., et al. Dynamic antibody responses to the Mycobacterium tuberculosis proteome. Proc Natl Acad Sci U S A. 107 (33), 14703-14708 (2010).
  3. Drage, M. G., et al. TLR2 and its co-receptors determine responses of macrophages and dendritic cells to lipoproteins of Mycobacterium tuberculosis. Cell Immunol. 258 (1), 29-37 (2009).
  4. Wallin, E., von Heijne, G. Genome-wide analysis of integral membrane proteins from eubacterial, archaean, and eukaryotic organisms. Protein Sci. 7, 1029-1038 (1998).
  5. Almeida, J. G., Preto, A. J., Koukos, P. I., Bonvin, A. M. J. J., Moreira, I. S. Membrane proteins structures: A review on computational modeling tools. Biochim Biophys Acta Biomembr. 1859 (10), 2021-2039 (2017).
  6. Finkelstein, J. Structures of membrane proteins. Nature. 511 ((Suppl 7509)), 21(2014).
  7. Smith, S. M. Strategies for the purification of membrane proteins. Methods Mol Biol. 1485, 389-400 (2017).
  8. Von Jagow, G., Link, T., Schager, H. Purification Strategies for Membrane Proteins. A Practical Guide to Membrane Protein Purification. , Academic Press. San Diego, CA. (1994).
  9. Raja, A., Uma Devi, K. R., Ramalingam, B., Brennan, P. J. Immunoglobulin G, A, and M responses in serum and circulating immune complexes elicited by the 16-kilodalton antigen of Mycobacterium tuberculosis. Clin Diagn Lab Immunol. 9 (2), 308-312 (2002).
  10. Covert, B. A., Spencer, J. S., Orme, I. M., Belisle, J. T. The application of proteomics in defining the T cell antigens of Mycobacterium tuberculosis. Proteomics. 1 (4), 574-586 (2001).
  11. Deenadayalan, A., et al. Immunoproteomic identification of human T cell antigens of Mycobacterium tuberculosis that differentiate healthy contacts from tuberculosis patients. Mol Cell Proteomics. 9 (3), 538-549 (2010).
  12. Sinha, S., et al. Immunogenic membrane-associated proteins of Mycobacterium tuberculosis revealed by proteomics. Microbiology. 151 (7), 2411-2419 (2005).
  13. Deenadayalan, A., et al. An Integrated approach for proteomic and immunological analysis of cell wall and cell membrane proteins of Mycobacterium tuberculosis. Med Res Arch. 11 (11), (2023).

الوصول مقيد. يرجى تسجيل الدخول أو بدء فترة تجريبية لعرض هذا المحتوى.

إعادة الطباعة والأذونات

طلب إذن لإعادة استخدام النص أو الأشكال في مقالة JoVE هذه

طلب إذن

الوسوم

SDS

مقالات ذات صلة