يتطلب اشتراك JoVE لعرض هذا المحتوى. تسجيل الدخول أو ابدأ نسخة تجريبية مجانية

مقالة منهجية

إعادة التكوين الفردية لميكروبات الحليب البشري: نهج ممكن في بيئات العالم الحقيقي

1.2K مشاهدات

⸱

DOI:

10.3791/67769

⸱

فبراير 7, 2025

 ,  ,  ,  ,  ,  ,  ,  ,  ,  ,  , 
1Laboratory of Immunoregulation, iREG, Department of Microbiology, Immunology, and Parasitology, Center for Dysbiosis Control, Federal University of Santa Catarina, 2Laboratory of Applied Molecular Microbiology, MIMA, Department of Clinical Analysis, Center for Dysbiosis Control, Federal University of Santa Catarina, 3Carmela Dutra Maternity Hospital, 4Laboratory of Applied Immunology, LIA, Department of Microbiology, Immunology, and Parasitology, Center for Dysbiosis Control, Federal University of Santa Catarina, 5Laboratory of Metabolism and Nutrition, MenuLab, Department of Pediatrics, Center for Dysbiosis Control, Federal University of Santa Catarina

في هذه المقالة

ملخص

تصف المقالة بروتوكولا لإعادة تكوين ميكروبيوتا الحليب المبستر المتبرع باستخدام ميكروبيوتا حليب الأم في بيئات عملية في العالم الحقيقي. إنه يوضح النمو البكتيري الفعال وتعديل الميكروبيوم ، مما يدعم التطبيق العملي لهذا الإجراء في الرعاية الروتينية لمستشفى الولادة وبنك الحليب البشري المرتبط به.

الملخص

حليب الأم (MOM) هو المورد الغذائي الأكثر اكتمالا لحديثي الولادة. وفي الحالات التي تكون فيها الأمهات غير قادرات على إنتاج ما يكفي من اللبن أو لا يستطعن الرضاعة الطبيعية، فإن البديل المفضل هو لبن الأم المبستر المتبرع به، الذي توفره بنوك اللبن البشري بشكل روتيني. تقدم PDM مجموعة متفوقة من العناصر الغذائية والمناعية مقارنة بأي تركيبة متاحة تجاريا. ومع ذلك ، لضمان السلامة البيولوجية ، يخضع PDM للبسترة ، وهي عملية تعطل الجراثيم المتعايشة وتقلل من بعض المركبات النشطة بيولوجيا. تقدم هذه الدراسة بروتوكولا مصمما لاستعادة الجراثيم ل PDM باستخدام MOM كمصدر ميكروبي ، وتكييف النهج مع بيئة سريرية في العالم الحقيقي.

تم تنفيذ البروتوكول في تجربة سريرية أجريت في مستشفى الولادة وبنك اللبن البشري المرتبط به ، بهدف توفير حليب متبرع شخصي للأطفال الخدج الذين لا تستطيع أمهاتهم إنتاج ما يكفي من الحليب. تتضمن المنهجية تلقيح PDM بنسبة 10٪ من MOM ، يليه الحضانة عند 37 درجة مئوية لمدة 4 ساعات. أظهر التحليل الميكروبيولوجي نموا البكتيريا الناجح في الحليب الملقح (IM) بعد الحضانة ، مع وجود ملف تعريف الجراثيم للحليب المعاد تكوينه (RM) يشبه إلى حد كبير ملف MOM ، مما يشير إلى استعادة فعالة للميكروبات. تشير هذه النتائج إلى أن بروتوكول إعادة التكوين ممكن للتنفيذ في رعاية حديثي الولادة، مع إمكانية تعزيز الجودة التغذوية والمناعية لمرض الولادة الوليدية، وبالتالي دعم صحة ونمو الولدان الذين لا يرضعون رضاعة طبيعية.

المقدمة

يعرف حليب الثدي على نطاق واسع بأنه أفضل مصدر لتغذية الأطفال حديثي الولادة ، حيث لا يوفر فقط المغذيات الدقيقة الأساسية ولكن أيضا مجموعة معقدة من العناصر ، بما في ذلك المستقلبات المختلفة ومكونات الجهاز المناعي ، مثل الأجسام المضادة والسيتوكينات والخلايا1. بالإضافة إلى ذلك ، تنشأ الخصائص المفيدة في حليب الثدي أيضا من مجتمع من الكائنات الحية الدقيقة المتعايشة. تلعب كل هذه العناصر من حليب الثدي دورا مهما في نمو المولودالجديد 1. يتأثر مجتمع الكائنات الحية الدقيقة ، المعروف باسم الجراثيم ، بمجموعة من العوامل مثل النظام الغذائي ونمط حياة الأم ونوع الولادة وعمر الحمل ، مما يؤدي إلى أن يكون لكل حليب ميكروبات ذات خصائص معينة2. تتراوح الآليات التي تفيد بها ميكروبات حليب الثدي نمو حديثي الولادة من حماية السطح المعوي من خلال الاستعمار بواسطة البكتيريا المتعايشة إلى تعزيز نضوج الجهاز المناعي من خلال إنتاج المستقلبات التي تتفاعل مع الخلايا المناعية فيالأمعاء 3. لهذا السبب ، فإن المظهر الفردي للكائنات الحية الدقيقة في حليب كل أم يجعله شكلا من أشكال الطب الشخصي لحديثيالولادة 4.

يمكن أن يساعد وجود ميكروبات صحية في حماية المولود الجديد من الاستعمار بواسطة الكائنات الحية الدقيقة التي يحتمل أن تكون مسببة للأمراض من خلال احتلال المكانة البيئية ودعم التغذية ، خاصة بالنسبة للأطفال الخدج ، الذين يكونون أكثر عرضة لهذه الآثار الخارجية بسبب وجودهم في بيئة المستشفى ووجود جهاز مناعي غير ناضج. علاوة على ذلك ، غالبا ما تواجه الأمهات اللواتي يلدن قبل الأوان صعوبة في إنتاج الحليب بكميات كافية لأطفالهن حديثي الولادة. عادة ما يكون إنتاج الحليب أقل كلما كان عمر الحملأصغر من 5 سنوات. في هذه الحالات ، فإن أفضل خيار لتغذية المولود الجديد هو حليب المتبرع المبستر الذي توفره بنوك الحليب البشري (HMB) 6.

تمتلك البرازيل أكبر وأوسع شبكة من HMBs في العالم7. تقوم هذه الشبكة بجمع وإعداد وتوزيع أكثر من 160,000 لتر من حليب الأم المبستر المتبرع به (PDM) في جميع أنحاء البلاد دون أي تكلفة على الآباء ، من خلال النظام الصحي الوطني الموحد (Sistema Único de Saúde) ، الذي تديره وزارةالصحة 7. البسترة ضرورية لضمان السلامة البيولوجية للحليب المتبرع به المخصص لحديثي الولادة. عادة ما يتم تنفيذ هذه العملية باستخدام طريقة الحامل ، والتي تتضمن غمر وعاء من حليب الثدي الخام المتبرع به في حمام مائي عند 62.5 درجة مئوية لمدة 30 دقيقة6،8. ثم يتم تخزين PDM الناتج تحت التبريد حتى يصبح جاهزا للاستهلاك. ومع ذلك ، فإن البسترة تقلل من صلاحية الكائنات الحية الدقيقة المتعايشة للحليب وتقلل من التوافر البيولوجي لمختلف المكونات النشطة بيولوجيا. وذلك لأن عملية البسترة موحدة لمنع انتقال الكائنات الحية الدقيقة المسببة للأمراض إلى الأطفال حديثي الولادة. في هذا السياق ، في عام 2017 ، وصف كاتشو وزملاؤه إمكانية إعادة تكوين الكائنات الحية الدقيقة المتعايشة لحليب الأم عن طريق تلقيحه بنسب مختلفة في PDM9. أظهرت النتائج التي توصلوا إليها أن استخدام تركيز 10٪ من حليب الأم (MOM) هو التركيز الأمثل للحفاظ على التركيب الأصلي لملف تعريف ميكروبيوم MOM. يقلل هذا النهج من خطر فرط نمو بكتيريا معينة ، والتي ، على الرغم من أنها عادة ما تكون متكافئة ، يمكن أن تصبح ضارة إذا كانت موجودة بشكل غير متناسب في الحليب المعاد تكوينه. على وجه التحديد ، لاحظت الدراسة أن التخفيف بنسبة 1:10 (10٪ MOM + 90٪ PDM) ، المحتضن لمدة 4 ساعات ، أدى إلى حمل بكتيري متوازن - ما يقرب من 60٪ من ذلك الموجود في MOM غير المخفف - مما يشير إلى نهج أكثر أمانا وفعالية. في المقابل ، أدت التخفيفات العالية ، مثل 3:10 ، إلى نمو البكتيريا المفرط ، مما يسلط الضوء على الحاجة الماسة للتركيزات والظروف الخاضعة للرصدة لضمان السلامة.

في هذه المقالة ، نوضح أن هذا الإجراء لإعادة تكوين ميكروبات حليب الثدي في PDM يمكن تحقيقه في مواقف العالم الحقيقي ضمن الرعاية الروتينية لمستشفى الولادة وبنك الحليب البشري المرتبط به.

الوصول مقيد. يرجى تسجيل الدخول أو بدء فترة تجريبية لعرض هذا المحتوى.

البروتوكول

تم تنفيذ هذا البروتوكول كجزء من إجراءات التجربة السريرية التي أجرتها مجموعتنا البحثية (السجل البرازيلي للتجارب السريرية ، ReBEC RBR-729kr8x) ، وحصلت على موافقة لجنة الأخلاقيات (العملية CAAE nº 41063520.4.0 000.0121) وتم الحصول على موافقة مستنيرة من جميع المشاركين قبل التوزيع العشوائي وتجميع العينات.

يتم إجراء إعادة تكوين ميكروبات الحليب في ثلاث خطوات:

1. الحصول على حليب الأم الخام

ملاحظة: يمكن العثور على إجراء الحصول على الحليب في مكان آخر10،11.

  1. قبل الإجراء ، احصل على موافقة مستنيرة من الأم وفقا للجنة الأخلاقية وتأكد من شرح كل ما سيتم القيام به للأم ، ومعالجة أي شكوك أو مخاوف أو مخاوف أو مخاوف بشأن الإجراء للحفاظ على استرخاء الأم.
  2. اطلب من الأم شفط الحليب باستخدام مضخة حليب كهربائية في حاوية معقمة تحت إشراف الممرضة المسؤولة عن الوحدة ، وفقا لمعايير النظافة المحلية المعمول بها في كل جناح ولادة.
  3. بعد الجمع ، قم بتسمية الحاوية التي تحتوي على الحليب بمعلومات الأم وتاريخ ووقت الجمع. احتفظ بحليب الأم (MOM) عند درجة حرارة -4 درجة مئوية أو أقل لمدة تصل إلى 12 ساعة.

2. إذابة الجليد من حليب المتبرع المبستر (PDM)

ملاحظة: تمتلك HMBs مخزونها الخاص من PDM ، المجمدة عند درجة حرارة أقل من -4 درجات مئوية لمدة أقصاها تصل إلى 6 أشهر ، والإجراء موصوف جيدا في الأدبيات في مكان آخر12،13،14.

  1. قم بإذابة الحليب الخام أو PDM المخزن في عبوات زجاجية معقمة بأغطية بلاستيكية في حمام مائي عند 40 درجة مئوية ، مما يضمن الحفاظ على درجة الحرارة ووقت معالجة أقصر.
    ملاحظة: لا تقم بإذابة PDM في درجة حرارة الغرفة أو في درجة حرارة التبريد (داخل الثلاجة) ، حيث يتم إطالة أوقات الذوبان في هذه الحالات ، مما يعزز التعرض للميكروبات ونموها.
  2. أخرج زجاجات الحليب البشري من الحمام المائي قبل أن يصل الحليب الموجود في الزجاجة إلى درجة حرارة أعلى من 5 درجات مئوية.

3. تلقيح PDM مع MOM لإعادة تكوين الميكروبيوم

ملاحظة: النسبة الحجمية القياسية لعملية تلقيح PDM مع MOM هي 90٪: 10٪ (حجم / حجم). خطوات الإجراء هي كما يلي:

  1. اطلب من الفني ارتداء معطف المختبر والقناع والقبعة والقفازات.
  2. قم بتنظيف سطح العمل بمحلول تنظيف الأسطح باتباع البروتوكول المؤسسي المحلي.
  3. ترتيب المواد المراد استخدامها وإعداد المعدات. سخني الحاضنة (حمام مائي) بالماء إلى 37 درجة مئوية.
  4. خطط للحجم النهائي من الحليب الملقح المراد استخدامه وحدد وعاءا بحجم مناسب. ضع الحاوية مع MOM الخام الطازج و PDM في شكل سائل على سطح العمل.
  5. اجمع حصة تصل إلى 1 مل من MOM باستخدام معدات معقمة لتسلسل 16S اللاحق وتعداد البكتيريا. قم بتخزين الكمية في أنبوب تبريد خال من DNase / RNase عند -80 درجة مئوية.
  6. انقل الحجم المتبقي، أي ما يعادل 10٪ من الحجم النهائي المطلوب من الحليب، باستخدام أداة حجمية معقمة (مثل حقنة وماصة) إلى وعاء آمن للطعام ليتم غمره في حمام مائي عند 37 درجة مئوية.
  7. اجمع حصة 1 مل من PDM باستخدام معدات معقمة لتسلسل 16S اللاحق وعدد البكتيريا. قم بتخزين الكمية في أنبوب تبريد خال من DNase / RNase عند -80 درجة مئوية.
  8. انقل كمية من PDM تعادل 90٪ من الحجم النهائي المطلوب من الحليب باستخدام أداة حجمية معقمة (مثل المحقنة والماصة) إلى الحاوية مع MOM من الخطوة السابقة ، وتشكل الآن حليب الأم الملقح (IM).
  9. أغلق الحاوية بغطاء يمنع أي سائل خارجي من تلويث داخل الزجاجة واغمرها في الحمام المائي عند 37 درجة مئوية لمدة 4 ساعات للسماح للكائنات الحية الدقيقة المتلقية في الحليب بالتكاثر.
  10. بعد 4 ساعات ، قم بإزالة الحاوية التي تحتوي على الIM المخمر من الحمام المائي ، والذي يسمى الآن الحليب المعاد تكوينه (RM).
  11. احتفظ بكمية تصل إلى 1 مل باستخدام معدات معقمة لتسلسل 16S اللاحق وعدد البكتيريا. قم بتخزين مخزن aliquot في أنبوب تبريد خال من DNase / RNase عند -80 درجة مئوية.
  12. انقل الحجم المتبقي إلى وعاء معقم لتغذية الأطفال حديثي الولادة.

4. التحقق من صحة الطريقة عن طريق الاستزراع البكتيري على الألواح

ملاحظة: يجب تنفيذ جميع الإجراءات في ظل ظروف معقمة لمنع التلوث وضمان دقة التخفيفات. يمكن تقدير نمو البكتيريا باستخدام الطرق الموصوفة في مكان آخر9،15.

  1. تحضير التخفيفات التسلسلية لكل عينة حليب (PDM ، MOM ، IM ، RM) في محلول ملحي معقم بتركيزات 10-1 و 10-2 و 10-3 و 10-4 . امزج كل تخفيف جيدا لضمان توزيع بكتيري موحد.
  2. Pippete ونشر 100 ميكرولتر من كل عينة مخففة على ألواح Man-Rogosa-Sharpe (MRS) و Mannitol Salt Agar (MSA) في ثلاث نسخ ، باستخدام حلقة Drigalski معقمة أو مفرشة زجاجية. تأكد من أن الحجم منتشر بشكل موحد على لوحة الأجار.
  3. احتضان ألواح أجار MRS في وعاء لاهوائي يحتوي على بيئة منخفضة الأكسجين لنمو بكتيريا حمض اللاكتيك.
  4. احتضان ألواح Mannitol Salt Agar (MSA) بشكل هوائي لدعم نمو أنواع المكورات العنقودية.
  5. احتضان الألواح عند 37 ± 2 درجة مئوية لمدة 48-72 ساعة.
  6. حدد التخفيف بعدد قابل للعد من المستعمرات البكتيرية (25-250 مستعمرة) على كل نوع من أنواع الأجار
  7. احسب المستعمرات المرئية على كل من الألواح الثلاثة المكررة للتخفيف المحدد.
  8. احسب متوسط عدد المستعمرات من الألواح الثلاثية للتخفيف المحدد في كل من وسائط MRS و MSA.
  9. حدد عدد وحدات تكوين المستعمرة (CFU) لكل مل لكل عينة باستخدام الصيغة التالية وقم بالتحويل إلى مقياس لوغاريتمي أساسي 10 (log10) لتسهيل التفسير. المضي قدما في التحليل الإحصائي للنتائج.
    عدد CFU / مل = عدد المستعمرات × إجمالي عامل التخفيف / الحجم المطلي بالمل

5. تحليل ميكروبيوم الحليب

ملاحظة: يمكن إجراء تحليل ميكروبيوم الحليب وفقا للطرق وخطوط الأنابيب الموضحة في مكان آخر16. يتم تقديم لقطة شاشة للنص R المستخدم في هذا التحليل في الشكل التكميلي S1.

  1. جهاز طرد مركزي 500 ميكرولتر من العينة لمدة 15 ثانية عند 180 × جم لخلايا الرواسب والجسيمات.
  2. اجمع 350 ميكرولتر من المادة الطافية واستخدمها لاستخراج الحمض النووي.
  3. حدد كمية الحمض النووي المستخرج باستخدام مقياس الطيف الضوئي.
  4. تضخيم مناطق V3 و V4 من الحمض النووي الريبي الريبوزومي 16S باستخدام 20 نانوغرام من الحمض النووي والبادئات 357F / 805R (انظر جدول المواد) 17.
  5. استخدم الخرز المغناطيسي لتنقية الأمبليكونات الناتجة وتحديد الأمبليكونات المشفرة باستخدام مقياس فلور الحمض النووي.
  6. تسلسل الأمبليكونات في وضع 250 نقطة أساس مقترن.
  7. قم بمعالجة التسلسلات الناتجة عن طريق إجراء تشذيب الجودة وإزالة المحول18. استخدم وضع النهاية المزدوجة (PE) مع تسجيل Phred33 وقم بتعيين حد أدنى لطول القراءة يبلغ 200 نقطة أساس لضمان قراءات عالية الجودة.
  8. قم باستيراد بيانات التسلسل المزدوجة إلى QIIME 219 باستخدام تنسيق ملف البيان والأمر: استيراد أدوات qiime.
  9. قم بمعالجة التسلسلات المستوردة باستخدام DADA2 لإزالة الضوضاء وإلغاء النسخ المتماثل وإزالة الوهم باستخدام الأمر: qiime dada2 denoise-paired. تقوم هذه الخطوة بإنشاء تسلسلات تمثيلية عالية الجودة وجدول ميزات.
  10. قم بتصفية الميزات والتسلسلات للاحتفاظ فقط بتلك التي لديها تمثيل كاف باستخدام الأوامر: qiime feature-table filter-features و qiime feature-table filter-seqs.
  11. قم بإعداد قاعدة بيانات مرجعية عن طريق استخراج المناطق التي تم تضخيمها بواسطة البادئات (V3-V4) باستخدام: qiime feature-classifier extract-reads.
  12. استخدم خوارزمية VSEARCH للتصنيف التصنيفي مع قاعدة بيانات Silva المرجعية عند حد هوية 97٪ عن طريق تنفيذ الأمر:
    QIIME feature-classifier classify-consensus-vsearch
  13. قم بدمج التعيينات التصنيفية مع جدول الميزات باستخدام أدوات BIOM: بيانات تعريف إضافة biom.
  14. إجراء التحليلات الإحصائية كما هو موضح في مكان آخر20،21.

الوصول مقيد. يرجى تسجيل الدخول أو بدء فترة تجريبية لعرض هذا المحتوى.

النتائج

تحليل نمو البكتيريا عن طريق زراعة الصفائح
أظهرت الاختبارات الميكروبيولوجية التي أجريت للتحقق من صحة طريقة تلقيح PDM مع MOM ، كما اقترح Cacho et al.9 ، أنه ، بناء على عدد CFU / mL ، لم تكن هناك فروق ذات دلالة إحصائية بين عينات الحليب الملقحة قبل وبعد الحضانة لمدة 4 ساعات. ومع ذلك ، لوحظت اختلافات في عدد المستعمرات في هاتين النقطتين الزمنيتين ، مما يشير إلى نمو البكتيريا أثناء الحضانة على MSA للمكورات العنقودية spp. (الشكل 1 أ) وعلى وسط MRS ...

الوصول مقيد. يرجى تسجيل الدخول أو بدء فترة تجريبية لعرض هذا المحتوى.

المناقشة

نقدم هنا بروتوكولا يتم تطبيقه في مستشفيات الولادة المرتبطة ببنك الحليب البشري ، يهدف إلى تزويد PDM بإعادة تكوين ميكروبيوتا الحليب من أم معينة لا تستطيع ، لأسباب مختلفة ، توفير ما يكفي من الحليب لمولودها الجديد. البروتوكول بسيط ويعتمد بشكل أساسي على خطوتين. الأول ينطوي على تطبيق الإجراءات التي يتم إجراؤها بشكل روتيني في بنوك اللبن البشري من أجل الجمع السليم والبسترة اللاحقة لحليب المتبرع به ، بالإضافة إلى جمع حليب الأم نفسه ، الذي سيتم توسيع ميكروبيوتا6،...

الوصول مقيد. يرجى تسجيل الدخول أو بدء فترة تجريبية لعرض هذا المحتوى.

الإفصاحات

ويعلن أصحاب البلاغ أنه ليس لديهم مصالح متنافسة.

شكر وتقدير

يعرب المؤلفون عن امتنانه للدعم التمويلي المقدم من برنامج Pesquisas para o SUS, PPSUS/2020, Ministério da Saúde do Brasil; Fundação de Amparo à Pesquisa e Inovação do Estado de Santa Catarina, Grant Number: 2021TR000506; Programa de Pesquisa Universal, Conselho Nacional de Desenvolvimento Científico e Tecnológico (CNPq) do Ministério de Ciência e Tecnologia do Brasil, Grant Number: 420996/2023-0; Programa Institucional de Bolsas de Iniciação Científica 2022 - 2024, Grant Number: 120815/2023-0. كما نشكر المتطوعين على تقديم العينات.

الوصول مقيد. يرجى تسجيل الدخول أو بدء فترة تجريبية لعرض هذا المحتوى.

المواد

قائمة المواد المستخدمة في هذه المقالة
الاسمالشركةرقم فهرسيالتعليقات
مضخة حليب الثدي الكهربائيةHorigenXN-2219M2مضخة ناعمة مزدوجة بالإضافة
إلى Pyrex   ؛ زجاجات الوسائط Corning CLS1395100عبوات زجاجية بأغطية بلاستيكية 
1000 & ميكرو; L ماصة Labmate بروCorning HTL SA & nbsp ؛  5666ماصة متغيرة الحجم 
قارورة مبردة كورنينج CLS431417قوارير خالية من DNase / RNase 2 مل   ؛
أنابيب الطرد المركزي 15 مل Corning CLS431470أنابيب خالية من DNase / RNase سعة 15 مل   ؛
حمام مائيEcoSonicsQ3.0 / 40A
Man &ndash ؛ Rogosa– شارب (MRS) Difco288210وسائط نمو بكتيريا حمض اللاكتيك
Mannitol Salt Agar (MSA)HimediaMH118Staphylococcus  media النمو
اللاهوائية جرةPermutionخلق بيئة منخفضة الأكسجين لنمو بكتيريا حمض اللاكتيك
Extracta  كيت – الحمض النووي والريبيلوكسMPTA-PV16-B Yطقم استخراج الحمض النووي
NanodropPromegaE6150Quantus DNA
GoTaqG2PromegaM7841PCR نظام تضخيم الكمية
الفلورالكمي PromegaE5150تكميم الحمض النووي الريبي
MiSeq SystemIllumina Inc.M-GL-00006 v4.0معدات التسلسل
MiSeq Reagent Kit v2 (300 دورة)شركة Illumina Inc.MS-102-2002مجموعات التسلسل والكواشف
اسم البرنامج  < / قوي >
Trimmomatichttp://www.usadellab.org/cms/index.php?page=trimmomaticقراءة أداة التشذيب لبيانات Illumina NGS
QIIME 2 & nbsp ؛https://docs.qiime2.org/2024.10/حزمة تحليل الميكروبيوم 
Primer namePrimer sequence
16S_357F TCGTCGGCAGCGTCAGA
TGTGTATAAGAGACAGC
CTACGGGNGGCWGCAG
16S_805RGTCTCGTGGGCTCGGAG
ATGTGTATAAGAGACAGG
ACTACHVGGGTATCTAATC
مقياس مجموعة

المراجع

  1. Szyller, H., et al. Bioactive components of human milk and their impact on child's health and development, Literature Review. Nutrients. 16 (10), 1487(2024).
  2. Fernández, L., Rodríguez, J. M. Human milk microbiota: Origin and potential uses. Nestle Nutr Inst Workshop Ser. 94, 75-85 (2020).
  3. Fernández, L., Ruiz, L., Jara, J., Orgaz, B., Rodríguez, J. M. Strategies for the preservation, restoration and modulation of the human milk microbiota. Implications for human milk banks and neonatal intensive care units. Front Microbiol. 9, 2676(2018).
  4. Meier, P. P. More evidence: Mothers' own milk is personalized medicine for very low birthweight infants. Cell Rep Med. 3 (8), 100710(2022).
  5. Fewtrell, M. S., et al. Predictors of expressed breast milk volume in mothers expressing milk for their preterm infant. Arch Dis Child Fetal Neonatal Ed. 101 (6), F502-F506 (2016).
  6. Abrams, S. A., et al. Donor human milk for the high-risk infant: Preparation, safety, and usage options in the United States. Pediatrics. 139 (1), e20163440(2017).
  7. Brasil é referência em doação de leite materno. , Serviços e Informações do Brasil. At https://www.gov.br/pt-br/noticias/saude-e-vigilancia-sanitaria/2020/02/brasil-e-referencia-em-doacao-de-leite-materno (2024).
  8. Landers, S., Updegrove, K. Bacteriological screening of donor human milk before and after holder pasteurization. Breastfeed Med. 5 (3), 117-121 (2010).
  9. Cacho, N. T., et al. Personalization of the microbiota of donor human milk with mother's own milk. Front Microbiol. 8, 1470(2017).
  10. Pumping breast milk. , Centers for Disease Control and Prevention - CDC. https://www.cdc.gov/nutrition/infantandtoddlernutrition/breastfeeding/pumping-breast-milk.html (2023).
  11. Expressing and storing breast milk. , NHS UK. https://www.nhs.uk/conditions/baby/breastfeeding-and-bottle-feeding/breastfeeding/expressing-breast-milk/ (2020).
  12. Arslanoglu, S., et al. Recommendations for the establishment and operation of a donor human milk bank. Nutr Rev. 81 (Supplement_1), 1-28 (2023).
  13. Moro, G. E., et al. Processing of donor human milk: Update and recommendations from the European Milk Bank Association (EMBA). Front Pediatr. 7, 49(2019).
  14. Landers, S., Hartmann, B. T. Donor human milk banking and the emergence of milk sharing. Pediatr Clin North Am. 60 (1), 247-260 (2013).
  15. Stachelska, M. A. Identification of Lactobacillus delbrueckii and Streptococcus thermophilus strains present in artisanal raw cow milk cheese using real-time PCR and classic plate count methods. Pol J Microbiol. 66 (4), 491-499 (2017).
  16. Ruiz, L., et al. Comparison of two approaches for the metataxonomic analysis of the human milk microbiome. Front Cell Infect Microbiol. 11, 622550(2021).
  17. Lopez Leyva, L., Brereton, N. J. B., Koski, K. G. Emerging frontiers in human milk microbiome research and suggested primers for 16S rRNA gene analysis. Comp Struct Biotechnol J. 19, 121-133 (2021).
  18. Bolger, A. M., Lohse, M., Usadel, B. Trimmomatic: A flexible trimmer for Illumina sequence data. Bioinformatics. 30 (15), 2114-2120 (2014).
  19. Bolyen, E., et al. interactive, scalable and extensible microbiome data science using QIIME 2. Nat Biotechnol. 37 (8), 852-857 (2019).
  20. McMurdie, P. J., Holmes, S. phyloseq: An R package for reproducible iInteractive analysis and graphics of microbiome census data. PLoS ONE. 8 (4), e61217(2013).
  21. R Core Team. R: A language and environment for statistical computing. R Foundation for Statistical Computing. , R Foundation for Statistical Computing. Vienna, Austria. https://www.R-project.org/ (2024).
  22. Torrez Lamberti, M. F., et al. Metabolomic profile of personalized donor human milk. Molecules. 25 (24), 5783(2020).
  23. Mallardi, D., et al. Inoculation of mother's own milk could personalize pasteurized donor human milk used for feeding preterm infants. J Transl Med. 19 (1), 420(2021).

الوصول مقيد. يرجى تسجيل الدخول أو بدء فترة تجريبية لعرض هذا المحتوى.

إعادة الطباعة والأذونات

الوسوم

16S
إعادة التكوين الفردية لميكروبات الحليب البشري: نهج ممكن في بيئات العالم الحقيقي
اتصل بنا
أوصِ بها للمكتبة

الخصوصية

شروط الاستخدام

السياسات

2026 © حقوق الطبع والنشر MyJoVE Corporation. جميع الحقوق محفوظة.