هنا ، نقدم طريقة لتحليل تصوير الخلايا الحية التي يمكن استخدامها لتتبع سلالات المرور 0 الخلايا الكيراتينية يدويا والتي تسمح بجمع مقاييس الانتشار ، بما في ذلك مصير انقسام الخلية ومدة دورة الخلية.
يتطلب اشتراك JoVE لعرض هذا المحتوى. تسجيل الدخول أو ابدأ نسخة تجريبية مجانية
مقالة منهجية
تصوير الخلايا الحية مع التصوير الفوتوغرافي بفاصل زمني لدراسة حركية تكاثر الخلايا الكيراتينية للبشرة
في هذه المقالة
ملخص
الملخص
تصوير الخلايا الحية هو طريقة متطورة وصعبة إلى حد ما لدراسة سلوك الخلايا الكيراتينية في المختبر. تاريخيا ، تم التحقيق في سلوك انقسام الخلايا الكيراتينية من خلال طرق مثل التحليل النسيلي والتلوين المناعي وتحليل دورة الخلية. لا تسمح أي من هذه الطرق بتحليل سلوك الخلايا الكيراتينية على مستوى الخلية المفردة في الوقت الفعلي. على مدى العقد الماضي ، استخدمت المجموعات تصوير الخلايا الحية لتحديد الخلايا الجذعية للخلايا الكيراتينية والأسلاف الملتزمة دون الحاجة إلى وضع العلامات. تم تحديد الاختلافات في سلوك الانقسام لكل مجموعة ، ومعدل التمايز النهائي ، ومدة دورة الخلية. هنا ، يتم وصف طريقة لتصوير الخلايا الحية للخلايا الكيراتينية مع التصوير الفوتوغرافي بفاصل زمني وتحليله. يوصى باستخدام الخلايا الكيراتينية غير المارة لهذه الطريقة لتقليد السلوك في الجسم الحي عن كثب. يوفر تصوير الخلايا الحية قدرة فريدة على دراسة الخلايا الجذعية وسلوك السلف الملتزم على مستوى الخلية المفردة وتحديد مصائر الانقسام ومدة دورة الخلية بالإضافة إلى مقاييس الانتشار الأخرى.
المقدمة
تعد القدرة على تصور مجموعات الخلايا في المختبر في الوقت الفعلي أثناء توسعها لفترات طويلة من الزمن فائدة فريدة لتصوير الخلايا الحية. يسمح تصوير الخلايا الحية بتقييم حركة الخلية وهجرتها وتكاثرها على مستوى الخلية الواحدة. الهدف من هذا البروتوكول هو تحسين تصور مزارع الخلايا الكيراتينية عبر التصوير الفوتوغرافي بفاصل زمني ، وإنتاج مقاطع فيديو يمكن تتبعها يدويا بعد ذلك للحصول على بيانات دقيقة عن السلوك الخلوي.
وينصب تركيزنا على حركية الانتشار. من تحليل مقاطع فيديو تصوير الخلايا الحية ، يمكن توضيح أشجار النسب ، ويمكن تقييم الوقت بين الانقسامات (وكيل لمدة دورة الخلية) ، بالإضافة إلى نسب الانقسامات التي تؤدي إلى مزيد من الانقسام مقابل تمايز الخلايا الوليدة.
هناك تباين كبير من متبرع إلى متبرع عند التعامل مع الخلايا الكيراتينية الأولية والمحاولات الفاشلة المتكررة لتكاثر الخلايا. لهذا السبب ، يختار العديد من الباحثين استخدام الخلايا الكيراتينية عالية التكاثر مثل خلايا HaCaT أو الخلايا الكيراتينية لحديثي الولادة ، غالبا بعد خضوعهم لمقاطع متعددة في المختبر1. قد يكون استزراع الخلايا الكيراتينية الأولية من الجلد البالغ أو المسن لغرض تتبع النسب أمرا صعبا. ومع ذلك ، هناك مشكلات في استخدام الخلايا المنقولة من خطوط الخلايا أو من القلفة الذكرية. ينتج عن المرور المتكرر خلايا تختلف اختلافا كبيرا عن حالتها في الجسم الحي 2. علاوة على ذلك ، فقد ثبت أن خلايا HaCaT تتفاعل بشكل مختلف عن الخلايا الكيراتينية الأولية في المقايسات المتعددة3،4،5. للاستفادة من الخلايا التي تشبه إلى حد كبير نظيراتها في الجسم الحي ، يتم استخدام مرور 0 خلايا كيراتينية من المتبرعين البشريين البالغين. تظهر الخلايا الجذعية للخلايا الكيراتينية والأسلاف الملتزمة اختلافات واضحة في السلوك ، مما يسمح بتمييز المستعمرات من أي من المجموعتين عن طريق تصوير الخلايا الحية6. تم استخدام هذه القدرة الجديدة نسبيا على تصور سلوك الخلايا الكيراتينية المفردة على المدى الطويل في عدد قليل من الدراسات السابقة باستخدام تقنيات مماثلة6،7،8. يحدد هذا البروتوكول تصوير الخلايا الحية للخلايا الكيراتينية الأولية باستخدام نظام تحليل الخلايا الحية IncuCyte S3. من أشجار النسب التي يتم إنشاؤها ، يمكن تحديد نوع المستعمرة (الخلايا الجذعية مقابل السلف الملتزم) ، بالإضافة إلى مدة دورة الخلية ونسبة انقسامات التمايز.
الوصول مقيد. يرجى تسجيل الدخول أو بدء فترة تجريبية لعرض هذا المحتوى.
البروتوكول
أجريت هذه الدراسة وفقا لإعلان هلسنكي. تم الحصول على جميع الأنسجة البشرية بعد موافقة مجلس المراجعة المؤسسي بجامعة كاليفورنيا ، سان فرانسيسكو (UCSF) ، وتم الحصول على الموافقة على جميع الأنسجة المستخدمة.
1. التصوير الفوتوغرافي بفاصل زمني لمرور 0 الخلايا الكيراتينية البشرية
ملاحظة: هذا البروتوكول خاص ب IncuCyte S3 و SX5.
- تأكد من الحصول على الموافقات المناسبة من لجنة البحوث البشرية بالمؤسسة لاستخدام الأنسجة البشرية للدراسة.
- عزل الخلايا الكيراتينية عن الجلد الطازج كما هو موضحسابقا 9.
- تحديد كثافة البذر للمقايسة. قم بإجراء دراسات تجريبية مع عينات في تخفيفات متعددة من متبرعين مختلفين لفهم كثافة الخلايا اللازمة من أجل ضمان مستعمرات كافية للدراسة ولكن منع المستعمرات المفرطة التي تؤدي إلى تداخل المستعمرة خلال فترة المراقبة. قم بتشغيل هذه الطيارين في ظل ظروف تجريبية متطابقة (نفس الألواح والكواشف وما إلى ذلك) ، حيث يمكن لهذه العوامل تغيير النتائج.
ملاحظة: تؤدي كثافة البذر المنخفضة جدا إلى نمو غير كاف ، في حين أن كثافة البذر العالية جدا تؤدي إلى عدم القدرة على تتبع الخلايا بدقة بسبب ازدحام الخلايا في الحقل.- بالنسبة لمرور 0 خلايا كيراتينية من قلفة حديثي الولادة أقل من 48 ساعة من مجموعة مخزنة عند 4 درجات مئوية في وسائط التجميع ، تأكد من أن كثافة البذر 1000-5000 / سم2. بالنسبة للخلايا الكيراتينية P1 ، استخدم 500-2000 خلية / سم2. كلما زاد الممر ، انخفضت كثافة البذر.
- خلايا اللوحة على حجم اللوحة المحدد.
ملاحظة: 96 لوحة بئر وصفائح دقيقة لها تأثير الغضروف المفصلي ، مما يؤدي إلى توزيع الخلايا غير المنتظم ، مع وجود الكثير من النمو خارج مجال جهاز التصوير. تسمح الألواح ذات الآبار الكبيرة (24 لوحة بئر على سبيل المثال) بالتقاط المزيد من البيانات. تسمح 24 لوحة بئر بتصور ما يصل إلى 36 حقلا ، بينما تسمح 96 لوحة بئر بتصور ما يصل إلى 5 حقول فقط. ومع ذلك ، فإن عدد الحقول التي تم التقاطها على الأداة محدود ، وستستهلك المزيد من الحقول المزيد من سعة المصور. عادة ، يتم استخدام صفيحة 24 بئر.- لتحقيق توزيع متساو للخلايا على اللوحة ، يمكن استخدام تقنيات مختلفة. أولا ، بدلا من زرع كل بئر بشكل فردي ، قم بتقسيم إجمالي الوسائط اللازمة لجميع الآبار عند تخفيف معين في أنبوب صغير. بعد ذلك ، قم بتدوير الماصة العدد الإجمالي للخلايا اللازمة للوصول إلى الكثافة المطلوبة وقلب الأنبوب برفق لتوزيع الخلايا بشكل متجانس.
- بعد الطلاء ، حرك اللوحة في نمط متقاطع ثلاث مرات (لأعلى لأسفل ، من اليسار إلى اليمين) ثم انقلها إلى الحاضنة بعناية.
تنبيه: في حالة استخدام صفيحة دقيقة ، تجنب الصفوف والأعمدة الخارجية للآبار ، لأن المجهر بفاصل زمني يولد حرارة عند التصوير وقد يتسبب في تبخر الوسائط في تلك الآبار. يجب تجميع الآبار التجريبية في وسط الصفيحة وتحيط بها آبار تحتوي على PBS أو سائل معقم آخر بأقصى سعة لتقليل تأثيرات التبخر / الحافة.
- احتضان الخلايا لمدة 24 ساعة عند 37 درجة مئوية و 5٪ ثاني أكسيد الكربون2 للسماح بالالتصاق.
- تغيير الوسائط بعد 24 ساعة.
ملاحظة: لا تزعج الطبقة الأحادية المتنامية عند الشفط. استخدم دائما الوسائط الدافئة (37 درجة مئوية) وقم ببث الوسائط برفق في الآبار باستخدام الجدار الجانبي. الوسائط المستخدمة هنا هي Epilife / Supplement S7 / Primocin. يوصى باستخدام المضادات الحيوية في الوسائط لتصوير الخلايا الحية على المدى الطويل لهذا التطبيق. إن الثقافة الممتدة في آلة تستخدم في تجارب متزامنة متعددة معرضة لخطر كبير للتلوث. يشيع استخدام البنسلين والستربتومايسين. - افتح الحاضنة بالضغط على الزر المثلث الكبير في أسفل اليسار لفتح الدرج عندما يكون الضوء أخضر. ضع الوعاء في خليج مفتوح. ثم أغلق الدرج باستخدام نفس الزر الموجود أسفل اليسار. لا تفتح الدرج أبدا عندما يكون الزر المراد فتحه أحمر ، فهذا يعني أنه يقوم بالمسح الضوئي بنشاط ، وسيتم مقاطعة الفحص.
تنبيه: تأكد من عدم وجود عمليات فحص تبدأ بالنظر إلى الشاشة على وحدة التحكم. يخبرنا بالوقت حتى الفحص التالي وطول الفحص. إذا بدأ المسح ، فسوف يمنح الوقت حتى يكتمل الفحص. - افتح التطبيق على الكمبيوتر وقم بتسجيل الدخول باستخدام معرف المستخدم وكلمة المرور المناسبين. حدد جدولة.
- اضغط على الزر + في الزاوية العلوية اليسرى أسفل الجدول الزمني لإضافة اللوحة إلى الجدول.
- حدد مسح ضوئي حسب الجدول الزمني، ثم انقر فوق التالي.
- حدد جديد، ثم انقر على التالي.
ملاحظة: إذا كانت هذه اللوحة مطابقة لتجربة سابقة أو قيد التشغيل، فيمكن استخدام نسخ السابق أو نسخ الحالي لتسريع تنسيق التجربة. - حدد قياسي لنوع المسح الضوئي، ثم انقر على التالي.
ملاحظة: Image Lock عبارة عن لوحة بئر 96 خاصة تساعد على تقليل حدوث فقدان التركيز / القفز على الصورة ، والتي يمكن أن تكون مفيدة إذا واجهت هذه المشكلات. أنواع الفحص الأخرى ليست مفيدة بشكل خاص لتتبع النسب. - لإعدادات الفحص، حدد اللصق خلية تلو الأخرى باستخدام قناة الطور عند هدف 10x، ثم انقر فوق التالي.
ملاحظة: طالما تم اختيار قناة الطور، فلا يلزم تحديد خيار التحليل في هذه المرحلة، حيث يمكن بدء التحليل بعد التقاط البيانات. - حدد الوعاء، ثم انقر على التالي. تتوافق معظم الأوعية الشائعة مع الماكينة ، على الرغم من أن الصفائح غير المجهرية قد تحتاج إلى ملحقات خاصة لتناسب خلجان المجهر بفاصل زمني.
- حدد خليجا فارغا لوضع السفينة، ثم انقر فوق التالي.
- حدد الآبار المراد مسحها ضوئيا بالإضافة إلى الصور لكل بئر ، ثم انقر فوق التالي. سيتم توفير مدة الفحص المقدرة في الجزء السفلي الأيسر من الشاشة.
- قم بتسمية التجربة باستخدام اصطلاح التسمية المطلوب. قم بإنشاء خريطة لوحة للتجربة للرجوع إليها في المستقبل ، ثم اضغط على حسنا. أخيرا ، انقر فوق التالي.
- تأجيل التحليل إلى ما بعد جمع البيانات ، حيث يجب بدء التحليل خلية تلو الأخرى بعد اكتمال المسح. انقر فوق التالي.
- أخيرا ، اضبط تردد التصوير. من أجل تتبع الانقسام بشكل موثوق ، والذي يحدث على مدى 30 دقيقة ، قم بالمسح الضوئي على فترات 20 دقيقة بحثا عن الخلايا الكيراتينية. اضغط على التالي وقم بتأكيد الإعدادات لبدء التجربة.
ملاحظة: لا يمكن أن تتداخل أوقات المسح الضوئي ، ويوصي المصنعون بأن يكون الجهاز في حالة راحة طالما أنه يقوم بالمسح الضوئي. مع فواصل زمنية مدتها 20 دقيقة ، فهذا يعني أنه يجب قضاء 10 دقائق كحد أقصى في المسح. إذا تم تصوير 12 بئرا من 24 بئرا عند 36 مشاهدة لكل بئر ، فسيستغرق الأمر 7 دقائق حتى يكتمل الفحص ، لذلك ضع في اعتبارك دائما الموارد المتاحة للتجربة عند التخطيط.- هناك إشعار إذا كان هناك وقت غير كاف للماكينة للراحة ، وإذا تداخلت أوقات المسح ، فلا يمكن إضافة السفينة إلى الجدول. إذا لم يكن السفينة تتناسب مع الجدول الزمني على فترة زمنية منتظمة ، فانقر فوق حجز موقع الدرج واضغط على التالي.
- انقر نقرا مزدوجا فوق الجدول الزمني في الجزء العلوي من الشاشة وحدد السفينة الاحتياطية ثم انقر يدويا لإضافة صور في الفترات الزمنية المفتوحة. بدلا من ذلك، انقر بزر الماوس الأيمن بمجرد فتح الجدول الزمني لحذف جميع أوقات الفحص المجدولة وانقر بزر الماوس الأيمن لتعيين أوقات فحص جديدة لمجموعة المسح الضوئي على فاصل زمني منتظم.
ملاحظة: سيؤدي ذلك إلى مقاطعة جميع التجارب الموجودة حاليا على الجهاز حتى يتم تعيين أوقات جديدة. لا تنس الضغط على أيقونة القرص المرن للحفظ أو X الأحمر لإلغاء التغييرات التي تطرأ على الجدول الزمني. يعد اختيار الآبار أو المناظر المطلوبة عملية مباشرة ، حيث توفر الماكينة على الفور وقت المسح المقدر عند اختيار المعلمة. تعتمد مدة الفحص على نوع اللوحة المختارة وعلامتها التجارية ، بالإضافة إلى عدد الآبار أو المناظر المراد مسحها ضوئيا. يتيح ذلك للمستخدمين ضبط معلمات المسح الضوئي لتتناسب مع سعة الجهاز.
- بالنسبة للخلايا الكيراتينية ، قم بتغيير الوسائط كل 48 ساعة. لضمان الاتجاه الصحيح للوحة ، انتظر حتى يكتمل الفحص الأول في كل مرة يتم فيها وضع وعاء في الماكينة (إذا سمح الوقت بذلك). إنه خطأ بسيط لارتكابه. ضع اللوحة في الماكينة بحيث تكون الأحرف التي تشير إلى الصفوف على الجانب الأيسر من الخليج.
- لعرض المسح الضوئي، اضغط على الزر عرض مع أيقونة العين ثم انقر نقرا مزدوجا فوق التجربة. ضع في اعتبارك تغيير الوسائط مبكرا إذا كان هناك تغيير مفاجئ في لون الوسائط (تصبح الوسائط المحتوية على الفينول الأحمر صفراء بسبب التحمض) ، إذا كانت هناك خلايا ميتة زائدة (يمكن أن تتداخل مع تكاثر المستعمرات الحية) ، أو إذا لوحظ مورفولوجيا غير طبيعية.
- بمجرد أن تصبح جميع الآبار هادئة أو تصل إلى التقاء ، قم بتصدير التجربة. اتبع مستعمرات البالغين لمدة ~ 2 أسابيع وحديثي الولادة لمدة ~ 10 أيام ، وفي ذلك الوقت يتسبب الازدحام في تناقص عوائد التحليلات.
- للتصدير، انقر فوق علامة التبويب عرض وانقر نقرا مزدوجا فوق التجربة ضمن قائمة عمليات الفحص الحديثة (الإعداد الافتراضي هو أن يتم طلبها من أحدث إصدار للخلف). انقر على أفقي مع السهم وانتظر حتى يتم تشغيل أداة التصدير.
- انقر على كما معروض، ثم انقر على التالي.
- انقر يدويا على كل حقل عرض لتصديره، ثم انقر على التالي.
- حدد ما إذا كان الفيلم أو سلسلة الصور مطلوبا أم لا، ثم حدد أوقات المسح الضوئي المراد تصديرها. لتتبع نسب الخلايا الكيراتينية ، استخدم خيار الفيلم وحدد جميع عمليات الفحص (يوجد رمز تحديد الكل السريع مع سطر متقطع لتسريع ذلك). انقر فوق التالي.
- قم بالتصدير بمعدل 1 إطار في الثانية بأقصى جودة (اضبط هذا باستخدام الشريط بجوار الجودة). انقر فوق التالي.
- اختر المجلد الهدف ونوع الملف. قم بتسمية الملف، ثم انقر فوق تصدير.
ملاحظة: قد يستغرق تصدير مقاطع الفيديو وقتا طويلا ، اعتمادا على سرعة الاتصال بالإنترنت والكمبيوتر المعني. كن مستعدا للانتظار عدة أيام لتصدير جميع ملفات الفيديو لتجارب أكبر. يعد امتلاك القدرة على تسجيل الدخول إلى مجهر الفاصل الزمني عن بعد أمرا مريحا للغاية.
2. استخدام التصوير بفاصل زمني لبناء أشجار النسب وإنشاء أوراق البيانات
- افتح ملف الفيديو باستخدام مشغل وسائط. يوصى باستخدام مشغل وسائط VLC.
- قم بالتمرير عبر مقاطع الفيديو وحدد المستعمرات المتنامية. باستخدام VLC ، استخدم مفتاح السهم لتخطي الإطارات للأمام والخلف. التقط لقطة شاشة للمستعمرة المراد تتبعها وقم بتسمية المستعمرة.
- حدد مستعمرة ذات أهمية إما في نهاية أو بعد بضعة أيام من تسجيل الفيديو ، ثم قم بإرجاع الفيديو وتحديد الخلية المكونة للمستعمرة.
ملاحظة: هذا هو المكان الذي يكون فيه الحصول على كثافة البذر المناسبة أمرا مهما. إذا تطورت العديد من المستعمرات بجانب بعضها البعض ، فإنها تتوسع وتندمج مع بعضها البعض مما يجعل من المستحيل تتبع انقسامات الخلايا بدقة. - عندما تكون الخلية على وشك الانقسام ، يبدو أنها تتكثف (الشكل 1). أوقف الفيديو مؤقتا عند حدوث الانقسام. سجل وقت التقسيم (يوجد الطابع الزمني في الزاوية اليسرى السفلية). التقط لقطة شاشة لهذا التقسيم الأولي وامنحه نفس تسمية المستعمرة. سجل التقسيمات في مخطط نسب مرسوم يدويا (انظر النتائج التمثيلية). استمر في تتبع وتوثيق أكبر عدد ممكن من الأجيال.
ملاحظة: يتم تطوير التتبع الآلي للخلايا لتسريع هذه العملية وتتبع الخلايا بدقةأكبر 7. حتى في ظروف زراعة الكالسيوم المنخفضة مع الحد الأدنى من التمايز ، تفتقر نماذج التعلم الآلي حاليا إلى الحساسية لتتبع انقسامات الخلايا الكيراتينية بدقة. - انسخ شجرة النسب اليدوية إلى أوراق البيانات - سميت بهذا الاسم "الأوراق الخضراء" بسبب اللون الموجود في جدول البيانات (الملف التكميلي 1).
- استخدم الأوراق الخضراء لحساب نسب الانقسامات التكاثرية والتمايزية ، وتحديد الخلايا الجذعية ومستعمرات السلف الملتزمة ، ومدة دورة الخلية (انظر النتائج التمثيلية).
ملاحظة: الجهاز قادر على تحليل البيانات عبر أجهزة التحليل الأساسية الخاصة به وكل خلية تلو الأخرى لتشغيل فحوصات أخرى متعددة (التقاء ، خدش). ومع ذلك ، فإن هذا خارج نطاق هذا البروتوكول.
الوصول مقيد. يرجى تسجيل الدخول أو بدء فترة تجريبية لعرض هذا المحتوى.
النتائج
تنمو الخلايا الكيراتينية الأولية بطريقة نمطية ، والتي يمكن تتبعها عن طريق تصوير الخلايا الحية. يستخدم مشغل وسائط VLC لمسح التسجيلات. الوقت حتى التقسيم الأول متغير ويمكن أن يكون عدة أيام اعتمادا على خصائص المتبرع ، مثل العمر أو الحالة الصحية أو عوامل النمو الموجودة في بيئة المختبر . عند البذر الأولي ، يكون للخلايا الكيراتينية مظهر صغير مستدير (الشكل 1). بعد البذر ، عادة ما تصبح الخلايا الكيراتينية المكونة للمستعمرة مسطحة (الشكل 1...
الوصول مقيد. يرجى تسجيل الدخول أو بدء فترة تجريبية لعرض هذا المحتوى.
المناقشة
تصوير الخلايا الحية للخلايا الكيراتينية هو طريقة خالية من الملصقات لتتبع سلوك انقسام الخلايا الجذعية والأسلاف الملتزمة. بالنظر إلى أن الحفاظ على البشرة يعتمد على حركية تكاثر الخلايا الجذعية والأسلاف الملتزمة10 ، فإن وجود فهم دقيق للتغيرات في مجموعات الخلايا الكيراتينية هذه وكيف تتأثر في ظروف مختلفة يسهل تطوير العلاجات لتحسين العيوب التي يتم اكتشافها.
في النهاية ، يتوقف تتبع النسب عبر تصوير الخلايا الحية على الحصول على بيانات قابلة للاست...
الوصول مقيد. يرجى تسجيل الدخول أو بدء فترة تجريبية لعرض هذا المحتوى.
شكر وتقدير
تم دعم هذا العمل من قبل جائزة مراجعة الجدارة رقم I01 CX001816 من الولايات المتحدة (الولايات المتحدة) قسم شؤون المحاربين القدامى ، العلوم السريرية ، خدمة البحث والتطوير (CSRD). لا تمثل المحتويات وجهات نظر وزارة شؤون المحاربين القدامى الأمريكية أو حكومة الولايات المتحدة. نشكر الدكتور مايكل روزنبلوم على تزويدنا بإمكانية الوصول إلى مجهر الفاصل الزمني لإجراء تجاربنا.
الوصول مقيد. يرجى تسجيل الدخول أو بدء فترة تجريبية لعرض هذا المحتوى.
المواد
| الاسم | الشركة | رقم فهرسي | التعليقات |
|---|---|---|---|
| لوحة قفل صورة البئر 96 | سارتوريوس | BA-04856 | توصية بميكرولوح متوافقة مع الجهاز إذا كنت تستخدم لوحة بئر 96. |
| صفيحة 24 بئر | كورنينج | 3524 | توصية بميكرولوح متوافقة مع الجهاز إذا كنت تستخدم لوحة 24 بئر. |
| أمفوتيرسين B، 50 مل | كورنينج | 30-003-CF | تخفيف إلى 5 مرات (يأتي بسعة 100x) ل5 ضعف PSA - 1x لتغييرات الوسائط |
| إبيلايف، 50 مل | جيبكو | MEP1500CA | أضف S7، واعتبر البريموسين |
| إنكوسايت S3 | سارتوريوس | 4637 | Imager (بدائل مقبولة في Zoom/SX5) |
| البنسلين/ستريبتومايسين، 100 مل | كورنينج | 30-002-Cl | مخفف إلى 5x (يأتي بسعة 100x) |
| بريموسين | إنفيفوجين | ANT-PM-05 | 1 مل لكل 500 مل من الوسائط |
| الملحق S7 | جيبكو | S0175 | تمت إضافته إلى الحياة الفوقية |
المراجع
- Mateu, R., et al. Functional differences between neonatal and adult fibroblasts and keratinocytes: Donor age affects epithelial-mesenchymal crosstalk in vitro. Int J Mol Med. 38 (4), 1063-1074 (2016).
- Handl, J., Čapek, J., Majtnerová, P., Báčová, J., Roušar, T. The effect of repeated passaging on the susceptibility of human proximal tubular HK-2 cells to toxic compounds. Physiol Res. 69 (4), 731-738 (2020).
- Moran, M. C., et al. Characterization of human keratinocyte cell lines for barrier studies. JID Innov. 1 (2), 100018(2021).
- Seo, M. -D., Kang, T. J., Lee, C. H., Lee, A. -Y., Noh, M. HaCaT keratinocytes and primary epidermal keratinocytes have different transcriptional profiles of cornified envelope-associated genes to T helper cell cytokines. Biomol Ther. 20 (2), 171-176 (2012).
- Jahn, M., et al. Different immortalized keratinocyte cell lines display distinct capabilities to differentiate and reconstitute an epidermis in vitro. Exp Dermatol. 33 (1), e14985(2024).
- Xiao, T., et al. Short cell cycle duration is a phenotype of human epidermal stem cells. Stem Cell Res Ther. 15 (1), 76(2024).
- Hirose, T., Kotoku, J., Toki, F., Nishimura, E. K., Nanba, D. Label-free quality control and identification of human keratinocyte stem cells by deep learning-based automated cell tracking. Stem Cells. 39 (8), 1091-1100 (2021).
- Roshan, A., Murai, K., Fowler, J., Simons, B. D., Nikolaidou-Neokosmidou, V., Jones, P. H. Human keratinocytes have two interconvertible modes of proliferation. Nat Cell Biol. 18 (2), 145-156 (2016).
- Abegaze, B., Ijeh, N., Vittimberga, B., Ghadially, R. Generating primary cultures for the purpose of keratinocyte live cell imaging. J Vis Exp. , In Press (2024).
- Piedrafita, G., et al. A single-progenitor model as the unifying paradigm of epidermal and esophageal epithelial maintenance in mice. Nat Commun. 11 (1), 1429(2020).
- Ścieżyńska, A., et al. Isolation and culture of human primary keratinocytes-a methods review. Exp Dermatol. 28 (2), 107-112 (2019).
- Mansoury, M., Hamed, M., Karmustaji, R., Al Hannan, F., Safrany, S. T. The edge effect: A global problem. The trouble with culturing cells in 96-well plates. Biochem Biophys Rep. 26, 100987(2021).
- Malin-Mayor, C., et al. Automated reconstruction of whole-embryo cell lineages by learning from sparse annotations. Nat Biotechnol. 41 (1), 44-49 (2023).
- Waliman, M., et al. Automated cell lineage reconstruction using label-free 4D microscopy. Genetics. 228 (2), iyae135(2024).
الوصول مقيد. يرجى تسجيل الدخول أو بدء فترة تجريبية لعرض هذا المحتوى.
إعادة الطباعة والأذونات
الوسوم
