يتطلب اشتراك JoVE لعرض هذا المحتوى. تسجيل الدخول أو ابدأ نسخة تجريبية مجانية

مقالة منهجية

الكشف عن شد غشاء الشبكة الإندوبلازمي المرتبط بالميتوكوندريا باستخدام حساسات حيوية FRET المحفزة

132 مشاهدة

⸱

DOI:

10.3791/67914

⸱

أغسطس 7, 2026

 ,  , 
1Genetics and Aging Research Unit, MassGeneral Institute for Neurodegenerative Disease, Henry and Allison McCance Center for Brain Health, Department of Neurology, Massachusetts General Hospital, Harvard Medical School,

في هذه المقالة

ملخص

نحن نصف طريقة لقياس قيم FRET لحساسات FRET الحيوية المحفزة التي تستهدف ER (الموسوم ب CFP) أو الميتوكوندريا (موسوم ب YFP) في المختبر لتقييم شد أغشية ER المرتبطة بالميتوكوندريا (MAMs)، والتي تؤثر على توليد Aβ، ويمكن استخدام هذه الطريقة للفحص الأولي للعوامل الصناعية أو الطبيعية التي تعدل MAM كعلاجات محتملة للزهايمر.

الملخص

أظهرت العديد من الدراسات أن عدد وطول وعرض الفجوة (السمك) لاتصالات ER-الميتوكوندريا، أو الأغشية المرتبطة بالميتوكوندريا (MAMs)، تؤثر على أدوارها البيولوجية. أظهرت أعمالنا السابقة أن تثبيت MAMs الضيق، الذي يتميز بعرض فجوة حوالي 7 نانومتر، يؤدي إلى زيادة مستويات β الأميلويد (Aβ)، في حين أن وجود MAMs فضفاضة بعرض فجوة حوالي 40 نانومتر يقلل من إنتاج Aβ في نموذج عصبي ثلاثي الأبعاد (3D) لمرض الزهايمر (AD). لدراسة تأثيرات MAMs ذات عرض الفجوات المختلفة، تم تطوير حساسات FRET (نقل طاقة رنين فورستر) المستهدفة للميتوكوندريا - ER-CFP (بروتين فلوري سيان) وMito-YFP (بروتين فلوري أصفر) على التوالي - لقياس حجم MAMs الضيق (<عرض الفجوة 10 نانومتر) مقارنة بالموجات الفضفاضة أو غير الفضفاضة. يحدث FRET عندما يكون فلوروفور المتبرع (CFP) والفلوروفور المستقبل (YFP) على بعد 10 نانومتر من بعضهما البعض، مما يجعل هذا النظام مناسبا لتقييم قرب MAM. يوضح هذا البروتوكول استخدام FRET ذو النسبة الطيفية لقياس مدى تكوين MAM الضيق.

المقدمة

تلامس الشبكة الإندوبلازمية المرتبطة بالميتوكوندريا (MERCs)، والتي يتم عزلها كيميائيا كأغشية ER المرتبطة بالميتوكوندريا (MAMs)، متورطة في عدة اضطرابات تنكسية عصبية، بما في ذلك مرض الزهايمر (AD)1. تشير فرضية "MAM" المقترحة مؤخرا إلى أن MAMs تلعب دورا مركزيا في توليد β الأميلويد (Aβ)، مما يؤدي إلى بدء السلسلة الممرضة لمرض AD. تشمل هذه السلسلة تكوين التشابك الليفي العصبي (NFTs)، خلل التوازن في الكالسيوم، والالتهاب العصبي2. تتكون MAMs من مجالات دقيقة غنية بالكوليسترول تشبه طوف الدهون في الشبكة الإندوبلازمية وغشاء الميتوكوندريا الخارجي (OMM)، ترتبط ببروتينات ربط محددة تساهم في تنوعها الهيكلي والوظيفي3. يؤثر استقرار اتصالات ER-الميتوكوندريا على عمليات خلوية مختلفة، بما في ذلك إشارات الكالسيوم في ER والموت المبرمج 4,5. يقدر أن 5٪-20٪ من الميتوكوندريا تتواصل فيزيائيا مع الشبكة الطيرانية لتأسيسMAMs 6. أشارت عدة دراسات إلى أن عدد وطول وعرض الفجوة (السماكة) بين ال ER والميتوكوندريا في مواقع MAM هي عوامل مهمة لتحديد أدوارهم الوظيفية. أظهرت المجهر الإلكتروني البارد والتحليلات في الجسم الحي لكبد الفئران أن الحالة الأيضية لخلايا الكبد تعدل كل من سمك (من 14 نانومتر إلى 20 نانومتر) وطول (من 145 نانومتر إلى 270 نانومتر)MAMs 7.

تظهر أيضا MAMs كأهداف علاجية محتملة لمختلف الاضطرابات، بما في ذلك السرطان واضطرابات الأيض. ينظم سمك أو عرض الفجوة في MAM بقاء الخلية. أظهرت المثبتات المكونة ل MAM، MAM 1X و MAM 9X، المصممة لتثبيت التوازن بإحكام (عرض الفجوة 6 نانومتر ± 1 نانومتر) والرخوة (عرض الفجوة 24 نانومتر ± 3 نانومتر)، على التوالي أن تثبيت الميكروفونات الضيقة زاد بشكل كبير من توليد Aβ في نموذج جديد ثلاثي الأبعاد للزراعة العصبية للزهايمر. على النقيض من ذلك، لم يكن لتثبيت المامات الفضفاضة أي تأثير8. لذا، قد يكون تحويل استقرار MAMs المشدود إلى MAMs غير مرتبة مفيدا لتقليل أمراض الأميلويد. تجعل التعقيدات الهيكلية والوظيفية ونقص التحليل الكمي الدقيق لدرجة استقرار ال MAM من الصعب استهداف MAMs لاكتشاف الدواء. أظهر تحليل جديد للتصوير الحي والكيموغرافيا لسرعة المحور المحورية للميتوكوندريا المرتبطة ب ER أن سرعة المحورية للميتوكوندريا يمكن استخدامها كمقياس لقياس استقرار MAM بشكل كمي، لأن التلامس الأقوى مع ER يقلل بشكل كبير من سرعة المحور المحوري للميتوكوندريا مقارنة بالميتوكوندريا الحرة 8,9. باستخدام مثبت محفز لموجات MAM في خلايا Neuro 2A (N2AAPP) المعبرة عن hAPP8، وجدنا أن تضييق عرض فجوة MAM يزيد من توليد Aβ بطريقة تعتمد على الجرعة8. مثبتات MAM القابلة للتحفيز هي بلازميدات تعبيرية ترمز إلى مستشعرات استهداف ER الموسومة بالحبات (CFP) ومستشعرات مستهدفة للميتوكوندريا مع بروتين فلوري أصفر، ومستهدفة للميتوكوندريا بعلامة YFP (بروتين فلورية أصفر) مع نطاقات ارتباط رافاميسين FK506 (FRB) القادرة على تحفيز الراباميسين أو بروتين ارتباط FK506 بقدرة 12 كيلو دالتون (FKBP). تم تمييز المستشعرات الحيوية ب ER-CFP و Mito-YFP على التوالي. CFP هو فلوروفور متبرع ينقل الطاقة إلى الفلوروفور المستقبل YFP عندما يفصل بينهما >10 نانومتر. الخلايا (N2A APP) التي تعبر عن المستشعرات الحيوية المحفزة زادت من توليد Aβ عند علاج الراباميسين8، مما يشير إلى أن زيادة كثافة MAMs تزيد من توليد Aβ. ستكون هذه الطرق مفيدة لفحص معدلات الجزيئات الصغيرة للMAMs وتركيزها الفعال المطلوب لتحقيق استقرار مستوى مثالي من MAMs الضيقة التي ستحول MAMs الممرضة ("Aβ متزايدة") إلى علاجية ("Aβ منخفضة") دون زعزعة استقرار نقاط ER واتصالات الميتوكوندريا بالكامل، وهو أمر مهم لبقاء الخلايا.

النموذج التجريبي
استخدمت هذه الدراسة خلايا Neuro2A(N2A) التي عبرت بشكل مستمر عن APP751 (N2AAPP). تطلق هذه الخلايا مستويات قابلة للكشف من Aβ في الوسط المكيف (CM) مقارنة بخلايا N2A الساذجة. تم الحفاظ على خلاياN2A APP في DMEM مع مكمل 10٪ FBS، و100 U/mL بنسلين، و100 ميكروغرام/مل من الستربتومايسين، و2 ملي مول L-جلوتامات مع 200 ميكروغرام/مل G418، كما تم وصفهسابقا 10.

بلازميد التعبير
تم توليد بلازميد تعبيري عن طريق دمج تسلسل استهداف الميتوكوندريا الموسوم ببروتين A-kinase الثديي 1 [AKAP1(34-63)] وتسلسل استهداف ER الموسوم ببروتين الفلورية السماوية CFP لفوسفاتيديلينوسيتول-3-فوسفاتاز Sac1 [Sac1(521-587)] مع تسلسل Tav2A ذاتي الشق يرمز لتسلسل الببتيد EGRGSLLTCGDVEENPGPP، ويرمز له ب pYFP-AKAP1-Tav2A-Sac1-CFP8 . البلازميد المدمج مع Tav2A محاط أيضا بتسلسلات نوكليوتيدية تشفر مجال ارتباط الراباميسين FK506 (FRB) [EMWHEGLEEASRLYFGERNVKGMFEVLEPL HAMMERGPQTLKETSFNQAYGRDLMEAQEWCRKYMKSGNV (K 2095P)DLTQAWDLYYHVFRRISKQ] أو مجال بروتين ارتباط FK506 (FKBP) بقوة 12 كيلو دالتون (MGVEKQVIRPNGPKPAPGQTVTVHCTGFGKD GDLSQKFWSTKDEGQKPFSFQIGKGAVIKGWDEGVIGMQ IGEVARLRCSSDYAGAGGFPAWGIQPNSVLDFEIEVLSVQ). تم توليد بلازميد الاندماج FRB-YFP-AKAP1(34-63)-Tav2A-Sac1(521-587)-CFP-FKBP، المشار إليه هنا باسم MAM-Tav2A، للحصول على مستويات تعبير متساوية الأضرار ل FRB-YFP-AKAP1(34-63) و Sac1(521-587)-CFP-FKBP لتحليل FRET النسبي. Sac1(521-587)-CFP-FKBP، ويرمز له ب ER-CFP، هو فلوروفور المتبرع، بينما ميتو-YFP-FRB، المرمز إليه ب Mito-YFP، هو الفلوروفور المستقبل الذي يولد FRET عند الفصل بينهما ~10 نانومتر8. لذا، تكتشف حساسات المحركات الحيوية المبنية على FRET الميكروبات الضيقة (6-10 نانومتر، عرض الفجوة). تم إدخال FRB وFKBP لتحفيز تضييق عرض فجوات MAM عند إضافة الراباميسين بطريقة تعتمد على الجرعة، ويمكن قياسها بقياس إشارة FRET المتزايدة8.

الوصول مقيد. يرجى تسجيل الدخول أو بدء فترة تجريبية لعرض هذا المحتوى.

البروتوكول

الكواشف والمعدات المستخدمة في هذه الدراسة مدرجة في جدول المواد.

1. النقل الداخلي

  1. نقل خلاياN2A APP باستخدام بلازميد تعبير MAM-Tav2A (14-18 ساعة).
    1. قبل البدء، × اللوحة 1 106 خلايا N2A APPلكل بئر من صفائح ذات 6 آبار تحتوي على أغطية زجاجية وتحافظ على الخلايا في وسط النمو لمدة 12-16 ساعة.
    2. نقل بلازميد MAM-Tav2A بسعة 1-3 ميكروغرام (ملف تكميلي 1) باستخدام كاشف الترانسفيكشن ليبوفكتامين وفقا لبروتوكول الشركة المصنعة.
    3. بعد 12-16 ساعة من النقل الدوائي، قم بإجراء العلاج الدوائي.
      ملاحظة: دائما يجب نقل الخلايا باستخدام بلازميد تعبير يرمز فقط للمتبرع (ER-CFP) أو المستقبل (Mito-YFP) ليستخدم كخلفية FRET.

2. علاج المخدرات

  1. عالج خلاياNP التي تعبر عن MAM-Tav2A باستخدام راباميسين (Rapa) أو Rapalog (Log) (3-6 ساعات).
    1. قبل العلاج، حضر محاليل المخزون (10 ملم) من رابا وجذوع.
    2. غير الوسائط باستخدام وسائط جديدة تحتوي على 0 نانومتر، 100 نانومتر، أو 250 نانومال، رابا أو لوج.
    3. بعد 3 ساعات من العلاج، أضف 3.3٪ بارافورمالديهايد (PFA) لتثبيت الخلايا.
    4. جهز الشرائح للمجهر الكونفوكالي الفلوري عن طريق وضع قطرة واحدة من مادة مضاد التلاشي.
    5. ثبت الغطاء فوق القطرة واضغط بلطف بالملاقط.
      ملاحظة: أغطية الزجاج هشة وتتطلب الحذر. كبديل لألواح الغطاء الزجاجي، استخدم صفائح قاعية زجاجية. العيب الرئيسي في استخدام الألواح ذات القاع الزجاجي هو عدم إمكانية استخدام كاشف مكافحة التلاشي، مما يجعل التصوير صعبا بسبب تبييض الفلوروفورات. لا تستخدم كاشف مضاد التصبغ الذي يحتوي على DAPI (4′,6-دياميدينو-2-فينيل إندول) لأن فلورته الزرقاء ستؤثر على FRET بين CFP وYFP.

3. المجهر الكونفوكلي لنقل طاقة الرنين الفلوري (FRET)

  1. ضع الشرائح تحت المجهر المقلوب وضبط تركيز المجهر حتى تصبح الخلايا مرئية.
  2. تحفيز الفلوروفور باستخدام ليزر 440 نانومتر والتقاط صور باستخدام انبعاث 468-503 نانومتر للمانح CFP (FKBP-CFP-ER) أو 525-565 نانومتر للمستقبل YFP (FRB-YFP-MITO).
  3. قم بضبط شدة الإشارة باستخدام فلتر الفلورسنت المدمج حتى تتلاشى الإشارة الخلفية (يجب أن تكون تقريبا سوداء تماما).
    ملاحظة: تم استخدام مجهر كونفوكال لالتقاط الصور الفلورية باستخدام برنامج NIS Element AR. تم استخدام تكبير 60x بدقة 512 بكسل.
  4. احفظ الصور كملفات .nds.
  5. قم بإجراء تحليل FRET النسبي الطيفي.

4. تحليل FRET بنسبة (6 - 12 ساعة)

ملاحظة: تم اكتشاف انبعاث فلوري من المتبرع ER-CFP (468-503 نانومتر) والمستقبل ميتو-YFP (525-565 نانومتر) باستخدام مجهر كونفوكلي. تم استخدام برنامج ImageJ لقياس متوسط شدة فلورة البكسل بعد طرح الخلفية. تم حساب نسبة YFP إلى شدة انبعاث CFP واستخدامها كقراءة لتحليل FRET الطيفي.

  1. صورة مفتوحة J (فيجي).
  2. إما سحب ملف .nds إلى الصورة J، أو اضغط ملف -> فتح واختر الصورة.
  3. في الشاشة التالية، اختر مربع تقسيم القنوات .
  4. انقر على لوحة C = 0 .
  5. انقر على تحليل -> القياس.
    ملاحظة: اكتب القيمة المتوسطة لحسابها لاحقا.
  6. انقر على العملية -> الرياضيات -> الطرح.
  7. هنا يأتي المتوسط للقيمة.
  8. كرر الخطوة 4 للوحة C = 1.
  9. انقر على أداة الاختيار الحرة .
  10. قم بتدوير خلية محل اهتمام، ثم اضغط Ctrl+T لتسجيلها إلى العائد على الاستثمار.
  11. انقر على عرض الجميع في أسفل العائد على الاستثمار لعرض ما اخترته بالفعل.
  12. اختر جميع الخلايا المحددة وانقر على القياس، وسجل هذه القيم في إكسل.
  13. انقر على لوحة C = 1 ثم اضغط على عرض الكل.
  14. اختر جميع الخلايا وانقر على القياس مرة أخرى، وسجل هذه القيم في عمود منفصل في Excel.
  15. في Excel، أنشئ دالة لوضع قيم إشارة المتبرع فوق المستلم (C0/C1). هذه هي نسبة FRET.

الوصول مقيد. يرجى تسجيل الدخول أو بدء فترة تجريبية لعرض هذا المحتوى.

النتائج

أظهر تحليل FRET النسبي لخلاياN2A APP الغنية ب FACS والتي تعبر عن MAM-Tav2A زيادة تعتمد على الجرعة في مستويات Aβ40 بعد علاج الراباميسين8. يعمل الراباميسين عن طريق تثبيط مسار الإشارة المستهدف للثدييات من راباميسين (mTOR)، مما يقلل بدوره من تعبير TREM2 (المستقبل المحفز المعبر عن خلايا الميلويد 2) في الخلايا الدبقية الدقيقة، مما يؤدي إلى تقليل تطهير اللويحات Aβ في نماذج الفئران 5XFAD لمرض الزهايمر11. ...

الوصول مقيد. يرجى تسجيل الدخول أو بدء فترة تجريبية لعرض هذا المحتوى.

المناقشة

تعديل MAMs هو مجال بحثي ناشئ له تداعيات محتملة على اضطرابات مختلفة، بما في ذلك السرطان، والاضطرابات الأيضية، والأمراض التنكسية العصبية13. العديد من العوامل الدوائية، بما في ذلك مضاد الداينين LDC-3/دينرايستين، ودواء مضاد السكري الميتفورمين، والعامل المضاد للسرطان سولفورافان، تعطل MAMs وتخضع حاليا لتجارب ما قبل السريرية والسريرية للسرطان والاضطرابات الأيضية. تقوم هذه العوامل الدوائية بتعديل نقاط اتصال ER-الميتوكوندريا أو عرض تلامس MAM من خلال تنظيم التفاعلات بين برو...

الوصول مقيد. يرجى تسجيل الدخول أو بدء فترة تجريبية لعرض هذا المحتوى.

شكر وتقدير

نشكر بصدق الدكتور رودولف إي. تانزي، أستاذ في مستشفى ماساتشوستس العام (MGH)، على تعليقاته العميقة حول المخطوطة. نشكر الدكتور ماساتو مايساكو، أستاذ مساعد في MGH، على مشاركته خبرته في اختبارات FLIM. نشكر الدكتور جيورجي هاجنوتشكي، أستاذ جامعة توماس جيفرسون في فيلادلفيا، على تزويدنا بسخاء بلازميدات التعبير التي ترمز إلى ER-CFP أو Mito-YFP. وقد دعمت هذه الدراسة صندوق علاج الزهايمر ل RB.

الوصول مقيد. يرجى تسجيل الدخول أو بدء فترة تجريبية لعرض هذا المحتوى.

المواد

قائمة المواد المستخدمة في هذه المقالة
الاسمالشركةرقم فهرسيالتعليقات
BSAFisher Scientific501781532
Confocal microscope Olympus FV3000RS (Tokyo, Japan)N/A
DMEM with GlutaMAX supplementGibco/Thermo Fisher Scientific10564011
EDTA  Life Technologies41116134
Falcon 6 Well Plates VWR International41122107
GAPDH Polyclonal AntibodyThermo Fisher ScientificPA1-988
Gelatin VWR International9000-70-8
Geneticin (G418 Sulfate)Gibco/Thermo Fisher Scientific10131035
GFP monoclonal AntibodyInvitrogenMA5-15256
Graphpad Prism N/APrism 9, version 9.5.0N/A
HeparinSigma-Aldrich H0200000
ImageJ Software ImageJ 1.53aN/A
Inverted confocal microscope Nikon (C2 Eclipse Ti2)N/A
Lipofectamine2000Invitrogen11668027
MS Excel  Microsoft Excel, version 2302N/A
NaCl  Fisher Scientific7647145
NuPAGE 4–12% Bis-Tris gel  InvitrogenNP0321BOX
Penicillin/Streptomycin/Amphotericin B Lonza 17-745E
PhotoshopAdobe Photoshop CC 20.0.10 N/A
Tris-HCL, pH 7.6  Boston BioProducts42000000
Triton X-100  Sigma-AldrichT8787
Trypsin-EDTAGibco/Thermo Fisher Scientific25200056
Tween 20Fisher Scientific501657287

المراجع

  1. Martino Adami, P. V., et al. Perturbed mitochondria-ER contacts in live neurons that model the amyloid pathology of Alzheimer's disease. J Cell Sci. 132 (20), 229906(2019).
  2. Area-Gomez, E., Schon, E. A. On the pathogenesis of Alzheimer's disease: The MAM hypothesis. FASEB J. 31 (3), 864-867 (2017).
  3. Fujimoto, M., Hayashi, T. New insights into the role of mitochondria-associated endoplasmic reticulum membrane. Int Rev Cell Mol Biol. 292, 73-117 (2011).
  4. Prudent, J., et al. MAPL SUMOylation of Drp1 stabilizes an ER/mitochondrial platform required for cell death. Mol Cell. 59 (6), 941-955 (2015).
  5. Carpio, M. A., et al. controls apoptosis by Ca2+ through ER-mitochondrial contact sites. Cell Rep. 34 (10), 108827(2021).
  6. Degechisa, S. T., Dabi, Y. T., Gizaw, S. T. The mitochondrial associated endoplasmic reticulum membranes: A platform for the pathogenesis of inflammation-mediated metabolic diseases. Immun Inflamm Dis. 10 (7), e647-e658 (2022).
  7. Csordás, G., Weaver, D., Hajnóczky, G. Endoplasmic reticulum-mitochondrial contactology: Structure and signaling functions. Trends Cell Biol. 28 (7), 523-540 (2018).
  8. Zellmer, J. C., et al. Stabilization of mitochondria-associated endoplasmic reticulum membranes regulates Aβ generation in a three-dimensional neural model of Alzheimer's disease. Alzheimers Dement. 21 (2), e14417(2024).
  9. Zellmer, J. C., Lomoio, S., Tanzi, R. E., Bhattacharyya, R. Quantitative analysis of mitochondria-associated endoplasmic reticulum membrane (MAM) stabilization in a neural model of Alzheimer's disease (AD). J Vis Exp. (215), e66129(2025).
  10. Bhattacharyya, R., et al. The neuronal-specific isoform of BIN1 regulates beta-secretase cleavage of APP and Abeta generation in a RIN3-dependent manner. Sci Rep. 12 (1), 3486-3500 (2022).
  11. Shi, Q., et al. Microglial mTOR activation upregulates Trem2 and enhances β-amyloid plaque clearance in the 5XFAD Alzheimer's disease model. J Neurosci. 42 (27), 5294-5313 (2022).
  12. Wilmington, S. R., Matouschek, A. An inducible system for rapid degradation of specific cellular proteins using proteasome adaptors. PLoS One. 11 (4), e0152679(2016).
  13. Magalhaes Rebelo, A. P., et al. Chemical modulation of mitochondria-endoplasmic reticulum contact sites. Cells. 9 (7), 1637-1655 (2020).
  14. De Vos, K. J., et al. VAPB interacts with the mitochondrial protein PTPIP51 to regulate calcium homeostasis. Hum Mol Genet. 21 (6), 1299-1311 (2012).
  15. Yang, M., et al. Mitochondria-associated ER membranes: The origin site of autophagy. Front Cell Dev Biol. 8, 595(2020).
  16. Filadi, R., et al. Mitofusin 2 ablation increases endoplasmic reticulum-mitochondria coupling. Proc Natl Acad Sci U S A. 112 (17), E2174-E2181 (2015).
  17. Filadi, R., et al. On the role of Mitofusin 2 in endoplasmic reticulum-mitochondria tethering. Proc Natl Acad Sci U S A. 114 (12), E2266-E2267 (2017).
  18. Xie, Q., et al. ABT737 reverses cisplatin resistance by regulating ER-mitochondria Ca2+ transduction in human ovarian cancer cells. Int J Oncol. 49 (6), 2507-2519 (2016).
  19. Tsunoda, T., et al. Inositol 1,4,5-trisphosphate receptor type 1 modulates the acquisition of cisplatin resistance in bladder cancer cell lines. Oncogene. 24 (8), 1396-1402 (2005).
  20. Tubbs, E., et al. Sulforaphane improves disrupted ER-mitochondria interactions and suppresses exaggerated hepatic glucose production. Mol Cell Endocrinol. 461, 205-214 (2018).
  21. Bhattacharyya, R., et al. Axonal generation of amyloid-beta from palmitoylated APP in mitochondria-associated endoplasmic reticulum membranes. Cell Rep. 35 (7), 109134(2021).
  22. Alhazmi, H. A., Albratty, M. An update on the novel and approved drugs for Alzheimer disease. Saudi Pharm J. 30 (12), 1755-1764 (2022).
  23. Rountree, S. D., et al. Effectiveness of antidementia drugs in delaying Alzheimer's disease progression. Alzheimers Dement. 9 (3), 338-345 (2013).
  24. Hadwen, J., et al. Transcriptomic RNAseq drug screen in cerebrocortical cultures: Toward novel neurogenetic disease therapies. Hum Mol Genet. 27 (18), 3206-3217 (2018).
  25. Ray, B., et al. Rivastigmine modifies the α-secretase pathway and potentially early Alzheimer's disease. Transl Psychiatry. 10 (1), 47(2020).
  26. Bailey, J. A., Ray, B., Greig, N. H., Lahiri, D. K. Rivastigmine lowers Aβ and increases sAPPα levels, which parallel elevated synaptic markers and metabolic activity in degenerating primary rat neurons. PLoS One. 6 (7), e21954(2011).
  27. Ziegler, D. V., Martin, N., Bernard, D. Cellular senescence links mitochondria-ER contacts and aging. Commun Biol. 4 (1), 1323(2021).
  28. Neikirk, K., et al. Call to action to properly utilize electron microscopy to measure organelles to monitor disease. Eur J Cell Biol. 102 (4), 151365(2023).
  29. Liu, X., et al. Mitochondrial 'kiss-and-run': Interplay between mitochondrial motility and fusion-fission dynamics. EMBO J. 28 (20), 3074-3089 (2009).
  30. Szymanski, J., et al. Interaction of mitochondria with the endoplasmic reticulum and plasma membrane in calcium homeostasis, lipid trafficking and mitochondrial structure. Int J Mol Sci. 18 (7), ijms18071576(2017).
  31. Tikhomirova, M. S., et al. A role for endoplasmic reticulum dynamics in the cellular distribution of microtubules. Proc Natl Acad Sci U S A. 119 (15), e2104309119(2022).
  32. Stacchiotti, A., et al. Perspective: Mitochondria-ER contacts in metabolic cellular stress assessed by microscopy. Cells. 8 (1), 8010005(2018).
  33. Cieri, D., et al. SPLICS: A split green fluorescent protein-based contact site sensor for narrow and wide heterotypic organelle juxtaposition. Cell Death Differ. 25 (6), 1131-1145 (2018).
  34. Giacomello, M., Pellegrini, L. The coming of age of the mitochondria-ER contact: A matter of thickness. Cell Death Differ. 23 (9), 1417-1427 (2016).
  35. Dai, J., et al. Impaired axonal transport of cortical neurons in Alzheimer's disease is associated with neuropathological changes. Brain Res. 948 (1), 138-144 (2002).
  36. Trimmer, P. A., Borland, M. K. Differentiated Alzheimer's disease transmitochondrial cybrid cell lines exhibit reduced organelle movement. Antioxid Redox Signal. 7 (9-10), 1101-1109 (2005).
  37. Quinti, L., et al. Neurotherapeutics in the Era of Translational. Smith, R. A., Kaspar, B. K., Svendsen, C. N. , Academic Press. 311-331 (2021).

الوصول مقيد. يرجى تسجيل الدخول أو بدء فترة تجريبية لعرض هذا المحتوى.

إعادة الطباعة والأذونات

الوسوم

علم الأحياءالعدد 234العدد 234هذا الشهر في JoVEالعدد

تم نشر هذه المقالة

الفيديو قريباً

تواصل معنا
أوصِ به للمكتبة

الخصوصية

شروط الاستخدام

السياسات

حقوق الطبع والنشر © 2026 MyJoVE Corporation. جميع الحقوق محفوظة.