تقدم هذه الدراسة منهجية لتوصيل العلاجات إلى شبكية العين والأعصاب البصرية للفئران البالغة. بالإضافة إلى ذلك ، يتم تقديم طريقة فريدة لاسترجاع الأنسجة لمجموعة من أعلى إلى أسفل من العصب البصري وشبكية العين في الفئران البالغة.
يتطلب اشتراك JoVE لعرض هذا المحتوى. تسجيل الدخول أو ابدأ نسخة تجريبية مجانية
مقالة منهجية
التوصيل العلاجي للعين واسترجاع الأنسجة المتقدم في الفئران البالغة
في هذه المقالة
ملخص
الملخص
إن التوصيل العلاجي إلى الجزء الخلفي من العين ، بما في ذلك شبكية العين والعصب البصري ، معقد بسبب وجود حواجز دموية في الدماغ والدم والشبكية. تستخدم نماذج الصغيرة ، مثل الفئران ، لدراسة أمراض العين المختلفة. في حين أن التوصيل العلاجي للعين الخلفية يمثل تحديا ، إلا أن تحقيقه ضروري لعلاج اضطرابات العين ، والتي يتطلب الكثير منها التحقق من الصحة في نماذج الصغيرة من أجل الأهمية الانتقالية. لذلك ، يتم تقديم تقنيتين للتوصيل العلاجي الخلفي: الحقن داخل الجسم الزجاجي (IVI) والحقن خلف البصيلة (RBI) للاستخدام في الفئران البالغة. بالإضافة إلى ذلك ، يتم تقديم طريقة لإزالة الكتلة المختلطة للعيون والأعصاب البصرية لمختلف تقنيات التحليل النسيجي والجزيئي. يتيح بروتوكول التشريح المراقبة الكاملة للنظام العصبي البصري مع تقليل إصابة ما بعد الوفاة لأنسجة الشبكية والعصب البصري. تم تحقيق التوصيل الناجح للسيكلوسبورين العلاجي إلى شبكية العين والعصب البصري ، مع ملاحظة تركيزات يمكن اكتشافها بعد أربع وعشرين ساعة من الحقن باستخدام كل من IVI و RBI. علاوة على ذلك ، تم استخراج عينات الشبكية والأعصاب بنجاح لتحليل الأنسجة النسيجية للعين بالكامل ، مما يسهل المراقبة الشاملة لشبكية العين والنظام العصبي البصري الأوسع.
المقدمة
يعد توصيل العلاجات إلى شبكية العين والعصب البصري أمرا صعبا للغاية بسبب التشريح المعقد للعين1،2 ، وتحديدا وجود حاجز الدم والشبكية (BRB) 3،4،5. يعمل BRB على حماية شبكية العين من غزو الدورة الدموية الجهازية ، ولكنه يمثل معارضا صعبا للإدارة العلاجية حيث غالبا ما يتم حظر الدورة العلاجية الجهازية بواسطة BRB6،7. يمكن أن تنتشر الجزيئات الصغيرة المحبة للدهون بسهولة من خلال BRB ، لكن الجزيئات الأكبر والمحبة للماء تواجه صعوبة في الوصول إ....
الوصول مقيد. يرجى تسجيل الدخول أو بدء فترة تجريبية لعرض هذا المحتوى.
البروتوكول
أجريت جميع التجارب وفقا لبيان ARVO لاستخدام في أبحاث طب العيون والبصرية وتمت الموافقة عليها من قبل اللجنة المؤسسية لرعاية واستخدامها في جامعة ولاية أوهايو. ذكور Sprague Dawley الفئران التي تزن ~ 200 غرام وحوالي شهرين من العمر تم استخدامها لهذه الدراسة25. تفاصيل الكواشف والمعدات المستخدمة مدرجة في جدول المواد.
1. الحقن داخل الجسم الزجاجي (IVI)
- قم بتوصيل الأيزوفلوران ويؤدي النفايات إلى منافذ تثبيت SALOOT. تخدير باستخدام إجراءات الأيزوفلوران القياسية باتباع بيان ARVO لاستخدام في أبحاث العيون والبصر وبروتوكول IACUC المعتمد.
ملاحظة: بدلا من....
الوصول مقيد. يرجى تسجيل الدخول أو بدء فترة تجريبية لعرض هذا المحتوى.
النتائج
تم إجراء تجارب تجريبية أولية على الجثث باستخدام صبغة الحقن (صبغة إيفانز الزرقاء) وحبر الوشم (الشكل 2 ب) لتحسين وضع وحجم الإبرة لكل من RBI و IVI. كان حبر الوشم غير مخفف ، ثم تم خلط مسحوق إيفانز الأزرق في PBS حتى أصبح السائل معتما. خلصنا إلى أن RBI المثالي يتميز بإبرة 28 جيجا تم إدخالها بزاوية في منتصف الطريق بين الساعة 6 و 7 على طول الحافة المدارية السفلية حتى يتم الشعور بالجزء الخلفي من تجويف العين. أدى هذا إلى توصيل الأصباغ إلى الجزء الخلفي من المدار ، بالقرب من العصب ، دون ثقب العصب البصري.......
الوصول مقيد. يرجى تسجيل الدخول أو بدء فترة تجريبية لعرض هذا المحتوى.
المناقشة
تؤكد التحديات المعقدة المرتبطة بتوصيل العلاجات إلى شبكية العين والعصب البصري ، ويرجع ذلك أساسا إلى الحاجز غير المنفذ الذي يفرضه BRB ، على أهمية هذه الدراسة3،4. لا يسلط استكشاف تقنيات IVI و RBI الضوء على الأساليب المبتكرة للتغلب على هذه العقبات فحسب ، بل يؤكد أيضا على الآثار الأوسع نطاقا على رعاية العين والتطوير العلاجي. توضح هذه النتائج أن كلا من IVI و RBI يمكن أن يسهلا التوصيل المستهدف للعلاجات مباشرة إلى أنسجة العين المصابة. هذ.......
الوصول مقيد. يرجى تسجيل الدخول أو بدء فترة تجريبية لعرض هذا المحتوى.
الإفصاحات
ويعلن المؤلفون أن البحث أجري في غياب أي علاقات تجارية أو مالية يمكن تفسيرها على أنها تضارب محتمل في المصالح.
شكر وتقدير
تم تمويل هذا العمل جزئيا من قبل جوائز برنامج أبحاث الرؤية التابع لوزارة الدفاع الأمريكية W81XWH-15-1-0074 و W81XWH-22-1-0989. الآراء أو التأكيدات الواردة هنا هي آراء خاصة لأصحاب البلاغ ولا ينبغي تفسيرها على أنها رسمية أو تعكس وجهات نظر وزارة الجيش أو وزارة الدفاع. تم دعم هذه المنحة البحثية جزئيا من قبل شركة أوهايو التابعة لجائزة زمالة الطالب الباحث الشاب لمنع العمى للباحثات الإناث في أبحاث الرؤية. نحن ممتنون للدعم المقدم من مؤسسة روس. تم تقديم الخدمات في البرنامج الأساسي لأبحاث علوم الرؤية في جامعة ولاية أوهايو تحت P30EY032857. نود أن نشكر مختبر جامعة ولاية أوهايو والموارد الحيوانية (ULAR). بالإضافة إلى ذلك ، نود أن نشكر أعضاء مختبر ر....
الوصول مقيد. يرجى تسجيل الدخول أو بدء فترة تجريبية لعرض هذا المحتوى.
المواد
| الاسم | الشركة | رقم فهرسي | التعليقات |
|---|---|---|---|
| أناكينرا 100 مجم / 0.67 مل ؛ | Sobi | NDC: 66658-0234-07 | |
| أنتيبامزول هيدروكلوريد (أنتيسيدان) 5.0 مجم / مل | Zoetis | NADA # 141-033 | 107204-8 | |
| كلوريد الصوديوم المضاد للجراثيم (0.9٪) | Hospira Inc. | NDC: 0409-1966-02 | |
| Cryotube | VWR | 76417-258 | ؛ https://us.vwr.com/store/product?keyword=76417-258 |
| ملقط منحني | فيشر العلمي | 08-953F | |
| حقن السيكلوسبورين 250 مجم / مل ؛ | Perrigo | NDC: 00574-0866-10 | |
| السيكلوسبورين الموضعي ، 0.05٪ (Restasis) ؛ | AbbVie (Vizient) | NDC: 00023-9163-30 | |
| Cyotube Cap | Thermo Scientific | 3471BLK | https://www.fishersci.com/shop/products/screw-cap-microcentrifuge-tube-caps/14755237?searchHijack=true&searchTerm = غطاء لولبي - طرد مركزي دقيق - أغطية أنبوب & searchType=Rapid& متطابقةCatNo = 14755237 |
| Evans Blue | سيجما ألدريتش | E2129-10G | |
| سبيرز العين | فيشر العلمية | NC0972725 | https://www.fishersci.com/shop/products/ultracell-pva-eye-spears-100-p/NC0972725 |
| ملقط ناعم | فيشر العلمي | 08-953E | https://www.fishersci.com/shop/products/fisherbrand-dissecting-jewelers-microforceps-2/08953E?gclid=Cj0KCQiAkJO8BhCGARIsAM kswyiER9Kanmi3ZMgoXTr82Zg3 g44m1Q6WLftkYfb36hC7pbkwR hVAy3MaAqkLEALw_wcB& ef_id =Cj0KCQiAkJO8BhCGARIsAMks wyiER9Kanmi3ZMgoXTr82Zg3g4 4m1Q6WLftkYfb36hC7pbkwRhV Ay3MaAqkLEALw_wcB:G:s& PPC _id = PLA_goog_2086145680_81 843405274_08953E__38624700 1354_6556597232892883360& ev_chn = متجر & s_kwcid=AL!4428 !3!386247001354!!! g!827721591 040!& gad_source = 1 |
| ملقط عيون ناعم مع الأسنان ; | فيشر ساينتفيك | 50-253-8287 | https://www.fishersci.com/shop/products/bonn-suturing-forceps-7-5-cm/502538287 |
| ملعقة مسطحة | فيشر العلمي | 14-375-100 | https://www.fishersci.com/shop/products/fisherbrand-spoonula-lab-spoon/1437510#?keyword = |
| معقم حبة ساخنة ؛ | أدوات العلوم | الدقيقة 18000-45 | https://www.finescience.com/en-US/Products/Instrument-Care-Accessories/Sterilization/Hot-Bead-Sterilizers |
| هيبروميلوز 0.3٪ (GenTeal Tears Severe Dry Eye Gel) | مختبرات الكون. | https://www.amazon.com/GenTeal-Tears-Lubricant-Ointment-Night-Time/dp/B01IN5G1L0/ref=sr_1_4?dib=eyJ2IjoiMSJ9.DxYpqjIIBNO TVuPo7jln5xeGazA_YFg0cbt3 kCyC-0ouZARw5qIHYvCM7vB R_vO30OWUEXDZhQmQfLQ9 ySld4mujpzrWjxbsEXLBs5JPhjZ eUPgPY0sHoJA46f9EYULdxiTu BQy5fVA2OB20RV09mbdW8hX 6j8-bXIYTZljPGMo5_GMq9jnJo8< br/> 3iR35c1THxEiEH2FsvSx7VXup- QK9uCkWwAYrw2v3tyLUCq2JT APPF34nsYqGnSASMgOARU_ 2lVz-kIy-QUEYHGOoIimIWwBY htz33RkFrq7YjtnC2uDbImNiudG zWJv-uUhmJngYjbBGbeWE0VX 7CGPkEokUZrCQ8AI2HeXjSMph gPhMbK88RcHJ63AyH0TiBtS2k1 Xceh-CD26_prJSNxF6Mv5-jgGf9 iLmXvVtKkkSwc-5uYLk7gZHaFC Yj73F_imbmeHYr.4vfu7h4m4Jlfy- qiqmgeAnDHlJTGYV22HJ2w_xD ir0k& dib_tag=se& الكلمات الرئيسية = Gent eal + gel & amp QID = 1736793609 & SR=8-4 | |
| iBudilast | Millipore Sigma | I0157-10MG | |
| حقنة الأنسولين 0.5 مل مع 28 قياس Micro-Fine IV إبرة | Becton, Dickinson and Company (BD) | 14-826-79 | |
| Isoflurane | Covetrus | NDC: 11695-6777-2 | |
| Ketamine | Covetrus | NDC: 11695-0703-1 | |
| Long Evans Rat | Charles River Laboratories International، Inc. | https://www.criver.com/products-services/find-model/long-evans-rat?region=3611 | |
| Mayo Scissors | علوم المجهر الإلكتروني | 72968-03 | |
| مقص دقيق متوسط | Amazon | https://www.sigmaaldrich.com/US/en/product/aldrich/z168866#product-documentation | |
| مرقئ مستقيم متوسط أو برامج تشغيل إبرة | إبرة سيجما ألدريتش | Z168866-1EA | https://www.sigmaaldrich.com/US/en/product/aldrich/z168866#product-documentation |
| 33 جم بطرف نمط 4 بطول 10 مم وزاوية 15 درجة ؛ | هاميلتون | 7803-05 | |
| بارافورمالدهيد 4 في محلول ملحي مخزن بالفوسفات (PBS) (4٪ PFA) | ثيرمو فيشر | J61899. طبق AK | |
| Petri | Millipore Sigma | P5606-400EA | https://www.sigmaaldrich.com/US/en/product/sigma/p5606?utm_source=google&utm_medium = cpc & utm_campaign=8674694095 & utm_content=105162454052& gad_source = 1 & gclid=Cj0KCQiA kJO8BhCGARIsAMkswygXXfgY ABr7EfLtf4tvuLS0E8A4SxX4XM NJQDaI80Yi4FO-iahCsPcaAp9E EALw_wcB |
| ملحي مخزن بالفوسفات (PBS) | سيجما-ألدريتش | P3813-10PAK | https://www.sigmaaldrich.com/US/en/product/sigma/p3813 |
| بوفيدون-اليود (بيتادين) 5٪ | مختبرات الكون. | NDC: 0065-0411-30 | |
| شاكر موديل 3500 | VWR | 89032-092 | |
| مقص قزحية صغير | سيجما ألدريتش | Z265977-1EA | https://www.sigmaaldrich.com/US/en/product/aldrich/z265977& ؛ |
| مقص صغير ؛ | فيشر ساينتفيك | 17-456-004 | https://www.fishersci.com/shop/products/self-opening-scissors-2/17456004?keyword=true |
| سبراج داولي جرذ | تشارلز ريفر كومبرتبرز إنترناشيونال | SAS 400 | https://emodels.criver.com/product/400 |
| السكروز | حقنة Millipore Sigma | 57-50-1 | https://www.sigmaaldrich.com/US/en/substance/sucrose3423057501 |
| 10 & micro ؛ L (موديل 701 RN) حبر | الوشم هاميلتون | 80330 | |
| (حبر الوشم Intenze أسود حقيقي 1 أونصة) حمض | الأمازون | https://www.amazon.com/Intenze-Tattoo-Ink-True-Black/dp/B01GW747L2 | |
| tauroursodeoxycholic (TUDCA) ؛ | Milipore Sigma | 580549-1GM | |
| العيون رباعي هيدروكلوريد التتراكايين 0.5٪ | Bausch & amp شركة Lomb Inc. | NDC: 68682-920-64 | |
| زيلازين (رومبون) 100 مجم / مل | Dechra | NADA # 047-956 | |
المراجع
- Nguyen, D. D., Lai, J. -Y. Advancing the stimuli response of polymer-based drug delivery systems for ocular disease treatment. Polym Chem. 11 (44), 6988-7008 (2020).
- Tsai, C. -H., et al. Ocular drug delivery: Role of de....
الوصول مقيد. يرجى تسجيل الدخول أو بدء فترة تجريبية لعرض هذا المحتوى.
إعادة الطباعة والأذونات
