يتطلب اشتراك JoVE لعرض هذا المحتوى. تسجيل الدخول أو ابدأ نسخة تجريبية مجانية

مقالة منهجية

الوقاية من Allodynia وفرط الألم بواسطة الكانابيديول في نموذج الفئران للاعتلال العصبي المحيطي الناجم عن العلاج الكيميائي

856 مشاهدة

⸱

DOI:

10.3791/68079

⸱

يونيو 20, 2025

 ,  ,  ,  , 
1Center for Substance Abuse Research, Department of Neural Sciences, Temple University, 2Department of Psychology, Program in Neuroscience Temple University

في هذه المقالة

ملخص

يمنع الإعطاء المشترك لاتفاقية التنوع البيولوجي مع باكليتاكسيل تطور الاعتلال العصبي المحيطي الناجم عن العلاج الكيميائي في الفئران. يصف هذا البروتوكول التعامل مع القنب ، وإحداث نمط ظاهري في الفئران عن طريق إعطاء العلاج الكيميائي ، وتقييم allodynia الميكانيكية والحرارية ، واستخدام تصوير الفيديو عالي السرعة للتمييز بين allodynia وفرط الألم.

الملخص

توضح هذه الدراسة فائدة نموذج الفئران للاعتلال العصبي المحيطي الناجم عن العلاج الكيميائي (CIPN) لتقييم قدرة الكانابينويد غير ذو التأثير النفساني (CBD) على تعديل تطور هذه المتلازمة في الجسم الحي. تستخدم الطريقة عامل العلاج الكيميائي باكليتاكسيل لتوليد نمط ظاهري في. توضح هذه الدراسة كيفية التعامل مع اتفاقية التنوع البيولوجي وإذابتها ، وإدارة عامل العلاج الكيميائي ، وتقييم الحساسية الميكانيكية والباردة ، وتطبيق تصوير فيديو عالي السرعة لقياس السلوك المؤلم في. باستخدام الإجراءات الموضحة ، تدعم البيانات أن اتفاقية التنوع البيولوجي تمنع النمط الظاهري الميلاني من التطور في المعالجة. لم يلاحظ أي اختلاف في المعالجة باتفاقية التنوع البيولوجي من اليوم 0 (خط الأساس قبل باكليتاكسيل) إلى اليوم 7 (ما بعد التحسس) في الحساسية الميكانيكية أو الحرارية ، بينما أصبحت المعالجة بالمركبات أكثر حساسية بشكل ملحوظ. هذه الاستجابة للعلاج دائمة حتى آخر نقطة زمنية حيث تم جمع البيانات (7 أسابيع). تسمح إضافة تصوير الفيديو عالي السرعة بتقييم أكثر دقة وغير متحيز لهذا النمط الظاهري السلوكي (على سبيل المثال ، تصنيف التسكين ومضاد التأمين). يوضح هذا فائدة هذا النموذج لتوصيف عقارات القنب والدور المحتمل لاتفاقية التنوع البيولوجي في التخفيف من آلام الأعصاب.

المقدمة

الاعتلال العصبي المحيطي الناجم عن العلاج الكيميائي (CIPN) هو نوع من الاعتلال العصبي الحسي. إنه أحد الآثار الجانبية الشائعة للعلاج الكيميائي وهو منتشر بشكل خاص مع التاكسان والأدوية القائمة على البلاتين1،2. تشمل بعض أعراض CIPN الألم المزمن والخدر والوخز والحساسية الشديدة للمس ودرجة الحرارة1،2. لا تتداخل هذه الأعراض المؤلمة مع الحياة اليومية للمريض فحسب ، بل تتداخل أيضا مع علاج السرطان. يسعى بعض مرضى السرطان إلى تقليل الجرعة أو الإنهاء الكامل للعلاج الكيميائي ليتمكنوا من إدارة الانخفاض في نوعية الحياة المرتبط بهذه المتلازمة3. حاليا ، العلاجات الشائعة المستخدمة سريريا ل CIPN غير فعالة بشكل كامل في تخفيف الأعراض وتشمل المواد الأفيونية ، والتي تشكل احتمالية كبيرة لإساءةالاستخدام 4. لا يوجد علاج ل CIPN حتى الآن ، لذلك ، فإن إيجاد بديل آمن وفعال أمر ضروري5،6.

لقد ثبت سابقا أن الكانابيديول (CBD) له فعالية في منع تطور CIPN كما هو موضح في الفئران7،8. يوضح هذا مسارا واعدا لتجنب الأعراض التماثلية طويلة المدى المحتملة ل CIPN للمرضى دون الحاجة إلى الراحة عن طريق الأدوية الفعالة بشكل ملتبس أو المواد الأفيونية التي يحتمل أن تكون ضارة. يعاني غالبية الأشخاص الذين يستخدمون اتفاقية التنوع البيولوجي ، خاصة للأغراض العلاجية مثل إدارة النوبات ، من آثار جانبية خفيفة ، والدواء جيد التحمل بشكل عام9. تعتمد معظم الآثار السلبية على الجرعة وغالبا ما تتحسن مع ضبط الجسم.

في هذا النموذج المستخدم على نطاق واسع من CIPN10 ، يتم إعطاء الفئران باكليتاكسيل للحث على الاعتلال العصبي ، والذي يلخص النمط الظاهري اللوديني الذي لوحظ في بعض المرضى بعد تدخل العلاج الكيميائي ، كما وردسابقا 11. الهدف من هذا الحث هو الحصول على منصة ذات صلة انتقالية لتقييم هذا النوع من الاعتلال العصبي الحسي في الجسم الحي ، وهو مناسب للباحثين الذين يبحثون في آليات أو تدخلات لهذه المتلازمة. يتم قياس الحساسية الميكانيكية باستخدام اختبار فون فراي ، وتستخدم تحديات درجة الحرارة الباردة لقياس الحساسية الحرارية10،11. يسمح هذا بتحديد الإمكانات الوقائية لاتفاقية التنوع البيولوجي في التخفيف من CIPN في أهم نقطتي نهاية لجودة الحياة من الناحية السريرية للمرضى. وشمل التقييم الإضافي تحليلا عالي السرعة بمساعدة التصوير بالفيديو للسلوكيات المؤلمة12،13. يسمح هذا التحليل الموسع للاستجابات السلوكية للمنبهات غير الضارة والضارة بالتمييز بين التأثيرات التمهيدية ومفرطة الألم لإدارة العلاج الكيميائي ، بالإضافة إلى قدرة اتفاقية التنوع البيولوجي على تعديل هذه التأثيرات.

يصف هذا البروتوكول كيفية تحفيز النمط الظاهري ل CIPN ، وتقييم وتحديد فرط الحساسية الميكانيكية والحرارية في الفئران ، وتطبيق التصوير بالفيديو لتقييم غير متحيز وأكثر دقة للألودينيا وفرط الألم.

الوصول مقيد. يرجى تسجيل الدخول أو بدء فترة تجريبية لعرض هذا المحتوى.

البروتوكول

تمت الموافقة على هذا البروتوكول ويتبع إرشادات لجنة رعاية واستخدامه بجامعة تمبل بموجب بروتوكولات معتمدة للأبحاث على. تم استخدام ذكور فئران Sprague-Dawley البالغة (250-300 جم) في هذه الدراسة. التفاصيل المتعلقة بالكواشف والمعدات المستخدمة مدرجة في جدول المواد.

1. تحضير القنب وعوامل العلاج الكيميائي لتحريض CIPN

ملاحظة: يوضح الشكل 1 عملية إذابة الكانابيديول.

  1. قم بتجميع المواد التالية لإذابة اتفاقية التنوع البيولوجي وتخفيف باكليتاكسيل.
    1. 100٪ إيثانول (EtOH) ، Chremophor (زيت الخروع Ethoxylated) ، محلول ملحي عادي ، قوارير زجاجية كهرمانية (x2) ، أنبوب مخروطي 50 مل (x2) ، مخزون مسحوق CBD ، مخزون سريري باكليتاكسيل (6 مجم / مل).
  2. أضف حجما مناسبا من EtOH إلى كل أنبوب مخروطي سعة 50 مل لتحضير مذيب نهائي 1: 1:18 EtOH: زيت الخروع الميثوكسيل: محلول ملحي عادي.
  3. قم بتجميع الكمية المناسبة من اتفاقية التنوع البيولوجي لإنشاء تركيز 5 مجم / كجم لعدد المراد اختبارها.
  4. قم بإذابة اتفاقية التنوع البيولوجي في EtOH في أحد الأنبوبين المخروطيين المحضرين سعة 50 مل.
  5. خليط Vortex CBD-EtOH بسرعة عالية حتى يذوب CBD تماما.
  6. أضف حجما مكافئا من زيت الخروع المغطى بالإيثوكسيلات إلى كل أنبوب مخروطي سعة 50 مل.
  7. دوامة كل أنبوب بسرعة عالية حتى يصبح زيت الخروع المليء بالإيثوكسيلات في محلول مع EtOH.
  8. أضف حجما مناسبا من المحلول الملحي العادي لكل أنبوب مخروطي سعة 50 مل للحصول على نسبة نهائية تبلغ 1: 1: 18.
  9. دوامة حتى يصبح المحلول الملحي.
  10. انقل محلول التحكم في السيارة ومحلول CBD إلى قوارير زجاجية كهرمانية.
  11. يخفف محلول باكليتاكسيل 1: 6 في محلول ملحي عادي ليصل التركيز النهائي إلى 1 مجم / مل في قوارير كهرمانية بالحجم المناسب لعدد المراد اختبارها.
  12. أغلق القوارير الكهرمانية بأغطية قارورة مطاطية من الألومنيوم.
    ملاحظة: إذا تم تحضيرها قبل بدء التجربة ، فيمكن تخزين قوارير السيارة والمركبة + اتفاقية التنوع البيولوجي والباكليتاكسيل عند 4-8 درجات مئوية لمدة تصل إلى 7 أيام. اترك القوارير المبردة تتوازن مع درجة حرارة الغرفة قبل الحقن. لاحظ أيضا أنه من المهم للغاية تخزين كواشف القنب المحضرة في الزجاج ، إن لم يكن للاستخدام الفوري ، لمنع الالتصاق بالوعاء أو الترسيب خارج المحلول.

2. إحداث النمط الظاهري في الفئران

  1. قم بتجميع المواد اللازمة لحقن باكليتاكسيل كما هو مذكور أدناه:
    1. محضر 1 مجم / مل محلول مخزون باكليتاكسيل ، 1 مل محاقن يمكن التخلص منها (x n جرذان) ، 25 جم إبر حقنة (x n جرذان) ، حاوية نفايات حادة للعلاج الكيميائي ، ومقياس لجمع أوزان.
  2. قم بترقيم الفئران أو وضع علامة عليها بمعرفات فريدة.
    ملاحظة: يجب أن تكون قد تأقلمت مع مساكنها لمدة أسبوع واحد على الأقل قبل بدء التجربة.
  3. اجمع أوزان كل.
  4. تحضير المحاقن بالحجم المناسب من باكليتاكسيل (جميع) والمركبة أو اتفاقية التنوع البيولوجي (حسب مجموعة العلاج). في هذه الحالة ، يتوافق حجم الحقن مع 1 ميكرولتر / غرام من وزن.
  5. حقن باكليتاكسيل ومركبة أو باكليتاكسيل واتفاقية التنوع البيولوجي بين الصفاق.
    1. لكبح جماح الجرذ للحقن ، أمسك الجرذ غير المهيمن من الخلف ، مع مقابلة السبابة للإبهام حول الرقبة والإصبع الأوسط مع الإبهام تحت الكتف ، باستخدام أصابع الخاتم والخنصر للإمساك بالجسم.
    2. ثبت أرجل الفئران الخلفية على الجسم.
    3. توخي الحذر حتى لا تمارس مستوى غير مريح من الضغط على لتجنب الإصابة.
      ملاحظة: هناك دائما خطر العض أو الخدش عند التعامل مع الفئران. للتخفيف من هذا الخطر ، قد يرتدي المجرب معدات الوقاية الشخصية الإضافية على شكل قفازات مقاومة للعض.
    4. أثناء تقييده وتثبيته يدويا ، قم بإمالة بحيث يمكن الوصول إلى بطنه بسهولة من قبل المحقنة.
    5. حقن 1 مجم / مل باكليتاكسيل في الربع الأيمن السفلي من وتخلص من المحقنة في حاوية نفايات العلاج الكيميائي.
    6. قم بحقن السيارة أو اتفاقية التنوع البيولوجي بوزن 1 ميكرولتر / جم في الربع الأيسر السفلي من وتخلص من المحقنة في حاوية الأدوات الحادة العادية.
      ملاحظة: يؤدي تبديل مواقع الحقن إلى تخفيف ضائقة والتهيج المحتمل لموقع الحقن.
    7. هذا يمثل اليوم التجريبي 1. كرر هذه العملية في الأيام 2-4 للحث على النمط الظاهري الخاص. اتبع بروتوكولات المناولة المؤسسية للأقفاص الملوثة بالعلاج الكيميائي خلال هذا الوقت.
    8. خذ قياسات ألودينيا الميكانيكية والحرارية الأساسية في اليوم 0 ، كما هو موضح في الخطوة 3. قم بتضمين محفزات إضافية في توليد خط الأساس كما هو موضح في الخطوة 4. سيكون تحليل قيم اليوم 0 لهذه المحفزات ضروريا لتوليد درجات الألم.
    9. كرر الخطوة 2.5.8 حتى تظهر خط أساس مستقر وقابل للتكرار لتجنب عدم التجانس في الاستجابة الناجم عن عدم كفاية المناولة
      ملاحظة: لا تقاطع عملية إحداث النمط الظاهري الخاص. إذا كان المجرب غير قادر على إجراء الحقن في 4 أيام متتالية ، يمكن أن تحقق جداول الجرعات البديلة تحريضا مماثلا للنمط الظاهري. من الممكن أيضا وربما يوصى بالجمع بين حقن باكليتاكسيل والمركبة أو اتفاقية التنوع البيولوجي في حقنة واحدة بدلا من 2 عن طريق ضبط حجم السيارة الأولية أو محلول اتفاقية التنوع البيولوجي بشكل مناسب لاستيعاب تخفيف باكليتاكسيل في هذه الخلائط مع الحفاظ على تركيز نهائي 5 مجم / مل من اتفاقية التنوع البيولوجي و 1 مجم / مل من تركيز باكليتاكسل. توخي الحذر المناسب أثناء التعامل مع الأدوات الحادة للعلاج الكيميائي لتجنب التعرض العرضي للمجرب.

3. تقييم الحساسية الميكانيكية والحرارية بعد التحسس

ملاحظة: يوضح الشكل 2 الجهاز التخطيطي المستخدم في هذه الدراسة.

  1. قم بتجميع المواد التالية لمقايسات الحساسية الميكانيكية والباردة:
    1. خيوط فون فراي (4-100 جم) ، ثلج جاف ، أنبوب مخروطي 15 مل ، غرف عزل ، شبكة أرضية سلكية ، لوح زجاجي 1/4 بوصة ، وساعة توقيت.
  2. ابدأ التقييم في اليوم التجريبي 7 (على سبيل المثال ، بعد 3 أيام من الحقن النهائي للعلاج الكيميائي / حالة العلاج).
  3. قم بتجميع غرف فون فراي والعزل الحراري.
    1. ضع غرف العزل للحساسية الميكانيكية (6 غرف مفصولة بأقسام بلاستيكية) على شبكة أرضية سلكية على ارتفاع 20 سم فوق سطح الطاولة.
    2. ضع غرف العزل لاختبار الحساسية الحرارية (غرفة واحدة) على سطح زجاجي 1/4 بوصة 20 سم فوق سطح الطاولة.
  4. ضع بشكل فردي في غرف عزل للألودينيا الميكانيكية.
  5. السماح بالتأقلم مع غرف العزل لمدة 15 دقيقة قبل بدء الاختبار.
  6. إجراء اختبار فون فراي اليدوي للحساسية الميكانيكية. تصف هذه الطريقة اختبار فون فراي اليدوي ، ولكن يمكن استبدال اختبار فون فراي الإلكتروني بالاختبار اليدوي14.
    1. ابدأ بالفتيل المقابل لأدنى جرام من القوة (على سبيل المثال ، 4 جم) واضغط على السطح الأخمصي الأوسط للمخلب الخلفي الأيمن بحيث يتم تثبيت الفتيل على شكل حرف C لمدة 6 ثوان.
      ملاحظة: أبلغ الباحثون عن اختلاف بسيط بين الكفوف الخلفية اليمنى واليسرى ، ولكن يجب أن يكون المجربون متسقين بين). كرر 5 تجارب لكل محفز.
    2. كرر لكل ليتم اختباره.
    3. ارفع حجم الفتيل بالتتابع وكرر الخطوات 3.5.1-3.5.2 حتى يتم ملاحظة استجابة للألم (على سبيل المثال ، سحب المخلب) في 2 على الأقل من 5 تجارب.
    4. سجل خيوط غرام القوة التي أثارت استجابة المخلب المرصودة.
    5. أعد اختبار الفتيل السفلي التالي لمعرفة ما إذا كان قد لوحظ انسحاب المخلب. إذا لم يتم ملاحظة أي استجابة ، فإن الجرام المسجل للقوة يكون نهائيا.
    6. إذا استجاب في هذه الخطوة ، فقم بتسجيل خيوط جديدة من القوة وأعد اختبار الفتيل السفلي التالي. كرر حتى لا تثير الخيوط السفلية استجابة. يتم عرض البيانات التمثيلية في الشكل 3 أ ، ج.
  7. إجراء اختبار حساسية البرد.
    1. قم بإزالة من غرفة عزل الحساسية الميكانيكية وضعه في غرفة عزل الحساسية الحرارية.
    2. قم بتعبئة أنبوب مخروطي سعة 15 مل بالثلج الجاف بحيث تمتد الحبيبات النهائية من أعلى الأنبوب.
    3. ضع الثلج الجاف على الزجاج القريب من المخلب الخلفي الأيمن للحيوان.
    4. باستخدام ساعة توقيت ، سجل الوقت حتى يظهر انسحاب المخلب استجابة لدرجة الحرارة. يتم عرض البيانات التمثيلية في الشكل 3 ب.
    5. أعد إيواء الجرذ في قفص منزله.
    6. كرر جميع الخطوات 3.7 حتى يتم اختبار جميع والعودة إلى قفص منزلها.
      ملاحظة: من المهم أيضا ملاحظة أنه يجب مراقبة سلوك وأوزانها بحثا عن أي علامات للضيق في هذه المرحلة. إذا أصيبت بسلوك الألم الأساسي أو فقدت وزن الجسم خلال الدورات الزمنية الطويلة ، فيجب إنهاء الدراسة ، ويجب القتل الرحيم للحيوانات وفقا لتقنية التعامل المناسبة مع. إذا لم تظهر ضائقة على مدار التجربة ، فيجب القتل الرحيم للحيوانات بعد يوم الاختبار الأخير.

4. تقييم الحساسية الميكانيكية عبر التصوير بالفيديو عالي السرعة

  1. قم بتجميع المواد التالية كما هو مذكور أدناه لمقايسة الحساسية الميكانيكية والتصوير بالفيديو:
    1. غرف العزل ، شبكة أرضية سلكية ، مسحة قطنية ، فرشاة مكياج ، دبابيس ، كاميرا عالية السرعة ، أضواء الأشعة تحت الحمراء ، كمبيوتر محمول مع برنامج تحليل متوافق.
  2. التقييم بالاقتران مع اختبار الحساسية الميكانيكيةالموصوف سابقا 11أو كمقايسة مستقلة كما هو موضح أدناه.
  3. قم بتجميع غرف العزل للحساسية الميكانيكية (غرفة واحدة) عن طريق وضعها على شبكة أرضية سلكية على ارتفاع 20 سم فوق سطح الطاولة.
  4. ضع الكاميرا على حامل ثلاثي القوائم بزاوية 45 درجة تقريبا بين 1 و 2 قدم بعيدا عن غرفة العزل.
  5. ضع مصابيح الأشعة تحت الحمراء على حوامل ثلاثية القوائم لإضاءة الغرفة للتجريب والتسجيل اللاحق.
  6. ضع بشكل فردي في غرفة العزل لتقييم التحفيز الميكانيكي.
  7. السماح بالتأقلم مع غرف العزل لمدة 15 مترا قبل بدء الاختبار.
  8. إجراء اختبار حسي جسدي للحساسية الميكانيكية بمحفزات مختلفة (الشكل 4).
    1. استخدم جهاز كمبيوتر محمول مزود ببرنامج Photron FastCAM Analysis لتسجيل غرفة العزل بمعدل 2000 إطار / ثانية لكل حافز (اضغط على الزر المقابل لبدء التسجيل).
    2. استخدم قطعة القطن لإجراء اتصال لطيف بين طرف القطن والمخلب الخلفي للفأر أثناء التسجيل ، وتوقف بعد الانتهاء من التسجيل.
    3. استخدمي فرشاة المكياج للمسح عبر المخلب الخلفي من الخلف إلى الأمام وتوقف بعد الانتهاء.
    4. استخدم الدبوس لإجراء وخز دبوس منخفض وعالي الضغط على المخلب الخلفي للفأر. بالنسبة للوخز منخفض الضغط ، المس الدبوس برفق على المخلب الخلفي ، واسحب بعد التلامس أثناء التسجيل ، وتوقف بعد الانتهاء.
    5. بالنسبة لوخزات الدبوس ذات الضغط العالي ، اضغط بحدة على الدبوس في المخلب الخلفي ، واسحب بعد الاتصال أثناء التسجيل وتوقف بعد الانتهاء.
    6. أعد إلى قفص المنزل.
    7. كرر لكل ليتم اختباره.
  9. تقييم السلوك المؤخر المسجل يدويا via تصوير فيديو عالي السرعة باستخدام مقاطع الفيديو التي تتم معالجتها باستخدام برنامج FastCAM15، كما هو موضح في الشكل 5 أ، ب.
    1. قم بقياس ارتفاع المخلب (بالسنتيمتر) من الأرضية الشبكية إلى أعلى نقطة لها بعد تحفيز المخلب. للقيام بذلك في البرنامج ، انتقل إلى الأبعاد > القياسات وحدد نقطتين.
      1. قم بتشغيل الفيديو من خلال حركة المخلب بأكملها لتحديد اللحظة التي يصل فيها المخلب إلى ذروته أثناء الحركة التصاعدية الأولية. حدد منطقة يمكن تحديدها بوضوح من المخلب (على سبيل المثال ، مركز السطح الأخمصي ، تقاطع الرقم مع المخلب ، الكعب ، إلخ) وقم بتعيينه كنقطة أولية.
      2. قم بإرجاع الفيديو لتحديد موقع تلك المنطقة قبل التحفيز وتحديد النقطة الثانية في هذا الموقع على طول المحور y. تأكد من أن خط القياس يظل موازيا للمحور y وليس بزاوية. سيتم عرض الارتفاع في الزاوية العلوية اليسرى من الشاشة15.
    2. حدد سرعة المخلب عن طريق حساب المسافة (بالسنتيمتر) من المصعد الأولي إلى أعلى نقطة ، مقسومة على الوقت (بالثواني) بين هاتين النقطتين. يمكن إجراء هذا القياس في البرنامج عن طريق تحديد أبعاد > القياسات واختيار نقطتين.
    3. قم بتشغيل الفيديو من خلال حركة المخلب بأكملها لتحديد الإطارات التي يبدأ فيها المخلب أول حركة تصاعدية. قم بقياس سرعة المخلب عن طريق تحديد نقطتين في إطارات مختلفة داخل هذه الحركة وحساب المسافة مقسومة على عدد الإطارات أو الوقت المنقضي بين إطاري البداية والنهاية15.
    4. قم بتقييم مقاطع الفيديو بحثا عن الشد المداري ، واهتزاز المخلب ، وواقي المخلب ، وسلوكيات القفز. على سبيل المثال ، إذا أظهر أحد هذه السلوكيات أثناء تطبيق التحفيز ، فستكون درجة سلوكه المؤلم 1.
      ملاحظة: تم تسجيل الشد المداري عندما انتقلت العين من فتح كامل إلى إغلاق جزئي أو كلي أثناء تطبيق التحفيز. تم تسجيل اهتزاز المخلب عندما لوحظ رفرص مخلب عالي التردد أثناء تطبيق التحفيز. تم تسجيل القفز عندما كانت ثلاثة أقدام أو أكثر خارج أرضية الشبكة السلكية أثناء تطبيق التحفيز.
    5. استخدم بيانات خط الأساس من المحفزات لإنشاء تقديرات التوزيع والخطأ لهذه المجموعة من كما هو موضح سابقا15. باختصار ، قم بتسجيل مقاطع فيديو لكل يتم استخدامه في الدراسات استجابة للمس ثابت ، واللمس الديناميكي ، والوخز الخفيف ، والوخز الثقيل في خط الأساس المسبق للمعالجة لالتقاط مجموعة كاملة من الميزات السلوكية المحتملة.
      1. احسب المتوسط والانحراف المعياري لكل سمة سلوكية (السرعة ، الطول ، درجة الألم) للمجموعة عبر جميع المحفزات (اللمس الثابت ، مسحة القطن ، الوخز الخفيف ، الوخز الثقيل).
    6. قم بإنشاء درجات z من البيانات الأولية التي تمت ملاحظتها في كل مقطع فيديو باستخدام المتغيرات التي تم إنشاؤها في الخطوة 4.9.4 والإجراءات الموضحةسابقا 16.
    7. اجمع جميع درجات z في قيمة ذاتية أحادية البعد باستخدام تحليل المكون الرئيسي باستخدام برنامج التحليل الإحصائي17. يسمح ذلك بدمج درجات z المحولة من مجموعة البيانات ثلاثية الأبعاد ليتم حسابها كقيمة إجمالية مرجحةواحدة 16.
    8. ارسم درجات الألم التي تم إنشاؤها بواسطة PCA والتي تشمل هذه الأبعاد السلوكية المتعددة لفصل السلوكيات المرتبطة بالمحفزات الضارة وغير الضارة (الشكل 5C) باستخدام برنامج التحليل الإحصائي.
      ملاحظة: يتكرر الاختبار الميكانيكي بمساعدة التصوير بالفيديو على اختبار فون فراي من خلال دمج زيادة الأبعاد. في سياق CIPN ، يسمح بوصف والتمييز بين مضادات التأميل والمسكن. يمكن أيضا إجراء تسجيل الفيديو من قبل أطراف مستقلة عن المجرب الذي أجرى الاختبار الحسي. هذه أداة قوية يمكنها تقليل تحيز المجربين وزيادة عمق المعلومات التي تم جمعها. من المهم ملاحظة أن هذه الطريقة تعتمد على الأجهزة والبرامج والتقنيات الإحصائية المتخصصة. وهو بمثابة مكمل للطريقة التي يسهل الوصول إليها الموضحة في الأقسام السابقة. علاوة على ذلك ، تجدر الإشارة إلى أن جمع البيانات يستغرق وقتا طويلا نظرا لحجم الملفات التي تم إنشاؤها بواسطة الكاميرا وأن مساحة تخزين الملفات يمكن أن تكون عاملا مقيدا. يجب مراعاة هذه العوامل في بداية التجربة.

الوصول مقيد. يرجى تسجيل الدخول أو بدء فترة تجريبية لعرض هذا المحتوى.

النتائج

النتائج السلوكية التي أثارها نموذج CIPN هذا في الفئران قابلة للتكرار ومتسقة بدرجة كبيرة. يوضح الشكل 3 أ نتائج الحساسية الميكانيكية لحساسية خط الأساس وما بعد باكليتاكسيل في التحكم المعالجة باتفاقية التنوع البيولوجي. عند خط الأساس ، تبدأ فئران Sprague-Dawley عموما في إظهار انسحاب المخلب عند 26-60 جم من القوة كما تطبقها خيوط فون فراي. يمكن ملاحظة ذلك في كلتا المجموعتين العلاجيتين في اليوم صفر. بعد إعطاء باكليتاكسيل ، تصبح المعالجة بالمركبات حساسة لأدنى جرام من خيوط القوة المطبقة (على سبيل المثا...

الوصول مقيد. يرجى تسجيل الدخول أو بدء فترة تجريبية لعرض هذا المحتوى.

المناقشة

يلخص نموذج الفئران للاعتلال العصبي المحيطي الناجم عن العلاج الكيميائي اثنين من أكثر مشكلات جودة الحياة التي تم الإبلاغ عنها للمرضى الذين يتلقون أنواعا معينة من العلاج الكيميائي في الحساسية الميكانيكية والحرارية. باستخدام هذا النموذج ، يمكن للطرق غير المكلفة والفعالة نسبيا تحديد هذه الحساسيات عن طريق اختبار خيوط فون فراي والحساسية الحرارية من خلال التعرض للجليد الجاف. توفر هذه الطريقة أيضا طريقة إضافية لاختبار أكثر تخصصا عبر التصوير بالفيديو عالي السرعة ، والذي يمكن استخ...

الوصول مقيد. يرجى تسجيل الدخول أو بدء فترة تجريبية لعرض هذا المحتوى.

الإفصاحات

المؤلفون ليس لديهم ما يكشفون عنه.

شكر وتقدير

يود المؤلفون أن يشعروا بالشكر لمختبري Ward و Wimmer لدعمهم في هذا المشروع. تم دعم هذا العمل من قبل المعاهد الوطنية للصحة ، المعهد الوطني للاضطرابات العصبية والسكتة الدماغية [Grant R42 NS120548-02].

الوصول مقيد. يرجى تسجيل الدخول أو بدء فترة تجريبية لعرض هذا المحتوى.

المواد

قائمة المواد المستخدمة في هذه المقالة
الاسمالشركةرقم فهرسيالتعليقات
CannabidiolCaymen Chemical90080Ann Arbor ، MI
ChremophorMillipore-Sigma238470St. Lous ، MO
EthanolMillipore-SigmaE7023St. Lous ، MO
FastCAM Analysis Software   ؛فوتونhttps://photron.com,
كاميرا مفتوحة المصدر عاليةPhotron AX 50 
أضواء الأشعة تحت الحمراء CMVision IP65 
Normal SalineMillipore-SigmaS0817St. Lous ، MO
PaclitaxelTemple University Hospital PharmacyN / Aفيلادلفيا ، بنسلفانيا
فئران Sprague-Dawley (250 &ndash ؛ 300 ز)  مختبرات تاكونيك ، كرانبري ، نيوجيرسي
السرعة

المراجع

  1. Zhang, X., Chen, W. W., Huang, W. J. Chemotherapy-induced peripheral neuropathy. Biomed Rep. 6 (3), 267-271 (2017).
  2. Sałat, K. Chemotherapy-induced peripheral neuropathy: part 1-current state of knowledge and perspectives for pharmacotherapy. Pharmacol Rep. 72 (3), 486-507 (2020).
  3. Velasco, R., Bruna, J. Chemotherapy-induced peripheral neuropathy: An unresolved issue. Neurología (English Edition). 25 (2), 116-131 (2010).
  4. Zajaczkowską, R., et al. Mechanisms of chemotherapy-induced peripheral neuropathy. Int J Mol Sci. 20 (6), 1451(2019).
  5. Cavaletti, G., et al. Cannabinoids: An effective treatment for chemotherapy-induced peripheral neurotoxicity. Neurother. 18 (4), 2324(2021).
  6. Lowe, H., Toyang, N., Steele, B., Bryant, J., Ngwa, W. The endocannabinoid system: A potential target for the treatment of various diseases. Int J Mol Sci. 22 (17), 9472(2021).
  7. Ward, S. J., Ramirez, M. D., Neelakantan, H., Walker, E. A. Cannabidiol prevents the development of cold and mechanical allodynia in paclitaxel-treated female C57Bl6 mice. Anesth Analg. 113 (4), 947-950 (2011).
  8. Ward, S. J., et al. Cannabidiol inhibits paclitaxel-induced neuropathic pain through 5-HT(1A) receptors without diminishing nervous system function or chemotherapy efficacy. Br J Pharmacol. 171 (3), 636-645 (2014).
  9. Iffland, K., Grotenhermen, F. An update on safety and side effects of cannabidiol: A review of clinical data and relevant animal studies. Cannabis Cannabinoid Res. 2 (1), 139(2017).
  10. Bacalhau, C., Costa-Pereira, J. T., Tavares, I. Preclinical research in paclitaxel-induced neuropathic pain: A systematic review. Front Vet Sci. 10, 1-17 (2023).
  11. Ippolito, M. J., Hayduk, S. A., Kinney, W., Brenneman, D. E., Ward, S. J. KLS-13019, a novel structural analogue of cannabidiol (CBD) and GPR55 receptor antagonist, prevents and reverses chemotherapy-induced peripheral neuropathy (CIPN) in rats. J Pharmacol Exp Ther. 391 (2), 231-240 (2024).
  12. Brenner, D. S., Golden, J. P., Gereau, R. W. IV A novel behavioral assay for measuring cold sensation in mice. PLoS ONE. 7 (6), 1-08 (2012).
  13. Zeid, D., et al. Paternal morphine exposure in rats reduces social play in adolescent male progeny without affecting drug-taking behavior in juvenile males or female offspring. Mol Cell Neurosci. 126, 103877(2023).
  14. Deuis, J. R., Dvorakova, L. S., Vetter, I. Methods used to evaluate pain behaviors in rodents. Front Mol Neurosci. 10 (284), 1-17 (2017).
  15. Burdge, J., Fried, N. T., Abdus-Saboor, I. Using high-speed videography for objective and reproducible pain measurement on a mouse pain scale. STAR Protoc. 2 (1), 1-16 (2021).
  16. Toussaint, A. B., et al. Chronic paternal morphine exposure increases sensitivity to morphine-derived pain relief in male progeny. Sci Adv. 8 (7), 1-17 (2022).
  17. Abdus-Saboor, I., et al. Development of a mouse pain scale using sub-second behavioral mapping and statistical modeling. Cell Rep. 28 (6), 1-33 (2019).
  18. Faraji, J., et al. Sex-specific stress and biobehavioral responses to human experimenters in rats. Front Neurosci. 16, 1-14 (2022).
  19. Bigelow, L. J., Pope, E. K., MacDonald, D. S., Rock, J. E., Bernard, P. B. Getting a handle on rat familiarization: The impact of handling protocols on classic tests of stress in Rattus norvegicus. Lab Anim. 57 (3), 259-269 (2023).
  20. Bryda, E. C. The mighty mouse: The impact of rodents on advances in biomedical research. Missouri Med. 110 (3), 207-211 (2013).
  21. Gadgil, S., et al. A systematic summary and comparison of animal models for chemotherapy induced (peripheral) neuropathy (CIPN). PLoS One. 14 (8), 1-17 (2019).

الوصول مقيد. يرجى تسجيل الدخول أو بدء فترة تجريبية لعرض هذا المحتوى.

إعادة الطباعة والأذونات

استكشف المزيد من المقالات

الاعتلال العصبي الناجم عن العلاج الكيميائيالعلاج بالكانابيديولنموذج الاعتلال العصبي في الجرذانإعطاء الباكليتاكسيلالحساسية الميكانيكيةالحساسية للبرودةالتصوير بالفيديو عالي السرعةالسلوك الدفاعي ضد الألمالألم الاعتلالي العصبيالوقاية من الألم الخيفي

تم نشر هذه المقالة

الفيديو قريباً

تواصل معنا
أوصِ به للمكتبة

الخصوصية

شروط الاستخدام

السياسات

حقوق الطبع والنشر © 2026 MyJoVE Corporation. جميع الحقوق محفوظة.