آثار الشيكونين على مسار إشارات HIF-1α / VEGF في الفئران المصابة بإصابة الرئة الحادة الناجمة عن الإنتان

ملخص

يهدف البروتوكول إلى تقييم فعالية الشيكونين في التخفيف من إصابات الرئة الحادة الناجمة عن الإنتان في الفئران. من خلال استهداف مسار HIF-1α / VEGF ، تبحث الدراسة في كيفية تأثير الجرعات المختلفة من الشيكونين على معدلات البقاء على قيد الحياة ، وأمراض الرئة ، والتعبير عن علامات الالتهابات ، مما يسلط الضوء على فوائده العلاجية المحتملة.

الملخص

غالبا ما يسبب الإنتان إصابة الرئة الحادة (ALI) ، وهي مضاعفات عالية الوفيات. يلعب مسار HIF-1α / VEGF دورا رئيسيا في الإنتان ، وقد يخفف الشيكونين ، وهو مركب طبيعي له خصائص مضادة للالتهابات ، من إصابة الرئة من خلال استهداف هذا المسار. تم تقسيم فئران Balb / c بشكل عشوائي إلى أربع مجموعات: مجموعة الوهم ، والمجموعة النموذجية ، ومجموعة العلاج بجرعة منخفضة ، ومجموعة العلاج بجرعات عالية. خضعت المجموعة الوهمية لبضع البطن بدون ربط الرأس والثقب (CLP) ، بينما خضعت المجموعة النموذجية لعملية CLP للحث على إصابة رئوية حادة مرتبطة بالإنتان. وبعد النمذجة، تلقت مجموعات المعالجة ذات الجرعة المنخفضة والجرعة العالية الشيكونين عن طريق التزقيم بجرعات 12.5 ملغم/كغ و50 ملغم/كغ، على التوالي، مرة واحدة يوميا لمدة 14 يوما. تمت مراقبة معدل بقاء الفئران لمدة 7 أيام. تم استخدام تلطيخ الهيماتوكسيلين واليوزين (HE) لتقييم أمراض أنسجة الرئة ، وتم قياس نسبة الوزن الرطب / الجاف في الرئة (W / D) ، وتم إجراء لطخة غربية للكشف عن التعبير عن HIF-1α و VEGF و TNF-α و IL-6 في أنسجة الرئة. أدى الشيكونين إلى تحسين معدل بقاء الفئران الإنتانية بشكل كبير ، مع أكبر تأثير لوحظ في مجموعة الجرعات العالية (ص < 0.05). بالمقارنة مع المجموعة النموذجية ، انخفضت نسبة W / D في الرئة وتلف الأنسجة في المجموعات المعالجة بالشيكونين بشكل ملحوظ بطريقة تعتمد على الجرعة. بالإضافة إلى ذلك ، قلل الشيكونين بشكل كبير من التعبير عن HIF-1α و VEGF و TNF-α و IL-6 ، حيث أظهرت مجموعة الجرعات العالية الانخفاض الأكثر وضوحا (ص < 0.05). يخفف الشيكونين من إصابة الرئة الحادة في الفئران الإنتانية ، وربما عن طريق تثبيط التعبير عن HIF-1α وتقليل إنتاج العوامل الالتهابية ذات الصلة.

المقدمة

الإنتان هو استجابة التهابية جهازية شديدة تسببها العدوى. ¹ غالبا ما يؤدي إلى خلل وظيفي في أعضاء متعددة ويمكن أن يصبح مهددا للحياة مع تقدم الحالة. ² على الرغم من استخدام العلاجات مثل التهوية الميكانيكية والرعاية الداعمة، لا تزال معدلات الوفيات الناجمة عن ALI المرتبط بالإنتان مرتفعة، حيث تصل إلى 30٪ -40٪³. تعالج هذه العلاجات بشكل أساسي الأعراض بدلا من الأسباب الكامنة ، مما يحد من فعاليتها بشكل عام. لذلك ، فإن تحديد الأساليب العلاجية الجديدة التي تستهدف أسباب إصابة الرئة يمكن أن يحسن بشكل كبير نتائج المرضى في الإنتان.

حددت الدراسات الحديثة ....

البروتوكول

حصل البروتوكول على موافقة من مركز التجريبية بجامعة ونتشو الطبية. تم استخدام ذكور C57Bl / 6 فئران (5-6 أشهر ؛ 20-25 جم) في الدراسة الحالية. تفاصيل الكواشف الرئيسية والمعدات المستخدمة مدرجة في جدول المواد.

1. تحضير نموذج فأر الإنتان

1. الفئران المنزلية تحت درجة حرارة ثابتة تبلغ 25 درجة مئوية ، ورطوبة 50٪ ، ودورة ضوء / ظلام لمدة 12 ساعة.
2. بعد فترة تأقلم مدتها 7 أيام ، قسم الفئران بشكل عشوائي إلى أربع مجموعات: مجموعة الشام ، والمجموعة النموذجية ، ومجموعة العلاج بجرعة منخفضة ، ومجموعة العلاج بالجرعات العالية ، مع 20 فأرا في كل مجموعة.
3. بناء على مراجع من دراسة سابقة

النتائج

لتقييم الإمكانات العلاجية للشيكونين ، قمنا أولا بتقييم تأثيره على البقاء على قيد الحياة في الفئران الإنتانية على مدى 7 أيام. أدى العلاج بالشيكونين إلى تحسين معدلات البقاء على قيد الحياة بطريقة تعتمد على الجرعة (الشكل 1).

نظرا لانتشار إصابة الرئة في الإنتان ، قمنا أيضا بتقييم الوذمة الرئوية في الفئران. تم تقييم الوذمة الرئوية عن طريق قياس نسبة الوزن الرطب إلى الجاف في الرئة (W / D). ارتفعت نسبة W / D بشكل ملحوظ في المجموعة النموذجية مقارنة بالمجموع.......

المناقشة

باعتباره النموذج القياسي الذهبي لأبحاث الإنتان ، يعد نموذج CLP خطوة أساسية في هذه التجربة لأن CLP يحاكي تعقيد الإنتان البشري بشكل أفضل من العديد من النماذج الأخرى. لا يزال مرض التهاب الغدة الدعامة الليفوري المرتبط بالإنتان يمثل تحديا سريريا خطيرا بسبب معدلات الوفيات المرتفعة والفعالية المحدودة للعلاجات الحالية^14،15. توضح دراستنا ، لأول مرة ، أن الشيكونين يحسن بشكل كبير من البقاء على قيد الحياة في الفئران الإنتانية عن طريق تعديل ك.......

المواد

قائمة المواد المستخدمة في هذه المقالة

الاسم	الشركة	رقم فهرسي	التعليقات
H& طقم تلطيخ طقم وصمة عار E	Solaibao Technology	G1120HE
جهاز طرد مركزي بدرجة حرارة منخفضة	Sigma	3K15
قارئ صفيحة حيوية		طراز 680
أرنب أحادي النسيلة VEGF-receptor1 الجسم المضاد	Abcam	ab238632
الأرنب متعدد النسيلة HIF-1 & ألفا الجسم المضاد	Abcam	ab51608
SDS-PAGE نظام الرحلان الكهربائي	Bio-Rad	MINI Protean2
Shikonin	MedChemExpress	HY-N0822