مقالة منهجية

آثار الوقاية العصبية من التناظرية Octadecaneuropeptide التي تدار عن طريق الأنف في نموذج الفأر لمرض باركنسون الناجم عن MPTP

DOI:

10.3791/68122

⸱

أغسطس 29, 2025

 ,  ,  ,  ,  ,  ,  ,  ,  ,  , 
1Faculty of Sciences of Tunis, LR18ES03, Laboratory of Neurophysiology Cellular Physiopathology and Biomolecule Valorization, University Tunis El Manar, 2Inserm U1239 NorDiC, Laboratory of Neuroendocrine, Endocrine and Germinal Differentiation and Communication, PRIMACEN, Univ Rouen Normandie, 3Confocal Microscopy Unit, Faculty of Medicine of Tunis, University Tunis El Manar

* These authors contributed equally

في هذه المقالة

ملخص

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,

يتيح الإعطاء داخل الأنف التوصيل المباشر للجزيئات النشطة بيولوجيا إلى الدماغ ، مما يوفر بديلا غير جراحي للطريقة داخل البطين. توضح هذه الدراسة أن الإعطاء داخل الأنف ل cyclo (1-8) OP ، وهو تناظري ODN ، يمارس تأثيرات وقائية عصبية قوية ضد الضرر التأكسدي الناجم عن MPTP وموت الخلايا المبرمج في المخطط في نموذج فأر لمرض باركنسون ، مما يسلط الضوء على الإمكانات العلاجية.

الملخص

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,

مرض باركنسون (PD) هو اضطراب تنكسي عصبي تكون العلاجات الحالية له ملطفة في المقام الأول وتفتقر إلى الفعالية العلاجية. Octadecaneuropeptide (ODN) هو ببتيد يتم إنتاجه حصريا بواسطة الخلايا النجمية يحمي الخلايا العصبية من تلف الخلايا المؤكسدة وموت الخلايا المبرمج في نماذج باركنسون في المختبر وفي الجسم الحي . ومع ذلك ، لا يمكن ل ODN عبور الحاجز الدموي الدماغي (BBB) ويتطلب الحقن داخل المخ البطيني للوصول إلى الدماغ ، مما يمثل تحديا كبيرا للتطبيق العلاجي. تبحث هذه الدراسة في فعالية الحماية العصبية ل cyclo (1-8) OP ، وهو تناظري ODN ، يتم تسليمه عبر الطريق داخل الأنف (IN) لتجاوز BBB في نموذج في الجسم الحي من PD. تم استخدام ذكور الفئران C57BL / 6J للتجارب وتم تقسيمها إلى أربع مجموعات: الوهم ، MPTP- (20 مجم / كجم من وزن الجسم ، داخل الصفاق) ، cyclo (1-8) OP- (10 نانوغرام / 10 ميكرولتر ، IN) ، و MPTP + cyclo (1-8) المعالجة ب OP. في اليوم 0 (D0) ، تلقت ثلاث حقن داخل الصفاق من محلول MPTP سعة 100 ميكرولتر على فترات ساعتين (MPTP- و MPTP + cyclo (1-8) الفئران المعالجة ب OP) أو محلول ملحي (الفئران المعالجة بالزيم والسيكلو (1-8)). بعد ساعة واحدة من الحقن النهائي ، تم إعطاء 10 ميكرولتر من تقطير IN للفئران المعالجة ب cyclo (1-8) OP (cyclo (1-8) OP- و MPTP + cyclo (1-8) OP) أو محلول ملحي (الفئران المعالجة بالوهم و MPTP). في D7 ، تم إجراء اختبار الأسطوانة لتقييم وظيفة الحركة. بعد ذلك ، تم التضحية بالحيوانات ، وتمت إزالة المخطط وتحليله بواسطة RT-qPCR لتقييم التعبير الجيني caspase-3. كما استخدمت عينات الأنسجة لقياس أنشطة الإنزيم المضاد للأكسدة وأنواع الأكسجين التفاعلية (ROS) ومالوندي الديهايد (MDA) ووفرة البروتين المتكربن. جرعة واحدة IN من 10 نانوغرام cyclo (1-8) OP, تدار 1 ساعة بعد جرعة MPTP النهائية, منع السمية العصبية في المخطط 7 أيام بعد العلاج. ارتبطت الحماية العصبية بوساطة Cyclo (1-8) OP بتثبيط قوي لتعبير caspase-3 الناجم عن MPTP في المخطط. بالإضافة إلى ذلك ، أعاد cyclo (1-8) OP أنشطة الإنزيمات المضادة للأكسدة ، مما منع تراكم ROS ومنتجات بيروكسيد الدهون وكربنيل البروتين في المخطط.

المقدمة

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,

مرض باركنسون (PD) هو اضطراب تنكسي عصبي يتميز بالفقدان التدريجي للخلايا العصبية الدوبامينية في المادة السوداء ، مما يعصب المخطط. ينتج عن هذا الفقدان أعراض عصبية كبيرة ، بما في ذلك العجز الحركي الشديد مثل تصلب العضلات ، والحركية ، وبطءالحركة 1. يستمر انتشار الأمراض التنكسية العصبية مثل مرض باركنسون في الارتفاع ، ويرجع ذلك أساسا إلى شيخوخة السكان ، مما يشكل تحديا كبيرا للصحة العامة2. تعتمد العلاجات الحالية لمرض باركنسون في الغالب على نظائر الدوبامين والتحفيز عالي التردد داخل المخ3،4. ومع ذلك ، فإن هذه العلاجات تفتقر إلى التأثيرات الوقائية العصبية وتفشل في وقف تطور المرض ، مما يؤكد الحاجة الملحة لاستراتيجيات مبتكرة لمنع فقدان الخلايا العصبية ، وتعزيز التجدد ، والتخفيف من تقدمالمرض 5.

أوكتاديكانيوروببتيد (ODN) هو ببتيد مشتق من المعالجة المحللة للبروتين لمثبط ربط الديازيبام المكون من 86 حمض أميني (DBI)6 ، يتم التعبير عنه بشكل أساسي بواسطة الخلايا الفلكمية في الجهاز العصبي المركزي للثدييات. يشير الحفظ التطوري للهيكل الأساسي ل ODN إلى أدواره البيولوجية المهمة. ثبت أن ODN ينظم الوظائف الرئيسية مثل تناول الطعام والنوم والعدوانية والسلوكيات المرتبطةبالقلق 7. بالإضافة إلى دورها التنظيمي ، أظهرت الأبحاث المكثفة الخصائص العصبية ل ODN في مختلف الاضطرابات العصبية المرتبطة بالتنكس العصبي. على سبيل المثال ، يحمي ODN الخلايا العصبية الدوبامين في نموذج PD8 ، ويقلل من حجم الاحتشاء مع تعزيز الانتعاش الوظيفي بعد السكتة الدماغية في القوارض9. تتمثل إحدى الميزات الرئيسية ل ODN في قدرته على مواجهة العديد من العمليات الضارة التي يتم تنشيطها أثناء تلف الدماغ من خلال أنشطتها المضادة لموت الخلايا المبرمج والمضادة للالتهابات ومضادات الأكسدة والمناعية10،11،12. علاوة على ذلك ، قد يعمل ODN بعد المرحلة الحادة من السكتة الدماغية عن طريق تعزيز تكوين الخلايا العصبية واللدونة العصبية9. بالنسبة للتطبيقات السريرية المحتملة للببتيدات أو نظائرها كعوامل علاجية ، يعد اختيار المسار الأمثل للإعطاء أمرا بالغ الأهمية لمنع التدهور السريع في مجرى الدم وتقليل تأثير المرور الأول. من بين استراتيجيات التوصيل المختلفة ، برزت الإدارة داخل الأنف (IN) كبديل غير جراحي واعد ، مما يسمح بالتوصيل المباشر لبعض الجزيئات النشطة بيولوجيا إلى الدماغ مع تجاوز الحاجز الدموي الدماغي (BBB) 13،14،15. يلغي هذا المسار الحاجة إلى الحقن التجسيمية الغازية ويعزز التوزيع الحيوي للدماغ مقارنة بالأعضاء الطرفية. على سبيل المثال ، أظهر عديد الببتيد المنشط للغدة النخامية (PACAP) فعالية أكبر في امتصاص الدماغ والحماية العصبية عند تسليمه عن طريق تقطير IN مقارنة بالحقن الوريدي ، مما يقلل بشكل كبير من حجم الاحتشاء ويحسن الانتعاش الوظيفي في نماذج السكتة الدماغية9.

على الرغم من أن إدارة IN هي تقنية طفيفة التوغل وفعالة لتوصيل العوامل العلاجية مباشرة إلى الدماغ عن طريق تجاوز BBB ، إلا أن فعاليتها لا تزال تعتمد على العديد من المعايير العملية ، بما في ذلك الجرعة والحجم الإجمالي المعطى. في القوارض ، يتراوح الحجم الموصى به عادة من 10 إلى 25 ميكرولتر لكل فتحة أنف لتجنب الشفط أو الفائض في الجهاز الهضمي16،17. تتأثر كفاءة امتصاص الأنف أيضا بحجم ، ومساحة سطح تجويف الأنف ، وإزالة الغشاء المخاطي الهدبي ، والخصائص المركبة مثل محبة الدهون والوزن الجزيئي18،19. يجب مراعاة هذه القيود أثناء تصميم البروتوكول لضمان قابلية التكاثر والملاءمة الانتقالية في النماذج قبل السريرية.

أظهرت دراسة في الجسم الحي أن الحقن داخل المخ البطيني (ICV) لجرعات منخفضة من ODN يمنح تأثيرات وقائية عصبية كبيرة ، لا سيما عن طريق منع تنكس الخلايا العصبية الدوبامين في الفئران المعالجةب MPTP 8. تهدف الدراسة الحالية إلى تقييم جدوى وفعالية إدارة IN لتناظرية ODN ، cyclo (1-8) OP ، كبديل غير جراحي لحقن ICV لإيصال نظير الببتيد الواقي من الأعصاب إلى الدماغ ، على وجه التحديد لتحديد ما إذا كان هذا المسار يمكن أن يمنع فقدان الخلايا العصبية الدوبامينية ويحسن النتائج الحركية في الفئران المعالجة MPTP ، وهو نموذج راسخ لمرض باركنسون.

الوصول مقيد. يرجى تسجيل الدخول أو بدء فترة تجريبية لعرض هذا المحتوى.

البروتوكول

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,

اتبعت جميع التجارب إرشادات الجمعية الطبية البيطرية الأمريكية وتمت الموافقة عليها من قبل لجنة الأخلاقيات الطبية التابعة لمعهد باستور (رقم الموافقة: FST / LNFP / Pro 160220). تم الحصول على ذكور الفئران C57BL / 6J البالغة من العمر عشرة أسابيع من معهد باستور في تونس. تم إيواء الفئران في ثلاثة لكل قفص في غرفة يتم التحكم في درجة حرارتها (21 درجة مئوية ± 1 درجة مئوية) مع دورة ضوء / ظلام مدتها 12 ساعة ووفرت حرية الوصول إلى الطعام والماء لمدة أسبوع واحد من التأقلم. تفاصيل الكواشف والمعدات المستخدمة مدرجة في جدول المواد.

1. إجراء العلاج

  1. قسم إلى أربع مجموعات: الوهم (ن = 9) ، MPTP- (ن = 9) ، cyclo (1-8) OP- (ن = 9) ، و MPTP + cyclo (1-8) المعالجة ب OP (ن = 9).
  2. تطبيق ثلاث حقن داخل الصفاق (IP) من MPTP (20 ملغ/كغ وزن الجسم) في 100 ميكرولتر من 0.9٪ كلوريد الصوديوم بفواصل زمنية مدتها ساعتان في اليوم الأول من العلاج (D0). بعد 1 ساعة من الحقن النهائي MPTP ، قم بإعطاء 10 ميكرولتر عن طريق الأنف (IN) من cyclo (1-8) OP (10 ng) أو محلول ملحي.
  3. حقن التحكم بالمحلول الملحي بدلا من MPTP ، مع أو بدون cyclo (1-8) OP (الشكل 1).
  4. في اليوم السابع (D7) ، أخضع الفئران لاختبار الأسطوانة. ثم قم بتخدير الفئران بعمق باستخدام حقن IP من البنتوباربيتال والتضحية بها (باتباع البروتوكولات المعتمدة مؤسسيا) لجمع الأدمغة لتحليل تفاعل البوليميراز المتسلسل والتحليلات الكيميائية الحيوية في الوقتالفعلي 20 (الشكل 2).

2. إجراء الحقن

  1. الحقن داخل الصفاق
    1. ضع الماوس بعناية وشل حركة رأسه أثناء العملية.
    2. قم بتوجيه رأس الماوس لأسفل للسماح للأعضاء بالتحول بشكل طبيعي مع الجاذبية ، مما يقلل من أي اتصال بالإبرة.
    3. أدخل الإبرة بزاوية 45 درجة في أسفل البطن.
    4. يجب إعطاء ثلاث حقن سعة 100 ميكرولتر على نفس الجانب ، مع فاصل زمني مدته ساعتان بين كل حقنة ، يتم إجراؤها جميعا في نفس اليوم.
    5. حقن 0.9٪ محلول ملحي لمجموعات الوسام والسيكلو (1-8) OP ، أو محلول MPTP (20 مجم / كجم وزن الجسم) لمجموعات MPTP و MPTP + cyclo (1-8) OP.
  2. الإعطاء داخل الأنف
    ملاحظة: استندت الجرعة المختارة (10 نانوغرام) إلى دراسة سابقة توضح فعالية الوقاية العصبية لإعطاء القيمة المحلية المضادة للأودنا8. تم اختيار الحجم الإجمالي البالغ 10 ميكرولتر وحجم القطرات (5 ميكرولتر لكل فتحة أنف) وفقا لبروتوكولات إدارة IN المعمولبها 18،21. هذا الحجم أقل بكثير من متوسط سعة تجويف أنف الفأر (0.032 سم3) ، وبالتالي تقليل خطر انسداد فتحة الأنف أو الاختناق وضمان امتصاص الأنف الآمن والفعال22.
    1. أمسك الماوس بإحكام من رقبته ، مع التأكد من توجيه أنفه لأعلى لتسهيل الجرعات الدقيقة مع تقليل حركة الرأس.
    2. اقلب بحيث يواجه جانبه البطني السقف ، مع رقبته موازية للأرض. تأكد من بقاء رأس الماوس ثابتا بإحكام ، مما يمنع الحركة الرأسية أو الأفقية.
    3. قم بمحاذاة طرف الماصة مع فتحة أنف الماوس واضغط ببطء على المكبس لتشكيل قطرة صغيرة.
    4. ضع قطرة 5 ميكرولتر (نصف الحجم) بالقرب من كل فتحة من فتحتي أنف الفأر.
    5. اسمح للفأر باستئناف المحلول بشكل طبيعي.
    6. كرر هذه الخطوات لضمان الجرعات المتسقة ، مع إعطاء 10 ميكرولتر من سيكلو (1-8) OP (10 نانوغرام) لمجموعات MPTP + cyclo (1-8) OP و cyclo (1-8) OP.
    7. راقب بعناية فم الفأر طوال العملية. قد يشير وجود سائل في الفم إلى امتصاص أنف غير كامل. قد ينتج هذا عن حجم القطيرات غير السليم أو الإعطاء السريع أو عدم كفاية الاستنشاق ، مما يسمح للمحلول بالتجمع في البلعوم الأنفي ثم الخروج من خلال الفم.
    8. قلل من هذا الخطر عن طريق تقليل حجم القطرات إذا لزم الأمر وضمان الوقت الكافي للاستنشاق قبل إعطاء كميات إضافية.
    9. تجنب إعطاء جرعة إضافية على الفور لمنع الحجم الزائد.
    10. قم بتوثيق أي جرعات في غير محلها ولاحظ بعناية أي سائل طرد.
    11. تأكد من أن كل فأر يستنشق كلتا القطرتين بالكامل (واحدة لكل فتحة أنف) قبل متابعة المزيد من الإعطائ.
    12. تأكد من الاستهداف الدقيق للبصلة الشمية عن طريق إجراء حقن IN لمحلول الميثيلين الأزرق.
    13. قم بتقييم الدقة من خلال الفحص البصري لترسيب وانتشار اللون الأزرق.

3. اختبار الاسطوانة

  1. استخدم أسطوانة شفافة ، بارتفاع 20 سم وقطرها 15 سم ، موضوعة في وسط الطاولة.
  2. ضع ثلاث ألواح من الورق المقوى الأسود حول الأسطوانة (على بعد 4-8 سم) لتقليل تأثيرات الإضاءة البيئية. اترك جانبا واحدا من الأسطوانة مفتوحا لتسجيل الفيديو.
  3. اضبط الكاميرا على بعد 40-60 سم من الأسطوانة لالتقاط رؤيتها الكاملة.
  4. ضع الماوس في الأسطوانة وابدأ التسجيل على الفور لمدة 5 دقائق.
  5. بعد أن يكمل كل فأر الاختبار ، قم بتنظيف الأسطوانة بالماء ، ورش 70٪ من الإيثانول لإزالة الروائح ، وامسحها حتى تجف قبل اختبار الماوس التالي.
  6. قم بتشغيل التسجيل بنصف السرعة للسماح بالملاحظة التفصيلية.
  7. احسب كل حالة يرفع فيها الماوس كفوفه على جدار الأسطوانة لتقييم السلوك الاستكشافي23.

4. تحضير مستخلصات أنسجة المخ للتجارب الكيميائية الحيوية

  1. تخدير بالبنتوباربيتال (40 مجم / كجم ، IP) ثم قطع رأسها (باتباع البروتوكولات المعتمدة مؤسسيا).
  2. قم بتشريح المخطط وتجانسه في 2 مل من TBS لكل جرام من الأنسجة باستخدام محلول التحلل (1٪ Triton X-100 ، 50 ملي Tris-HCl ، 10 ملي EDTA).
  3. تتجانس أجهزة الطرد المركزي عند 14,000 × جم لمدة 15 دقيقة عند 4 درجات مئوية.
  4. قم بقياس تركيز البروتين باستخدام مجموعة التحديد اللوني Biuret وقم بتخزين الحصص عند -20 درجة مئوية لتحليلها لاحقا.

5. قياس تكوين ROS داخل الخلايا

  1. احتضان مستخلص أنسجة المخ مع 10 ميكرومتر من DCFH2-DA عند 37 درجة مئوية لمدة 30 دقيقة في الظلام.
  2. قم بإزالة المادة الطافية واغسلها مرتين باستخدام PBS (0.1 متر ، درجة الحموضة 7.4 ، 37 درجة مئوية).
  3. قم بقياس التألق باستخدام قارئ صفيحة دقيقة بطول موجي إثارة يبلغ 485 نانومتر وطول موجة انبعاث يبلغ 538 نانومتر.

6. قياس علامات الإجهاد التأكسدي

  1. مالوند الديهايد
    1. امزج 20 ميكرولتر من العينة (~ 50 ميكروغرام من البروتين) مع 125 ميكرولتر من 20٪ TCA و 50 ميكرولتر من 0.67٪ TBA.
    2. احتضن عند 95 درجة مئوية لمدة 30 دقيقة ، ثم تبرد بسرعة عند 4 درجات مئوية.
    3. أضف 800 ميكرولتر من البيوتانول والدوامة وأجهزة الطرد المركزي عند 3000 × جم لمدة 10 دقائق عند 4 درجات مئوية.
    4. قم بقياس الامتصاص عند 532 نانومتر واحسب مستويات MDA باستخدام معامل الانقراض (1.65 × 105 M-1 cm-1).
  2. قياس بروتين كربونيل
    1. امزج 200 ميكرولتر من DNPH مع 50 ميكرولتر من عينة البروتين واحتضنه لمدة 1 ساعة.
    2. أضف 250 ميكرولتر من 20٪ TCA واتركها تبرد لمدة 10 دقائق على الثلج.
    3. جهاز طرد مركزي عند 3000 × جم لمدة 10 دقائق عند 4 درجات مئوية وغسل الحبيبات بنسبة 10٪ TCA ، ثم بالإيثانول: أسيتات الإيثيل (v / v).
    4. أعد تعليق الحبيبات في 250 ميكرولتر من 6 M غوانيدين هيدروكلوريد وقياس الامتصاص عند 370 نانومتر.
    5. احسب مستويات PCO باستخدام معامل الانقراض (22,000 M-1 cm-1)24.

7. قياس أنشطة الإنزيم المضاد للأكسدة

  1. فحص الديسموتاز الفائق
    1. احتضان العينة (~ 50 ميكروغرام) مع كاتالاز البقري (0.4 وحدة / لتر) ، ديسيل-أدرينالين (5 مجم / مل) ، و Na2CO3 / NaHCO3 عازلة (62.5 ملي مولار ، درجة الحموضة 10.2).
    2. قم بقياس أكسدة الأدرينالين عند 480 نانومتر باستخدام مقياس الطيف الضوئي لمدة 300 ثانية على فترات 60 ثانية25.
  2. فحص كاتالاز
    1. امزج العينة مع 90 ملي مولار H2O2 في PBS.
    2. راقب الانخفاض في امتصاص H2O2 عند 240 نانومتر لمدة 3 دقائق على فترات 30 ثانية.
    3. احسب نشاط الترجمة بمساعدة المقطعيات باستخدام معامل الانقراض (40 م -1سم -1).

8. تحليل PCR في الوقت الحقيقي

  1. استخرج الحمض النووي الريبي الكلي من مخطط الفأر باستخدام طريقة حمض غوانيدينيوم ثيوسيانات-فينول-كلوروفورم.
  2. عالج الحمض النووي الريبي باستخدام DNase I لإزالة الحمض النووي الجيني وقياس تركيز الحمض النووي الريبي عند 260 نانومتر.
  3. قم بإجراء RT-PCR الكمي باستخدام 1 ميكروغرام من إجمالي الحمض النووي الريبي باستخدام مجموعة Q-RT PCR المكونة من خطوة واحدة.
  4. تضخيم (كدنا) باستخدام SYBR Green PCR Master Mix والبادئات (الجدول 1).
  5. احسب مستويات (كدنا) النسبية باستخدام طريقة 2−ΔΔCt مع GAPDH كعنصر تحكمداخلي 26.

9. التحليل الإحصائي

  1. إجراء التحليلات الإحصائية باستخدام برنامج GraphPad.
  2. استخدم اختبار t الخاص بالطالب للمقارنات الفردية. للمقارنات المتعددة ، استخدم ANOVA أحادي الاتجاه أو ثنائي الاتجاه متبوعا باختبار Bonferroni اللاحق ، حسب الاقتضاء. في جميع الحالات ، ضع في اعتبارك قيمة P البالغة 0.05 أو أقل ذات دلالة إحصائية.

الوصول مقيد. يرجى تسجيل الدخول أو بدء فترة تجريبية لعرض هذا المحتوى.

النتائج

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,

بعد إدارة MPTP ، أظهرت الفئران أعراضا باركنسون مميزة ، بما في ذلك ذيل Straub المرتفع والصلب ، والانتصاب ، وعدم الحركة ، والتشوهات الوضعية مثل انحناء العمود الفقري ، مما يؤكد التأسيس الناجح لنموذج MPTP (الشكل 3). أظهر التحقق من توصيل IN باستخدام الميثيلين الأزرق ، مع التضحية بالفئران بعد 10 دقائق من الحقن ، توزيعا فعالا للصبغة داخل البصلة الشمية المستهدفة ومناطق الدماغ ، مما يدعم دقة هذه الطريقة (الشكل 4).

كشفت التقييم...

الوصول مقيد. يرجى تسجيل الدخول أو بدء فترة تجريبية لعرض هذا المحتوى.

المناقشة

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,

أظهرت الدراسات السابقة أن إعطاء القيمة المحلية للخلايا من ODN يتصدى للتنكس الناجم عن MPTP للخلايا العصبية الدوبامين nigrostriatal ، والضرر التأكسدي ، والالتهاب العصبي8. قام التحقيق الحالي بتقييم فعالية توصيل IN لتناظرية ODN ، cyclo (1-8) OP ، لمنع الإعاقات الحركية الناجمة عن MPTP ، والضرر التأكسدي ، والسمية العصبية في نموذج PD في الجسم الحي باستخدام الفئران C57BL / 6J.

أظهرت النتائج أن الفئران المعالجة ب MPTP أظهرت أ...

الوصول مقيد. يرجى تسجيل الدخول أو بدء فترة تجريبية لعرض هذا المحتوى.

الإفصاحات

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,

يعلن المؤلفون أنه ليس لديهم مصالح مالية متنافسة معروفة أو علاقات شخصية يمكن أن يبدو أنها تؤثر على العمل الوارد في هذه المقالة.

شكر وتقدير

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,

تم دعم هذا العمل من قبل مختبر الفيزيولوجيا العصبية وعلم الأمراض الفيزيائية الخلوية وتثمين الجزيئات الحيوية ، LR18ES03 ، NorDiC Inserm U1239 ، برنامج التبادل الفرنسي التونسي CMCU-Campus France / PHC Utique 24G0807 / 50283RD (إلى Olfa Masmoudi-Kouki و Jérôme Leprince) ، برنامج Horizon-Marie Skłodowska-Curie Actions (MSCA) معرف اتفاقية منحة PsyCoMed: 101086247 ، وبرنامج البحث والابتكار Horizon 2020 التابع للاتحاد الأوروبي بموجب اتفاقية منحة Marie Skłodowska Curie No 101034329.

الوصول مقيد. يرجى تسجيل الدخول أو بدء فترة تجريبية لعرض هذا المحتوى.

المواد

قائمة المواد المستخدمة في هذه المقالة
الاسمالشركةرقم فهرسيالتعليقات
2 '، 7'-ثنائي كلورو فلوريسين DCFH2-DAسيجما ألدريتش064 م 4008 فولت
مقياس الطيف الضوئي Bio-Rad   ؛مختبرات بيو راد ، فيلادلفيا ، بنسلفانيا ، الولايات المتحدة الأمريكية
بوتانول
كاميرا
كاتلاز من كبد البقرSIGMA علوم الحياةSLBZ7596
cyclo(1-8)OPINSERM U1239 NorDiC ، روان
اختبار الاسطوانة (دورق متدرج)
DNPH 
EDTA plusثيرمو ساينتيك  11836714
الإيثانول 70٪
محلول الإيثانول إيثيلاسيتات
برنامج GraphPad   ؛لا جولا ، كاليفورنيا ، الولايات المتحدة الأمريكية
هيدروكلوريد جوانيدينجينون5CCAE310
H2O2 فارماغربAEQ10101-D
حقنة الأنسولين 2 مل
L-epinephrine MP Biomedicals151065
الميثيلين الأزرق   ؛الكيماويات العلمية الحرارية10455081
الماصة الدقيقة 
قارئ الصفيحة الدقيقة Synergy LX-Agilentسينرجي LX-Agilent
MPTPميدكيم اكسبرسHY-15608
MPTP
Na2CO3/NaHCO3 buffer 
كلوريد الصوديوم 0.9
مجموعة Q-RT PCR بخطوة واحدة   ؛نيو إنجلاند بيولابس
بنتوباربيتال   ؛سيجما ألدريتش
مقياس الطيف الضوئي Synergy LX Nanodrop 2000   ؛بيوتيك أجيلينت
حمض الثيوباربيتوريك (TBA ، 0.67٪)   ؛لوبا كيمي الخاص. المحدوده626500025
النصائح
حمض ثلاثي كلورو أسيتيك (TCA ، 20٪)مختبرات سيسكو للأبحاث SRL6740608
ثلاثي الكاشف سيجما ألدريتشMFCD00213058
تريس حمض الهيدروكلوريكثيرمو ساينتيك  J22638. ك 2
تريتون X-100ثيرمو ساينتيك  A16046.AE

المراجع

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,
  1. Mat Taib, C. N., Mustapha, M. M. MPTP-induced mouse model of Parkinson's disease: A promising direction of therapeutic strategies. Bosn J Basic Med Sci. 21 (4), 422-433 (2021).
  2. Dionísio, P. A., Amaral, J. D., Rodrigues, C. M. P. Oxidative stress and regulated cell death in Parkinson's disease. Ageing Res Rev. 67, 101263(2021).
  3. Charvin, D., Medori, R., Hauser, R. A., Rascol, O. Therapeutic strategies for Parkinson disease: Beyond dopaminergic drugs. Nat Rev Drug Discov. 17 (11), 804-822 (2018).
  4. Stoker, T. B., Barker, R. A. Recent developments in the treatment of Parkinson's disease. F1000Res. 9, (2020).
  5. Airavaara, M., Voutilainen, M. H., Wang, Y., Hoffer, B. J. Neurorestoration. Parkinsonism Relat Disord. 18 Suppl 1 (01), S143-S146 (2012).
  6. Guidotti, A., et al. Isolation, characterization, and purification to homogeneity of an endogenous polypeptide with agonistic action on benzodiazepine receptors. Proc Natl Acad Sci U S A. 80 (11), 3531-3535 (1983).
  7. Tonon, M. C., et al. Endozepines and their receptors: Structure, functions and pathophysiological significance. Pharmacol Ther. 208, 107386(2020).
  8. Bahdoudi, S., et al. Neuroprotective effects of the gliopeptide ODN in an in vivo model of Parkinson's disease. Cell Mol Life Sci. 75 (11), 2075-2091 (2018).
  9. Cherait, A., Maucotel, J., Lefranc, B., Leprince, J., Vaudry, D. Intranasal administration of PACAP is an efficient delivery route to reduce infarct volume and promote functional recovery after transient and permanent middle cerebral artery occlusion. Front Endocrinol. 11, 585082(2021).
  10. Bourzam, A., et al. promotes cell survival against 6-OHDA-induced oxidative stress and apoptosis by modulating the expression of miR-34b, miR-29a, and miR-21 in cultured astrocytes. Cells. 13 (14), 1188(2024).
  11. Namsi, A., et al. Octadecaneuropeptide (ODN) induces N2a cells differentiation through a PKA/PLC/PKC/MEK/ERK-dependent pathway: Incidence on peroxisome, mitochondria, and lipid profiles. Molecules. 24 (18), 3310(2019).
  12. Masmoudi-Kouki, O., et al. Cytoprotective and neurotrophic effects of octadecaneuropeptide (ODN) in in vitro and in vivo models of neurodegenerative diseases. Front Endocrinol. 11, 566026(2020).
  13. Scafidi, J., et al. Intranasal epidermal growth factor treatment rescues neonatal brain injury. Nature. 506 (7487), 230-234 (2014).
  14. Lopes, C., et al. IGF-1 intranasal administration rescues Huntington's disease phenotypes in YAC128 mice. Mol Neurobiol. 49 (3), 1126-1142 (2014).
  15. Nonaka, N., et al. Intranasal administration of PACAP: Uptake by brain and brain region targeting with cyclodextrins. Peptides. 36 (2), 168-175 (2012).
  16. Illum, L. Transport of drugs from the nasal cavity to the central nervous system. Eur J Pharm Sci. 11 (1), 1-18 (2000).
  17. Hanson, L. R., Frey, W. H. Intranasal delivery bypasses the blood-brain barrier to target therapeutic agents to the central nervous system and treat neurodegenerative disease. BMC Neurosci. 9 Suppl 3, S5(2008).
  18. Dhuria, S. V., Hanson, L. R., Frey, W. H. Intranasal delivery to the central nervous system: Mechanisms and experimental considerations. J Pharm Sci. 99 (4), 1654-1673 (2010).
  19. Lochhead, J. J., Thorne, R. G. Intranasal delivery of biologics to the central nervous system. Adv Drug Deliv Rev. 64 (7), 614-628 (2012).
  20. Spijker, S., Faliagkas, L., Rao-Ruiz, P. Dissection of rodent brain regions: Guided free-hand slicing and dissection of frozen tissue. Neuroproteomics. 146, 7-19 (2019).
  21. Eyme, K. M., Carvalho, L., Badr, C. E. Intranasal delivery of experimental compounds in orthotopic brain tumor mouse models. STAR Protoc. 2 (1), 100290(2021).
  22. Khan, A. R., Liu, M., Khan, M. W., Zhai, G. Progress in brain targeting drug delivery system by nasal route. J Controlled Release. 268, 364-389 (2017).
  23. Jiang, P. E., et al. Behavioral assessments of spontaneous locomotion in a murine MPTP-induced Parkinson's disease model. J Vis Exp. (143), e58653(2019).
  24. Colombo, G., et al. A step-by-step protocol for assaying protein carbonylation in biological samples. J Chromatogr B Analyt Technol Biomed Life Sci. 1019, 178-190 (2016).
  25. Misra, H. P., Fridovich, I. The role of superoxide anion in the autoxidation of epinephrine and a simple assay for superoxide dismutase. J Biol Chem. 247 (10), 3170-3175 (1972).
  26. Schmittgen, T. D., Livak, K. J. Analyzing real-time PCR data by the comparative CT method. Nat Protoc. 3 (6), 1101-1108 (2008).
  27. Jackson-Lewis, V., Przedborski, S. Protocol for the MPTP mouse model of Parkinson's disease. Nat Protoc. 2 (1), 141-151 (2007).
  28. Dufes, C., Olivier, J. C., Gaillard, F., Gaillard, A., Couet, W., Muller, J. M. Brain delivery of vasoactive intestinal peptide (VIP) following nasal administration to rats. Int J Pharm. 255 (1-2), 87-97 (2003).
  29. Silva, S., et al. Encapsulated escitalopram and paroxetine intranasal co-administration: In vitro/in vivo evaluation. Front Pharmacol. 12, 751321(2021).
  30. Selvaraj, K., Gowthamarajan, K., Karri, V. V. S. R. Nose to brain transport pathways an overview: Potential of nanostructured lipid carriers in nose to brain targeting. Artif Cells Nanomedicine Biotechnol. 46 (8), 2088-2095 (2017).
  31. Jeong, S. H., Jang, J. H., Lee, Y. B. Drug delivery to the brain via the nasal route of administration: Exploration of key targets and major consideration factors. J Pharm Investig. 53 (1), 119-152 (2023).
  32. Cherait, A., Banks, W. A., Vaudry, D. The potential of the nose-to-brain delivery of PACAP for the treatment of neuronal disease. Pharmaceutics. 15 (8), 2032(2023).
  33. Crowe, T. P., Hsu, W. H. Evaluation of recent intranasal drug delivery systems to the central nervous system. Pharmaceutics. 14 (3), 629(2022).
  34. Hanson, L. R., Frey, W. H. Intranasal delivery bypasses the blood-brain barrier to target therapeutic agents to the central nervous system and treat neurodegenerative disease. BMC Neurosci. 9 Suppl 3, S5(2008).
  35. Meredith, G. E., Rademacher, D. J. MPTP mouse models of Parkinson's disease: An update. J Park Dis. 1 (1), 19-33 (2011).
  36. Sarrafchi, A., Bahmani, M., Shirzad, H., Rafieian-Kopaei, M. Oxidative stress and Parkinson's disease: New hopes in treatment with herbal antioxidants. Curr Pharm Des. 22 (2), 238-246 (2016).
  37. Hirsch, E. C., Hunot, S. Neuroinflammation in Parkinson's disease: A target for neuroprotection. Lancet Neurol. 8 (4), 382-397 (2009).
  38. Baillet, A., et al. The role of oxidative stress in amyotrophic lateral sclerosis and Parkinson's disease. Neurochem Res. 35 (10), 1530-1537 (2010).
  39. Mythri, R. B., et al. Evaluation of markers of oxidative stress, antioxidant function and astrocytic proliferation in the striatum and frontal cortex of Parkinson's disease brains. Neurochem Res. 36 (8), 1452-1463 (2011).
  40. Venkateshappa, C., et al. Increased oxidative damage and decreased antioxidant function in aging human substantia nigra compared to striatum: Implications for Parkinson's disease. Neurochem Res. 37 (2), 358-369 (2012).
  41. Ghouili, I., et al. Endogenous expression of ODN-related peptides in astrocytes contributes to cell protection against oxidative stress: Astrocyte-neuron crosstalk relevance for neuronal survival. Mol Neurobiol. 55 (6), 4596-4611 (2018).
  42. Kaddour, H., et al. Antioxidant and anti-apoptotic activity of octadecaneuropeptide against 6-OHDA toxicity in cultured rat astrocytes. J Mol Neurosci MN. 69 (1), 1-16 (2019).

الوصول مقيد. يرجى تسجيل الدخول أو بدء فترة تجريبية لعرض هذا المحتوى.

إعادة الطباعة والأذونات

طلب إذن لإعادة استخدام النص أو الأشكال في مقالة JoVE هذه

طلب إذن

الوسوم

MPTP Caspase 3
الفيديو قريباً

مقالات ذات صلة