يتطلب اشتراك JoVE لعرض هذا المحتوى. تسجيل الدخول أو ابدأ نسخة تجريبية مجانية

مقالة منهجية

ربط الشريان التاجي الأمامي اليسر الهابط في الفئران لتطوير نموذج احتشاء عضلة القلب الانسدادي

1K مشاهدات

⸱

DOI:

10.3791/68143

⸱

أكتوبر 3, 2025

 ,  ,  ,  ,  ,  ,  ,  , 
1Department of Pharmacology, Khalsa College of Pharmacy, 2Khalsa College of Veterinary and Animal Sciences, 3Department of Molecular Biology and Biochemistry, Guru Nanak Dev University, 4Universal Diagnostics, 5Histopathology Department, Fortis Memorial Research Institute

في هذه المقالة

ملخص

يوضح البروتوكول تطوير نموذج احتشاء عضلة القلب (MI) عن طريق ربط الشريان التاجي الأمامي الهابط الأيسر بشكل دائم في الفئران. يعد بقاء بعد MI ضروريا لإنقاذ خلايا عضلة القلب في المنطقة الإقفارية ، ومنع توسع الاحتشاء ، وتقليل التهاب ما بعد عضلة القلب والتليف.

الملخص

تعد أمراض القلب والأوعية الدموية (CVD) ، بما في ذلك أمراض القلب الإقفارية والسكتة الدماغية ، سببا رئيسيا للوفيات والمراضة في جميع أنحاء العالم. احتشاء عضلة القلب هو متلازمة سريرية لأمراض القلب الإقفارية التي تحدث بسبب نقص تروية لفترات طويلة. تخضع عضلة القلب الإقفارية لتغيرات وظيفية وأيضية وهيكلية ، مما يؤدي إلى تلف لا رجعة فيه لجزء من عضلة القلب بسبب النخر. تعد النماذج التجريبية لاحتشاء عضلة القلب ضرورية لفهم التغيرات الخلوية والجزيئية والمورفولوجية الحادة والمزمنة التي تحدث أثناء وبعد احتشاء عضلة القلب ولتطوير وتحسين أهداف أو استراتيجيات جديدة للعلاج. يشبه النموذج الجراحي ل MI في الصغيرة التي تستخدم الإغلاق الدائم للشريان التاجي الأمامي الأيسر (LAD) تقريبا MI البشري. الهدف من هذه الدراسة هو إنشاء نموذج MI المستحث جراحيا يتضمن إغلاق الشريان التاجي LAD بشكل لا يمحى في الفئران. يتضمن البروتوكول التجريبي تحريضا أوليا للتخدير باستخدام الكيتامين 80 مجم / كجم وإزيلازين 12 مجم / كجم ، والتنبيب لقنية القصبة الهوائية باستخدام منظار الأذن دون إجراء بضع القصبة الهوائية تحت التهوية بمساعدة جهاز التنفس الصناعي باستخدام ضغط الزفير النهائي الإيجابي الخارجي (PEEP) لمنع انهيار الحويصلات الهوائية. تم اعتماد إجراء بضع الصدر الذي يحد من الآفات التي تسببها عضلات الهيكل العظمي أثناء الجراحة. هذا النهج طفيف التوغل وقابل للتكرار ويقلل من معدل الوفيات بعد الجراحة. في هذا النموذج ، نجت بعد 4 أيام من MI لفهم التغيرات البيولوجية المرضية قصيرة المدى ، وخاصة التهاب ما بعد MI ، وتكوين الأوعية كعملية طبيعية لشفاء الاحتشاء ، وفي النهاية ، التليف في عضلة القلب المحتشية.

المقدمة

تعد أمراض القلب والأوعية الدموية (CVD) ، التي تشمل بشكل أساسي أمراض القلب الإقفارية (IHD) والسكتة الدماغية ، سببا رئيسيا للوفيات والمراضة في جميع أنحاء العالم. وفقا للاتحاد العالمي للقلب ، توفي 20.5 مليون شخص بسبب أمراض القلب والأوعية الدموية في عام 2021 1,2. احتشاء عضلة القلب (MI) ، المعروف أيضا باسم النوبة القلبية ، هو متلازمة سريرية حادة ل IHD. أثناء MI ، تعاني أنسجة عضلة القلب من تلف لا رجعة فيه نتيجة نقص تروية طويل الأمد ، والذي يحدث عادة بسبب انسداد الجلطة التي تشكلت فوق لوحة تصلب الشرايين الممزقة في الشريان التاجي3.

إعادة التروية في الوقت المناسب باستخدام التدخل التاجي عن طريق الجلد (PCI) أو عوامل حال للتخثر هو العلاج الأساسي لإنقاذ عضلة القلب الإقفارية من النخر3،4. في البلدان المتقدمة ، بسبب زيادة تنفيذ PCI ، انخفضت الوفيات بعد MI ، لكن معدل الإصابة بمرض MI آخذ في الازدياد في البلدان النامية مثل جنوب آسيا5. بعد MI ، يحيط جزء من عضلة القلب التي تخضع للنخر بمنطقة من خلايا عضلة القلب التالفة بشكل عكسي ومنطقة إقفارية. تخضع عضلة القلب الإقفارية لإعادة تشكيل البطين بعد MI والتي يمكن أن تؤدي إلى تمدد البطين وخلل وظيفي ، مما يؤدي في النهاية إلى قصور القلب6.

حاليا ، يتم إجراء أبحاث مكثفة لتعزيز تجديد خلايا عضلة القلب التالفة عن طريق العلاج بالخلايا الجذعية7 ولتسهيل إصلاح عضلة القلب عن طريق تحفيز تكوين الأوعية داخل المنطقة الإقفارية8. ومع ذلك ، هناك حاجة إلى تحسينات كبيرة في الاستراتيجيات للنجاح السريري لكلا النهجين. وبالتالي ، فإن النماذج التجريبية التي تحاكي احتشاء عضلة القلب أو نقص تروية تعتبر ضرورية لفهم التغيرات المرضية والخلوية والجزيئية والمورفولوجية التي تحدث أثناء وبعد MI بحيث يمكن تحديد الأهداف أو الاستراتيجيات العلاجية الجديدة للعلاج وتحسينها للترجمة السريرية. في هذه الدراسة ، تم تطوير نموذج تجريبي ل MI عن طريق إجراء إغلاق الشريان التاجي الأمامي الأيسر الهابط (LAD) بشكل لا رجعة فيه في الفئران. أولا ، تم إجراء التنبيب الرغامي في المخدرة بدون بضع القصبة الهوائية تحت التهوية بمساعدة جهاز التنفس الصناعي عن طريق تطبيق ضغط الزفير النهائي الإيجابي الخارجي (PEEP) لمنع انخماص الرئة (انكماش / انهيار الأكياس الهوائية في الرئتين). تم اعتماد إجراء طفيف التوغل لفتح تجويف الصدر ، وتجنب أي إصابة لعضلات الهيكل العظمي أثناء الجراحة. يتضمن موقع الربط أصل الفرع القطري الأول من LAD ، والذي ينتج احتشاءا كافيا ويحاكي الحالة السريرية لاحتشاء عضلة القلب الانسدادي (OMI). نظرا لأن موقع الربط هو منطقة منتصف LAD ، فإن معدل الوفيات بعد الجراحة ، وكذلك مضاعفات ما بعد الجراحة ، أقل9. في هذا النموذج ، نجت بعد 4 أيام من MI لفهم التعديلات قصيرة المدى التي تحدث في أنسجة عضلة القلب بعد MI وتحديد الأهداف والاستراتيجيات الجديدة لعلاج MI.

الوصول مقيد. يرجى تسجيل الدخول أو بدء فترة تجريبية لعرض هذا المحتوى.

البروتوكول

تم تنفيذ الإجراءات التجريبية وفقا للبروتوكول بعد موافقة لجنة أخلاقيات المؤسسية (IAEC) [البروتوكول رقم. (IAEC/KCP/2023/009)]. تم اتباع المبادئ التوجيهية للجنة الغرض من المراقبة والإشراف (CCSEA) ووزارة البيئة والغابات وتغير المناخ ، حكومة الهند ، في التعامل مع التجارب ورعايتها.

1. التخدير والتنبيب من قنية القصبة الهوائية (المدة: 10-15 دقيقة)

  1. استخدم فئران Wistar من كلا الجنسين ، تزن 200-240 جم ، ويزيد عمرها عن 6 أشهر. سجل وزن الفئران. تخدير الفئران عن طريق إعطاء الكيتامين (80 مجم / كغ) والزيلازين (12 مجم / كغ) وفقا لوزن الجسم من خلال الطريق داخل الصفاق.
    ملاحظة: الكيتامين ، وهو مخدر انفصامي ، ينتج تخديرا سريعا ولكن تجميد جزئي للعضلات10. وبالتالي ، يتم استخدامه مع الزيلازين لإنتاج استرخاء العضلات وتحقيق حالة التخدير الجراحي11.
  2. اضغط على الذيل للتأكد من مدى التخدير. إذا أظهر الفئران ردود أفعال, إدارة 1/3من جرعة الكيتامين. قم بتوصيل وسادة تسخين بجهاز التنفس الصناعي لوضعها فوق طاولة العمليات لتوفير الاحترار الحراري الداخلي.
  3. ضع الجرذ في وضع الاستلقاء الظهري على وسادة التدفئة (الشكل 1 أ). احتفظ بالفئران في هذا الوضع عن طريق تطبيق أشرطة لاصقة ووضع طاولة العمليات في وضع مائل.
  4. اضبط معلمات الجهاز التنفسي لجهاز التنفس الصناعي مع حجم المد والجزر عند 8 مل / كجم (2-3 مل / دقيقة) ، ومعدل التنفس عند 77 نفسا في الدقيقة (نبضة في الدقيقة) ، وذروة الضغط (ذروة ضغط الشهيق) عند 15 سم H2O. لمنع انهيار الرئتين ، اضبط ضغط الزفير النهائي الإيجابي (PEEP) إلى 2 سم H2O.
  5. لإجراء التنبيب الرغامي ، أمسك اللسان وارفعه بملاقط حادة. أدخل منظار الأذن (الشكل 1 ب) في الفم لعرض الأحبال الصوتية وإدخال قنية القصبة الهوائية (الشكل 1 ب والشكل 2 أ) من خلال الأحبال الصوتية. لرؤية لسان المزمار بوضوح ، قم بإسقاط مصباح يدوي حول الحلق من الأعلى.
  6. قم بتوصيل قنية القصبة الهوائية بأنبوب التنفس الصناعي (الشكل 1 أ والشكل 2 ب) وراقب حركات الصدر لتأكيد التنبيب الصحيح. يشير تورم البطن إلى الاشتباه في التنبيب المريء ، كرر التنبيب وفقا للخطوة 1.8.
  7. بعد الانتهاء من جميع الإعداد ، استخدم مجهره تجسيوي جراحي لربط LAD (الشكل 1 أ) ، واستخدم مصباح تسخين أثناء العملية للحفاظ على درجة حرارة جسم الفئران عند 37 درجة مئوية.
  8. ضعي كريم إزالة الشعر على رقبة الفئران ومنطقة الصدر واتركيه لمدة 10 - 20 دقيقة. قم بإزالة فرو الفئران برفق من الرقبة إلى منطقة الصدر.

2. الحث الجراحي لاحتشاء عضلة القلب (المدة: 20 - 25 دقيقة)

  1. استخدم الملقط لنتف الجلد في عملية الخنجري وعمل شق طفيف (حوالي 1 سم) بمساعدة المقص ، متبوعا بالقطع طوليا بدءا من عملية الخنجري ، موجهة نحو العضلة القصية الترقوية الخشائية.
    1. تجنب إيذاء اللفافة لمنع النزيف الحاد. إذا كان هناك نزيف ، فاستخدم مناديل ملفوفة للضغط برفق على منطقة النزيف.
  2. من قاعدة العضلة القصية الترقوية الخشائيةإلى الضلع 5 - 6 ، قم بقطع اللفافة والعضلات الصدرية على طول الجانب الأيسر من القص.
  3. استخدم الملقط لعمل ثقب في المساحةالوربية 3 و 4 باتجاه الجانب الأيسر من القص. لا تتلف القلب أو الرئتين أثناء إحداث ثقب (حوالي 6-8 مم). ضع زقزقة في هذه الخطوة.
  4. استخدم القراص المقطوع بالضلع لقطعالأضلاع 4 و 5 و 6 جنبا إلى جنب مع العضلات الوربية وفصل العضلات الوربية المتبقية بالملقط (الشكل 2 ج).
  5. أدخل ضام الضلع برفق لإبقاء الضلوع بعيدا وفضح القلب (الشكل 2 د). لرؤية الأذين الأيسر بوضوح ، افصل التامور والغودة الصعترية عن الجانب الأمامي من القلب باستخدام الملقط والمقص المنحني.
  6. تحديد موقع الشريان التاجي الأمامي الهابط الأيسر (LAD) للربط بالخياطة.
    1. بعد إزالة التامور بعناية ، حدد LAD على أنه شريان سطحي بارز يمتد قطريا من قاعدة القلب إلى القمة على طول الأخدود بين البطينين. ينقسم LAD إلى مجموعتين من الفروع: أولا ، الفروع الحاجز (S1 و S2) التي تثقب الحاجز بين البطينين. المجموعة الثانية من الفروع ، والتي تسمى الفروع القطرية (D1 و D2) ، تثقب الجزء الأمامي من البطين الأيسر.
    2. حدد المناطق الثلاث من LAD، وهي المناطق القريبة والمتوسطة والبعيدة. LAD القريب: منطقة LAD من أصلها إلى الفرع الأول ، والتي يمكن أن تكون إما حاجز أو قطري ؛ منتصف LAD: المنطقة الواقعة بين الفرع الأول والفرع القطري الثاني. LAD البعيد: تعرف المنطقة الواقعة خلف الفرع القطري الثاني باسم LAD البعيد (الشكل 2E).
    3. يظهر LAD كشريان ضارب إلى الحمرة نابض بجدران أكثر سمكا. لتأكيد موقعه ، اضغط برفق باستخدام ملقط دقيق ، وتشعر بالنبض.
  7. قم بإجراء إغلاق دائم ل LAD بتمرير 8-0 خياطة حريرية في منطقة منتصف LAD بالقرب من أصل الفرع القطري الأول D1 باستخدام حامل إبرة وسحب الخيط برفق ، مما يمنع أي ضرر للقلب (الشكل 2E).
  8. باستخدام الملقط ، قم بعمل عقدتين من الرباط في اتجاه متطابق (عقدة الجراح). اربط الرباط عن طريق عمل عقدة متعددة في اتجاه على الوجهين بمساعدة الملقط.

3. جراحة الوسادة

  1. قم بتنفيذ الخطوات 2.1-2.6. بعد إجراء عملية استئصال الصدر في الجانب الأيسر ، كشف القلب ، ومرر خياطة حريرية ، واسحب أسفل الشريان التاجي الرئيسي الأيسر (LAD) دون ربط.

4. إعطاء الدواء العلاجي (المدة: 2-5 دقائق)

  1. بعد ربط LAD ، حقن دوكسازوزين على الفور 0.06 مجم / كغ عن طريق الوريد من خلال وريد الذيل في مجموعة العلاج (الشكل 3)

5. إغلاق تجويف الصدر بعد العملية الجراحية (المدة: 5 دقائق)

  1. قم بإزالة المباعدات بحيث تعود الأضلاع والعضلات الوربية إلى وضعها الأصلي. أغلق تجويف الصدر عن طريق خياطة العضلات الوربية اليمنى واليسرى باستخدام خياطة حريرية 6-0. قم بعمل غرز بخيطة 4-0 Prolene لإغلاق الجلد (الشكل 2F).

6. رعاية ومراقبة ما بعد الجراحة (المدة: 40 دقيقة - 60 دقيقة)

  1. اتبع الجرذ الذي تم تشغيله للتعافي من التخدير لمدة 40 دقيقة أو أكثر. تأكد من الشفاء التام عن طريق رفع الذيل أو قرصه.
  2. قم بإزالة الوصلة من جهاز التنفس الصناعي مؤقتا وتأكد من التنفس الذاتي المنظم للفئران من خلال فحص الحركة الطبيعية لمنطقة الصدر.
  3. أغلق جهاز التنفس الصناعي وأزل قنية القصبة الهوائية. افصل الأشرطة اللاصقة المثبتة على الأطراف.
  4. حقن الترامادول (12.5 ملغ/كغ) من خلال الطريق داخل الصفاق لتخفيف آلام ما بعد الجراحة.
  5. احتفظ بالفأر على وسادة التسخين للحفاظ على درجة حرارة الجسم عند 37 درجة مئوية لمدة 30 دقيقة على الأقل. راقب الفئران باستمرار بحثا عن أي حالات مرضية ، مثل التنفس غير المنتظم أو الصعوبة ، أو أي علامات خطيرة للاحتشاء.
  6. عندما يكون الجرذ قادرا على التحرك بحرية ، اعتبره في حالة شفاء تام من التخدير. على الرغم من أن الجرذ غير قادر على التحرك طواعية ، احتفظ به في القفص في غضون 45 دقيقة بعد إزالته من جهاز التنفس الصناعي.
  7. راقب الفئران يوميا لأول 4 أيام. في اليوم الرابع ، قم بالتضحية بالجرذ باستخدام غرفة القتل الرحيم CO2 .

7. تحليل العلامات الكيميائية الحيوية لاحتشاء عضلة القلب

  1. تقييم مستوى التروبونين كمؤشر حيوي لاحتشاء عضلة القلب بعد 6 ساعات و 4 أيام من الجراحة في عينات دم.
    1. جمع العينات وتحضيرها: جمع عينة دم (200 ميكرولتر) من وريد الذيل بعد 6 ساعات من الاحتشاء في أنابيب مغلفة ب EDTA أو مغلفة بالهيبارين وعن طريق ثقب مداري رجعي (1 مل) بعد 4 أيام من MI.
      ملاحظة: يفضل أخذ عينة دم كاملة مضادة للتخثر لاختبار Troponin T.
    2. ضع 150 ميكرولتر من العينة على شريط الاختبار باستخدام ماصات القلب ومحاقن الجرعات التي تستخدم لمرة واحدة المتوفرة في المجموعة.
    3. احتضان في درجة حرارة الغرفة لمدة 15-20 دقيقة ، ثم تفسير النتائج بناء على ظهور خط إشارة (خط محمر) في منطقة الكشف في غضون 15-20 دقيقة. استخدم المعلمات التالية: لا يوجد خط كشف ، فقط خط التحكم = سالب ؛ خط الكشف المرئي وخط التحكم = إيجابي (الشكل 6 ب).
  2. اكتشف التروبونين I في عينة مصل الدم باستخدام محلل F القياسي.
    1. جمع العينات وتحضيرها: جمع عينات دم (200 ميكرولتر) من وريد الذيل بعد 6 ساعات من الاحتشاء في أنابيب مغلفة ب EDTA أو مغلفة بالهيبارين وعن طريق ثقب مداري رجعي (1 مل) بعد 4 أيام من MI.
    2. اترك المجموعة وعينة الدم في درجة حرارة الغرفة قبل الاختبار. تحقق من تاريخ انتهاء الصلاحية على ظهر كيس رقائق الألومنيوم. افتح كيس الرقائق وتحقق من جهاز الاختبار (الشكل 4).
    3. أدخل جهاز الاختبار في فتحة الاختبار الخاصة بالمحلل. يقرأ المحلل بيانات الباركود ويتحقق من صحة جهاز الاختبار (الشكل 4).
    4. اجمع 100 ميكرولتر من العينة باستخدام قطارة ذات حجم ثابت (100 ميكرولتر). قم بتوزيع العينة التي تم جمعها في أنبوب المخزن المؤقت للاستخراج. ثم تخلص من قطارة الحجم الثابت المستخدمة (100 ميكرولتر).
    5. امزج العينة وعازلها 2x-3x مع القطارة التي تستخدم لمرة واحدة (100 ميكرولتر). ثم اجمع 100 ميكرولتر من خليط العينة.
    6. بعد تطبيق العينة في بئر العينة لجهاز الاختبار ، اضغط على الفور على زر TEST START الخاص بالمحلل. سيعرض المحلل نتيجة الاختبار تلقائيا في غضون 10 دقائق.
      ملاحظة: في حالة وجود تروبونين I (TnI) ، ربطه بجسيمات اليوروبيوم الدقيقة. سيتم التقاط هذا المركب بواسطة الجسم المضاد الملتقط على خط الاختبار ، وسيتم الكشف عن شدة ضوء التألق بواسطة المحلل.

8. تحليل منطقة الاحتشاء

  1. بعد التضحية بالفئران بعد 4 أيام من المخالفة ، حدد منطقة الاحتشاء باستخدام الطريقة العيانية لصبغة 2،3،5-ثلاثي فينيل تترازوليوم كلوريد (TTC).
    1. قم بإزالة القلب من جسم واحتفظ به طوال الليل عند 4 درجات مئوية. استئصال كل من الأذنين وجذر الشريان الأورطي والبطين الأيمن. قطع البطين الأيسر المجمد إلى شرائح بسمك 2-4 مم باستخدام شفرة جراحية. احتضان شرائح البطين عند 37 درجة مئوية في محلول TTC 1٪ (محضر باستخدام مخزن مؤقت 0.1 M Tris تم الحفاظ عليه عند درجة الحموضة 7.8) لمدة 20 دقيقة.
    2. قم بتحليل نمط التلوين على أنه عضلة القلب القابلة للحياة ، والتي تحتوي على إنزيم نازعة الهيدروجين والعامل المساعد NADH ، باللون الأحمر الملون باللون الأحمر مع TTC بسبب تكوين فورمازان ، في حين أن منطقة عضلة القلب التي تخضع للاحتشاء تظل غير ملطخة.
  2. تحديد المنطقة المصابة بالاحتشاء حسب طريقة الحجم.
    1. ضع شرائح البطين بين شريحتين زجاجيتين وشبكة بلاستيكية شفافة بها 100 مربع في 1 سم موضوعة فوقها.
    2. احسب متوسط مساحة كل شريحة بطينية عن طريق حساب عدد المربعات على كلا الجانبين. وبالمثل ، احسب عدد المربعات التي تقع على مناطق ملطخة وغير ملطخة على كلا الجانبين. تمثل المنطقة الصفراء الباهتة غير الملطخة الجزء المصاب بالاحتشاء ، وتمثل المنطقة الحمراء الجزء القابل للحياة.
    3. عبر عن حجم الاحتشاء كنسبة مئوية من إجمالي حجم البطين الأيسر (٪ LVV).

9. التحليل النسيجي المرضي

  1. تلطيخ الهيماتوكسيلين واليوزين
    1. للحصول على نتائج التشريح المرضي ، قم بالتضحية بالحيوان بعد 4 أيام من ربط LAD ، وإزالة القلب ، واغسله بمخزن الفوسفات (PBS ، الرقم الهيدروجيني 7.4) ، وحفظه في محلول الفورمالين (10٪) على الفور.
    2. قم بإجراء معالجة الأنسجة عن طريق تجفيف الأنسجة لمدة ساعة واحدة في سلسلة من تركيزات الكحول المتزايدة (70٪ ، 80٪ ، 95٪ ، 95٪ والكحول المطلق) بحيث يتم إزالة الماء من الأنسجة ويدخل الكحول داخل الأنسجة. قم بإزالة الكحول من الأنسجة عن طريق الغمر في الزيلين.
    3. بعد التنظيف ، انقل الأنسجة باستخدام الملقط إلى شمع البارافين المنصهر في قالب من الفولاذ المقاوم للصدأ. ينتشر عامل المقاصة ، ويتسلل الشمع المصهور إلى الأنسجة. برد القالب على الطبق البارد لترسيخ البارافين. عندما يتم تبريد الشمع تماما وتصلبه (30 دقيقة) ، قم بإزالة كتلة البارافين بسهولة من القالب.
    4. قم بقص كتل البارافين التي تحتوي على أنسجة مدمجة إلى أقسام بسمك 4 ميكرومتر باستخدام ميكروتوم. ضع شريط أقسام البارافين في حمام مائي عند 40-45 درجة مئوية. قم بتركيب الأقسام على شريحة وجفف الشريحة في الهواء أو قم بتسخين الشريحة برفق. بعد ذلك ، قم بإزالة البارافين من الأقسام عن طريق غسلها بالزيلين وإعادة ترطيبها بالكحول المطلق والماء.
    5. وصمة عار مع الهيماتوكسيلين لمدة 15 دقيقة. اغسل الأجزاء الملطخة بالماء وعالجها بخليط كحول حمضي 1٪ لمدة 20 ثانية.
    6. بعد الغسيل بالماء ، قم بتلطيخ الأقسام ب counterstain (محلول مائي 1٪ من اليوزين) لمدة دقيقتين. راقب الشرائح تحت المجهر لتصور التغيرات النسيجية المرضية عند تكبير 10x و 40x.
  2. تلطيخ ماسون ثلاثي الألوان
    1. قم بإعداد الكواشف التالية.
      1. محلول بوين: أضف 75 مل من حمض البيكريك المشبع ، و 25 مل من 40٪ فورمالديهايد ، و 5 مل من حمض الخليك الجليدي. محلول الهيماتوكسيلين الحديدي من Weigert: تحضير محلول المخزون A الذي يحتوي على الهيماتوكسيلين 1 جم في 100 مل من الكحول بنسبة 95٪. قم بإعداد محلول المخزون B الذي يحتوي على 29٪ كلوريد الحديديك في 4 مل من الماء ، و 1 مل من حمض الهيدروكلوريك المركز ، و 95 مل من الماء المقطر. أضف أجزاء متساوية من محلول المخزون A و B للاستخدام. الخليط مستقر فقط لمدة لا تزيد عن 3 أشهر.
      2. محلول فوشين بيبريش القرمزي: أضف 90 مل من 1٪ مائي Biebrich Scarlet ، و 10 مل من 1٪ فوسكين حمض مائي ، و 1 مل من حمض الخليك الجليدي. محلول حمض الفوسفوتونجستيك الفوسفوتونجستي: أضف 25 مل من حمض الفوسفوتولبيك 5٪ و 25 مل من حمض الفوسفوتونجستيك 5٪. محلول الأنيلين الأزرق: أضف 2.5 جم من الأنيلين الأزرق و 2 مل من حمض الخليك الجليدي إلى 100 مل من الماء المقطر. 1٪ محلول حمض الخليك الجليدي.
    2. قم بإزالة البارافينات من أقسام القلب المضمنة بالبارافين باستخدام الزيلين ، متبوعا بالإماهة بتركيزات مختلفة من الكحول.
    3. احتضن أقسام القلب بمحلول بوين لمدة 30 دقيقة عند 56 درجة مئوية لزيادة كثافة اللون النهائية. اشطف الأقسام بماء الصنبور الجاري حتى تتم إزالة اللون الأصفر.
    4. وصمة عار المنديل مع الهيماتوكسيلين لمدة 1 دقيقة ، ثم اغسلها بماء الصنبور الجاري لمدة 2-3 دقائق. تلطيخ الأقسام بمحلول الفوشسين بحمض القرمزي بيبريش لمدة 15 دقيقة.
    5. التفريق مع 5٪ فوسفوموليبديك - حمض الفوسفوتونستيك لمدة 5-8 دقائق. انقل القسم مباشرة (بدون شطف) إلى محلول أزرق أنيلين لمدة 6-8 دقائق.
    6. يغسل بالماء المقطر. ثم ، التفريق بمحلول حمض الخليك 1٪. جفف بنسبة 95٪ إيثانول ، وامسح مع الزيلين ، وقم بتثبيته على الشريحة ، وافحص تحت المجهر12.

الوصول مقيد. يرجى تسجيل الدخول أو بدء فترة تجريبية لعرض هذا المحتوى.

النتائج

التنبيب الرغامي ضروري للمساعدة في التهوية أثناء إجراء ربط LAD الذي يتضمن إجراءات الصدر المفتوح في الفئران. يتم تأكيد التنبيب الناجح من خلال معلمات الجهاز التنفسي القاعدية قبل الجراحة والحفاظ على تنفس مستقر وحجم المد والجزر وحجم الدقيقة أثناء العملية الجراحية (الشكل 5).

تم تأكيد نجاح إجراء ربط LAD من خلال تقييم التروبونين T والتروبونين I القلبي كعلامات كيميائية حيوية لإصابة عضلة القلب13 ، وقياس حجم الاحتشاء ، ومراقبة التغيرات النسيجية المرضي...

الوصول مقيد. يرجى تسجيل الدخول أو بدء فترة تجريبية لعرض هذا المحتوى.

المناقشة

تمثل دراستنا الحالية تحريض احتشاء عضلة القلب من خلال الإغلاق الدائم للشريان التاجي الأمامي الهابط الأيسر (LAD) في الفئران. في هذا البروتوكول الجراحي ، أدى تخدير الكيتامين 80 مجم / كجم الذي يتم إعطاؤه عن طريق داخل الصفاق ، إلى التخدير السريع ، جنبا إلى جنب مع إعطاء زيلازين 12 مجم / كجم داخل الصفاق ، إلى استرخاء كاف للعضلات ، وبالتالي تسهيل العملية الجراحية بأكملها بشكل فعال بالإضافة إلى التعافي السلس بعد الجراحة بعد فترة قصيرة مع الحد الأدنى من الآثار الجانبية. تم إنشاء بروتوكولات تخدير م...

الوصول مقيد. يرجى تسجيل الدخول أو بدء فترة تجريبية لعرض هذا المحتوى.

الإفصاحات

وقد كشف جميع المؤلفين عن أي وجميع تضارب المصالح.

شكر وتقدير

الدكتور رافي كومار داوان ، مدير كلية خالصة للصيدلة ، أمريتسار ، لتقديم التوجيه والدعم لشراء جميع المعدات الجراحية ؛ إدارة مجلس إدارة كلية خالصة لتوفير الأموال. الدكتور هاريش كومار فيرما ، مدير كلية خالصة للعلوم البيطرية والحيوانية ، أمريتسار لتقديم عينة هدية من الكيتامين والزيلازين. الدكتورة ريخا سينغ ، قسم علم الأنسجة ، معهد فورتيس التذكاري للأبحاث ، جورجاون لمرافق علم الأنسجة المرضية والدرجات ؛ السيد هيمانت أرورا، دكتور في الطب، التشخيص الشامل الذي يوفر تسهيلات لتقييم تروبونين 1؛ الدكتورة راشنا هورا ، أستاذ مشارك ، قسم البيولوجيا الجزيئية والكيمياء الحيوية لتقنيات النشاف.

الوصول مقيد. يرجى تسجيل الدخول أو بدء فترة تجريبية لعرض هذا المحتوى.

المواد

قائمة المواد المستخدمة في هذه المقالة
الاسمالشركةرقم فهرسيالتعليقات
قنية وريدية قياس 18كينت العلمي, الولايات المتحدة
قنية وريدية عيار 20كينت العلمي, الولايات المتحدة
4-0 خياطة البولي بروبلينخانا الجراحية
6-0 خياطة حريريةناناك الجراحي
8-0 خياطة الحريرناناك الجراحي
ملقط أدسونناناك الجراحي
جهاز التخديرأوركيد العلمية
غرفة تحريض التخديرأوركيد العلمية
مقص منحنيناناك الجراحي
أنبوب التنبيب الرغاميكينت العلمية ، الولايات المتحدة
كريم إزالة الشعرناناك الجراحي
وسادة التدفئةكينت العلمي, الولايات المتحدة
ملقط مدمن مخدراتناناك الجراحي
الكيتامينعينة هدية من KVAS ، أمريتسار
حامل إبرة صغيرةناناك الجراحي
قفازات النتريل ناناك الجراحي
جدول العمليات
منظار الأذنناناك الجراحي
ملقط البازلاءناناك الجراحي
ضام الضلعناناك الجراحي
ملاقط مستقيمناناك الجراحي
القراص المضيقناناك الجراحي
غطاء الشعر الجراحيناناك الجراحي
قناع جراحيناناك الجراحي
المجهر المجسم الجراحيأوليمبوس ماغنوس24B1187مجهر ستيريو زووم MSZ-TR مع حامل ذراع الذراع ، نسبة التكبير: 1: 7 تقريب موضوعي: 0.65 - 4.5x العدسة 10x / 22 مم التكبير: 6.5 - 45x مع 10x قطعة العين LED حلقة الإضاءة
ملقط بلا أسنانناناك الجراحي
ترامادولعينة هدية من مستشفى أمانديب ، ASR
الملقطناناك الجراحي
جهاز التنفس الصناعيRoVent (Kent Scientific ،   الولايات المتحدة)RV-04-220جهاز تهوية أوتوماتيكي مع التحكم في الحجم والضغط وتسخين درجة الحرارة ومراقبتها
زيلازينعينة هدية من KVAS ، أمريتسار

المراجع

  1. World Heart Report. , World Heart Federation. https://world-heart-federation.org/wp-content/uploads/World-Heart-Report-2023.pdf (2023).
  2. Lindstrom, M., et al. Global Burden of Cardiovascular Diseases and Risks Collaboration, 1990-2021. J Am Colleg Cardiol. 80 (25), 2372-2425 (2022).
  3. Byrne, R. A., et al. ESC guidelines for the management of acute coronary syndromes. Eur Heart J. 44 (38), 3720-3826 (2023).
  4. Widimsky, P., et al. Long distance transport for primary angioplasty vs immediate thrombolysis in acute myocardial infarction. Final results of the randomized national multi-center trial-PRAGUE-2. Eur Heart J. 24 (1), 94-104 (2003).
  5. Roth, G. A., et al. Global, regional, and national age-sex-specific mortality for 282 causes of death in 195 countries and territories, 1980-2017: a systematic analysis for the Global Burden of Disease Study 2017. Lancet. 392, 1736-1788 (2018).
  6. Frangogiannis, N. G. The mechanistic basis of infarct healing. Antioxid Redox Signal. 8, 1907-1939 (2006).
  7. Gill, J. K., Rehsia, S. K., Verma, E., Sareen, N., Dhingra, S. Stem cell therapy for cardiac regeneration: past, present, and future. Can J Physiol Pharmacol. 102, 161-179 (2024).
  8. Robich, M. P., et al. Myocardial therapeutic angiogenesis: a review of the state of development and future obstacles. Expert Rev Cardiovasc Ther. 9 (11), 1469-1479 (2011).
  9. Ahn, D., et al. Induction of myocardial infarcts of a predictable size and location by branch pattern probability-assisted coronary ligation in C57BL/6 mice. Am J Physiol Heart Circ Physiol. 286, H1201-H1207 (2004).
  10. Domino, E. F. Taming the ketamine tiger. 1965. Anesthesiology. 113, 678-684 (2010).
  11. Van Pelt, L. F. Ketamine and Xylazine for surgical anesthesia in rats. J Am Vet Med Assoc. 171, 842-844 (1977).
  12. Li, C., et al. Silver nanoparticles/chitosan oligosaccharide/ poly(vinyl alcohol) nanofiber promotes wound healing by activating TGFβ1/Smad signaling pathway. Silver nanoparticles/chitosan oligosaccharide/ poly(vinyl alcohol) nanofiber promotes wound healing by activating TGFβ1/Smad signaling pathway. Int J Nanomedicne. 11, 373-387 (2016).
  13. Thygesen, K., et al. Fourth universal definition of myocardial infarction. Eur Heart J. 40, 237-269 (2018).
  14. Radha, R., Shahzadi, S. K., Al-Sayah, M. H. Fluorescent Immunoassays for Detection and Quantification of Cardiac Troponin I: A Short Review. Molecules. 26, 4812(2021).
  15. Srikanth, G. V. N., Parkash, P., Tripathy, N. K., Dixit, M., Nityanand, S. Establishment of a rat model of myocardial infarction with a high survival rate: A suitable model for evaluation of efficacy of stem cell therapy. J Stem Cells Regen Med. 5 (1), 30-36 (2004).
  16. Lugrin, J., Parapanov, R., Kueger, T., Liaudet, L. Murine Myocardial Infarction Model using Permanent Ligation of Left Anterior Descending Coronary Artery. J Vis Exp. (150), e59591(2019).
  17. Kast, S., et al. Simplification of rat intubation on inclined metal plate. Adv Physiol Educ. 28, 29-32 (2004).
  18. Maruyama, K., et al. Anterior descending coronary artery in mice to generate a model of myocardial infarction. STAR Protoc. 2, 100775(2021).
  19. Pop, I. C., et al. Induction of a chronic myocardial infarction in the laboratory animal - experimental model. Clujul Medical. 86 (4), 334-339 (2013).
  20. Durant, E., Singh, A. Acute first diagonal artery occlusion: a characteristic pattern of ST elevation in noncontiguous leads. Am J Emerg Med. 33 (9), 1326.e3-1326.e5 (2015).
  21. McLaren, J., et al. From ST-Segment Elevation MI to Occlusion MI: The New Paradigm Shift in Acute Myocardial Infarction. JACC Adv. 3 (11), 101314(2024).
  22. Kasturi, S., Bandimida, S., Gajiwal, N., Thakkar, A. A Challenging Case of Bifurcation Lesion in Left Anterior Descending Artery: Managed Successfully with Everolimus-Eluting Bioresorbable Vascular Scaffold and Kissing Balloon Technique under Optical Coherence Tomography Guidance. Heart India. 3 (3), 79-81 (2015).
  23. Meyers, H. P., et al. Comparison of the ST-elevation myocardial infarction (STEMI) vs. NSTEMI and occlusion MI (OMI) vs. NOMI paradigms of acute MI. J Emerg Med. 60, 273-284 (2021).

الوصول مقيد. يرجى تسجيل الدخول أو بدء فترة تجريبية لعرض هذا المحتوى.

إعادة الطباعة والأذونات

الوسوم

الفيديو قريباً
اتصل بنا
أوصِ بها للمكتبة

الخصوصية

شروط الاستخدام

السياسات

2026 © حقوق الطبع والنشر MyJoVE Corporation. جميع الحقوق محفوظة.