يتطلب اشتراك JoVE لعرض هذا المحتوى. تسجيل الدخول أو ابدأ نسخة تجريبية مجانية

مقالة منهجية

فحص حقول العدس لوجود ذبول الفيوزاريوم وتعفن الجذور في تركيا في ظل المناخ الأرضي

846 مشاهدة

⸱

DOI:

10.3791/68156

⸱

أبريل 11, 2025

 ,  ,  , 
1Department of Plant Protection, Faculty of Agriculture, Yozgat Bozok University, 2Department of Plant Protection, Faculty of Agriculture, University of Tokat Gaziosmanpaşa, 3Department of Field Crops, Faculty of Agriculture, Yozgat Bozok University

في هذه المقالة

ملخص

وجدت دراسة أجريت في مقاطعة يوزغات أن العوامل الحيوية ، مثل الأمراض الفطرية مثل الذبول وتعفن الجذور ، تحد من إنتاج العدس. تم العثور على عزلات الفيوزاريوم في 95.4٪ من العينات ، مما يشير إلى مسوحات محلية دورية ومراقبة منتظمة لتطوير التكنولوجيا المستدامة واستراتيجيات المكافحة الفعالة.

الملخص

العدس هو نبات مهم من محاصيل البقوليات ذاتية التلقيح. إنتاجه محدود بعوامل حيوية مختلفة ، وخاصة العوامل الفطرية التي تسبب مركب الذبول وتعفن الجذور. هدفت الدراسة إلى فهم علم الأوبئة الإقليمية ومسببات العوامل الفطرية المسببة للأمراض النباتية لتطوير استراتيجيات مكافحة الفيوزاريوم المنقول بالتربة. بحثت هذه الدراسة في 83 موقعا لبذر العدس في مقاطعة يوزغات بحثا عن أمراض الذبول وتعفن الجذور والتاج التي تسببها أنواع الفيوزاريوم الشائعة خلال عامي 2022 و 2023. تم جمع نباتات العدس ذات الأعراض لعزل الفطريات وتحديدها. تم تجميع عزلات الفيوزاريوم وفقا لمورفولوجيا المستعمرة واستزراعها على وسط المساعد الشخصي الرقمي. علاوة على ذلك ، تم تحليل الحمض النووي الجيني الذي تم الحصول عليه من عزلات الفيوزاريوم باستخدام تفاعل البوليميراز المتسلسل ومقارنتها مع عزلات الفيوزاريوم الأخرى المسجلة في NCBI GenBank. تم تحديد العلاقات الجينية بين عزلات الفيوزاريوم باستخدام طريقة الحد الأقصى للبخل (MP) في برنامج Mega 11. تم تحديد النتائج ومتوسط معدل الإصابة وشدة المرض لأمراض الذبول وتعفن الجذور في مقاطعة يوزغات بنسبة 16.9٪ و 38.6٪ على التوالي. تم العثور على عزلات الفيوزاريوم في 95.4٪ من العينات. كان هناك تجانس تسلسل النيوكليوتيدات بنسبة 99.5٪ إلى 100٪ بين F. oxysporum و F. culmorum و F. graminearum و F. acuminatum و F. solani عزلات ، والأنواع الأكثر عزلة كانت F. oxysporum. تم تقسيم مخطط الشجيرات MP لعزلات الفيوزاريوم إلى فرعين رئيسيين ، تضمن الفرع الأول جميع عزلات F. solani . وشمل الفرع الرئيسي الثاني أنواعا أخرى من الفيوزاريوم معزولة في هذه الدراسة وفي NCBI GenBank. تقترح الدراسة مسوحات محلية دورية لتحديد تواتر ذبول الفيوزاريوم لقمع العدس. يقترح بشدة قمع الأضرار القائمة على الفيوزاريوم في الوقت المناسب للسيطرة على المرض والحفاظ على نظام إنتاج العدس.

المقدمة

العدس (Lens culinaris Medik.) ، وهو بقوليات صغيرة صالحة للأكل تنتمي إلى عائلة البقوليات ، هو محصول ذاتي التلقيح في الموسم البارد بأوراق تشبه الإبرة وأزهار بيضاء إلى أرجوانية شاحبة أو أرجوانية داكنة1. تم تدجينها من قبل البشر منذ حوالي 10,000 عام في جزء بلاد ما بين النهرين من الهلال الخصيب وسرعان ما انتشرت إلى العالم الجديد ، بما في ذلك حوض البحر الأبيض المتوسط وآسيا الوسطى ، وبعد ذلك تم تجنيسها في الأمريكتين2. تبلغ مساحة زراعة العدس العالمية حوالي 5.5 مليون هكتار بإنتاج 6.6 مليون طن3. تحتل تركيا المرتبةالرابعة في إنتاج العدس بعد كندا والهند وأستراليا. تعتبر زراعة العدس في تركيا مهمة جدا وتمثل 6.7٪ من الإنتاج العالمي. يبلغ إجمالي إنتاج العدس في تركيا 474.000 طن ويتم إنتاجه في 40 مقاطعة على الأقل. حوالي 89.5٪ من إنتاج العدس في تركيا يتكون من العدس الأحمر والأخضر ، والذي يشكل 10.5٪ من محصول الشتاء في منطقة جنوب شرق الأناضول. يزرع باقي المحصول كمحاصيل صيفية. تساهم محافظات يوزغات (39.5٪) وقونية (23.7٪) وقرشهير (16.3٪) وتشوروم (7.6٪) وأنقرة (2.9٪) بشكل كبير في إنتاج العدس الأخضر4. يمكن أن يكون إنتاج العدس محدودا بعوامل الإجهاد الحيوي وغير الأحيائي الصقيع والجفاف هما أكثر عوامل الإجهاد اللاأحيائي شيوعا في إنتاج العدس الأخضرالصيفي 5. الأمراض الفطرية مثل الذبول وجذور وتعفن التاج التي تسببها أنواع Ascochyta lentis و Rhizoctonia solani و R. bataticola و Aphanomyces euteche و Pythium و Fusarium هي أهم الأمراض الفطرية التي تسبب مجموعة من الأمراض بما في ذلك التخميد ولفحة الشتلات والذبول وتعفن الجذور ، اعتمادا على توقيت الإصابة وقابلية المضيف وظروف الأرصادالجوية 6،7 ، 8.

الفيوزاريوم هو فطر خيطي غير كامل موجود في التربة والنباتات والركائز العضوية وهو جنس عالمي بين هذه مسبباتالأمراض 9. يسبب أمراضا مختلفة مثل ذبول الفيوزاريوم ، وتعفن الجذور ، وطوق الجذور ، وكذلك لفحة رأس الفيوزاريوم في القمح ، وذبول الفيوزاريوم في القرعيات ، وتعفن الجذور في معظم البقوليات ، بما في ذلك العدس10،11،12. ذبول الأوعية الدموية وتعفن الجذور وطوق الجذور الناجم عن الفيوزاريوم spp. هو أهم أمراض العدس في العديد من مناطق زراعة العدس على مستوىالعالم 10. Fusarium oxysporum هو أكثر أنواع الفيوزاريوم شيوعا المرتبطة بالذبول وتعفن الجذور وطوق الجذور في العدس. على الصعيد العالمي ، تحدث أمراض الذبول والجذور وتعفن التاج بسبب F. graminearum و F. sporotrichioides و F. equity و F. acuminatum و F. redolent و F. avenaceum و F. culmorum و F. solani و F. verticillioides في مناطق زراعة العدس7. أمراض الذبول وتعفن الجذور والتاج التي تسببها الفيوزاريوم تحدث في كل من مراحل الشتلات والبالغين وتسبب الذبول المفاجئ والجفاف وموت الأوراق في نهاية المطاف. تشمل أعراض المرض تعفن البذور ، وتعفن الجذور ، وذبول المنشورات العلوية ، والتقزم ، والانكماش ، وتجعد الأوراق. في مراحل ملء القرون الوسطى والمتأخرة ، عادة ما تتقلص البذور ، وتشمل أعراض الجذر توقف النمو ، وتغير اللون البني ، وتالف أطراف الجذر الرئيسي ، وتكاثر الجذور الثانوية. قد لا يظهر تغير لون أنسجة الأوعية الدموية في جميع الحالات13.

في منطقة الأناضول الوسطى ، أجريت دراسات حول حالة أمراض الذبول وتعفن الجذور في العدس بأعداد محدودة. تتمتع Yozgat بمناخ معتدل ومعتدل مع هطول أمطار غزيرة في الشتاء عند مقارنتها بالصيف وتصنف على أنها Dsb (مناخ أرضي دافئ ورطب) بواسطة Köppen و Geiger14. يبلغ متوسط درجة الحرارة 9.6 درجة مئوية ويبلغ متوسط هطول الأمطار 512 ملم. يقع Yozgat في نصف الكرة الشمالي. يحدث الصيف في يونيو ويوليو وأغسطس وسبتمبر. من المهم جدا الحصول على معلومات حول علم الأوبئة الإقليمية ومسببات العوامل الفطرية المسببة للأمراض النباتية التي تسبب المرض لتطوير استراتيجيات تحكم مختلفة ضد الفيوزاريوم التي تنقلها التربة ، للسيطرة على المرض15. في هذا السياق ، تتمثل أهداف الدراسة الحالية في تحديد وتحديد - معايير المرض (انتشار المرض ، والإصابة ، وشدته) لأمراض الذبول والجذور وتعفن التاج في العدس من خلال إجراء مسح في مقاطعة يوزغات ، حيث يتم إجراء ما يقرب من 40٪ من إجمالي إنتاج العدس الأخضر منفردة ، الفيوزاريوم الممرض الأنواع التي تسبب الذبول وتعفن الجذور في العدس عن طريق التحليلات المورفولوجية والجزيئية ، ولتحديد مستويات الفوعة الفردية لأنواع الفيوزاريوم من خلال إجراء اختبارات الإمراضية.

الوصول مقيد. يرجى تسجيل الدخول أو بدء فترة تجريبية لعرض هذا المحتوى.

البروتوكول

ملاحظة: تفاصيل الكواشف والمعدات المستخدمة في الدراسة مدرجة في جدول المواد.

1. المسح الميداني وأخذ العينات والعزل الفطري

ملاحظة: تم تنفيذ أعمال المسح في عامي 2022 و 2023 ، وفقا ل Endes16. لوحظ ما مجموعه 83 منطقة لزراعة العدس تغطي تسع مناطق في مقاطعة يوزغات لمرض الذبول والجذور وتعفن طوق الجذور (الشكل 1).

  1. حدد حقول العدس التي تزيد مساحتها عن 1000 م2 كمنطقة أخذ العينات. اجمع كل عينة عن طريق المشي بشكل عشوائي من الحدود إلى وسط أو منتصف الحقل بواسطة التعرجات التي تمشي على طول الأقطار باستخدام إطار 1 م2 ، ووضعها بشكل عشوائي عند ثلاث نقاط مختلفة على الأقل تم اختيارها عشوائيا. جمع نباتات العدس التي تظهر عليها أعراض المرض من كل نقطة ، ووضعها في أكياس ورقية ، ونقلها إلى المختبر لاستخدامها في دراسات عزل الفطريات وتحديد الهوية.
    ملاحظة: تم غسل جذور وأطواق جذور نباتات العدس المريضة المنقولة إلى المختبر أولا بماء الصنبور للتخلص من المخلفات الخشنة. في وقت لاحق ، تعرضوا للتطهير السطحي لعزل مسببات الأمراض الفطرية كما هو موضح في Endes16.
  2. انقع الأنسجة النباتية المريضة في 70٪ من الإيثانول لمدة 10-15 ثانية ، ثم اشطفها 3 مرات لمدة 3 دقائق في ماء معقم. احتفظ بها جميعا في هيبوكلوريت الصوديوم 1٪ (NaOCl) لمدة 5 دقائق ، واشطفها 3 مرات لمدة 5 دقائق مرة أخرى بالماء المعقم.
  3. جفف الأنسجة النباتية المبللة على أوراق الترشيح في خزانة معقمة لإنهاء عملية تطهير السطح. بعد ذلك ، قم بتقطيع الأنسجة النباتية المطهرة إلى قطع بطول 5-10 مم وضع 4-5 قطع على وسط PDA يحتوي على 0.01٪ ستربتومايسين داخل أطباق بتري (قطر 90 مم). ضع أطباق بتري في حاضنة في الظلام عند 25 ± 1 درجة مئوية لمدة 4-7 أيام ولاحظ نمو الفطريات.
    ملاحظة: تم تنقية العزلات الفطرية النامية من خلال طريقة عزل الأبواغ الفردية. لهذا الغرض ، تم تعديل الدراسة التي أجراها Choi et al.17 حول الحصول على مزارع بواغية مفردة من الفطريات التي تنتمي إلى الفطريات القاعدية والفطريات القاعدية والفطريات العضوية واستخدامها كما هو موضح أدناه.
  4. لتنقية العزلات الفطرية ، احتفظ بالعزلات الفطرية التي تم الحصول عليها في نهاية دراسات العزل في حاضنة عند 25 ± 1 درجة مئوية لمدة 12 ساعة من ضوء الفلورسنت / 12 ساعة من الظلام لمدة 15 يوما لتشجيع تكوين هياكل التكاثر المشوهة على المساعد الشخصي الرقمي.
  5. قم بوزن حوالي 100 مجم من الفطريات الفطرية من الثقافات التي يبلغ عمرها 15 يوما باستخدام ملعقة ، ثم انقلها إلى أنبوب طرد مركزي دقيق معقم سعة 1.5 مل ، ثم قم بطحنها جيدا باستخدام مدقات بلاستيكية معقمة للتجانس.
  6. أضف 1 مل من الماء المعقم والدوامة لمدة 1 دقيقة لضمان نقل الجراثيم إلى الماء. لضبط عدد الجراثيم التي تنتقل إلى الماء ، ارسم 20 ميكرولتر من هذا الخليط باستخدام ماصة وتحقق من عدد الجراثيم تحت تكبير 10x للمجهر الضوئي.
  7. عندما تكون كمية الجراثيم أكثر من الكمية المطلوبة ، قم بتخفيف خليط الماء البوغ بنسب مثل 1/10 و 1/100 و 1/1000. توفير خليط يحتوي على 4-6 جراثيم في مجال رؤية المجهر.
  8. خذ 100 ميكرولتر من معلق البوغ المحضر وانقله إلى أطباق بتري بقطر 90 مم تحتوي على وسط المساعد الشخصي الرقمي المكمل بنسبة 0.1٪ ستربتومايسين. بعد ذلك ، انشر التعليق المنقول على المساعد الرقمي الشخصي باستخدام ملعقة Drigalski.
  9. احتضان أطباق بتري المحضرة في الظلام عند 25 ± 1 درجة مئوية لمدة 12-24 ساعة. في نهاية هذه الفترة ، قم بنقل قطع صغيرة من الخيوط المطورة من كونيديا واحدة مع حلقة تلقيح إلى طبق بتري جديد يحتوي على وسط القناة الشريانية. كل ثقافة يتم الحصول عليها من كل بوغ هي ثقافة بوغ واحدة. قم بتخزينها لاستخدامها في اختبارات الإمراض وتحديد المورفولوجية والجزيئية.
    ملاحظة: الغرض الرئيسي هو الحفاظ على العزلات الفطرية على قيد الحياة لفترة طويلة دون تغيير مورفولوجيتها وجيناتها وضراوتها. تم تنفيذ عملية التخزين باستخدام طريقتين مختلفتين18،19. يتم شرح جميع طرق التخزين المستخدمة في هذه الدراسة بالتفصيل أدناه.
    1. الطريقة الأولى لتخزين العينات هي كما يلي. تنمو العزلات الفطرية على وسط المساعد الشخصي الرقمي عند 25 ± 1 درجة مئوية مع 12:12 ساعة مظلمة: ضوء لمدة 15 يوما للحصول على أقراص فطريات قطرها 4 مم يمكن تخزينها في ماء معقم.
    2. قطع أقراص الفطريات (قطرها 4 مم ، 10 أقراص) بحفار الفلين من الثقافات الفطرية التي نمت في ظل الظروف المذكورة أعلاه. انقل أقراص الفطريات إلى أنابيب الطرد المركزي الدقيقة التي تحتوي على 1 مل من الماء المعقم. احتفظ بالعينات في أنابيب أجهزة الطرد المركزي الدقيقة في الثلاجة عند -20 درجة مئوية لمدة 6 أشهر.
    3. الطريقة الثانية لتخزين العينات هي كما يلي. أولا ، خذ قليلا من القرص الفطري النقي من مزارع الأبواغ المفردة التي تم الحصول عليها بحلقة تلقيح وانقله إلى أطباق بتري التي تحتوي على المساعد الشخصي الشخصي المكمل بالكلورامفينيكول وحمض اللاكتيك والأمبيسلين والريفامبيسين والتتراسيكلين والستربتومايسين ، إلخ.
    4. تنمو لمدة 5-10 أيام قبل عملية التخزين عند 25 ± 1 درجة مئوية مع 12 ساعة: 12 ساعة مظلمة: حالة خفيفة. قص وتعقيم أوراق الترشيح للأغراض العامة مقاس 1 سم × 1 سم في الأوتوكلاف عند 121 درجة مئوية ، 15 رطل لكل بوصة مربعة لمدة 60 دقيقة.
    5. ضع أوراق الترشيح في أطباق بتري جديدة بنفس الوسط أو الانتقائي. قطع المستعمرات / الجراثيم من الثقافة الفطرية النقية وضعها في الجزء العلوي من كل قطعة.
    6. أغلق أطباق بتري وضعها في حاضنة في ظروف نمو مناسبة (كما هو مذكور أعلاه). تنمو العزلات الفطرية ببطء على ورق الترشيح. احتضن لمدة 15 يوما تقريبا لضمان الاستعمار الكامل.
    7. بعد التبوغ أو تكوين المستعمرة الكاملة على أوراق الترشيح ، انقل قطع الورق الفردية إلى طبق بتري جديد بدون وسيط ثقافة. في وقت لاحق ، ضع أطباق بتري في الحاضنة حتى يجف ورق الترشيح والفطريات تماما (حوالي 20-30 يوما).
    8. بعد التجفيف ، ضع 10 قطع من ورق الترشيح في كل مغلف ورقي معقم ، وقم بتسمية كل مغلف ، وضع هذه الأظرف في أكياس بلاستيكية ، وقم بتخزين الأكياس البلاستيكية التي تحتوي على الأظرف في وعاء بلاستيكي وشفاف عند -20 درجة مئوية.
  10. احسب معدل انتشار مرض ذبول العدس وجذوره وتعفن التاج في يوزغات وفقا للصيغة الواردة أدناه ، مع مراعاة انتشار المرض في كل حقل من حقل العدس ، متبوعا باسم قضاء المقاطعة.
    معدل انتشار المرض (٪) = (أ / ب) × 100
    حيث يشير a إلى عدد الحقول المريضة ؛ يشير b إلى العدد الإجمالي للحقول التي تم مسحها في منطقة معينة.
  11. احسب معدل الإصابة بالمرض وفقا لطريقة المتوسط المرجح التي أبلغت عنها بورا وكاراجا20. عد النباتات في كل مربع في الحقل. افصلها إلى نباتات مريضة وغير مريضة في كل مربع واحسب انتشار المرض وفقا للصيغة الواردة أدناه.
    معدل انتشار المرض (٪) = (x / y) × 100
    حيث يشير x إلى عدد النباتات المريضة ؛ يشير Y إلى العدد الإجمالي للنباتات التي تم مسحها.
  12. احسب شدة المرض وفقا للمقياس 0-4 من Öğüt21 ، حيث لم تظهر الأعراض 0 = ، 1 = أعراض خفيفة في 25٪ من الأوراق ؛ 2 = أعراض متوسطة المستوى في 26٪ -50٪ من الأوراق ؛ 3 = داء الاخضرار الشديد والذبول في 51٪ -75٪ من الأوراق ؛ و 4 = أعراض الإصابة بالكلور والذبول الشديدة جدا أو الجفاف أو التساقط أو تأخر النمو أو الأوراق الميتة على أكثر من 75٪ من النباتات بنفس الترتيب (الشكل 2).
  13. احسب شدة المرض باستخدام الصيغة التالية بقيم المقياس التي تم الحصولعليها 16.
    شدة المرض (٪) = [∑ [i (ni x vi) / (V) x N)] × 100
    حيث عدد المصانع في قيمة المقياس ؛ قيمة مقياس VI V أعلى قيمة مقياس ؛ N العدد الإجمالي للنباتات التي لوحظت ؛ أنا يشير إلى عدد الفصول.

2. بيانات الأرصاد الجوية

  1. إجراء دراسات مسحية. بالنسبة لهذا البروتوكول ، تم إجراء المسوحات خلال فترتي مايو ويونيو 2022 و 2023. احصل على درجة الحرارة والرطوبة النسبية وإجمالي قيم هطول الأمطار للفترة من مارس إلى يوليو في 2022 و 2023 والسنوات الطويلة من مديرية الأرصاد الجوية الإقليمية في يوزغات (الجدول 1).

3. التحديد المورفولوجي

  1. قارن الخصائص الثقافية (لون المستعمرة ، والفطريات الهوائية ، ومعدل نمو الفطريات) والكونيدالية (الأبعاد الكونيدية ، والشكل ، واللون ، وعدد الحاجز) لعزلات الفيوزاريوم بتلك الخاصة بالدراسات السابقة وحدد الأنواع الفطرية مبدئيا.
  2. حدد عينات تمثيلية من المجموعات لاستخدامها في تحديد المورفولوجيا. قم بتنقية هذه العينات وفقا لطريقة عزل الأبواغ الفردية كما هو مذكور أعلاه. خلال هذه الفترة ، لاحظ خصائص تصبغ المستعمرة لعزلات الفيوزاريوم بالإضافة إلى هياكل الكلاميدوبور الدقيقة / الماكروكونيديا.
  3. لتعزيز تكوين الهياكل المجهرية مثل الميكروكونيديا الدقيقة / الكبيرة والأبواغ الكلاميدوسبورية في المزارع الفطرية النقية التي تم الحصول عليها ، احتضن على المساعد الشخصي الرقمي في 25 ± 1 درجة مئوية و 12 ساعة: 12 ساعة مظلمة: ضوء لمدة 25-30 يوما في حاضنة. قم بقياس طول وعرض الكونيديا لكل عزل فيوزاريوم بواسطة الفحص المجهري الضوئي. بالإضافة إلى ذلك ، قم بتوثيق الهيكل والشكل واللون والحاجز أو بدون حاجز للكونيديا باستخدام مجهر ضوئي مزود بكاميرا رقمية.
  4. بناء على الملاحظات المذكورة أعلاه ، قم بتجميع عزلات Fusarium وفقا لمستوى الأنواع ، كما هو موضح في Leslie and Suerell22.

4. التحديد الجزيئي

ملاحظة: تم استخراج الحمض النووي الجيني الكلي لعزلات الفيوزاريوم باستخدام الطريقة التالية ، والتي تم تعديلها بشكل طفيف من بروتوكول Cenis23. تم إجراء تحليلات تفاعل البوليميراز المتسلسل والرحلان الكهربائي لعزلات الفيوزاريوم باستخدام البروتوكول الموصوف بواسطة Aras و Endes24.

  1. استخراج الحمض النووي الجيني الفطري
    1. من مزرعة جديدة (عمرها 10 أيام) من عزلات الفيوزاريوم المزروعة على المساعد الشخصي الرقمي ، اكشط 100 مجم من الفطريات بمشرط معقم ثم انقلها إلى أنبوب طرد مركزي دقيق سعة 2 مل. احتضان الأنابيب عند -20 درجة مئوية طوال الليل.
    2. بعد الحضانة بين عشية وضحاها ، أضف 500 ميكرولتر من المخزن المؤقت لاستخراج الحمض النووي (200 ملي مولار Tris-HCl pH: 8.5 ، 250 ملي كلوريد الصوديوم ، 25 ملي مولار EDTA ، 0.5٪ كبريتات دوديسيل الصوديوم) في الأنابيب وسحقها بمدقة بلاستيكية معقمة.
    3. بعد ذلك ، أضف 150 ميكرولتر من أسيتات الصوديوم 3M (NaOAc) درجة الحموضة 5.2 إلى الأنابيب واحتضانها عند -20 درجة مئوية لمدة 30 دقيقة. بعد هذه المرحلة ، قم بالطرد المركزي للأنابيب عند 4,000 × جم لمدة 10 دقائق.
    4. بعد الطرد المركزي ، انقل 400 ميكرولتر من المادة الطافية الموجودة في الجزء العلوي من الأنبوب إلى أنابيب جديدة (1.5 مل) وأضف حجما متساويا من الأيزوبروبانول (2-بروبانول). احتضان الأنابيب الجديدة عند -20 درجة مئوية لمدة 30 دقيقة. خلال هذا الوقت ، امزج الأنابيب برفق 5x أو 6x.
    5. جهاز طرد مركزي عند 4,000 × جم لمدة 10 دقائق لترسيب الحمض النووي الجيني والتخلص من كل السائل المتبقي في الأنابيب.
    6. أضف 1 مل من 70٪ إيثانول إلى حبيبات الحمض النووي الجينومية كرواسب بيضاء أو كريمية اللون في قاع الأنبوب. امزج الأنبوب برفق لأعلى ولأسفل 4x-5x لمدة دقيقة واحدة تقريبا ، وتخلص من كل الإيثانول الموجود في الأنابيب. بعد ذلك ، افتح الأنابيب في تدفق الهواء الرقائقي لمدة 30 دقيقة لتبخر الإيثانول تماما على حبيبات الحمض النووي.
    7. لإذابة الحمض النووي الجيني وتخزينه لفترة طويلة ، أضف 50 ميكرولتر من محلول عازل TE (1M Tris-HCl pH: 8.0 ؛ 0.5M EDTA pH 8.0) إلى الأنابيب واحتضان الأنابيب في حمام مائي عند 65 درجة مئوية لمدة ساعة واحدة. خلال هذا الوقت ، امزج الأنبوب برفق لأعلى ولأسفل 8x-10x. قم بتخزين الحمض النووي الجيني المذاب في محلول عازلة TE في فريزر عميق -20 درجة مئوية لاستخدامه في الدراسات الجزيئية.
  2. لدراسات تفاعل البوليميراز المتسلسل ، استخدم بادئات قليل النوكليوتيدات ITS5 F (5 GGAAGTAAAGTCGTAACAAGG3 ') / ITS4 R (5'TCCTCCGCTTATTGATATGC3') لتضخيم منطقة ITS من rDNA25. قم بإجراء كل تفاعل تفاعل تفاعل البوليميراز المتسلسل باستخدام 2.5 ميكرولتر من 10x PCR المؤقت ، و 2.5 ميكرولتر من MgCl2 (25 ملي مولار) ، و 2.5 ميكرولتر من dNTP (2 ملي مولار) ، و 0.5 ميكرولتر من كل مادة أولية (10 ميكرومتر) ، و 2 ميكرولتر من قالب الحمض النووي ، و 0.5 ميكرولتر من بوليميراز الحمض النووي Taq (1 U / μL ، Fermantas) و 14 ميكرولتر من sQH2O في حجم إجمالي قدره 25 ميكرولتر.
  3. بالنسبة لتفاعل PCR 25 ميكرولتر ، قم بتشغيل برنامج PCR التالي 95 درجة مئوية لمدة دقيقتين (التمسخ الأولي) ، متبوعا ب 40 دورة ؛ 95 درجة مئوية لمدة 30 ثانية (تمسخ) ، 55 درجة مئوية لمدة 45 ثانية (التلدين) ، 72 درجة مئوية لمدة 90 ثانية (تمديد) و 72 درجة مئوية لمدة 5 دقائق (التمديد النهائي). منتجات تفاعل البوليميراز المتسلسل الكهربائي لمدة 1.5 ساعة عند 90 فولت في هلام الاغاروز 1.5٪ المحضر في محلول عازل 1x TAE (قاعدة تريس - حمض الخليك الجليدي - EDTA).
    1. لتحضير عازلة TAE للرحلان الكهربائي للهلام ، قم بإذابة 242 جم من قاعدة تريس في 700 مل من الماء المعقم ؛ أضف 57.1 مل من حمض الخليك الجليدي ؛ أضف 100 مل من محلول EDTA 0.5 M ، واضبط مستوى الصوت على 1 لتر عن طريق إضافة ماء معقم. اضبط الرقم الهيدروجيني النهائي للمخزن المؤقت 1 لتر 50x TAE إلى 8.5. لعمل 1x TAE يعمل ، أضف 49 جزءا من الماء المعقم إلى جزء واحد من المخزن المؤقت TAE 50x.
  4. قم بتلطيخ المواد الهلامية ب 0.5 ميكروغرام / مل بروميد الإيثيديوم وفحصها بصريا عن طريق جعلها مرئية على مصباح الأشعة فوق البنفسجية.
  5. من أجل فحص العلاقة التطورية بين عزلات عامل تعفن الجذر والتاج ، احصل على تسلسلات قاعدة الجينات ITS بواسطة تفاعل البوليميراز المتسلسل ، والتي تم تصنيعها ثنائي الاتجاه (5'-3' و 3'- 5') من خلال بائع. قارن التسلسلات الأساسية مع بيانات الجينات من موقع NCBI (المركز الوطني لمعلومات التكنولوجيا الحيوية) والتسلسلات الأساسية لجين ITS لعزلات الفيوزاريوم الأخرى في العالم باستخدام برنامج الانفجار. استخدم هذا لتحديد العزلات على مستوى الأنواع كما هو موضح أدناه.
    1. انتقل إلى https://www.ncbi.nlm.nih.gov الموقع. انقر فوق علامة التبويب BLAST في قسم الموارد الشائعة.
    2. انقر فوق علامة التبويب Nucleotide BLAST في النافذة الجديدة. في المقطع إدخال تسلسل الاستعلام في النافذة الجديدة ، أدخل التسلسلات الأساسية بتنسيق Fasta ، واكتب اسم الدراسة في قسم المسمى الوظيفي.
    3. بعد ذلك ، تحقق من قواعد البيانات القياسية (nr وما إلى ذلك) في علامة التبويب قاعدة البيانات في قسم اختيار مجموعة البحث في الأسفل.
    4. تحقق من التسلسلات المتشابهة للغاية (megablast) في علامة التبويب Optimize for في قسم Program Selection وانقر على علامة التبويب BLAST في أسفل الصفحة.
  6. استخدم برنامج تحليل النشوء والتطور MEGA 11 لتحديد العلاقة التطورية بين عزلات الفيوزاريوم . قم بمحاذاة التسلسلات الأساسية باستخدام برنامج ClustalW وقم بإنشاء أشجار العائلة الجينية للعزلات وفقا للحد الأقصى من البخل لجين ITS26.
    1. لتنزيل برنامج Mega ، انتقل إلى موقع الويب https://www.megasoftware.net ، وقم بتثبيت برنامج Mega. يتم توفير برنامج MEGA مجانا للاستخدام في البحث والتعليم.
    2. أولا ، احفظ التسلسلات على سطح المكتب كملف Notepad (.txt) بتنسيق FASTA. قم بتشغيل برنامج Mega وانقر فوق علامة التبويب ALIGN . انقر فوق تحرير / بناء المحاذاة في النافذة. بعد ذلك ، حدد إنشاء محاذاة جديدة في النافذة الجديدة وانقر فوق موافق للتأكيد.
    3. انقر فوق علامة تبويب DNA . تحذف السمة 1. التسلسل الذي يظهر تلقائيا في النافذة ، وانتقل إلى تحرير الملف ، ثم انقر فوق علامة التبويب إدراج تسلسل من ملف . افتح ملف المفكرة (.txt) الذي يحتوي على التسلسلات والموجود على سطح المكتب.
    4. في هذه المرحلة ، تظهر جميع التسلسلات على الشاشة. أولا ، انقر فوق أي تسلسل يظهر على الشاشة ، ثم ضع علامة على جميع التسلسلات باستخدام CTRL + A. افتح ملف المحاذاة وانقر فوق محاذاة بواسطة Clustal W من هناك ، وانقر فوق موافق لتشغيل البرنامج في الإعدادات الافتراضية.
    5. بعد فحص الاختلافات في محاذاة التسلسلات ، انتقل إلى ملف البيانات ، وانقر فوق تحليل النشوء والتطور ثم انقر فوق لا في مربع الاختيار في النافذة لمعرفة ما إذا كانت التسلسلات تصنع البروتينات أم لا. لا تقوم تسلسلاتنا بتصنيع البروتينات لأنها تنتمي إلى منطقة أنظمة النقل الذكية.
    6. ارجع إلى النافذة الرئيسية لبرنامج Mega. انقر فوق Phylogeny وحدد Construct / Test Maximum Parsimony Tree(s). في النافذة الجديدة ، حدد طريقة التمهيد لاختبار Phylogeny وأدخل قيم التمهيد 1,000 لاختبار قوة الفرع. في علامة التبويب الفجوات/معالجة البيانات المفقودة، حدد الحذف الجزئي، وحدد الشجرة الفرعية-التقليم-إعادة التطعيم (SPR) كطريقة بحث MP، وانقر فوق موافق لتأكيد العمليات.
    7. انتظر نتيجة التحليل لإظهار شجرة النشوء والتطور.

5. اختبار الإمراضية

  1. استخدم أربع عزلات لدراسات الإمراضية لكل نوع تمثيلي من أنواع الفيوزاريوم التي تم تحديدها بالطرق الجزيئية. إجراء دراسات الإمراضية عند 24 درجة مئوية ، 16 ساعة من ضوء الفلورسنت / 8 ساعات من الفترة الضوئية المظلمة ، مع رطوبة 65٪ في غرفة مكيفة.
  2. زرع بذور العدس في قوارير بلاستيكية سوداء بقطر 45 حفرة بقطر 5 سم. احتفظ بكل قارورة في هيبوكلوريت الصوديوم 1٪ لمدة 3 دقائق ثم اشطفها بالماء المقطر المعقم 3 مرات. جفف البذور في خزانة معقمة لمدة 24 ساعة وزرع بذرة واحدة في كل حفرة.
    ملاحظة: تم استخدام بذور العدس من صنف Kayı 91 ، الحساسة للمرض ، في جميع اختبارات الإمراض6. تم استخدام تقنية غمر الشتلات كطريقة التلقيح27.
  3. احتضان المزارع النقية لكل عزلة في القناة الشريانية السالكة عند 24 درجة مئوية لمدة 7-10 أيام. اكشط المستعمرات المزروعة من مزرعة المخزون من سطح الوسط بملعقة وقم بإعداد معلق البوغ / الفطريات باستخدام الماء المقطر المعقم.
  4. قم بإزالة البقايا الكبيرة من المعلق عن طريق الترشيح من خلال قطعة قماش قطنية مكونة من 4 طبقات واضبط تركيز البوغ / الفطريات إلى 1 × 106 جراثيم / مل بمساعدة مقياس كثافة الدم.
  5. بعد هذه المرحلة ، اقتلع جذور الشتلات التي نمت سابقا في القوارير عندما يكون لديها 2-3 أوراق حقيقية. يغسل بماء الصنبور ويصيب الجذور قليلا بإبرة معقمة. اغمر هذه الشتلات في معلق البوغ / الفطريات المحضر لمدة 3 دقائق ثم قم بزرعها في قوارير بلاستيكية تحتوي على خليط تربة معقمة / خث (2: 1 ؛ v / v).
  6. بالنسبة للشتلات المستخدمة كعناصر تحكم ، اقتلع جذورها ، وقم بإصابتها ، ثم زرعها عن طريق غمرها فقط في ماء معقم. قم بإجراء تقييمات اختبار الإمراضية بعد 3 أسابيع من عملية التلقيح وفقا لمقياس 0-4.
  7. بعد إخضاع قيم شدة المرض المحسوبة لتحويل الزاوية ، يتم إخضاع القيم التي تم الحصول عليها لتحليل التباين وتقييم الفروق بين الوسائل وفقا لاختبار Tukey's HSD (p = 0.05). شدة المرض: تم تقييم العزلات التي تحتوي على 0٪ -15٪ على أنها ذات ضراوة منخفضة جدا (LV) ، وتم تقييم العزلات التي تحتوي على 16٪ -35٪ على أنها منخفضة الفوعة (LV) ، وتم تقييم العزلات بنسبة 36٪ -50٪ على أنها ضراوة معتدلة (O) ، وتم تقييم العزلات بنسبة 51٪ -70٪ على أنها عالية الفوعة (VV) ، وتم تقييم العزلات بنسبة 71٪ -100٪ على أنها ضراوة عالية جدا (VV) وتم تقييم العزلات التي لا تحتوي على أعراض المرض على أنها عزلات رمية أو نباتية.

الوصول مقيد. يرجى تسجيل الدخول أو بدء فترة تجريبية لعرض هذا المحتوى.

النتائج

تحديد معلمات المرض
تم تقييم ما مجموعه 83 منطقة بذر العدس تغطي تسع مناطق مختلفة من يوزغات من حيث الذبول والجذر وأعراض مرض تعفن التاج ، والتي تمتد على مساحة 1.1984 × 106 م2 (الجدول 2). تمت مواجهتها أعراض مرض الذبول أو تعفن الجذور في جميع المجالات. ومع ذلك ، تم تحديد معدل الإصابة بالذبول ومرض تعفن الجذور في يوزغات بنسبة 16.9٪ ، مع شدة المرض بنسبة 38.6٪ في مقاطعتي سورغون وساريكايا. كما تم تحديد نسبة الإصابة الكبيرة بالمرض في مقاطعات ش...

الوصول مقيد. يرجى تسجيل الدخول أو بدء فترة تجريبية لعرض هذا المحتوى.

المناقشة

من المعروف أن ذبول الفيوزاريوم يسبب خسائر اقتصادية خطيرة في بعض أجزاء العالم31. تم الإبلاغ عن المرض لأول مرة في المجر32 وتم الإبلاغ عنه لاحقا في العديد من البلدان مثل مصر والهند وميانمار ونيبال وباكستان وتركيا وسوريا والولايات المتحدةالأمريكية 33. أبلغ Kumar et al.34 عن توزيع واسع لذبول العدس وتعفن الجذور وطوق الجذور مع تقارير عن حدوثه في 26 دولة على الأقل حول العالم. في دراسة حديثة ،...

الوصول مقيد. يرجى تسجيل الدخول أو بدء فترة تجريبية لعرض هذا المحتوى.

الإفصاحات

يعلن أصحاب البلاغ عدم وجود تضارب في المصالح.

شكر وتقدير

تم دعم هذه الدراسة من قبل مركز تنسيق المشاريع ومركز البحث بجامعة بوزوك ، وحدة BAP برقم المشروع FÇD-2022-1096. هذه الدراسة جزء من دراسة الدكتوراه لسيفيم أتماكا.

الوصول مقيد. يرجى تسجيل الدخول أو بدء فترة تجريبية لعرض هذا المحتوى.

المواد

قائمة المواد المستخدمة في هذه المقالة
الاسمالشركةرقم فهرسيالتعليقات
(S) - حمض اللاكتيكMerck100366تم استخدامه كمضاد حيوي في الدراسات.
2-بروبانولميرك109634يستخدم في الدراسات الجزيئية.
ماصة أوتوماتيكية دقيقة قابلة للتعديل (0.1-2.5 وميكرو ؛ ل)أبحاث إيبندورفLB. EP.3123000012يستخدم لقياس كميات صغيرة من السوائل.
مجموعة ماصات أوتوماتيكية دقيقة قابلة للتعديل (2 &ndash ؛ 20 & micro ؛ ل, 20 – 200 وميكرو ؛ ل ، 100 &ndash ؛ 1.000 وميكرو ؛ ل)أبحاث إيبندورفLB. EP.4924000916يستخدم لقياس كميات صغيرة من السوائل.
110453أجارميركللاستخدام في صنع الوسائط الفطرية.
AgaroseSigma-Aldrich18300012للاستخدام في تحضير الجل في الرحلان الكهربائي.
غرفة تكييف الهواء?klimlabتم استخدامه لزراعة النباتات في ظل ظروف خاضعة للرقابة.
AmpisilinSigma-AldrichA9393كمضاد حيوي في الدراسات.
ميزان الدقة التحليليShimadzu ATX224لوزن المواد الصلبة المستخدمة في الدراسة.
معقم الأوتوكلافZealway GF-120DRتم استخدامه لتعقيم المواد الصلبة والسائلة في كل مرحلة من مراحل الدراسة.
مجهر مجهرLeica DM750للاستخدام في التشخيص المورفولوجي.
خزانة السلامة البيولوجيةHFsafe Class II A2لضمان سلامة منطقة العمل والمستخدم والبيئة والعملية.
الطرد المركزيDLAB DM1424رطل. DL.903001124يستخدم لفصل الجسيمات في عينة بناء على شكلها وحجمها وكثافتها
220551 تم استخدام الكلورامفينيكولسيجما-ألدريتشكمضاد حيوي في الدراسات.
مجموعة حفار الفلينSigma-AldrichZ165220تم استخدامه لأخذ عينات من ثقافة الفطريات في أطباق بتري.
غطاء زجاجي وشريحةISOLAB075.01.006 / 075.02.005تم استخدامه في عملية التحضير لدراسات المجهر.
D (+) - الجلوكوز أحادي الهيدراتMerck108342للاستخدام في صنع الوسائط الفطرية.
DFC450 مع كاميرا رقميةرقمي لايكامع واجهة ج-جبل ومع 5 ميجابيكسل مستشعر ccd.
مجهر مجهر Dm750  LeicaMIC5246للتعرف المورفولوجي على الفطريات.
الرحلان الكهربائي للهلام الحمض النوويالحراري فيشر العلميB2-UVT
DNA هلام تحميل صبغة (6x)Thermo ScientificR0611للاستخدام في التشخيص الجزيئي.
مزيج dNTPThermo ScientificR0192يستخدم في الدراسات الجزيئية.
يمزج Dreamtaq pcr master (2x)Thermo ScientificK1082للاستخدام في التشخيص الجزيئي.
ملعقة DrigalskiISOLAB082.03.001تم استخدامه لكشط ونشر المزارع الفطرية المزروعة في أطباق بتري.
Edta Thermo Scientific17892للاستخدام في التشخيص الجزيئي.
الإيثانولميرك100983في الدراسات الجزيئية ودراسات تطهير السطح.
بروميد الإيثيديومسيجما ألدريتشE7637يستخدم لتلطيخ الحمض النووي في المواد الهلامية أثناء الرحلان الكهربائي للهلام.
حمض الإيثيلين ديامين تترا أسيتيك (EDTA)سيجما ألدريتشE6758يستخدم في الدراسات الجزيئية.
ورق الترشيحISOLAB107.58.158يستخدم في دراسات زراعة المخزون.
خزانة تجفيف الهواء القسريZHICHENG ZXDS-A-1090للاستخدام في عمليات الحضانة.
غطاء الدخانElektromag EM1201LB. م. EM1201تم استخدامه للتحكم في الأبخرة الكيميائية الضارة والغازات والغبار.
نظام التصوير الهلاميSyngene G: BOX Chemi XX6للاستخدام في التشخيص الجزيئي.
سلم الحمض النووي Generuler 50 نقطة أساسThermo ScientificSM0372للاستخدام في التشخيص الجزيئي.
حمض الخليك الجليديMerck1005706يستخدم في الدراسات الجزيئية.
الجلسرينميرك104094للاستخدام في تربية الفطريات.
لانسيتإيسولاب048.50.002يستخدم لإزالة الأنسجة المريضة من عينات النبات.
كلوريد المغنيسيومسيجما ألدريتش814733يستخدم في الدراسات الجزيئية.
شريط قياسISOLAB016.07.500يستخدم لقياس أحجام السوائل.
أنابيب الطرد المركزيISOLAB0778.03.001 / 0778.03.002 / 0778.03.003تستخدم لتخزين كميات مختلفة من السوائل.
أنبوب تفاعل البوليميراز المتسلسلISOLAB123.01.002تم استخدامه لوضع مزيج الحمض النووي في دراسات تفاعل البوليميراز المتسلسل (PCR).
أطباق بتريISOLAB120.13.090للاستخدام في زراعة الفطريات.
أطراف الماصةISOLAB005.01.001 / 005.01.002 / 005.01.003 / 005.01.004لنقل أحجام السوائل المستخدمة في التحليلات.
كيس بلاستيكيISOLAB039.30.005تم استخدامه لنقل العينات إلى المختبر.
وعاء بلاستيكيToXAتم استخدامه لزراعة النباتات.
كماشة ، مشابكISOLAB048.08.130تم استخدامه لوضع أوراق الترشيح في مظاريف بعد نمو الفطريات في طبق بتري.
ملاط البورسلينISOLAB038.02.150تم استخدامه لسحق الفطريات الفطرية.
سكر العنب البطاطس أجارCondalab1022لتحديد وزراعة الفطريات.
نظام المياه النقيةشركة بشريةLT. مفوضيه. تم استخدام NHP009في إعداد المحلول وتحليله طوال الدراسات.
ثلاجة (+4 درجة ؛ ج / -20 درجة ؛ ج)Vestelللاستخدام في تخزين مواد المخزون.
تم استخدام ريفامبيسينسيجما ألدريتش557303كمضاد حيوي في الدراسات.
أسيتات الصوديومميرك106268تستخدم في الدراسات الجزيئية.
كلوريد الصوديومميرك1064041000يستخدم في الدراسات الجزيئية.
كبريتات دوديسيل الصوديومسيجما ألدريتش436143تستخدم في الدراسات الجزيئية.
محلول هيبوكلوريت الصوديومMerck105614يستخدم لتطهير السطح.
ملعقةISOLAB047.33.210تم استخدامه لكشط ثقافة الفطريات التي تنمو في أطباق بتري.
Streptomycñn كبريتاتBioShop CanadaSTP101لمنع التلوث في زراعة زراعة الفطريات.
TeksollTekkimTK.200650النقي الإضافي للاستخدام كمطهر في جميع مراحل العمل.
TetrasiklinSigma-AldrichT3258كمضاد حيوي في الدراسات.
الدراجة الحرارية PCRBio؟ راد T100للاستخدام في التحليلات الجينومية.
Thoma lamISOLAB075.03.002للاستخدام في عد الجراثيم.
10812846001تستخدم Tris HCLRocheفي الدراسات الجزيئية.
TrizmaSigma-AldrichT1503يستخدم في الدراسات الجزيئية.
توين 80ميرك822187للاستخدام في محلول البوغ في اختبار الإمراضية.
خلاط دوامة vorteksVelp WIZARDLB. VLP. F202A0175تستخدم لخلط المواد بكميات سائلة.
حمامات مائيةMemmert WNB 221018-5702تم استخدامه أثناء الحضانة في دراسات استخراج الحمض النووي.
تم استخدام تم استخدام كاميرا مجهر تم استخدام يستخدم الدقيقة تم استخدام

المراجع

  1. Skrzypkowski, W., Kiełkowska, A. Current status of haploidization in cool-season grain legume crop species. Agriculture. 14 (7), 1031(2024).
  2. Liber, M., Duarte, I., Maia, A. T., Oliveira, H. R. The history of lentil (Lens culinaris subsp. culinaris) domestication and spread as revealed by genotyping-by-sequencing of wild and landrace accessions. Front Plant Sci. 12, 628439(2021).
  3. FAOSTAT. , Food and Agriculture Organization of the United Nations. Database on Crops https://www.fao.org/faostat/en/#data (2022).
  4. TÜİK. Agricultural statistics report. , Turkish Statistical Institute. Türkiye. (2023).
  5. Baxevanos, D., et al. Lentil cultivar evaluation in diverse organic mediterranean environments. Agronomy. 14 (4), 790(2024).
  6. Aydın, M., Koç, M., Sağır, A. Investigations on determination of soilborne fungal pathogens causing root rot, crown rot and wilt on lentil in Southeast Anatolia Region. Plant Protect Bulletin. 44 (1), 93-103 (2004).
  7. Zitnick-Anderson, K., et al. Fusarium species associated with root rot of lentil (Lens culinaris) in North Dakota. Plant Health Prog. 22 (4), 524-528 (2021).
  8. Kushwaha, D. A. A research book of seed mycoflora of chickpea (Cicer arietinum). , books.google.com (2020).
  9. Ekwomadu, T. I., Mwanza, M. Fusarium fungi pathogens, identification, adverse effects, disease management, and global food security: A review of the latest research. Agriculture. 13 (9), 1810(2023).
  10. Jiskani, A. M., et al. A destructive disease of lentil: Fusarium wilt of lentil. Plant Arch. 21 (1), 2117-2127 (2021).
  11. Alisaac, E., Mahlein, A. K. Fusarium head blight on wheat: biology, modern detection and diagnosis and integrated disease management. Toxins. 15 (3), 192(2023).
  12. Yang, F., et al. Effects of rhizosphere microbial communities on cucumber Fusarium wilt disease suppression. Microorganisms. 11 (6), 1576(2023).
  13. Kumari, N., Katoch, S. Wilt and root rot complex of important pulse crops: their detection and integrated management. Management of Fungal Pathogens in Pulses. Fungal Biology. , Springer. Cham. (2020).
  14. Köppen, W., Geiger, R. Handbuch der klimatologie. , Gebrüder Borntraeger. Berlin. (1936).
  15. Agrios, G. N. Plant Pathology. , 5th Edn, Elsevier Academic Press. Amsterdam. (2005).
  16. Endes, A. Occurrence and distribution of Chickpea root rot and wilt disease in Yozgat Kırşehir and Kırıkkale Provinces. Çukurova J Agri Food Sci. 38 (2), 284-298 (2023).
  17. Choi, Y. W., Hyde, K. D., Ho, W. H. Single spore isolation of fungi. Fungal Diversity. 3, 29-38 (1999).
  18. Baskarathevan, J., Jaspers, M. V., Jones, E. E., Ridgway, H. J. Evaluation of different storage methods for rapid and cost effective preservation of Botryosphaeria species. New Zealand Plant Protect. 62, 234-237 (2009).
  19. Dikilitaş, M., Katırcıoğlu, Z., Altınok, H. Latest developments and methods on long-term storage, protection, and recycle of fungi and fungal material. JAgric Fac HR U. 15 (1), 55-69 (2011).
  20. Bora, T., Karaca, İ Measurement of disease and damage in cultivated plants. , Ege University Press. Turkey. (1970).
  21. Öğüt, E. Pathogenic and molecular characterization of some Fusarium spp. causing root rot and wilt on lentil with determination of variety reactions in south eastern Anatolia. , Mustafa Kemal University, Institute of Science and Technology. (2015).
  22. Leslie, J. F., Summerell, B. A. The Fusarium Laboratory manual. , Blackwell Publishing. (2006).
  23. Cenis, J. L. Rapid extraction of fungal DNA for PCR amplification. Nuc Acids Res. 20 (9), 2380(1992).
  24. Aras, S., Endes, A. Effect of Fusarium oxysporum infection on strawberry under calcium, iron, and zinc deficiency conditions. Zemdirbyste-Agri. 110 (1), 71-78 (2023).
  25. White, T. J., Bruns, T., Lee, S., Taylor, J. Amplification and direct sequencing of fungal ribosomal RNA genes for phylogenetics. PCR Protoc A Guide Metho Appl. , 315-322 (1990).
  26. Endes, A. Characterization and pathogenicity of Botryosphaeriaceae species associated with Gummosis, Dieback, Trunk and Branch Cankers of almond trees in Türkiye. J Agri Sci. 30 (4), 698-711 (2024).
  27. Gordon, T. R., Okamoto, D., Jacobson, D. J. Colonization of muskmelon and non-susceptible crops by Fusarium oxysporum f. sp. melonis and other species of Fusarium. Phytopathology. 79 (10), 1095-1100 (1989).
  28. Xu, X., et al. Fusarium species associated with maize leaf blight in Heilongjiang Province, China. J Fungi. 8 (11), 1170(2022).
  29. Fonseca-Guerra, I. R., Chiquillo-Pompeyo, J. C., Benavides Rozo, M. E., Díaz Ovalle, J. F. Fusarium spp. associated with Chenopodium quinoa crops in Colombia. Sci Rep. 12 (1), 20841(2022).
  30. Khan, M. F., et al. First report of damping-off and seedling rot of Hemp (Cannabis sativa) caused by Fusarium solani in North Dakota, U.S.A. Plant Dis. 107 (1), 232(2023).
  31. Chaudhary, R. G., Saxena, D. R., Dhar, V., Singh, R. K., Namdev, J. K. Prevalence of wilt-root rot and their associated pathogens at reproductive phase in lentil. Arch Phytopathol Plant Protect. 43 (10), 996-1000 (2010).
  32. Fleischmann, R. Some observations on Maize smut in Hungary. Pflanzenbau. 14 (5), 199-206 (1937).
  33. Bedasa, T. Distribution and management of Fusarium wilt (Fusarium oxysporum f. sp. lentis) of lentil (Lens culinaris Medikus) in Central Highlands of Ethiopia. , Haramaya University Doctoral dissertation. (2018).
  34. Kumar, S., et al. Vascular wilt disease of lentil: A review. J Lentil Res. 4, 1-14 (2010).
  35. Chenari, S., Abbasi, S., Chehri, K. Phylogeny and host specificity of Fusarium solani species complex isolated from chickpea, lentil and common bean. Arch Phytopathol Plant Protect. , 1-15 (2024).
  36. Rathod, A., et al. Isolation of causal organism of wilt and collar rot of lentil and its pathogenicity tests. Int J Curr Microbiol Appl Sci. 10 (12), 276-282 (2021).
  37. Hayit, T., Endes, A., Hayit, F. The severity level classification of Fusarium wilt of chickpea by pre-trained deep learning models. J Plant Pathol. 106 (1), 93-105 (2024).
  38. Dean, R., et al. The Top 10 fungal pathogens in molecular plant pathology. Mol Plant Pathol. 13 (4), 414-430 (2012).
  39. Fletcher, J. D., Broadhurst, P. G., Bansal, R. K. F. avenaceum: A pathogen of lentil in New Zealand. New Zealand J Crop Horticultural Sci. 19 (2), 207-210 (1991).
  40. Al Ahmad, M., Mouselli, N. Wilt and root rot of lentis. Lens. 14 (1/2), 27-31 (1987).

الوصول مقيد. يرجى تسجيل الدخول أو بدء فترة تجريبية لعرض هذا المحتوى.

إعادة الطباعة والأذونات

الوسوم

أنواع الفوزاريوممسببات الأمراض المنقولة بالتربةعزل الفطرياتتحليل PCRمورفولوجيا المستعمراتمعدل حدوث المرضالعلاقات الجينية

تم نشر هذه المقالة

الفيديو قريباً

تواصل معنا
أوصِ به للمكتبة

الخصوصية

شروط الاستخدام

السياسات

حقوق الطبع والنشر © 2026 MyJoVE Corporation. جميع الحقوق محفوظة.