جهاز ملعقة مونتيفيديو لتزجيج أجنة الثدييات

Geraldine Schlapp; María Noel Meikle; Lucía Goyeneche; Pedro Dos Santos Neto; Martina Crispo

doi:10.3791/68176

يتطلب اشتراك JoVE لعرض هذا المحتوى. تسجيل الدخول أو ابدأ نسخة تجريبية مجانية

مقالة منهجية

جهاز ملعقة مونتيفيديو لتزجيج أجنة الثدييات

1.2K مشاهدة

⸱

DOI:

10.3791/68176

⸱

يونيو 6, 2025

Geraldine Schlapp^*¹ , María Noel Meikle^*¹ , Lucía Goyeneche² , Pedro Dos Santos Neto³ , Martina Crispo¹

¹Laboratory Animal Biotechnology Unit, Institut Pasteur de Montevideo, ²Centro de Esterilidad Montevideo, ³Fundación IRAUy, Instituto de Reproducción Animal de Uruguay

^* These authors contributed equally

في هذه المقالة

ملخص

هنا ، نقدم بروتوكول ملعقة مونتيفيديو لتزجيج أجنة الفئران والأغنام قبل الزرع ، والتي تتكون من ملعقة محلية الصنع وتستخدم محاليل محلية الصنع. يتم موازنة الأجنة بسرعة في محلولين بالتبريد بتركيز متزايد ، ويتم تحميلهما على الملعقة ، وغمرهما في النيتروجين السائل ، وأخيرا مختومة بقش 0.5 مل.

الملخص

تصف هذه الدراسة طريقة تزجيج فعالة وفعالة من حيث التكلفة لحفظ أجنة الفئران والأغنام بالتبريد المعروفة باسم ملعقة مونتيفيديو (MVD). يستخدم هذا البروتوكول ملعقة محلية الصنع كجهاز ناقل ، يتم تحضيره بطرف محمل جلي. يتم موازنة الأجنة بسرعة في محللين محليين الصنع بتركيز متزايد ، ويتم تحميلهما في الملعقة ، ثم غمرها مباشرة في النيتروجين السائل. يمكن تحميل ما يقرب من 30-40 جنينا من الفأر في مرحلة ما قبل الزرع على الملعقة ، والتي يتم إغلاقها لاحقا بقش 0.5 مل. يؤدي استخدام الملاعق بدلا من الأنابيب المبردة ، والتي تستخدم بشكل متكرر لتخزين الأجنة المزججة ، إلى تحسين المساحة في ديوارس النيتروجين السائل. بالإضافة إلى ذلك ، لا تتطلب عملية الاحترار سوى محلول سكروز محلي الصنع بتركيز متناقص لإعادة ترطيب الأجنة واستعادة مورفولوجيتها. استخدم مختبرنا بنجاح ملعقة مونتيفيديو لأجنة الفئران والأغنام قبل الزرع لأكثر من 10 سنوات. أظهرت ملعقة مونتيفيديو متوسط معدل الشفاء (الأجنة المستردة / المزججة) بنسبة 84٪ ومعدل بقاء (أجنة قابلة للحياة / المستعادة) بنسبة 97٪ في أجنة الفئران. أسفر تزجيج أجنة الفئران عن نتائج أفضل من التجميد البطيء ، على الرغم من عدم ملاحظة أي اختلافات في النتائج الإنجابية (الحمل والولادة ومعدلات المواليد). في أجنة الأغنام ، تم تحقيق معدلات بقاء ونمو أجنة مماثلة باستخدام ملعقة مونتيفيديو مقارنة بجهاز تجاري. على الرغم من أن معدل الحمل كان أعلى بالنسبة للجهاز التجاري ، إلا أن معدل بقاء الحملان لم يكن مختلفا بشكل كبير بين الأجهزة. طريقة التزجيج ملعقة مونتيفيديو هي تقنية حفظ بالتبريد مباشرة يمكن استخدامها لتخزين الأجنة الفائضة ، ونسخ خطوط الفئران المعدلة وراثيا ونماذج الأغنام احتياطيا ، وتسهيل تبادلها بين الباحثين في جميع أنحاء العالم.

المقدمة

زادت كفاءة توليد المعدلة وراثيا (GM) بشكل كبير بسبب تطوير الأساليب القائمة على نوكلياز داخلي ، وخاصة كريسبر / كاس9. تنتج العديد من المختبرات في جميع أنحاء العالم العديد من خطوط الفئران والجرذان المعدلة وراثيا التي يجب حفظها بالتبريد لمنع الانجراف الجيني والحفاظ على سلامة النمط الظاهري^{الأصلي 1}. بالإضافة إلى ذلك ، فإن الأرشفة تلغي الحاجة إلى التكاثر المستمر ، مما يؤدي غالبا إلى أعداد زائدة. ترسل بعض المختبرات خطوط الفئران المعدلة وراثيا كأجنة أو منوية محفوظة بالتبريد إلى المستودعات الدولية ، مما يسهل تبادل هذه النماذج مع تجنب نقل الحية. وهذا يضمن إمكانية الوصول إلى الخطوط دون التوليد المتكرر لنماذج المعدلة وراثيا^{المتطابقة 2}